专利名称：甘蔗dⅲ家族蔗糖磷酸合成酶基因及其植物表达载体的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种植物体内控制蔗糖合成的关键酶基因及其编码蛋白的序列，以及植物表达载体，属植物基因工程领域。
背景技术：
蔗糖磷酸合成酶(以下简称SPS)是高等植物体内控制蔗糖合成的关键酶，植物体内蔗糖的积累与SPS活性正相关，此外，SPS还参与植物的生长和产量形成，并在植物抗逆性，如抗寒、抗旱和耐盐过程中起重要作用。转SPS基因的研究在20世纪90年代初首先在番茄上进行，将玉米SPS基因导入番茄中，转基因番茄叶片中SPS活性增加了 6倍，叶片中淀粉含量减少而蔗糖含量增加。之后，在多种植物上进行了转SPS基因的研究。将玉米的SPS基因转入水稻中，转基因水稻的 SPS活性是未转基因水稻的3倍，使转基因水稻的株高明显比未转基因的高。转拟南芥SPS 基因的烟草茎内蔗糖含量增加，且由于节间增长和茎径增粗，转基因烟草的茎重明显增加。 转玉米SPS基因的马铃薯叶片中的SPS活性是对照植株的四倍，转基因植株地上部分和地下部分的干重也分别增加15%和20%，表明叶片中蔗糖的合成有助于促进植株的生长。导入玉米SPS基因的番茄植株叶片的SPS活性显著提高，叶片分配向蔗糖的碳同化物提高了 50%，转基因植株比对照的果实个数增加1.5倍，果实成熟提前，总干重提高32%。转玉米 SPS基因的烟草叶片中的SPS超量表达，使蔗糖合成和碳吸收能力提高，有助于整个植株的生长和发育，提高开花数目，故转基因烟草提前开花，并且开花数目比野生型的烟草多。转拟南芥A家族SPS基因(AtSPSA)的杨树的木质部纤维长度增加，叶片和茎组织细胞内蔗糖含量增加，春季叶片衰老减缓而萌芽提前。表明SPS基因参与调控白杨的发育过程。此外， 转SPS基因还能提高棉花品质。以上转基因研究表明，将SPS基因导入作物体内，是提高作物产量和品质、增强作物抗逆性的有效途径。甘蔗是高光合效率C4作物，它的蔗糖含量是所有植物中是最高的，表明其控制蔗糖合成的关键酶-SPS的作用效率也是非常高效的。用甘蔗SPS基因改良其它作物品种或通过改变甘蔗SPS表达调控途径进一步提高甘蔗蔗糖含量和产量具有重要意义。Langenkamper等对高等植物基因组和已知的SPS基因的全长序列和其保守序列进行生物信息学分析后把SPS基因分为A、B、C三个家族。但是，Castleden等之后还对小麦等单子叶植物的SPS基因进行研究后认为，双子叶植物中的SPS基因至少有A、B、C三个家族，而禾本科的单子叶植物中的SPS基因则可分为五个家族，分别为A、B、C、DIII和DIV。 且不同植物中SPS基因的数量不同，柑橘基因组中有三个SPS基因，分别属于A、B、C三个家族；拟南芥基因组中有四个SPS基因，其中两个属于A家族，另外两个分别属于B、C家族。 水稻基因组中有五个SPS基因，分别属于五个家族。而玉米基因组中至少有七个SPS基因， 其中A、C、DIII家族各有一个，而B、DIV家族各有两个。甘蔗属于禾本科的单子叶植物，所以甘蔗基因组中至少有5个分别属于5个不同家族的SPS基因。但是，目前甘蔗中只克隆了一个SPS基因的完整CDNA序列，且没有进一步研究并申请专利的报道。
发明内容
本发明的目的是研究一个新的甘蔗DIII家族蔗糖磷酸合成酶基因及其植物表达载体，使其得到开发应用。本发明所采取的技术方案是在对所有全长序列的植物SPS基因进行进化分析的基础上，比对植物DIII家族SPS基因的CDNA序列，并设计扩增SoSPSDIII基因核心片段的引物；提取甘蔗幼嫩叶片总RNA，并经反转录，用常规PCR法扩增SoSPSDIII基因核心片段；再通过RACE (Rapid Amplification ofcDNA ends, cDNA末端快速扩增)技术克隆到甘蔗蔗糖磷酸合成酶基因 (SofSPSDIII)的全长cDNA序列，总长3252bp ；经VectorNTI软件分析，该序列的ORF(Open Reading Frame，开放阅读框)为^92bp，编码964个氨基酸；起始密码子(ATG)位于转录起始位点后60bp处，终止密码子(TAA)后还有一段301bp的非编码序列，并带有真核生物典型的PolyA尾巴。以下是本发明所获得的甘蔗SofSPSDIII基因的全长cDNA序列tcaactctcccattccgtcccccgatctcgccggattctcctcctcgccggcggcggcg ^^ gcggg caacgacaactggatcaacagctacctcgacgccatcctagacgccggaaaggccgccatcggcggcgaccggccct ccctcctcctccgcgagcgcggccatttctcccccgcgcgctacttcgtcgaggaggtcatcaccggctacgacgag accgacctctacaagacatggctacgcgcgaacgccatgcggagcccgcaggagaggaacacgcggctcgagaacat gacgtggaggatctggaaccttgcaaggaagaagaaggagttcgagaaagaagaagcttgtcgtttgtcaaaacgcc agccagaaactgagaaaacacgagctgatgctactgcagatatgtctgaagatctctttgaaggtgaaaagggagaa gatgctggtgatccatctgttgcatatggggacagcaccacagggagctcacctaagacaagttcaattgacaagct atacatagtattgatcagtttacatggtctggtccgtggtgagaatatggagcttggccgagattcagatacgggtg gccaggtcaaatatgtggttgaacttgctaaagcactaagttcatctcctggagtttaccgggttgatctgctaaca agacaaatattagcaccaaattttgatcgtagttatggtgaacctgcagaattattggtttcaacaagtggtaaaaa ttctaaacaagaaaaaggagaaaatagtggcgcatatataattcggataccatttggtccaaaagataagtatctag ctaaagaacatctatggcctttcattcaagaatttgttgatggtgcactcagccatattgtgaggatgtcaaaagcc ataggtgaagaaactggccgcgggcatccagtatggccttctgtgattcatgggcattatgccagtgcaggaattgc tgctgctttactttctggagcacttaaccttcctatggcattcacaggacattttcttgggaaagataaattggaag ggcttctcaaacaagggagacaaactagggaacagataaatatgacatacaaaataatgtgccgaattgaggcagag gagctatctcttgacgcatctgagattgtcattgcaagcactaggcaagaaatagaagagcagtggaacttgtatga tggttttgaggttatacttgcaaggaagctccgagcaagagttaaacgtggtgctaattgttatggtcgttttatgc ctcgtatggttataattcctcctggagttgaatttggtcacattattcacgattttgatatggacggtgaagaagag aatccatccccggcatctgaggatccacctatttggtctcagataatgcgcttctttacaaatcctaggaagcctat gattctagctgttgctcgcccttatcctgagaagaatattactacgcttgtaaaagcatttggtgaatgtcggccac taagggagcttgcaaaccttacattgataatgggtaaccgtgaagctatatctaagatgcacaatatgagtgctgct gtcttgacatcagtgcttacattgattgatgaatatgacttgtatggtcaagtggcataccccaagcatcataagca ctcggaagttcctgacatttatcgtttagctgcaagaacaaagggggcttttgtaaatgtagcttacttcgaacaat ttggagttactctgatagaggctgctatgaatggtttgcctataattgcgacaaaaaatggagcccctgttgaaattaatcaggtcctgaacaatggtctccttgttgatccgcacgatcagaatgccattgcggatgcactatataaacttct ttctgacaaacaactttggtcaaggtgcagagagaatggactgacaaatattcaccaattctcgtggcccgaacatt gcaagaattacctgtcaaggatattaactcttggcccaaggtctcctgctattggtaacagagaggagcggagtaat acacctatttcaggaaggagg caaatcattgttatttctgtagactctgttaacaaggaagatctagtcaggataa tcagaaatgctattgaggtcatacatacacaaaacatgtcgggttcaactggttttgtgctgtcaacttcgctgact atatcagagatacattcactgctactatctggtggcatgcttcccactgattttgatgctttcatctgcaatagtgg gagtaacatttactatccttcatattctggtgaaacgccaaacaactccaagattacatttgcattagatcaaaatc accagtcacatatcgagtatcgttggggaggagaaggactaaggaaatatcttgtgaagtgggccacttcagtggta gaaagaaagggaagaacagagaggcaaattatttttgaagatccagaacactcttcagcctattgtcttgcatttag agtggttaatcccaatcatcttcctcctttaaaggagttgaggaagttgatgagaatccaatctctccgttgcaatg cattgtataaccacagcgctaccagattatctgtagtccctatccatgcatcaagatctcaggctctaaggtacttg tgtatacgttgggggatagaggtgccaaatgttgcagtcctcgtgggtgaaagtggcgattcagattacgaggaact gctggggggtctccataggaccgttatcctgaagggcgagttcaacacccccgcaaacaggatccacacggtgagga gataccccttacaggatgtcgtcccacttgacagctcaaacatcaccggtgtcgaaggctacaccacggatgacttg aagtcggccctgcagcagatgggtatactcacacaa ^aaj taacacctccggagcttctgtttccacacccaagcca acgggaaaacgaaaggaaaggagacgaaccaagtgcaactgtttccatgctcgatggaaatgccgattttgctcgta ggctgtagaggttgtgtatgtgtgtgcgtgcgtgcggtggtggcctattcttgagctgtgaataactgccctccttt gtttgtaatgccccaaaaattttgaagtgagtaccctacaaccaaacaggaaacaggttcacatattgataatggaa aaRacRaatRcaaRaaaRRaaaacaaaaaa以下是本发明所获得的甘蔗SofSPSDIII基因所编码蛋白的氨基酸序列MAGNDNWINSYLDAILDAGKAAIG⑶RPSLLLRERGHFSPARYFVEEVITGYDETDLYKTWLRANAMRS PQERNTRLE匪TWRIWNLARKKKEFEKEEACRLSKRQPETEKTRADATADMSEDLFEGEKGEDA⑶PSVAYGDSTTG SSPKTSSIDKLYIVLISLHGLVRGENMELGRDSDTGGQVKYVVELAKALSSSPGVYRVDLLTRQILAPNFDRSYGEP AELLVSTSGKNSKQEKGENSGAYIIRIPFGPKDKYLAKEHLWPFIQEFVDGALSHIVRMSKAIGEETGRGHPVWPSV IHGHYASAGIAAALLSGALNLPMAFTGHFLGKDKLEGLLKQGRQTREQI匪TYKIMCRIEAEELSLDASEIVIASTR QEIEEQWNLYDGFEVILARKLRARVKRGANCYGRFMPRMVIIPPGVEFGHIIHDFDMDGEEENPSPASEDPPIWSQI MRFFTNPRKPMILAVARPYPEKNITTLVKAFGECRPLRELANLTLIMGNREAISKMHNMSAAVLTSVLTLIDEYDLY GQVAYPKHHKHSEVPDIYRLAARTKGAFVNVAYFEQFGVTLIEAAMNGLPIIATKNGAPVEINQVLNNGLLVDPHDQ NAIADALYKLLSDKQLWSRCRENGLTNIHQFSWPEHCKNYLSRILTLGPRSPAIGNREERSNTPISGRRQIIVISVD SVNKEDLVRIIRNAIEVIHTQ匪SGSTGFVLSTSLTISEIHSLLLSGGMLPTDFDAFICNSGSNIYYPSYSGETPNN SKITFALDQNHQSHIEYRWGGEGLRKYLVKWATSVVERKGRTERQIIFEDPEHSSAYCLAFRVVNPNHLPPLKELRK LMRIQSLRCNALYNHSATRLSWPIHASRSQALRYLCIRWGIEVPNVAVLVGES⑶SDYEELLGGLHRTVILKGEFN TPANRIHTVRRYPLQDVVPLDSSNITGVEGYTTDDLKSALQQMGILTQ扩增SofSPSDIII基 因ORF，连接到植物表达载体pBI121上的组成型启动子 CaMV35S后面，构成一个新的植物表达载体，命名为pBI-SofSPSDIII。本发明的载体在转基因提高作物的蔗糖含量、产量或增强抗逆性方面具有很好的应用前景。
图1是本发明SofSPSDIII植物表达载体构建过程。扩增SofSPSDIII基因0RF，酶切后与相同酶切的pBI121连接， 转化大肠杆菌 Jml09,经PCR验证和酶切验证获得阳性克隆。
具体实施例方式本发明的具体实施方式
如下1.植物 SPS 基因进化分析用 “sucrose phosphate synthase” 搜索 NCBI 网站 (http //www. ncbi. nlm. nih. gov)非冗余氨基酸数据库，获得所有植物SPS序列。对所获得的所有序列进行分析，除去重复的序列。共得到植物SPS序列77条，其中全长序列43条。 用ClustalX对所有全长SPS的氨基酸序列进行比对，并将比对结果保存为PHYLIP格式； 然后用PHYLIP软件包的kqboot，Protdist, Neighbor和Consense程序进行进化分析，将植物所有全长SPS基因分为相应的家族。2.设计扩增SoSPSDIII基因核心片段的引物比对植物DIII家族SPS基因的cDNA 序列，在保守区设计一对用于扩增SofSPSDIII部分片段的引物SofSPSDIII-F(5，-atggcgg gcaacgacaa-3')禾口 SofSPSDIII—R(5，-gaagcgcattatctgagacc-3‘)。3.甘蔗总RNA的提取(1)取50 IOOmg甘蔗相应组织(如幼嫩叶鞘、叶片等)在液氮中研磨成粉末，加入ImlTrizol提取液，吹吸混勻；(2)将溶液快速转移至1. 5ml的离心管中，室温下放置5min，以完全溶解核蛋白体；(3) 4"C，12，OOOg,离心 15min ；(4)吸取上清液于另一个1. 5ml离心管中，以0. 2ml氯仿Iml Trizol提取液的比例加入0. 2ml新鲜的氯仿，充分振荡混勻15sec，室温放置2 ^iin后出现分层；(5) 40C，12，000g/min,离心 15min ；(6)吸取上清液于另一个1. 5ml离心管中，加入等体积预冷的异丙醇，室温放置 IOmin 沉淀 RNA ；(7) 40C，12，000g/min,离心 IOmin ；(8)丢弃上清液，留沉淀，用0.5-lml 75 %的乙醇漂洗沉淀2遍(每次4 °C， 12，OOOg，离心 5min)。(9)将沉淀晾干后溶于适量的DEPC处理水，于_70°C保存(或_20°C短期贮存备用)；(10)取1 μ 1 RNA样品用1 %琼脂糖凝胶进行电泳检测，另取1 μ 1 RNA样品测浓度。
4. RT-PCR (反转录 PCR)RT-PCR RevertAidTM First Strand cDNA Synthesis Kit(Fermentas) i式齐[J 盒操作手册进行。(1)准备一个0. 2ml的离心管，加入以下成分甘蔗总RNA :0. 1_5μ g ；oligo (dT) 18 引物(0. 5 μ g/μ 1) :1μ 1 ；加入DEPC处理的水到总体积12 μ 1 ；
短暂离心混勻。(2) 70°C温育5min后置于冰上，短暂离心。(3)将离心管置于冰上，加入以下成分5Xreaction buffer :4μ 1 ；RiboLock Ribonuclease Inhibitor (20u/μ 1) 1μ 1 ；10mM dNTP mix :2μ 1 ；短暂离心混勻。(4)371温育5111土11。(5)加入 1 μ 1 RevertAid M-MuLV 反转录酶(200u/ μ 1)；使终体积达到 20 μ L·(6)421温育60111土11。(7)70°C温育IOmin终止反应，将离心管置于冰上。5. SoSPSDIII基因核心片段克隆以2μ 1 RT-PCR产物为模板，用SofSPSDIII-F和 SofSPSDIII-R引物进行常规PCR扩增，PCR产物经胶回收纯化后克隆到T载体并测序。测序结果表明，PCR产物长度1371bp。6. SoSPSDIII基因全长cDNA克隆根据上一步测序获得的核心区序列，设计了 5，-RACE和3，-RACE的基因特异引物，DIII5，-GSPl (5，_cgttcgcgcgtagccatgtcttgt_3，)DII15， _GSP2(5， _ccggtgatgacctcctcgacgaagt_3，)DIII3' -GSPl (5' -gcaaggaagctccgagcaagagtt-3‘)DIII3，_GSP2(5，_tcctcctggagttgaatttggtcaca_3，)。提取甘蔗幼嫩叶总RNA，按 SMART RACE cDNA Amplification Kit(Clontech)试剂盒操作手册进行5’-RACE和3’-RACE。产物经胶回收纯化后克隆到T载体并测序。测序结果表明，5，-RACE产物长度21 lbp，3，-RACE产物长度1937bp。7.甘蔗SoSPSDIII基因全长序列分析将所获得的三个序列进行拼接，获得了 SofSPSDIII基因全长cDNA序列，总长3252bp。经VectorNTI软件分析，该序列的ORF为 2892bp，编码964个氨基酸。起始密码子(ATG)位于转录起始位点后60bp处，终止密码子 (TAA)后还有一段301bp的非编码序列，并带有真核生物典型的polyA尾巴。8.甘蔗SofSPSDIII基因植物表达载体的构建根据SofSPSDIII全长cDNA序列，设计一对用于扩增SofSPSDIII基因ORF的引物，DIII-ORF-F(CccTCTAGAatRRcRRRcaacRacaa)和 DIII-QRF-R(RRRCCCGGGttattRtRtRaR tatacccatctgc)，并分别在5，端加上XbaI和XmaI酶切位点。用RT-PCR产物为模板，用 DIII-ORF-F和DIII-ORF-R为弓|物进行常规PCR。PCR产物经胶回收纯化后，用XbaI和XmaI 进行双酶切，同时用XbaI和XmaI 对植物表达载体pBI121进行双酶切。酶切产物用PCR纯化试剂盒纯化后进行连接，转化大肠杆菌JM109感受态细胞，在含Km的培养基上筛选。在 PBI121质粒的插入位点两侧设计各设计一条引物，pBI121-conF(cagtggtcccaaagatggaccc cca)和pBI121-conR(tccagactgaatgcccacaggccgt)，以少量菌体为模板，用该对引物行常规PCR验证。挑选3个能扩增出预期产物的阳性克隆菌株提质粒酶切验证，验证正确的质粒送上海鼎安公司测序进一步确认，并命名为PBl-SofSPSDIII。甘蔗DIII家族蔗糖磷酸合成酶基因(SofSPSDIII)序列表，见后页。
权利要求
1.甘蔗DIII家族蔗糖磷酸合成酶基因SofSPSDIII，其特征在于它具有序列表中 SEQIDN0. 1的DNA序列，且它的编码区从第60位核苷酸到四51位核苷酸；SofSPSDIII编码的蛋白，是具有序列表中SEQID NO. 2氨基酸残基序列的蛋白质，或者是将SEQID NO. 2的氨基酸残基序列经过一个或几个氨基酸残基的取代、缺失或添加且具有与SEQID NO. 2的氨基酸残基序列相同活性的衍生蛋白质； 本发明所获得的甘蔗SofSPSDIII基因的全长cDNA序列tcaactctcccattccgtcccccgatctcgccggattctcctcctcgccggcggcggcg|at^ gcgggcaacga caactggatcaacagctacctcgacgccatcctagacgccggaaaggccgccatcggcggcgaccggccctccctcc tcctccgcgagcgcggccatttctcccccgcgcgctacttcgtcgaggaggtcatcaccggctacgacgagaccgac ctctacaagacatggctacgcgcgaacgccatgcggagcccgcaggagaggaacacgcggctcgagaacatgacgtg gaggatctggaaccttgcaaggaagaagaaggagttcgagaaagaagaagcttgtcgtttgtcaaaacgccagccag aaactgagaaaacacgagctgatgctactgcagatatgtctgaagatctctttgaaggtgaaaagggagaagatgct ggtgatccatctgttgcatatggggacagcaccacagggagctcacctaagacaagttcaattgacaagctatacat agtattgatcagtttacatggtctggtccgtggtgagaatatggagcttggccgagattcagatacgggtggccagg tcaaatatgtggttgaacttgctaaagcactaagttcatctcctggagtttaccgggttgatctgctaacaagacaa atattagcaccaaattttgatcgtagttatggtgaacctgcagaattattggtttcaacaagtggtaaaaattctaa acaagaaaaaggagaaaatagtggcgcatatataattcggataccatttggtccaaaagataagtatctagctaaag aacatctatggcctttcattcaagaatttgttgatggtgcactcagccatattgtgaggatgtcaaaagccataggt gaagaaactggccgcgggcatccagtatggccttctgtgattcatgggcattatgccagtgcaggaattgctgctgc tttactttctggagcacttaaccttcctatggcattcacaggacattttcttgggaaagataaattggaagggcttc tcaaacaagggagacaaactagggaacagataaatatgacatacaaaataatgtgccgaattgaggcagaggagcta tctcttgacgcatctgagattgtcattgcaagcactaggcaagaaatagaagagcagtggaacttgtatgatggttt tgaggttatacttgcaaggaagctccgagcaagagttaaacgtggtgctaattgttatggtcgttttatgcctcgta tggttataattcctcctggagttgaatttggtcacattattcacgattttgatatggacggtgaagaagagaatcca tccccggcatctgaggatccacctatttggtctcagataatgcgcttctttacaaatcctaggaagcctatgattct agetgttgetcgcccttatcctgagaagaatattactacgcttgtaaaagcatttggtgaatgtcggccactaaggg agcttgcaaaccttacattgataatgggtaaccgtgaagctatatctaagatgcacaatatgagtgctgctgtcttg acatcagtgcttacattgattgatgaatatgacttgtatggtcaagtggcataccccaagcatcataagcactcgga agttcctgacatttatcgtttagctgcaagaacaaagggggcttttgtaaatgtagcttacttcgaacaatttggag ttactctgatagaggctgctatgaatggtttgcctataattgcgacaaaaaatggagcccctgttgaaattaatcag gtcctgaacaatggtctccttgttgatccgcacgatcagaatgccattgcggatgcactatataaacttctttctga caaacaactttggtcaaggtgcagagagaatggactgacaaatattcaccaattctcgtggcccgaacattgcaaga attacctgtcaaggatattaactcttggcccaaggtctcctgctattggtaacagagaggagcggagtaatacacct atttcaggaaggaggcaaatcattgttatttctgtagactctgttaacaaggaagatctagtcaggataatcagaaa tgctattgaggtcatacatacacaaaacatgtcgggttcaactggttttgtgctgtcaacttcgctgactatatcag agatacattcactgctactatctggtggcatgcttcccactgattttgatgctttcatctgcaatagtgggagtaac atttactatccttcatattctggtgaaacgccaaacaactccaagattacatttgcattagatcaaaatcaccagtc acatatcgagtatcgttggggaggagaaggactaaggaaatatcttgtgaagtgggccacttcagtggtagaaagaa agggaagaacagagaggcaaattatttttgaagatccagaacactcttcagcctattgtcttgcatttagagtggttaatcccaatcatcttcctcctttaaaggagttgaggaagttgatgagaatccaatctctccgttgcaatgcattgta taaccacagcgctaccagattatctgtagtccctatccatgcatcaagatctcaggctctaaggtacttgtgtatac gttgggggatagaggtgccaaatgttgcagtcctcgtgggtgaaagtggcgattcagattacgaggaactgctgggg ggtctccataggaccgttatcctgaagggcgagttcaacacccccgcaaacaggatccacacggtgaggagataccc cttacaggatgtcgtcccacttgacagctcaaacatcaccggtgtcgaaggctacaccacggatgacttgaagtegg ccctgcagcagatgggtatactcacacaa[taa|taacacct ccggagc ttctgttt ccacacccaagccaacgggaaaa cgaaaggaaaggagacgaaccaagtgcaactgtttccatgctcgatggaaatgccgattttgctcgtaggctgtaga ggttgtgtatgtgtgtgcgtgcgtgcggtggtggcctattcttgagctgtgaataactgccctcctttgtttgtaat gccccaaaaattttgaagtgagtaccctacaaccaaacaggaaacaggttcacatattgataatggaaaagacgaat gcaagaaaggaaaacaaaaaa本发明所获得的甘蔗SofSPSDIII基因所编码蛋白的氨基酸序列 MAGNDNWINSYLDAILDAGKAAIG⑶RPSLLLRERGHFSPARYFVEEVITGYDETDLITWLRANAMRSPQE RNTRLE匪TWRIWNLARKKKEFEKEEACRI^KRQPETEKTRADATADMSEDLFEGEKGEDA⑶PSVAYGDSTTGSSP KTSSIDKLYIVLISLHGLVRGENMELGRDSDTGGQVKYVVELAKALSSSPGVYRVDLLTRQILAPNFDRSYGEPAEL LVSTSGKNSKQEKGENSGAYIIRIPFGPKDKYLAKEHLWPFIQEFVDGALSHIVRMSKAIGEETGRGHPVWPSVIHG HYASAGIAAALLSGALNLPMAFTGHFLGKDKLEGLLKQGRQTREQI匪TYKIMCRIEAEELSLDASEIVIASTRQEI EEQWNLYDGFEVILARKLRARVKRGANCYGRFMPRMVIIPPGVEFGHIIHDFDMDGEEENPSPASEDPPIWSQIMRF FTNPRKPMILAVARPYPEKNITTLVKAFGECRPLRELANLTLIMGNREAISKMHNMSAAVLTSVLTLIDEYDLYGQV AYPKHHKHSEVPDIYRLAARTKGAFVNVAYFEQFGVTLIEAAMNGLPIIATKNGAPVEINQVLNNGLLVDPHDQNAI ADALYKLLSDKQLWSRCRENGLTNIHQFSWPEHCKNYLSRILTLGPRSPAIGNREERSNTPISGRRQIIVISVDSVN KEDLVRIIRNAIEVIHTQ匪SGSTGFVLSTSLTISEIHSLLLSGGMLPTDFDAFICNSGSNIYYPSYSGETPNNSKI TFALDQNHQSHIEYRWGGEGLRKYLVKWATSVVERKGRTERQIIFEDPEHSSAYCLAFRVVNPNHLPPLKELRKLMR IQSLRCNALYNHSATRLSWPIHASRSQALRYLCIRWGIEVPNVAVLVGES⑶SDYEELLGGLHRTVILKGEFNTPA NRIHTVRRYPLQDVVPLDSSNITGVEGYTTDDLKSALQQMGILTQ
2.甘蔗Dili家族蔗糖磷酸合成酶基因植物表达载体，其特征在于载体中的启动子为 CaMV35S，载体中的基因为SofSPSDIII，即含有序列表中SEQID NO. 1的第60位核苷酸到第 2954位核苷酸片段，构成一个新的植物表达载体，命名为pBI-SofSPSDIII。
全文摘要
本发明涉及一种甘蔗DⅢ家族蔗糖磷酸合成酶基因及其植物表达载体。该基因SofSPSDⅢ是下列序列之一1.序列表中的1的DNA序列；2.编码序列表中2的蛋白质序列。该基因编码的蛋白，是具有序列表中2的氨基酸残基序列，或者是将2的氨基酸残基序列经过一个或几个氨基酸残基的取代、缺失或添加且具有与2相同活性的衍生蛋白质。本发明的植物表达载体含有来自序列表中1的第60位核苷酸到第2954位核苷酸片段，插入到载体pBI121的组成型启动子CaMV35S后面，构成一个新植物表达载体，命名为pBI-SofSPSDⅢ。本发明的载体在转基因提高作物的蔗糖含量、产量或增强抗逆性方面具有很好的应用前景。
文档编号C12N15/52GK102154333SQ20111003247
公开日2011年8月17日 申请日期2011年1月30日 优先权日2011年1月30日
发明者刘丽敏, 刘助生, 唐红琴, 廖青, 方锋学, 李双喜, 李杨瑞, 游建华, 莫磊兴, 黄东亮, 黎涛 申请人:广西壮族自治区甘蔗研究所