专利名称：一种用于桃的生物保鲜剂及其制备方法和应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种水果保鲜剂，具体涉及一种用于桃的生物保鲜剂及其制备方法和 应用，属于水果保鲜剂的技术领域。
背景技术：
桃以其汁多甜润、营养丰富而深受广大消费者喜爱。但桃的果肉质软、含水量和含 糖量高，极易腐烂；采收期正值高温季节，果实采收成熟衰老进程很快，极不耐贮存和运输。目前桃采用的防腐保鲜措施主要有冰窖贮藏、热激处理、电子技术保鲜法、微波 保鲜法、自发气调法、减压贮藏、使用化学杀菌剂等等。但是目前的现有技术存在这样或那 样的缺点冷库贮藏，极易发生冷害，条件不易控制；热激处理、电子技术保鲜法和微波保鲜法目前仅处于研究阶段，有很多技术关键 没有解决，未能进入实际生产应用；气调贮藏和减压贮藏是效果相对较好，但成本较高；使用化学杀菌剂会产生药物残留，严重影响消费者健康和产品出口。因此，桃采后保鲜急需一种具有操作简单、高效无毒、天然安全并且价格低廉等特 点的保鲜技术。
发明内容
本发明就是为了解决上述问题，克服桃的果实病原菌的生长、繁殖，防止桃贮存过 程中的腐烂、褐变，延缓桃衰老过程的问题，提供一种用于桃的生物保鲜剂及其制备方法和 应用。该发明适用于桃，尤其适用于水蜜桃，也可用于其它水果和蔬菜。本发明是为了解决上述现有技术的不足之处，提供一种高效、安全、价格低廉的生 物保鲜剂。本发明是从豆制品中分离的食品微生物枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis), 由加拿大农业及农业食品部，食品研究中心提供的代谢产物制成，安全性高。另外，它是 微生物的分泌物而不是微生物细胞本身，因而具有高安全性。此微生物生命力强，生长速度 快，对生长条件要求不高，可在简单的培养基中生长，成本低。本发明所需要解决的技术问题，可以通过以下技术方案来实现作为本发明的第一发面，一种用于桃的生物保鲜剂，其特征在于，包括按照重量 份数计，微生物产生的代谢产物995-999份，吐温20 1-5份；所述微生物是枯草芽孢杆菌 (Bacillus subtilis)，所述微生物的菌体浓度 IXlO8 ~ IX IO9 个/ml。所述用于桃的生物保鲜剂，包括微生物产生的代谢产物999重量份，吐温20为1 重量份。所述微生物是枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)，本生物保鲜剂来源新，本发明 是利用枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)的代谢产物。本发明所用培养基为改良的LB培养基，通过稀释倒皿法和平板划线法(两者结合用)从发酵的豆制产品中分离出的有效的食品微生物，纯化后利用平板对峙法筛选拮抗菌 株。上述改良LB培养基配方葡萄糖5g/L，蛋白胨10g/L，酵母膏5g/L，氯化钠5g/L， 磷酸二氢钾 0. 25g/L，碳酸钙 0. 25g/L，琼脂 18g/L，水 1L，ρΗ7· 0。上述的稀释倒平板法先将待分离的材料用无菌水依次作一系列的10倍稀释液 (如1 10、1 100、1 1000、1 10000...)，然后分别从每一个浓度梯度吸取ImL稀释液加入已灭菌的培养皿中，再倒入已溶化并冷却至55°C左右的改良LB培养基，混合均勻， 待琼脂凝固后，30°C培养Mh。挑取在平板表面或琼脂培养基中分散的单个菌落，或重复以 上操作数次，便可得到纯培养。上述的平板划线分离法由接种环以菌操作沾取少许待分离材料，在无菌平板表 面进行平行划线或扇形划线，微生物细胞数量将随着划线次数的增加而减少，并逐步分散 开来，如果划线适宜的话，微生物能逐个分散，经培养后，可在平板表面得到单菌落。上述平板对峙法在固体PDA培养基上，中间接种平板划线法纯化得到并已培养 好的直径0. 5cm的菌块，两侧接种直径为0. 5cm的病原菌二8°C培养3_6天，每天3次测定 病原菌直径和拮抗菌直径，对照中间接种无菌培养基块，通过测定其抑制能力筛选拮抗性 能好的菌株。作为本发明的第二方面，一种用于桃的生物保鲜剂的制备方法，其特征在于，包括 以下步骤(1)拮抗菌的活化细菌固体培养基做试管斜面，将拮抗菌株枯草芽孢杆菌 (Bacillus subtilis)转接在斜面上扩大培养；(2)枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)拮抗菌摇床发酵菌体转接至液体培养 基中摇床发酵；(3)离心除菌体摇床发酵好的菌液低速离心除去菌体，保存上清液以备用；(4)样品检测测定发酵上清液对病原菌的孢子萌发抑制率；(5)包装按每瓶IOOOml规格要求进行塑料瓶包装。其中，步骤(1)中所述细菌固体培养基为改良的LB培养基制成的试管斜面，将拮 抗菌株枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)转接在斜面上28 30°C培养M 48小时。其中，改良LB培养基配方葡萄糖5g/L，蛋白胨10g/L，酵母膏5g/L，氯化钠5g/L， 磷酸二氢钾 0. 25g/L，碳酸钙 0. 25g/L，琼脂 18g/L，水 1L，ρΗ7· 0。其中，步骤O)中发酵培养基为马铃薯液体培养基，发酵参数为摇床115转/分 钟，温度22 25°C，发酵时间7-10天，菌体浓度1 X IO8 1 X IO9个/ml。其中，步骤(3)中所述离心是在4500转/分钟条件下离心30分钟，保存上清液的 温度为4°C。作为本发明的第三方面，一种用于桃的生物保鲜剂的应用，其特征在于，包括以下 步骤(1)桃分拣挑选无病虫害、无机械损伤、150 250g的八分熟桃子；(2)喷雾处理将配制好的保鲜剂均勻的喷在桃表面；(3)风干喷雾处理过的桃子用风扇吹干或自然风干；(4)装箱、预冷处理、保存将应经风干的桃子装有单层保鲜盒的保鲜箱里，避免挤压；先放置在冷库中预冷，再将冷库温度调到桃贮藏温度。其中，步骤( 所述喷雾处理，使用前将保鲜剂与吐温20配制成1000 1的溶液， 细孔喷雾器喷雾处理桃，每个桃子用5ml保鲜剂。其中，步骤(4)所述预冷温度6 10°C、湿度85% 90%、预冷时间12-14小时， 所述桃贮藏温度0 rc。本发明的有益效果本生物保鲜剂来源新，本发明是从发酵的豆制产品中分离出的食品微生物作为拮 抗菌株，所述微生物是枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)，本发明是利用枯草芽孢杆菌 (Bacillus subtilis)的代谢产物，不添加其他化学防腐成分。由于该保鲜剂不是微生物本 身，而是微生物的代谢产物，一定时间后可自动分解，更使得此保鲜剂绿色环保、无污染、无 残留，保证了其保鲜食品的安全性。本发明具有防止桃腐烂变质、保持水分、延缓其衰老的作用，其保鲜效果明显高于 其他国内生物保鲜剂。本发明的保鲜剂制备工艺先进，可操作性强。另外，本发明的应用方法简便，保鲜效果好，产品成本低，易于产业化生产和推广。
以下结合附图和具体实施方式
来进一步说明本发明。
图1 10°C下保鲜剂对桃好果率的影响图2 25°C下保鲜剂对桃好果率的影响
具体实施例方式为了使本发明的技术手段、创作特征、达成目的与功效易于明白了解，下面结合具 体图示，进一步阐述本发明。菌种的来源和制备。本发明是由豆制品中分离的食品微生物枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)，由 加拿大农业及农业食品部，食品研究中心提供的代谢产物制成。微生物是枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)，本发明所用培养基为改良的LB培 养基，通过稀释倒皿法和平板划线法(两者结合用)从发酵的豆制产品中分离出的有效的 食品微生物，纯化后利用平板对峙法筛选拮抗菌株。其中，改良LB培养基配方葡萄糖5g/L，蛋白胨10g/L，酵母膏5g/L，氯化钠5g/L， 磷酸二氢钾 0. 25g/L，碳酸钙 0. 25g/L，琼脂 18g/L，水 1L，ρΗ7· 0。其中，稀释倒平板法先将待分离的材料用无菌水依次作一系列的10倍稀释液 (如1 10、1 100、1 1000、1 10000...)，然后分别从每一个浓度梯度吸取ImL稀释液加入已灭菌的培养皿中，再倒入已溶化并冷却至55°C左右的改良LB培养基，混合均勻， 待琼脂凝固后，28°C培养Mh。挑取在平板表面或琼脂培养基中分散的单个菌落，或重复以 上操作数次，便可得到纯培养。其中，平板划线分离法由接种环以菌操作沾取少许待分离材料，在无菌平板表面 进行平行划线或扇形划线，微生物细胞数量将随着划线次数的增加而减少，并逐步分散开5来，如果划线适宜的话，微生物能逐个分散，经培养后，可在平板表面得到单菌落。其中，平板对峙法在固体PDA培养基上，中间接种平板划线法纯化得到并已培养 好的直径0. 5cm的菌块，两侧接种直径为0. 5cm的病原菌二8°C培养3_6天，每天3次测定 病原菌直径和拮抗菌直径，对照中间接种无菌培养基块，通过测定其抑制能力筛选拮抗性 能好的菌株。一种用于桃的生物保鲜剂的制备方法，包括以下操作步骤(1)拮抗菌的活化挑取筛选好的菌株接种在改良的LB培养基(葡萄糖5g/L，蛋 白胨10g/L，酵母膏5g/L，氯化钠5g/L，磷酸二氢钾0. 25g/L，碳酸钙0. 25g/L，琼脂18g/L， 水1L，pH7. 0)的试管斜面上，观 30°C培养M 48小时，待用；(2)拮抗菌摇床发酵将已活化的拮抗菌接种在马铃薯液体培养基中，摇床115 130转/分钟，温度22 25°C，发酵时间7-10天，菌体浓度1 X IO8 1 X IO9个/mL ；(3)离心除菌体发酵液用4500转/分钟的转速离心30分钟除去菌体，4°C保存 上清液以备用；(4)样品检测测定上清液对病原菌的孢子萌发或者丝核萌发的抑制率，以确定 样品的稳定性；(5)包装按每瓶IOOOml规格要求进行塑料瓶包装。一种用于桃的生物保鲜剂的应用，包括以下操作步骤(1)桃分拣挑选无病虫害、无机械损伤、150 250g的八分熟桃子；(2)喷雾处理使用前将保鲜剂与吐温20配制成1000 1的溶液，将配制好的溶 液用细孔喷雾器均勻的喷在桃表面，每个桃子5mL ；(3)风干喷雾处理过的桃子用风扇吹干或自然风干；(4)装箱、预冷处理、保存将应经风干的桃子装有单层保鲜盒的保鲜箱里，避免 挤压，放置在温度6 10°C、湿度85% 90%的冷库中预冷12 14小时，再将冷库温度调 到桃贮藏温度0 1°C。上述制备及应用过程应注意离心过的上清液要4°C保存；应用时，喷雾要均勻、 完全，桃子的各个部位都要喷到。以下为本发明与其他保鲜剂的比较结果如图1所示，10°C下保鲜剂对桃好果率的影响如图2所示，25°C下保鲜剂对桃好果率的影响注C06为本发明的桃生物保鲜剂，BOl为国内另一家使用量较大的果蔬生物保鲜 剂。试验结果表明，参见图1和图2，本发明在常温和低温条件下的保鲜效果明显高于 生物保鲜剂B01，其好果率、感官等口味等各项指标均优于生物保鲜剂B01。本发明属于生物保鲜剂，该生物保鲜剂，是利用改良的LB培养基通过稀释倒皿法 和平板划线法，从豆制品中分离出的食品微生物产生的代谢产物，具有防腐功能的食品微 生物，不添加其他化学防腐成分。特别适合于对桃等核果类水果在贮藏和运输过程中的保 鲜。此生物保鲜剂是一种它可抑制桃的主要病原菌的生长、繁殖，防止桃贮存过程中的腐 烂、褐变，延缓桃衰老过程，用于水蜜桃保鲜，效果更佳。由于本保鲜剂成分是微生物的分泌 物而不是微生物细胞本身，因而具有高安全性。其保鲜剂来源新，安全无毒、无害、无污染，6制备工艺简单、成本低廉、易产业化生产，其应用方法也较为简便，利于推广。
以上显示和描述了本发明的基本原理、主要特征和本发明的优点。本行业的技术 人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本 发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下本发明还会有各种变化和改进，这些变 化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其 等同物界定。
权利要求
1.一种用于桃的生物保鲜剂，其特征在于，包括按照重量份数计，微生物产生的代谢产 物995-999份，吐温201-5份；所述微生物是枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)，所述微 生物的菌体浓度1 X IO8 1 X IO9个/ml。
2.根据权利要求1所述的一种用于桃的生物保鲜剂，其特征在于，所述用于桃的生物 保鲜剂，包括微生物产生的代谢产物999重量份，吐温20为1重量份。
3.—种如权利要求1所述的用于桃的生物保鲜剂的制备方法，其特征在于，包括以下 步骤(1)拮抗菌的活化细菌固体培养基做试管斜面，将拮抗菌株枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)转接在斜面上扩大培养；(2)枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)拮抗菌摇床发酵菌体转接至液体培养基中 摇床发酵；(3)离心除菌体摇床发酵好的菌液低速离心除去菌体，保存上清液以备用；(4)样品检测测定发酵上清液对病原菌的孢子萌发抑制率；(5)包装按每瓶IOOOml规格要求进行塑料瓶包装。
4.根据权利要求3所述的一种用于桃的生物保鲜剂的制备方法，其特征在于，步骤(2) 中发酵培养基为马铃薯液体培养基，发酵参数为摇床115转/分钟，温度22 25°C，发酵时 间7-10天，菌体浓度1 X IO8 1 X IO9个/ml。
5.根据权利要求3所述的一种用于桃的生物保鲜剂的制备方法，其特征在于，步骤(3) 中所述离心是在4500转/分钟条件下离心30分钟，保存上清液的温度为4°C。
6.一种如权利要求1所述的用于桃的生物保鲜剂的应用，其特征在于，包括以下步骤(1)桃分拣挑选无病虫害、无机械损伤、150 250g的八分熟桃子；(2)喷雾处理将配制好的保鲜剂均勻的喷在桃表面；(3)风干喷雾处理过的桃子用风扇吹干或自然风干；(4)装箱、预冷处理、保存将应经风干的桃子装有单层保鲜盒的保鲜箱里，避免挤压； 先放置在冷库中预冷，再将冷库温度调到桃贮藏温度。
7.根据权利要求6所述的一种用于桃的生物保鲜剂的应用，其特征在于，步骤(2)所述 喷雾处理，使用前将保鲜剂与吐温20配制成1000 1的溶液，细孔喷雾器喷雾处理桃，每 个桃子用5ml保鲜剂。
8.根据权利要求6所述的一种用于桃的生物保鲜剂的应用，其特征在于，步骤(4)所述 预冷温度6 10°C、湿度85% 90%、预冷时间12-14小时，所述桃贮藏温度0 1°C。
全文摘要
一种用于桃的生物保鲜剂，包括枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)的代谢产物995-999份，吐温20 1-5份；菌体浓度1×108～1×109个/mL。该保鲜剂的制备方法，包括以下步骤拮抗菌株的活化、拮抗菌株摇床发酵、离心除菌体、样品检测、包装；该保鲜剂的应用包括桃分拣、喷雾处理、风干、装箱。本发明适合于对桃等核果类水果在贮藏和运输过程中的保鲜。它可抑菌，防止腐烂、褐变，延缓桃衰老过程，用于水蜜桃保鲜，效果更佳。由于本保鲜剂成分是微生物的分泌物而不是微生物细胞本身，具有高安全性，制备工艺简单、成本低廉、易产业化生产，其应用也较为简便，利于推广。
文档编号A23B7/155GK102047951SQ20091020978
公开日2011年5月11日 申请日期2009年10月29日 优先权日2009年10月29日
发明者何惠霞, 方毅, 曹玉明, 高海燕 申请人:上海佳迈农业技术服务有限公司