专利名称：一种修饰性谷胱甘肽过氧化物酶及其制备方法
技术领域：
本发明属于生物技术领域，涉及一种修饰性谷胱甘肽过氧化物酶及其制备方法。
背景技术：
谷胱甘肽过氧化物酶(glutathioneperoxidase, ECl. 11. 1.9，简称 GPx)是生物机体组织中存在的三种重要的抗氧化酶之一，也是一种重要的含硒酶，硒是该酶活性中心的构成成分。它可以消除机体内的过氧化氢及脂质过氧化物，阻断活性氧自由基对机体的进一步损伤，是生物体内重要的活性氧自由基清除剂，它以硒代半胱氨酸(Sec)的形式发挥作用，以谷胱甘肽(GSH)为还原剂分解体内的脂质过氧化物，因而可防止细胞膜和其它生物组织免受过氧化作用的损伤；它与体内的超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT) 一起构成了机体的抗氧化防御体系。医学研究表明它与人类许多疾病有关，对肿瘤、心血管疾病、老年性疾病、不孕症等多种疾病有着良好的预防和治疗作用，是一种有广泛应用和市场前景的医药用酶。但该酶在常温条件下其巯基易氧化而使酶失活、半衰期非常短、稳定性差等特性限制了该酶的以常态形式使用的实用性。对该类酶进行化学修饰以提高其物理、 化学和生物学稳定性是成功开发并推出市场的关键性技术
发明内容
本发明的目的在于针对现有技术的不足，提供一种酶活性高、稳定性强的修饰性谷胱甘肽过氧化物酶。本发明的另一个目的在于提供制备该修饰性猪谷胱甘肽过氧化物酶的方法。本发明公开了一种修饰性谷胱甘肽过氧化物酶，由谷胱甘肽过氧化物酶的氨基与活化的单甲氧基聚乙二醇连接，其结构式为
权利要求
1.一种修饰性谷胱甘肽过氧化物酶，其特征在于谷胱甘肽过氧化物酶的氨基与活化的单甲氧基聚乙二醇连接，其结构式为
2.一种如权利要求1所述的修饰性谷胱甘肽过氧化物酶的制备方法，其特征在于采用活化的单链单甲氧基聚乙二醇作为修饰剂，与谷胱甘肽过氧化物酶反应，反应式为
3.—种如权利要求2所述的制备方法，其特征在于反应结束时还再加入终止剂谷胱甘肽终止反应。
4.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于所述的活化的单链单甲氧基聚乙二醇与谷胱甘肽过氧化物酶的质量比为20-100 1。
5.如权利要求4所述的制备方法，其特征在于所述的活化的单链单甲氧基聚乙二醇与谷胱甘肽过氧化物酶的质量比为80 1。
6.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于所述的反应条件为温度4-37°C、pH 7. 0-10. O。
7.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于所述的加入终止剂的时间为反应 15_60min 后。
8.如权利要求6或7所述的制备方法，其特征在于所述的反应条件为温度15°C、pH 9. O ；加入终止剂的时间为反应45min后。
9.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于所述的终止剂为谷胱甘肽，按谷胱甘肽与单链单甲氧基聚乙二醇的摩尔比为1:1的添加量加入。
10.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于所述的活化的单链单甲氧基聚乙二醇是通过将单链单甲氧基聚乙二醇与三聚氰氯反应，并进一步纯化干燥获得。
全文摘要
本发明属于生物技术领域，涉及一种修饰性谷胱甘肽过氧化物酶及其制备方法。该修饰性谷胱甘肽过氧化物酶是将单链单甲氧基聚乙二醇(mPEG1)通过游离氯原子与谷胱甘肽过氧化物酶的氨基反应，将mPEG1连接到谷胱甘肽过氧化物酶上。通过采用活化的单链单甲氧基聚乙二醇作为修饰剂，与谷胱甘肽过氧化物酶在4-37℃、pH7.0-10.0反应，其中单链单甲氧基聚乙二醇与谷胱甘肽过氧化物酶的质量比为20-100:1，反应15-60min后，按修饰剂与终止剂谷胱甘肽(GSH)为1∶1的比例加入GSH终止反应，然后用3万超滤膜超滤去除终止剂，获得所述的修饰性谷胱甘肽过氧化物酶。该修饰性谷胱甘肽过氧化物酶其氨基修饰率控制在40-45%，酶活力保持率超过100%。
文档编号C12N11/08GK102220305SQ201110122788
公开日2011年10月19日 申请日期2011年5月13日 优先权日2010年5月14日
发明者冯定远, 王林川, 陈芳艳 申请人:华南农业大学