专利名称：Tt1基因在提高植物抗旱性中的用途的制作方法
技术领域：
本发明属于生物技术领域，具体涉及TTl基因在提高植物抗旱性中的用途。
背景技术：
水资源短缺是目前制约农业发展的一个全球性问题。据统计，全球约43%的耕地 受到干旱、半干旱的威胁。干旱胁迫不仅严重影响作物生长发育、降低作物的产量，同时还 限制优良作物品种的推广。因此，提高作物的抗旱能力是现代农业研究工作中的热点问题之一。植物抗旱方面的研究涉及植物的形态、生理生化及分子生物学等诸多领域。植物 在干旱条件下根系及叶片结构的变化，脱落酸(ABA)和气孔关闭的关系，渗透调节物质甘 露醇、脯氨酸、甜菜碱、海藻糖、果聚糖、肌醇、多胺等小分子化合物与植物抗旱的关系，水孔 蛋白、活性氧清除及胚胎发育晚期丰度蛋白对植物抗旱性的影响等抗旱方面的研究一直受 到人们的关注。随着分子生物学研究的发展，人们相继发现并克隆出了一些重要的耐旱基因，获 得了烟草、水稻等抗旱转基因植株。并已在水稻上成功的进行了转抗旱基因水稻品系的培 育，这为其他植物的转抗旱基因的研究带来了广阔的应用前景。目前，抗旱基因工程中也存 在着一些问题。抗旱性是数量性状，由多基因控制，单基因转化能够提高植物的抗旱性，但 具体到哪种植物适合哪种基因还有待于进一步研究。目前利用基因工程技术培育抗旱品种主要有两种策略增加植物渗透性代谢产物 的合成能力，使植物在水分胁迫下能合成更多的渗透调节物质(如甘露醇、甜菜碱、海藻糖 等)，以提高植物的渗透调节能力，从而增强植物的抗旱性；增强植物对活性氧自由基的清 除能力，使植物在水分胁迫下过度表达一些酶(如S0D，P0D，CAT等)，以有效地排除有害的 活性氧自由基，从而提高细胞耐脱水的能力。由于渗透调节是植物主要的耐旱机制，近年来 人们已利用植物基因工程手段来增加目标植物中脯氨酸和甜菜碱的合成，在以渗透调节为 主的耐旱性转基因植物培育方面取得了可喜的进展。脯氨酸是水溶性很大的氨基酸。它具有偶极性使其疏水端与蛋白质联结。而亲水 端与水分子结合，从而使蛋白通过脯氨酸束缚更多的水分子，因此可增加蛋白质的可溶性， 使更多的可溶性蛋白加入到渗透调节的行列中。同时束缚水含量的增加也能避免或减少因 细胞脱水引起的蛋白质变性。因而增加脯氨酸的合成能力，可提高植物的抗旱性，在这方面 国内外有许多成功的报道。随着分子生物技术的迅速发展和基因克隆技术的不断完善，植物基因工程研究正 向纵深发展，抗性基因研究已由抗生物逆性(如抗病、抗虫)向抗非生物逆性(如抗寒、抗 旱、抗盐等)转移。使用基因工程技术以期提高植物的抗旱性，培育出抗旱品系也是一个可 行之道。但是目提高植物抗旱性的备选基因还较少。在申请人之前递交的中国专利申请 200810045667.8中记载了分离自油菜的新基因，命名为TT1。本领域需要开发出能够提高植物抗旱性的备选基因，以及运用基因工程技术提高
3植物的抗旱性的方法。
发明内容
本发明要解决的技术问题是为提高植物抗旱性的转基因技术领域提供一种新的 有效选择。本发明解决该技术问题的技术方案是提供了 TTl基因在提高植物抗旱性中的用 途。其中，上述TTl基因的核苷酸序列(1)如SEQ ID NO 1所示的核苷酸序列；或(2)在(1)限定的核苷酸序列中经过取代、缺失或添加至少一个核苷酸衍生所 得的核苷酸序列，且与SEQ ID NO :1的序列编码功能相同或相似的多肽。也能提高植物抗旱性。本发明同时提供了 TTl基因编码的多肽在提高植物抗旱性中的用途。上述TTl基因具有如下核苷酸序列(1)如SEQ ID NO 1所示的核苷酸序列；或(2)在(1)限定的核苷酸序列中经过取代、缺失或添加至少一个核苷酸衍生所 得的核苷酸序列，且与SEQ ID NO :1的序列编码功能相同或相似的多肽。本发明还提供了一种培育抗旱植物的方法。该方法包括以下步骤(1)将TTl基因可操作地连于载体上的表达调控序列后，形成所述TTl基因的重组 载体；(2)将步骤(1)中的重组载体转入植物细胞；(3)经筛选获得转化细胞，然后将转化细胞培育成转基因抗旱植株及其后代，所述 后代包括植物种子及植物组织。本发明中所述的TTl基因，其基本核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO :1所示，该 基因来源于十字花科(Brassicaceae，也名Cruciferae)中芥属(Brassica)的植物油菜 (Brassicanapus)，以油菜中的atp6基因为诱饵蛋白，根据酵母双杂交方法，筛选到油菜中 的一个EST序列，再根据这段筛选到的序列，通过5’RACE的方法获得序列表中SEQ ID NO 1所示的核苷酸序列。然后根据SEQ ID NO :1所示的核苷酸序列设计一对PCR引物，从油 菜cDNA中扩增SEQ ID NO 1所示的核苷酸序列。在本发明中，“在SEQ ID NO=I中的核苷酸序列经过取代、缺失或添加至少一个核 苷酸衍生序列”的TTl基因序列一般是指编码具有SEQ ID NO :1所编码的蛋白活性的多肽 的核苷酸序列及其简并序列。该简并序列是指所述序列中有一个或多个密码子被编码相 同氨基酸的简并密码子所取代后而产生的序列。由于密码子的简并性，所以与SEQ ID NO 1同源性低至约89%的简并序列也能编码出SEQ ID NO :1所述的序列。另外，“在SEQ ID NO 1中的核苷酸序列经过取代、缺失或添加至少一个核苷酸衍生序列”的含义还包括能在 中度严谨条件下，更佳的在高度严谨条件下与SEQ ID NO :1核苷酸序列杂交的核苷酸序列。 该术语还包括与SEQ ID NO :1中的核苷酸序列的同源性至少80%，较佳地至少89%，更佳 地至少90 %，最佳地至少95 %的核苷酸序列。在本发明中的相同功能是指提高植物的抗旱 性。
该术语还包括能编码具有与天然的SEQ ID NO :1相同功能的蛋白的SEQ ID NO=I 中开放阅读框序列的变异形式。这些变异形式包括(但并不限于)若干个(通常为1 90个，较佳地1 60个，更佳地1 20个，最佳地1 10个)核苷酸的缺失、插入和/或 取代，以及在5’和/或3’端添加数个(通常为60个以内，较佳地为30个以内，更佳地为 10个以内，最佳地为5个以内)核苷酸。比如SEQ ID NO :3所示的核苷酸序列，其编码的 多肽也能提高植物的抗旱性。本发明所述重组载体，是将TTl基因插入到载体中获得，上述载体可选用本领域 已知的各种载体，尤其是真核表达载体(如PBI121或pCAMBIA2301)。本发明用上述重组载 体转化宿主植物细胞，筛选获得转化细胞。然后将转化细胞培育成转基因抗旱植株及其后 代，所述后代包括植物种子及 植物组织。本发明中所述的“可操作地连于”表示如下情况即线性DNA序列的某些部分能够 影响同一线性DNA序列其他部分的活性。例如，如果信号肽DNA作为前体表达并参与多肽 的分泌，那么信号肽(分泌前导序列)DNA就是可操作地连于多肽DNA ；如果启动子控制序 列的转录，那么它是可操作地连于编码序列；如果核糖体结合位点被置于能使其翻译的位 置时，那么它是可操作地连于编码序列。一般，“可操作地连于”意味着相邻，而对于分泌前 导序列则意味着在阅读框中相邻。本发明的有益效果在于本发明提供了 TTl基因在提高植物抗旱性方面的用途， 在本发明的实施例中也通过实验证明转入了 TTl基因并过表达的植物在干旱环境下其种 子萌发率有了明显提高，生长后的植株中的脯氨酸含量也有提高，其幼苗的生长情况也更 有证明了 TTl基因能有效的提高植物抗旱性。本发明培育出抗旱植物的方法也简便而有 效，为提高植物抗旱性提供了新的有效选择，具有好的应用前景。
图1 :PCR检测，证明获得了 TTl基因过量表达甘蓝型油菜株系(图1_A)和TTl基 因抑制表达甘蓝型油菜株系(图1-B)。图3-A中，1、2、3、4为TTl基因过量表达甘蓝型油 菜的检测结果，M :marker ；图I-B中1、2为TTl基因抑制表达甘蓝型油菜株系，M :marker0图2:SEQ ID NO :1核苷酸序列过量表达和抑制表达的转基因甘蓝型油菜与甘蓝 型油菜在转录水平上SEQ ID NO :1核苷酸序列表达差异的比较分析图。其中ZN-OE为TTl 基因过量表达转基因甘蓝型油菜，ZN-DN为TTl基因抑制表达转基因甘蓝型油菜，WT为野生 型甘蓝型油菜。图3 干旱胁迫后转TTl基因油菜脯氨酸(Pro)含量测定结果。其中OE (1)、0E (2)、 0E(3)为3个TTl基因过量表达转基因甘蓝型油菜株系，WT为野生型甘蓝型油菜；纵坐标为 脯氨酸含量，单位为yg/g。图4 停止浇水当天的照片，左为野生型，右为转基因型。图5 停止浇水5天后的照片，左为野生型，右为转基因型。图6 停止浇水8天后的照片，左为野生型，右为转基因型。
具体实施例方式下面通过实施例并结合附图，进一步说明而不限定本发明。
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下述实施例中，凡未注明具体实验条件的，均为按照本领域技术人员熟知的 常规条件，例如Sambrook，Russell的分子克隆实验室手册(New York Co Id Spring HarborLaboratory Press, 1989)中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。下述实施 例中，所用载体PET28，pGEX-2T，pGEM-T购自于Qiagen公司，菌株BL21购自于Qiagen公 司，菌株EHA105、载体pBI121购自于Clontech公司。其余化学试剂均为市售分析纯。下述实施例中，“SEQ ID NO 1”单独出现时，本领域技术人员可理解1其为“SEQ IDNO 1所示核苷酸序列”的简称，实施例一TTl基因的克隆及获取以油菜中的atp6(genebank gi :89279377)基因为诱饵蛋白，根据酵母双杂交方 法(见Clontech公司所公开的资料)，筛选到油菜中的一个EST序列(SEQ ID NO :3所示，编 码的氨基酸序列如SEQ ID NO 4所示)，再根据这段筛选到的序列，通过5'RACE (见Takara 公司所公开的资料)的方法获得本发明所述提高植物抗旱性的基因，其核苷酸序列如序列 表中SEQID NO :1所示。根据SEQ ID NO 1所示核苷酸序列设计引物，上游引物(SEQID NO 7) :5，-ATGTCGGATCATTTGAGTTTATG-3，，下游引物(SEQID NO 8) :5，-TCAGACTGGTGTTGGGTTGGATAT-3，。
然后经PCR从油菜cDNA中扩增SEQ ID NO 1所示的核苷酸序列。PCR程序如下
195 0C4min (预变性)
295 0C30s (变性)
353 0C30s (复性)
472 0C50s (延伸)
52 4步骤循环30次
672 0C5min (终延伸)
74 0C保存。 对PCR产物纯化(见Qiagen公司所公开的PCR产物纯化资料)，经测序验证，得到 序列SEQ ID NO 1的基因片段。 核苷酸序列SEQ ID NO 1的替换与缺失根据SEQ ID NO 1所示核苷酸序列，设计 上游引物(SEQ ID NO 9) 5-ATGGCTGATGATTTCAG TTTATGTAC-3，和下游引物(SEQ ID NO 10 )5-，TTGGGTTGGATATTGGCGGCGGCTG-3，，以连接有 SEQ ID NO 1 的载体 pET28 做模板，PCR 扩 增出SEQ ID NO 5序列(编码的多肽序列为SEQ ID NO 6所示，是在SEQ ID NO 2序列N 端的第二个丝氨酸替换成丙氨酸以及第五位的亮氨酸替换成苯丙氨酸，并且C端缺失三个 氨基酸)，然后连接PGEM-T载体。设计扩增出完整编码SEQ ID NO 3序列的引物上游引物(SEQID NO 11)5’ -CCGGAA TTC ATGGCTGATGATTTCAG TTTATGTAC-3，，下游引物(SEQID NO 12)5’ -CCGGAGCTC TTGGGTTGGATATTGGCGGCGGCTG-3，经PCR从连接有SEQ ID NO 4的pGEM_T载体中扩增SEQ ID NO 3的核苷酸序列，PCR程序如下
95 0C4min (预变性)
950C30s (变性) 530C 30s (复性) 72V 50s (延伸)
2 4步骤循环30次 72 0C 5min (终延伸)
4 0C 保存。
对PCR产物纯化，然后用BamHl与Sacl酶切，胶回收，与pET28连接(连接位 点=BamHl与Sacl)，获含SEQ ID NO 4的重组质粒。将含SEQ ID NO 4的重组质粒转化 E. coli，涂布于含Amp的LB固体培养基上。经测序验证，得到含SEQ ID NO 3的重组质粒 的 E. colipET28 菌株。195 0C4min(预变性)
295 0C30s(变性)
353 0C30s(复性)
472 0C50s(延伸)
52 4步骤循环30次
672 0C5min(终延伸)
74 0C保存。对PCR产物纯化(见Qiagen公司所公开的资料)，然后用BamHl与Sacl酶切，胶 回收，与载体PBI121连接(连接位点=BamHl与Sacl)，获含SEQ ID NO 1的过量表达重组 质粒。将含SEQ ID NO :1的过量表达重组质粒转入农杆菌中，利用下胚轴浸染的方法转化 甘蓝型油菜(见步骤2)。(2)目的基因抑制表达重组质粒的构建根据SEQ ID NO 1所示核苷酸序列设计引物，上游引物(SEQID NO 15)5 ’ -CCGGAGC TCATGTCGGATCATTTGAGTTTATG-3’，下游引物(SEQID NO 16)5’ -CGC GGATCCTCAGACTGGTGTTGGGTTGGATAT-3’。经PCR，从油菜cDNA中扩增完整的SEQ ID NO 1所示的核苷酸序列，
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PCR程序如下1. 95°C 4min (预变性)2. 95"C 30s (变性)3. 53"C 30s (复性)4. 72"C 50s (延伸)5. 2 4步骤循环30次6. 72 "C 5min(终延伸)7.4V 保存。对PCR产物纯化(见Qiagen公司所公开的资料)，然后用BamHl与Sacl酶切，胶 回收，与载体PBI121连接(连接位点=BamHl与Sacl)，获含SEQ ID NO 1的抑制表达重组 质粒。将含SEQ ID NO :1的抑制表达重组质粒转入农杆菌中，利用下胚轴浸染的方法转化 甘蓝型油菜(见步骤2)。2、胚轴浸染的方法转化甘蓝型油菜(1)无菌苗的获取选取籽粒饱满的甘蓝型油菜种子，4°C过夜春化(保持种子发芽同步)，然后取出， 用70%乙醇浸泡30s，0. 的升汞(HgCl2)溶液浸泡8 lOmin，无菌水冲洗5次，滤纸吸 干，接种于MS固体培养基上。置培养室中24°C，暗培养2 3天，然后取出光照16h/d继续 萌发。取5 7cm(约7 8天)无菌苗下胚轴作为转化受体。(2)下胚轴的预培养将油菜下胚轴切成7mm左右小段，分散均勻置于预培养基(MS+2mg/L 6-BA，lmg/ L2，4-D，2. 5mg/L AgNO3,19. 62mg/L AS)中进行2 3天的预培养(可见下胚轴变粗)。(3)下胚轴的浸染及共培养挑取含SEQ ID NO 1的过量表达重组质粒的农杆菌、含SEQ ID NO=I的抑制表达 重组质粒的农杆菌，分别接种于含20mg/L Str,50mg/L Kan,40mg/L Rif的LB液体培养基 中，28°C摇菌过夜后收集菌体，重悬于含100mg/L AS的MS液体培养基中至OD6tltl = 0. 4-0. 6， 28°C摇菌 l_2h。将经预培养的健壮的油菜下胚轴分别浸入含SEQ ID NO 1的过量表达重组质粒的 农杆菌和含SEQ ID N0:1的抑制表达重组质粒的农杆菌的菌液中30s-lmin，此期间不断振 荡使菌液与油菜下胚轴充分接触。用无菌滤纸迅速吸干多余的菌液，将油菜下胚轴平放于 共培养基(MS+2mg/L 6-BA, lmg/L 2，4_D，2. 5mg/L AgNO3,19. 62mg/L AS)上，共培养 2d。(4)筛选培养与芽的诱导将共培养后的两种油菜下胚轴分别接入分化培养基(MS+2mg/L 6-BA, lmg/L 2， 4-D, 2. 5mg/L AgNO3,19. 62mg/L AS)中继续培养。每2周更新培养基一次，培养4周，得到 愈伤芽。(5)生根在筛选培养基(MS+2mg/L6_BA，2.5mg/L AgNO3, 500mg/L Carb, 10mg/L Kan)上 待两种愈伤芽长至有4-6片真叶时，将芽从愈伤组织中切下，移入生根培养基(1/2MS， 0. 15mg/L NAA, 250mg/L Cef)中。待再生苗根系生长发达时，将培养罐移至室外2_3d，然后 将培养罐盖揭开，在培养室中炼苗2-3d。
(6)盆栽培养将含SEQ ID NO :1的过量表达和含SEQ ID NO 1的抑制表达转基因植株分别在生 根培养基上发育出完整根系，将其转入盆栽。(7)转基因油菜的PCR检测待土壤中两种再生植株长大后，各取叶片少量抽提总DNA，以提取的DNA做模板， 分别进行PCR检测。I.目的基因过量表达甘蓝型油菜转基因株系检测上游引物(SEQID NO 17) :5，ATTTCATTTGGAGAGAACACGG 3，下游引物(SEQID NO 18) :5，TCAGACTGGTGTTGGGTTGGATAT 3，PCR程序如下195 0C4min (预变性)
295 0C30s(变性)
353 0C30s(复性)
472 0C50s(延伸)
52 4步骤循环37次
672 0C5min(终延伸)
74 0C保存。然后琼脂糖电泳检测是否有目标条带出现，若有则代表目的基因已转入甘蓝型油 菜。检测结果见图3A，所检测出目的条带的大小和预期SEQ ID N0:1大小一致，约为860bp。II.目的基因抑制表达甘蓝型油菜转基因株系检测上游引物(SEQID NO 19) :5，ATTTCATTTGGAGAGAACACGG 3，下游引物(SEQID NO 20) :5，ATGTCGGATCATTTGAGTTTATG 3，PCR程序如下
195 0C4min(预变性)
295 0C30s(变性)
353 0C30s(复性)
472 0C50s(延伸)
52-4步骤循环37次
672 0C5min(终延伸)
74 0C保存。然后琼脂糖电泳检测是否有目标条带出现，若有则代表目的基因已转入甘蓝型油 菜。检测结果见图3-B，如图所示，所检测出目的条带的大小和预期SEQ ID NO :1大小一致， 约为860bp。3、利用RT-PCR检测SEQ ID NO 1在转基因油菜植株中的表达(1)含SEQ ID NO=I的过量表达和含SEQ ID NO=I的抑制表达转基因植株以及甘 蓝型油菜的RNA制备与定量制备参考《分子克隆》(Sambrook等，1989)。(2)将含SEQ ID NO=I的过量表达和含SEQ ID NO=I的抑制表达转基因植株以及 甘蓝型油菜的RNA分别反转录成单链cDNA。分别取上述三种植物材料2ug总RNA，置65°C变性5min。在1. 5ml Eppendorf管
9中依次加入下列物质热变性 RNA，4ul 5Xlst Strand Synthesis Buffer, Iul DNTP, Iul RNaseInhibitor, Iul Oligo (dT) 18(0. 5g/L), Iul M-MLV, H2O 补足到 20ul，混合均勻后，于 42°C 保温 Ih。(3)半定量PCR反应1)模板量的确定先用actin基因作为内参，以反转录产物单链cDNA为模板进行PCR扩增，使上述 三种反转录的单链cDNA所扩增的actin的量一致(以电泳条带的光密度值计量)，进一步 确定所需的单链cDNA的模板量。PCR扩增程序
195 0C4min(预变性)
295 0C30s(变性)
353 0C30s(复性)
472 0C50s(延伸)
52-4步骤循环27次
672 0C5min(终延伸)
74 0C保存。2)循环数的确定以上述三种反转录的单链cDNA为模板，分别对actin基因与SEQ ID N0:1基因 进行PCR扩增，分别在15、18、21、24、27、30循环时取样跑电泳以确定指数增长期和平台期。 在指数增长期进行样品的半定量PCR反应(21个循环)。PCR扩增程序1. 95°C 4min (预变性)2. 95"C 30s (变性)3. 53"C 30s (复性)4. 72"C 50s (延伸)5. 2 4步骤循环21次6. 72 "C 5min (终延伸)7. 4°C 保存。试验结果表明在SEQ ID NO=I过量表达转基因甘蓝型油菜(Zn-OE)中，SEQ ID NO :1基因表达量增加，是对照植株(甘蓝型油菜WT)的2. 5倍；在SEQ ID NO :1抑制表达 转基因甘蓝型油菜(Zn-DN)中，SEQ ID NO 1基因表达量减少，只有对照植株(甘蓝型油 菜WT)的一半。检测结果见图2。如图所示，SEQ ID NO :1核苷酸序列过量表达甘蓝型油 菜(Zn-OE)中，SEQ ID NO=I基因表达量增加，是甘蓝型油菜的2. 5倍；在SEQ ID NO 1核 苷酸序列抑制表达甘蓝型油菜(Zn-DN)中，SEQ ID NO 1基因表达量减少，只有甘蓝型油菜 (WT)的一半。同理，制得SEQ ID NO 3抑制表达转基因甘蓝型油菜和SEQ ID NO=I核苷酸序列 过量表达甘蓝型油菜植株和种子备用。实施例三干旱胁迫对转TTl基因甘蓝种子萌发及幼苗存活的影响在实验室内一般可以采用PEG、甘露醇、蔗糖等溶液模拟干旱条件以测试植物的生
10长情况。Hohl等对上述胁迫剂研究的多项结果都支持用PEG作为渗透剂，研究植物的水分 关系。分子量6000的PEG比分子量较低的PEG，如PEG1000、2000等的效果更好。可能是因 为PEG6000的分子量较大，不会进入植物细胞造成伤害。蔗糖溶液易诱发霉菌，一般不用作 渗透剂。因此，本实施例采用PEG 6000模拟干旱胁迫条件。选取三个株系转基因型(OE)与非转基因的野生型(WT)各100粒大小均勻、饱满、 无病虫的油菜种子进行发芽。将8层吸水纸放入培养皿中，再放一层滤纸作为发芽床，处理 组发芽床加IOmL 10%的PEG6000溶液。对照组则分别选取三个株系转基因型(OE)与非转 基因的野生型(WT)各100粒大小均勻、饱满、无病虫的油菜种子进行发芽，则加IOmL蒸馏 水，置于恒温25°C室内在自然光照下进行发芽。7d后测定存活幼苗数、计算成苗率，随机选 取10株幼苗测定苗高、主根长、单株鲜重。试验重复3次。计算和测定方法如下相对发芽率=(处理发芽率/对照发芽率)X 100% ；相对苗高=(处理苗高/对照苗高)X 100% ；相对鲜重=(处理鲜重/对照鲜重)X 100 % ；相对活力指数=(处理成苗率X处理幼苗苗高)/(对照成苗率X对照幼苗苗 高)X 100% ；实验结果表明转TTl基因甘蓝种子萌发率和幼苗生长情况优于野生型。表1干旱胁迫对转TTl基因甘蓝种子萌发及幼苗存活的影响
权利要求
TT1基因在提高植物抗旱性中的用途。
2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于所述TTl基因具有如下核苷酸序列 (1)如SEQ ID NO 1所示的核苷酸序列；或(2)在(1)限定的核苷酸序列中经过取代、缺失或添加至少一个核苷酸衍生所得的 核苷酸序列，且与SEQ ID NO :1的序列编码功能相同或相似的多肽。
3.TTl基因编码的多肽在提高植物抗旱性中的用途。
4.根据权利要求3所述的用途，其特征在于所述TTl基因具有如下核苷酸序列 (1)如SEQ ID NO 1所示的核苷酸序列；或(2)在(1)限定的核苷酸序列中经过取代、缺失或添加至少一个核苷酸衍生所得的 核苷酸序列，且与SEQ ID NO :1的序列编码功能相同或相似的多肽。
5.一种培育抗旱植物的方法，其特征在于包括以下步骤(1)将TTl基因可操作地连于载体上的表达调控序列后，形成所述TTl基因的重组载体；(2)将步骤(1)中的重组载体转入植物细胞；(3)经筛选获得转化细胞，然后将转化细胞培育成转基因抗旱植株及其后代，所述后代 包括植物种子及植物组织。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于所述TTl基因具有如下核苷酸序列 (1)如SEQ ID NO 1所示的核苷酸序列；或(2)在(1)限定的核苷酸序列中经过取代、缺失或添加至少一个核苷酸衍生所得的 核苷酸序列，且与SEQ ID NO :1的序列编码功能相同或相似的多肽。全文摘要
本发明属于生物技术领域，具体涉及TT1基因在提高植物抗旱性中的用途。本发明要解决的技术问题是为提高植物抗旱性的转基因技术领域提供一种新的有效选择。本发明解决技术问题的技术方案是提供了TT1基因在提高植物抗旱性方面的用途，经实验证明转入了TT1基因并过表达的植物在干旱环境下其种子萌发率有了明显提高，生长后的植株中的脯氨酸含量也有提高，其幼苗的生长情况也更有证明了TT1基因能有效的提高植物抗旱性。本发明培育出抗旱植物的方法也简便而有效，为本领域提供了新的有效选择。
文档编号C12N15/82GK101962655SQ20091030472
公开日2011年2月2日 申请日期2009年7月23日 优先权日2009年7月23日
发明者杨毅 申请人:四川贝安迪生物基因工程有限公司