专利名称：一种包含转基因细胞样本的筛选芯片的制作方法
技术领域：
本实用新型属于生物芯片技术领域，涉及一种包含转基因细胞样本的筛选芯片， 以筛选用于免疫组织化学染色的单克隆抗体。
背景技术：
随着“人类基因组计划”的完成，人类已经进入“功能基因组计划”，蛋白质组学是 “功能基因组计划”的重要研究内容。蛋白质结构和功能的多样性决定了蛋白质组学研究的 复杂性，尤其是新基因所编码的蛋白质的表达分布规律、结构和功能的揭示对生物学家来 说是极富挑战性的。研究蛋白质的表达分布规律最常用的方法是免疫组织化学染色技术，它是利用特 异性抗体在组织细胞原位通过抗原抗体反应和组织化学的呈色反应，对相应抗原进行定 性、定位、定量测定的一项技术。免疫组织化学染色技术把免疫反应的特异性、组织化学的 可见性巧妙地结合起来，借助显微镜(包括光学显微镜、荧光显微镜、电子显微镜)的显像 和放大作用，在细胞、亚细胞水平检测目的蛋白质。免疫组织化学染色技术中最为重要的是可特异识别目的蛋白质的第一抗体，而最 常用的组织切片是石蜡切片。单克隆抗体由于其识别表位的均一性和特异性以及制备抗体 质量的稳定性，在免疫组织化学染色中的应用越来越受到重视。但由于石蜡切片制备过程 中需要经过福尔马林固定、脱水及浸蜡等过程，蛋白质的空间构像常常发生改变，所以用酶 联免疫吸附试验、流式细胞术等方法筛选到的单克隆抗体常常不能识别这种改变的构像， 故不能应用于免疫组织化学染色。因此，要获得能应用于免疫组织化学染色的单克隆抗体， 最好选用免疫组织化学染色的方法来筛选。而重组的抗原本身不能应用于免疫组织化学染色技术检测，利用转染了目的基因 的细胞做为免疫原又难以排除亲本细胞内上万种内源性蛋白的干扰，因此均不能满足单克 隆抗体筛选的需要。
实用新型内容本实用新型解决的技术问题在于提供一种包含转基因细胞样本的筛选芯片，以从 用重组抗原免疫动物后制备的杂交瘤上清中，筛选适用于免疫组织化学染色的单克隆抗 体。本实用新型是通过以下技术方案来实现一种包含转基因细胞样本的筛选芯片，包括载玻片，在载玻片上分布由转基因细 胞样本构成的微阵列，该微阵列为4行X8列，每行、每列中相邻转基因细胞样本之间的间 距为2 4毫米。所述的转基因细胞样本是以4行X8列的阵列方式分布在石蜡切片上，石蜡切片 与载玻片固定连接。所述的转基因细胞样本是从包埋有转染外源基因的重组细胞的石蜡蜡块中打孔取出的。所述的转染外源基因的重组细胞是将表达抗原的基因作为外源基因转染宿主细 胞，从而在宿主细胞表面表达出原来不表达的抗原分子。所述的转基因细胞样本的直径为1. 5毫米。与现有技术相比，本实用新型具有以下有益的技术效果本实用新型将转染抗原基因的重组细胞固定后包埋至石蜡块中形成细胞蜡块，然 后在细胞蜡块上打孔取出直径为1. 5毫米的转基因细胞样本，将32个转基因细胞样本以 4X 8阵列方式包埋于一块25mmX 50mm的石蜡蜡块中，然后进行切片，裱于载玻片上形成固 定的微阵列，以从用重组抗原免疫动物后制备的杂交瘤上清中，筛选适用于免疫组织化学 染色的单克隆抗体。在芯片上构成一个4行X8列的微阵列，在每行或每列中相邻组织样本之间的间 距均为4毫米。将32个样本基因转染细胞样本集中于一张芯片上，可明显减少每个组织样 本的处理时间，使得在较短时间内完成大量基因转染细胞样本的免疫细胞化学染色成为可 能，从而使数量众多的、不同克隆的单克隆抗体的筛选和阳性克隆的克隆化可以在同一天 内进行，这对单克隆抗体的制备至关重要。并且由于4行X8列的微阵列排列方式与单克隆抗体制备中使用的96孔板的布 局相同，故96孔板中的单克隆抗体上清可以很方便地加在芯片的相应的组织样本上，最大 限度地减少样品间混淆的可能性。
图1为本实用新型的结构示意图；其中1为载玻片；2为转基因细胞样本。
具体实施方式
以下结合附图对本实用新型做进一步详细描述，所述是对本实用新型的解释而不 是限定。参见图1，一种包含转基因细胞样本的筛选芯片，包括载玻片1，在载玻片1上分布 由转基因细胞样本2构成的微阵列，该微阵列为4行X8列，每行、每列中相邻转基因细胞 样本2之间的间距为4毫米。所述的转基因细胞样本2是以4行X8列的阵列方式分布在石蜡切片上，石蜡切 片与载玻片固定连接。而转基因细胞样本2是从包埋有转染外源基因的重组细胞的石蜡蜡 块中打孔取出的。所述的转染外源基因的重组细胞是将表达抗原的基因作为外源基因转染 宿主细胞，从而在宿主细胞表面表达出原来不表达的抗原分子。具体以SPACAl编码基因稳定转染CHO细胞为例，说明包含转基因细胞蜡块的筛选 芯片具体的制备将SPACAl编码基因稳定转染CHO细胞，扩大培养，离心收集细胞；将收集的转基因细胞用中性福尔马林浸泡12h固定后，常规脱水、浸蜡、包埋制备 转基因细胞蜡块，然后在转基因细胞蜡块上打孔取出直径为1. 5毫米的转基因细胞样本， 将32个转基因细胞样本以4行X8列的阵列方式包埋于一块25mmX50mm的石蜡蜡块中，然后进行切片得到石蜡切片，再将石蜡切片固定于载玻片上形成转基因细胞芯片，以从用 重组抗原免疫动物后制备的杂交瘤上清中，筛选适用于免疫组织化学染色的单克隆抗体。 所述的转染外源基因的重组细胞是将表达抗原的基因作为外源基因转染宿主细 胞(比如，将SPACAl编码基因稳定转染CHO细胞)，从而在宿主细胞表面表达出原来不表达 的抗原分子。由于筛选抗体的来源采用重组抗原免疫动物，动物体内产生针对重组抗原的 抗体，所产生的抗体与基因转染所用的不表达该抗原的宿主细胞理论上极少有交叉反应的 机率，因此，采用稳定转染抗原基因的外源基因的细胞芯片，行免疫细胞化学染色，可有效 筛选目的基因特异性的、适用于免疫组织化学染色的单克隆抗体。
权利要求1.一种包含转基因细胞蜡块的筛选芯片，其特征在于，包括载玻片(1)，在载玻片(1) 上分布由转基因细胞样本(2)构成的微阵列，该微阵列为4行X8列，每行、每列中相邻转 基因细胞样本⑵之间的间距为2 4毫米。
2.如权利要求1所述的包含转基因细胞蜡块的筛选芯片，其特征在于，所述的转基因 细胞样本(2)是以4行X8列的阵列方式分布在石蜡切片上，石蜡切片与载玻片(1)固定 连接。
3.如权利要求1所述的包含转基因细胞样本的筛选芯片，其特征在于，所述的转基因 细胞样本O)的直径为1.5毫米。
专利摘要本实用新型公开了一种包含转基因细胞样本的筛选芯片，包括载玻片，在载玻片上分布由转基因细胞样本构成的微阵列，该微阵列为4行×8列，每行、每列中相邻转基因细胞蜡块之间的间距为4毫米。所述的转染外源基因的重组细胞是将表达抗原的基因作为外源基因转染宿主细胞，从而在宿主细胞表面表达出原来不表达的抗原分子。而筛选抗体的来源采用重组抗原免疫动物，动物体内产生针对重组抗原的抗体，所产生的抗体与基因转染所用的不表达该抗原的宿主细胞理论上极少有交叉反应的机率，因此，采用稳定转染抗原基因的外源基因的细胞芯片，行免疫细胞化学染色，可有效筛选目的基因特异性的、适用于免疫组织化学染色的单克隆抗体。
文档编号C12M1/00GK201873667SQ201020504300
公开日2011年6月22日 申请日期2010年8月25日 优先权日2010年8月25日
发明者孙元杰, 宋朝君, 张赟, 杨琨, 金伯泉 申请人:中国人民解放军第四军医大学