专利名称：一种小球藻的培养方法
技术领域：
本发明属于微藻生物技术领域，涉及一种小球藻的培养方法。
背景技术：
微藻富含蛋白质、多糖、不饱和脂肪酸等营养成分(如螺旋藻)，可用于食品、医药和能源方面；可以大量积累脂肪酸，有些微藻脂肪酸含量可占干重的30% 60%。利用培养微藻来积累油脂资源，已经成为目前利用太阳能开发可再生资源最热门的研究领域。不仅具有强大的市场潜力，而且具有非凡的社会价值。但大部分野生微藻生长速度不快，固定二氧化碳能力也有限，要实现规模化生产， 需要消耗大量的人力物力，而收获甚微。当前，微藻研究正值热门时期，微藻的生长速度和油脂积累量成为研究的重点。微藻的生产要消耗C02，CO2的有效利用吸收，是实现理想培养效果的关键，目前开放的光生物培养微藻技术中，有不少(X)2补给方式和装置。李夜光等“微藻养殖池补充二氧化碳装置”(申请号200610018771. 9)采用一种与养殖池相连的(X)2补给装置，可以有效提高(X)2利用率，但工艺繁琐，增加了设备投资。刘建国等“微藻规模培养的管道光生物反应器”(申请号200410020978. 0)及缪坚人等“一种微藻工业生产用光合生物反应器系统”(申请号03^8138. 9)均采用在光生物反应器系统中加入一种装置方法，来实现(X)2的补给，同时也能实现一定的氧解析效果。这些都难免增加设备投资，工艺过程繁琐。目前文献报道中还有另外的一种CO2补给方式，丛威等在“通过PH值反馈控制补碳培养微藻的方法”(申请号200410009360. 4)和“用于大规模微藻的补碳装置及其使用方法合用途”(申请号200510126465. 2)中使用烟道气补碳。现有技术中，通过(X)2补给装置来实现较高的(X)2溶解浓度，提高(X)2的利用效率。 此外，培养温度也是影响(X)2溶解浓度的一个重要因素。目前一般的微藻在25°c 35°C条件下培养，其(X)2溶解度相差不大，当培养温度下降到5°C 15°C以后，(X)2在培养液中的溶解度提高了 3 4倍，这为微藻的培养提供了优先条件。但是，温度降低会严重影响微藻的生长速度，甚至使大部分微藻无法生长，因此，现有技术中关于在低温下培养微藻鲜有报道。
发明内容
针对现有技术的不足，本发明提供一种微藻高效培养方法。本发明方法能够使微藻在低温下正常生长，提高微藻油脂积累量和(X)2的利用效率。本发明微藻培养方法包括如下内容生物反应器内藻种液体积占培养基总体积的百分比为5-15%，通入CO2含量为5v% _15v%的气体，通气量为0. 1-1. Ovvm(每分钟通入单位体积容积内的单位体积量)，培养期间PH为7-10，培养温度自25°C -40°C起在0. 5-10 天内降温至0°C -15°C，于0°C _15°C下继续恒温培养5-15天。本发明方法培养温度可以自25°C -40°C起每0.5-5天勻速降温1-10°C，每降l-10°c恒温培养0. 5-5天，直至降温至0-15°C，也可以自25°C _40°C起在0. 5-10天内勻速降温至0°C -15°C。本发明方法所述的生物反应器内搅拌速度为80-100rpm，光照强度为 1000-60001x。本发明方法藻种为一种小球藻，包括市场上普通小球藻，也可包括经过驯化后可以进行异养快速生长的异养小球藻。本发明方法所用培养基的基本组成如下
权利要求
1.一种小球藻的培养方法，其特征在于包括如下内容生物反应器内藻种液体积占培养基总体积的百分比为5-15 %，通入(X)2含量为5v% _15v%的气体，通气量为0. 1-1. Ovvm, 培养期间PH为7-10，培养温度自25 V -40 °C起在0. 5-10天内降温至0°C -15 °C，于 O0C _15°C下继续恒温培养5-15天。
2.如权利要求1所述的培养方法，其特征在于所述的培养温度自25°C-40°C起每 0. 5-5天勻速降温1-10°C，每降1-10°C恒温培养0. 5_5天，直至降温至0_15°C。
3.如权利要求1所述的培养方法，其特征在于所述的培养温度自25°C-40°C起在 0. 5-10天内勻速降温至0°C -15°C。
4.如权利要求1所述的培养方法，其特征在于所述的生物反应器内搅拌速度为 80-100rpm，光照强度为 1000_60001x。
5.如权利要求1所述的培养方法，其特征在于所述的培养基基本组成为每升水中含有 0. 10 0. 50g 的 NaNO3 或 KNO3,0. 05 0. IOg 的 K2HPO4 · 3Η20，0· 05 0. IOg 的 MgSO4 · 7Η20，0· 01 0. 05g 的 CaCl2 · 2Η20，0· 05 0. 5g 的 KH2PO4,0. 01 0. 05g 的 NaCl， 10 40mL 的土壤提取液，0. 001 0. 005g 的 FeCl3 · 6H20，0. 5 2mL 的 Fe-EDTA。
6.如权利要求1或4所述的培养方法，其特征在于所述的培养基内含有浓度为0.01 0. 05mmol/L 的 Na2S03。
7.如权利要求1或4所述的培养方法，其特征在于所述的培养基内含有浓度为0.5 1.OmL/L的微量元素混合液，每升微量元素混合液成份为H3B035. 5 6. 5g、ZnSO4 · 7H20 4· 0 5. 0g、MnCl2 ·Η20 0· 5 1. 0g、(NH4) 6Mo7024 ‘ 4H200. 20 0. 40g、CuSO4 · 5H20 0. 50 1. 00g、Co (NO3) 2 · 6H20 0. 10 0. 20g。
8.如权利要求1所述的方法，其特征在于含CO2的气体是厌氧发酵或微氧发酵过程排放的尾气。
9.如权利要求1所述的方法，其特征在于含CO2的气体是好氧微生物发酵过程的尾气脱氧处理后的气体，氧含量为低于8v%。
全文摘要
本发明公开一种小球藻的培养方法，该方法包括如下内容生物反应器内藻种液体积占培养基总体积的百分比为5-15％，通入CO2含量为5v％-15v％的气体，通气量为0.1-1.0vvm，培养温度自25℃-40℃起在0.5-10天内降温至0℃-15℃，于0℃-15℃下继续恒温培养5-15天。本发明方法能够使微藻在低温下正常生长，提高微藻油脂积累量和CO2的利用效率。
文档编号C12N1/12GK102311920SQ20101022090
公开日2012年1月11日 申请日期2010年7月7日 优先权日2010年7月7日
发明者佟明友, 师文静, 李晓姝, 王崇辉, 王领民, 金平, 黎元生 申请人:中国石油化工股份有限公司, 中国石油化工股份有限公司抚顺石油化工研究院