专利名称：一种用于快速检测孕前宫内感染弓形虫和巨细胞病毒的生物芯片的制作方法
技术领域：
本发明属于生物医学领域，具体的说，涉及一种用于快速检测孕前宫内感染弓形虫和巨细胞病毒的生物芯片。
背景技术：
出生缺陷给家庭、国家和社会带来极大的精神及经济负担。目前，临床对胎儿的先天性缺陷尚无有效的治疗方法。出生缺陷疾病预防的方法中，孕前期的一级预防最为有效。 弓形虫与巨细胞病毒是一组孕期感染的病原微生物，能通过胎盘或产道引起宫内感染，导致流产、死胎或胎儿生长迟缓、先天畸形、新生儿期感染及婴、幼儿生长发育障碍。我国每年约有沈，000个弓形虫与巨细胞病毒混合感染患儿出生，平均每小时就有3个，因此，弓形虫与巨细胞病毒筛查是孕前感染性疾病检查的重要内容。但是，据统计资料显示，我国目前诊断临床普遍采用ELISA法、金标法等检测孕龄妇女血清TOX-IgG和CMV-IgG的水平，假阳性率较高，不能为临床提供准确的诊断依据。SELEX 技术，又指数富集配体的系统进化(systematic evolution of ligands by exponential enrichment，SELEX)是20世纪90年代发展起来的一项组合化学技术。DNA 配体与RNA配体的筛选过程虽然有一点不同，但一般都包括以下几个步骤(1)通过人工合成，建立dsDNA随机序列库。(2)与靶物质反应，筛选出相互结合的靶物质-核酸复合体。
(3)将筛选到的蛋白-核酸复合物分离，得到的核酸进行PCR扩增，变性成单链以准备进行下一轮筛选，筛选的次数由文库的类型和每次循环所得特异性序列的富集程度决定。(4) 经过若干轮筛选得到的、能高度结合靶物质的核酸配体可以进行测序并用于各种研究工作。具有库容量大，靶分子范围广，亲和力强等优点，应用十分广泛。与传统检测技术中的抗体相比，寡核苷酸适配子还具与靶分子结合力更强、稳定性好、精确性高、重复性好、可反复使用、可长期保存、可进行精确的位点修饰、筛选期更短等优势，是一种高效、快速的检测手段。近年来，表面等离子体共振(surface ρlasmon resonance, SPR)技术因其具有实时监测反应动态过程、灵敏度较高、无需标记、无背景干扰、成本低廉等特点，被认为是生物分子检测的理想检测器件，已经成为临床实验诊断领域研究的热点。基本原理是一种物理光学现象。表面等离子体(SP)是沿着金属和电介质间界面传播的电磁波形成的。当平行表面的偏振光以称之为表面等离子体共振角入射在界面上，发生衰减全反射时，入射光被耦合入表面等离子体内，光能大量被吸收，在这个角度上由于表面等离子体共振引起界面反射光显著减少。由于sra对金属表面电介质的折射率非常敏感，不同电介质其表面等离子体共振角不同。同种电介质，其附在金属表面的量不同，则SPR的响应强度不同。基于这种原理的生物传感器通常将一种具特异识别属性的分子即配体固定于金属膜表面，监控溶液中的被分析物与该配体的结合过程。在复合物形成或解离过程中，金属膜表面溶液的折射率发生变化，随即被Sra生物传感器检测出来。与传统的ELISA检测法相比，SPR生物传
6感器具有如下显著特点(1)实时检测，能动态地监测生物分子相互作用的全过程；(2)无需标记样品，保持了分子活性；(3)样品需要量极少；(4)检测过程方便快捷，灵敏度高；(5) 应用范围非常广泛；(6)高通量、高质量的分析数据；(7)大多数情况下，不需对样品进行预处理；(8)能检测混浊的甚至不透明的样品。现在已广泛用于物理量检测，化学检测与生物监测。如果能筛选出孕前宫内感染弓形虫和巨细胞病毒的适配子，然后将其包被在生物芯片上，再结合SPR生物传感器进行检测，将非常的快捷和精确。
发明内容
为解决以上技术问题，本发明的目的在于提供一种能快速检测、准确的检测孕前宫内感染弓形虫和巨细胞病毒的生物芯片。本发明目的是这样实现的一种用于快速检测孕前宫内感染弓形虫和巨细胞病毒的生物芯片，包括玻璃基底(1)，玻璃基底(1)上依次附着有金膜O)、连接层C3)和表面基质，其关键在于所述金膜O)的流池包被有SEQ IDNo. 1 SEQ ID No. 3与SEQ ID No. 4 SEQ ID No. 6混合在一起的适配子。
权利要求
1.一种用于快速检测孕前宫内感染弓形虫和巨细胞病毒的生物芯片，包括玻璃基底 (1)，玻璃基底(1)上依次附着有金膜(2)、连接层(3)和表面基质(4)，其特征在于所述金膜(2)的流池包被有SEQ ID No. 1 SEQ ID No. 3与SEQ ID No. 4 SEQ ID No. 6混合在一起的适配子。
2.根据权利要求1所述用于快速检测孕前宫内感染弓形虫和巨细胞病毒的生物芯片， 其特征在于所述金膜(2)在包被适配子前，先预处理，即在1. Omol / L NaOH中浸泡清洗 20 min，取出后用去离子水清洗3次，然后放入Piranha溶液中处理15 min，取出后立即投入无水乙醇中浸泡5 min，氮气吹干。
3.根据权利要求2所述生物芯片，其特征在于所述适配子包被在金膜(2)上之前，先预处理，即先将适配子溶解到PBS缓冲液，95°C变性3 min,迅速冰浴2 min,随后巯基法进行固定。
4.根据权利要求1或3所述用于快速检测孕前宫内感染弓形虫和巨细胞病毒的生物芯片，其特征在于SEQ ID No. 1 SEQ ID No. 6的二级构象依次分别为
全文摘要
本发明公开了一种用于快速检测孕前宫内感染弓形虫和巨细胞病毒的生物芯片。本发明与传统检测技术中的抗体相比，寡核苷酸适配子还具与靶分子结合力更强、稳定性好、精确性高、重复性好、可反复使用、可长期保存、可进行精确的位点修饰、筛选期更短等优势；所得到的生物芯片放入SPR生物传感器检测，能实现(1)实时检测、(2)无需标记样品、(3)样品需要量极少、(4)检测过程方便快捷，灵敏度高、(5)应用范围非常广泛、(6)高通量、(7)大多数情况下、(8)能检测混浊的甚至不透明的样品。
文档编号C12Q1/70GK102312019SQ20111015331
公开日2012年1月11日 申请日期2011年6月9日 优先权日2011年6月9日
发明者刘星, 府伟灵 申请人:中国人民解放军第三军医大学第一附属医院