一种抗弓形虫组方药物及其筛选方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于医药领域，特别涉及一种抗弓形虫组方药物及其筛选方法。
【背景技术】
[0002] 弓形虫病是由刚地弓形虫引起的一种人兽共患病。它是一种世界性分布的寄生原 虫，可感染包括人在内的200多种动物。在机体正常情况下，弓形虫感染多为隐性感染，但 对于免疫缺陷或免疫抑制者，如艾滋病、器官移植、恶性肿瘤患者，弓形虫感染可能是致死 病因之一。孕妇感染弓形虫的机率较高，弓形虫可通过胎盘屏障传染给胎儿，导致孕妇流 产、婴幼儿发育畸形、智力障碍、脑炎及脑膜炎等。对于动物，急性弓形虫病会引起仔猪发 热、呼吸困难、衰竭；母猪死胎、流产或产弱仔。
[0003] 目前，人和动物弓形虫病的治疗药物主要有：（1)抗生素大环内酯类的抗生素如 罗红霉素、螺旋霉素、阿奇霉素和林可霉素类抗生素如氯林可霉素、美浓霉素均可不同程度 的防治弓形虫病；阿托代醌可用于急性弓形虫病治疗后第二阶段预防用药；曲伐沙星等喹 诺酮类药物也被证实有体外抗弓形虫繁殖的效果。（2)抗叶酸代谢的药物：乙胺嘧啶被认 为是治疗眼弓形虫病的最有效的药物；磺胺嘧啶可用于眼弓形虫病的辅助治疗；磺胺甲噁 唑与TMP联合使用可治疗小鼠实验弓形虫病，预防慢性弓形虫脑炎的发生，但很难完全治 愈。（3)中药：大蒜素与复方磺胺甲噁唑联合使用可有效地控制急性感染弓形虫病；双氢青 蒿素可延长小鼠的存活时间，若与磺胺嘧啶钠应用，则能产生协同作用而快速清除虫体，有 效防止停药后复发；苦参碱有抑制弓形虫速殖子繁殖的作用；黄芪可以延长低剂量速殖子 感染小鼠的存活时间。（4)其它药物：安定药（氟哌丁苯）和情绪稳定药（丙戊酸）在体 外均能有效地抑制弓形虫繁殖，试验证实治疗重症精神病的药物可能成为治疗弓形虫病新 的候选药物。留醇类药物与磺胺嘧啶或乙胺嘧啶联合使用具有抗弓形虫增殖的效果。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的在于克服上述现有技术中存在的缺点与不足，提供一种抗弓形虫 组方药物的筛选方法。用小鼠实验弓形虫病模型评价治疗猪弓形虫病药物的疗效。本发明 药物包括磺胺嘧啶钠注射液、复方磺胺甲噁唑、盐酸林可霉素注射液、磺胺间甲氧嘧啶钠注 射液、阿奇氟注射液、乙酰螺旋霉素、乙胺嘧啶、罗红霉素、青蒿、苦参。
[0005] 本发明的又一目的是提供一种有上述筛选获得的抗弓形虫组方药物。
[0006] 本发明的目的通过下述技术方案实现：一种抗弓形虫组方药物的筛选方法，用小 鼠实验弓形虫病模型评价治疗猪弓形虫病药物的疗效；
[0007] 所述的小鼠实验弓形虫病模型评价治疗猪弓形虫病药物的疗效，包括以下步骤：
[0008] (1)小鼠实验弓形虫病动物模型建立：将液氮保种的PYS株速殖子在小鼠体内连 续复苏三代，腹腔接种SPF昆明小鼠，72h后，颈椎脱白法处死小鼠，用生理盐水冲洗腹腔， 抽取腹腔液，稀释后用白细胞计数板计数；小鼠感染弓形虫的剂量为I X IO3个速殖子/只， 腹水用生理盐水稀释成5 X IO3个速殖子/mL，每只小鼠接种0. 2mL ;
[0009] (2)用十种药物作为治疗药物设计两个试验，一个单方药物试验，一个组方药物试 验，对不同组的小鼠模型进行药物治疗，用药过程中观察小鼠的精神状态；其中以10只小 鼠记录各药物组死亡情况；于感染后3、5、7、10、17、24、30天从每组随机抓2-3只，眼眶采 血，提取DNA进行PCR扩增；取小鼠的腹水用白细胞计数板计数，取小鼠的肝脏、肺脏、心脏、 脾脏组织脏器，提取DNA，并以特异PCR方法进行检测；将两个试验所得数据应用SPSSl 1. 5 软件进行数据分析；
[0010] (3)在小鼠模型的研究基础上，建立新的小鼠和猪弓形虫病动物模型，设计试验用 已筛选出效果好的抗弓形虫药物进行治疗；试验前观察猪的精神状况，测量体温；对每头 猪进行采血，血样分两份保存（抗凝与非抗凝血）；试验过程中监测体温，从感染后4h开 始，每日测温2次，统计稽留热；观察其精神状态，食欲，排尿和排粪等状况；于感染后6、11、 21天各组随机宰杀1头猪，宰杀前每头实验猪前腔静脉采血，血液分两份保存；取剖杀猪的 腹水、肝脏、肺脏、肺门淋巴结、心脏、脾脏、肠系膜淋巴结组织，提取DNA，并以特异PCR方法 进行检测；实现抗弓形虫组方药物的筛选。
[0011] 步骤（2)中所述的十种药物包括磺胺嘧啶钠注射液、复方磺胺甲噁唑、盐酸林可 霉素注射液、磺胺间甲氧嘧啶钠注射液、阿奇氟注射液、乙酰螺旋霉素、乙胺嘧啶、罗红霉 素、青蒿、苦参。
[0012] 检测结果显示，抗弓形虫的单方药物中，盐酸林可霉素注射液、阿奇氟注射液、青 蒿、苦参抗弓形虫无效；乙胺嘧啶有一定的抗弓形虫效果，但小鼠存活率低；磺胺嘧啶钠注 射液、复方磺胺甲噁唑、磺胺间甲氧嘧啶钠注射液、乙酰螺旋霉素、罗红霉素有较好的抗弓 形虫效果，其中磺胺间甲氧嘧啶钠注射液与罗红霉素能彻底清除组织中的弓形虫。
[0013] 检测结果显示，抗弓形虫的组方药物中，对与治疗感染弓形虫的小鼠模型，组三 (磺胺间甲氧啼啶500mg/kg · d+乙胺啼啶25mg/kg · d+TMP100mg/kg · d)和组五（复方磺 胺甲噁唑500mg/kg · d+乙酰螺旋霉素200mg/kg · d)比其它药物组具有更好的抗弓形虫效 果。
[0014] 上述的组三（磺胺间甲氧啼啶500mg/kg · d+乙胺啼啶25mg/kg · d+TMP100mg/ kg · d)和组五（复方磺胺甲噁唑500mg/kg · d+乙酰螺旋霉素200mg/kg · d)用于人工感染 猪弓形虫病的治疗，均能有效治疗人工感染猪弓形虫病，彻底清除组织中的虫体。
[0015] -种抗弓形虫组合药物由上述的筛选方法获得，包括质量比为500 :25:100的磺 胺间甲氧嘧啶：乙胺嘧啶：TMP的药物组合物。
[0016] 另一种抗弓形虫组合药物由上述的筛选方法获得，包括质量比为500:200的复方 磺胺甲噁唑：乙酰螺旋霉素的药物组合物。
[0017] 本发明相对于现有技术具有如下的优点及效果：
[0018] 1、本发明通过建立小鼠实验弓形虫病动物模型，选择十种抗弓形虫的单方药物对 其治疗，筛选出磺胺嘧啶钠注射液、复方磺胺甲噁唑、磺胺间甲氧嘧啶钠注射液、乙酰螺旋 霉素、罗红霉素有较好的抗弓形虫效果，其中磺胺间甲氧嘧啶钠注射液与罗红霉素能彻底 清除组织中的弓形虫；用十种单方药物配伍的五个组方对小鼠动物模型进行治疗，筛选出 组方三（磺胺间甲氧啼啶500mg/kg · d+乙胺啼啶25mg/kg · d+TMP100mg/kg · d)和组方五 (复方磺胺甲噁唑500mg/kg · d+乙酰螺旋霉素200mg/kg · d)比其它组方有更好的抗弓形 虫效果。
[0019] 2、本发明通过建立小鼠动物模型和猪动物模型，用十种单方药物配伍的五个 组方分别对其治疗，筛选出组方三（磺胺间甲氧嘧啶500mg/kg· d+乙胺嘧啶25mg/ kg · d+TMP100mg/kg · d)和组方五（复方磺胺甲噁唑500mg/kg · d+乙酰螺旋霉素200mg/ kg ·(!)均能有效治疗人工感染猪弓形虫病，可彻底清除组织中的虫体。该组方药物可用于 治疗猪的弓形虫病，为弓形虫的防治技术进一步研究奠定了基础。
【附图说明】
[0020] 图1:试验一小鼠感染后第7天药物组一、组二、组三的PCR扩增产物电泳图。其中 M :Marker DL 2000 ;1 :阳性对照；2-16 :药物组一的血液、肝脏、肺脏、心脏、脾脏；药物组二 的血液、肝脏、肺脏、心脏、脾脏；药物组三的血液、肝脏、肺脏、心脏、脾脏扩增产物；17 :宿 主对照（小鼠）；18:空白对照。
[0021] 图2:试验一小鼠感染后第7天药物组四、组五、组六的PCR扩增产物电泳图。M : Marker DL 2000 ;1 :阳性对照；2-16 :药物组四的血液、肝脏、肺脏、心脏、脾脏；药物组五的 血液、肝脏、肺脏、心脏、脾脏；药物组六的血液、肝脏、肺脏、心脏、脾脏扩增产物；17 :宿主 对照（小鼠）；18 :空白对照。
[0022] 图3:试验一小鼠感染后第7天药物组七、组八、组九的PCR扩增产物电泳图。M : Marker DL 2000 ;1 :阳性对照；2-16 :药物组七的血液、肝脏、肺脏、心脏、脾脏；药物组八的 血液、肝脏、肺脏、心脏、脾脏；药物组九的血液、肝脏、肺脏、心脏、脾脏扩增产物；17 :宿主 对照（小鼠）；18 :空白对照。
[0023] 图4:试验一小鼠感染后第7天药物组十、药物阳性对照组的PCR扩增产物电泳 图。M :Marker DL 2000 ;1 :阳性对照；2-11 :药物组十的血液、肝脏、肺脏、心脏、脾脏；药物 阳性对照组的血液、肝脏、肺脏、心脏、脾脏；12:宿主对照（小鼠）；13:空白对照。
[0024] 图5:试验二小鼠感染后第7天药物组一、组二