专利名称：：木瓜蛋白酶降解壳聚糖的方法
技术领域：
：本发明涉及其属于海洋化工工程
技术领域：
，具体的是一种木瓜蛋白酶降解壳聚糖的方法。
背景技术：
：壳聚糖存在于虫下、蟹等甲壳动物的甲壳中，分布极其广泛，是世界上仅次于纤维素的第二大类天然高分子化合物。因其独特的物理化学结构，可生物降解，在化妆品、食品工业、医药、农业以及生物工程等等领域都有广泛的应用，但壳聚糖分子量大，水溶性差，这使其应用受到很大的制约。壳寡糖是壳聚糖经降解生成的一类低聚物，近年来，随着研究的深入,通过一系列实验发现，其水溶性好，易被人体吸收，具有抑菌、抗肿瘤、调血脂、调节免疫及活化肠道双歧杆菌等多种生理功能。目前，壳寡糖的制备大致分三种方法化学降解法、物理降解法和酶降解法。化学降解由于反应比较剧烈，对降解得到的壳寡糖分子链有一定的破坏，所得到的壳寡糖分子量不均匀，反应不易控制，副反应也较多。而酶降解条件比较温和，副反应少，且反应较容易控制，可以得到特定分子量的壳寡糖。降解壳聚糖的酶有多种，分为特异性酶和非特异性酶，特异性酶降解速度快，但由于其价格昂贵，在生产应用上受到限制，非特异性酶价格较便宜，但对壳聚糖的水解活性较低，所以提高非特异性酶对壳聚糖的水解活性具有重要的研究意义。木瓜蛋白酶具有降解壳聚糖的活性，但木瓜蛋白酶对壳聚糖降解活性较低，所得样品分子量较高，壳寡糖产率低，不适于工业生产。
发明内容本发明的目的就是提高木瓜蛋白酶对壳聚糖的水解作用，提供一种木瓜蛋白酶降解壳聚糖的方法。为实现本发明的目的，本发明所采用的技术方案为1.一种木瓜蛋白酶降解壳聚糖的方法，其特征在于在每升壳聚糖的木瓜蛋白酶降解溶液中加入O.Olmol-0.08mol的Vc,使其促进木瓜蛋白酶对壳聚糖的降解。2.按权利要求1所述的木瓜蛋白酶降解壳聚糖的方法，其特征在于所述每升壳聚糖的木瓜蛋白酶降解溶液为木瓜蛋白酶与壳聚糖质量比为1:10-1:30的乙酸缓冲溶液。3.按权利要求l所述的木瓜蛋白酶降解壳聚糖的方法，其特征在于所述降解温度为40-50'C,降解时间为l-24小时，反应溶液的pH在4.0-5.0;经木瓜蛋白酶降解的壳聚糖，再通过旋转蒸发、冷冻干燥制得降解产物。4.按权利要求3所述的木瓜蛋白酶降解壳聚糖的方法，其特征在于所述加入Vc后反应最佳pH值为4.8。本发明的优点在于1.本发明在讲解溶液中加入一定浓度的Vc,可使降解溶液中可溶性产物产率有较大提高，加Vc前，可溶部分约35.34%,加入Vc后，可溶部分约41.47%;增加了木瓜蛋白酶降解壳聚糖工业生产的可能性。2.通过本发明的方法降解的壳聚糖，其可得到分子量更低的低聚壳聚糖和壳寡糖；可以更好地用于医药、保健品、化妆品、农业和食品等领域。图1为本发明pH4.4木瓜蛋白酶降解壳聚糖示意图。图2为本发明pH4.8木瓜蛋白酶降解壳聚糖示意图。具体实施例方式实施例2.5g壳聚糖溶于100mlpH4.0-5.0的乙酸-乙酸钠缓冲液中，搅拌条件下加入含0.25g木瓜蛋白酶和浓度为0.Olmol/L-0.08mol/LVc(淄博化学试剂厂)，pH4.0-5.0的乙酸-乙酸钠缓冲液50ml。在4(TC-5(TC水洛条件下反应0-24h。在反应的不同时间，测定溶液的粘度(参见表1、表2、表3和表4)。以下是各PH条件下，加入不同浓度Vc的木瓜蛋白酶降解溶液粘度变化表表l(l)pH3.6,加入不同浓度Vc的木瓜蛋白酶降解溶液粘度变化<table>tableseeoriginaldocumentpage4</column></row><table>pH4.4Vc浓度Ohlh2h3h4h5h实施例9不力PVc62.37910.6508.5187.4427.1416.696实施例100,Olmol/LVc61.50911.9139,3258.1567.7217.121实施例110.04mol/LVc60.90010.6718.1877.3176.5316.158实施例120.067mol/LVc61.24810.3817.7837.1216.3346.075表3(2)pH4.4Vc浓度0lh2h3h4h5h实施例9不力口Vc6.3145.5585.3305.0824.9784.833实施例io-0.Olmol/LVc6.5215.7245.5065.2164.4093,571实施例110.04mol/LVc5.6824.6894.2543.5812.8362.422实施例120.067mol/LVc5.7134.7924.0472.9812.3602.142表4(1)pH4.8，加入不同浓度Vc的木瓜蛋白酶降解溶液粘度变化pH4.8Vc浓度Ohlh2h3h4h5h实施例13不加Vc61.85710.4339.0777.5977.3486.779实施例14O.Olmol/LVc60.29111.8929.2228.1877.5046.966实施例150.04mol/LVc60.03010.4228.1457.0796.5105.879实施例160.067mol/LVc60.03010.0198.0116.8216.0755.672表4(2)pH4.SVc浓度Ohlh2h3h4h5h实施例13不加Vc6.3245.8895.8275.6725.5165.454实施例14O.Olmol/LVc6.8215.9005.4344.8754.5023.685实施例150.04mol/LVc5.5274.2443.8303.1462.3081.842实施例160,067mol/LVc5,2793.8813.2292.7742.2361.780下面详细阐述一下实施例12和16:实施例122.5g壳聚糖溶于100mlPH4.4的乙酸-乙酸钠缓冲液中，搅拌条件下加入含0.25g木瓜蛋白酶和浓度为0.067mol/LVcpH4.4的乙酸-乙酸钠缓冲液50ml。在4(TC水浴条件下反应24h。在反应的不同时间，测定溶液的粘度(参见图1)。图1可知在木瓜蛋白酶降解液中加入Vc后，溶液的粘度与未加Vc的降解溶液粘度相比，在反应最初6小时，溶液的粘度下降稍快，在反应进行到10小时以后，随着反应时间的延长，含有Vc的降解溶液粘度明显地低于不含Vc的降解溶液粘度。实施例162.5g壳聚糖溶于100mlpH4.4的乙酸-乙酸钠缓冲液中，搅拌条件下加入含0.25g木瓜蛋白酶和浓度为0.067mol/LVcpH4.8的乙酸-乙酸钠缓冲液50ml。在4(TC水洛条件下反应24h。在反应的不同时间，测定溶液的粘度(参见图2)。图2表明，在木瓜蛋白酶降解液中加入Vc后，溶液的粘度与未加Vc的降解溶液粘度相比，在反应初期，加了Vc的溶液粘度下降稍快，在反应后期，随着反应时间的延长，含有Vc的降解溶液粘度明显地低于不含Vc的降解溶液粘度。权利要求1.一种木瓜蛋白酶降解壳聚糖的方法，其特征在于在每升壳聚糖的木瓜蛋白酶降解溶液中加入0.01mol-0.08mol的Vc，使其促进木瓜蛋白酶对壳聚糖的降解。2.按权利要求1所述的木瓜蛋白酶降解壳聚糖的方法，其特征在于所述每升壳聚糖的木瓜蛋白酶降解溶液为木瓜蛋白酶与壳聚糖质量比为1:10-1:30的乙酸缓冲溶液。3.按权利要求l所述的木瓜蛋白酶降解壳聚糖的方法，其特征在于所述降解温度为40-5(TC,降解时间为1-24小时，反应溶液的pH在4.0-5.0;经木瓜蛋白酶降解的壳聚糖，再通过旋转蒸发、冷冻干燥制得降解产物。4.按权利要求3所述的木瓜蛋白酶降解壳聚糖的方法，其特征在于所述加入Vc后反应最佳pH值为4.8。全文摘要本发明涉及其属于海洋化工工程
技术领域：
，具体的是一种木瓜蛋白酶降解壳聚糖的方法。在每升壳聚糖的木瓜蛋白酶降解溶液中加入0.01mo1-0.08mol的Vc，使其促进木瓜蛋白酶对壳聚糖的降解。本发明以高分子量壳聚糖为原料，通过改进的酶降解方法制备低聚壳聚糖与壳寡糖。研究表明，用本发明改进的方法可以制备分子量更低的低聚壳聚糖与壳寡糖。降解的样品有较高的水溶性，可应用于医药、化妆品、农业和食品等领域。文档编号C12P19/00GK101475969SQ200910013878公开日2009年7月8日申请日期2009年1月16日优先权日2009年1月16日发明者松刘,李荣峰,李鹏程,蔡圣宝,邢荣娥申请人:中国科学院海洋研究所