专利名称：核酸存在比测定装置、核酸存在比测定方法、判断方法及核酸存在比测定试剂盒的制作方法
技术领域：
本发明涉及核酸存在比测定装置、核酸存在比测定方法、判断方法及核酸存在比测定试剂盒。
背景技术：
以往，提出了一种熔解曲线分析方法及熔解曲线分析装置，其根据以微分熔解曲线表示的熔解曲线判断不同的两个峰的有无以及其温度范围，从而辨别基因多态性的类型；其中，微分熔解曲线表示的是对表示各温度下样品的信号值的熔解曲线的信号值进行微分而得的信号微分值与温度的关系(例如，参照专利文献1)。现有技术文献专利文献专利文献1 国际公开第2009/081965号小册子
发明内容
发明要解决的问题然而，在专利文献1的技术中，存在以下问题即使能够自动地辨别基因多态性的类型，也无法得到该基因的变异的比例。本发明是为了解决上述问题而完成的，其目的在于提供通过简易地计算核酸存在比即可测定核酸存在比的核酸存在比测定装置、核酸存在比测定方法、核酸存在比测定程序、判断方法以及核酸存在比测定试剂盒。用于解决问题的方案为了达成上述目的，本发明的核酸存在比测定装置包括以下结构检测单元，在不同的温度范围内检测具有1个以上熔解温度的核酸混合物的熔解曲线的检测信号；存在比计算单元，基于从由上述检测单元检测出的检测信号中得出的特征量之比和标准信息，计算核酸存在比。标准信息是指表示特征量之比与核酸存在比的关系的信息，例如，有表示特征量之比与核酸存在比的关系的标准曲线、表、计算式等。根据本发明的核酸存在比测定装置，检测单元，在不同的温度范围内检测具有1 个以上熔解温度的核酸混合物的熔解曲线的检测信号。而且，存在比计算单元，基于从由检测单元检测出的检测信号中得出的特征量之比和标准信息，计算核酸存在比，从而测定待测物(测定对象核酸混合物)中的核酸存在比。此外，本发明的核酸存在比测定装置的其他形态可以包括以下结构存储单元，存储表示特征量之比与存在比的关系的标准信息；或输入单元，用于输入上述标准信息；其中，所述特征量是基于从具有各不相同的熔解温度的核酸的存在比各不相同的多个核酸混合物各自得出的表示温度与检测信号的关系的熔解曲线、从包含上述熔解温度的多个温度范围内的上述熔解曲线的检测信号中得出的。
根据这样的形态，存储单元，存储表示特征量之比与存在比的关系的标准信息，其中，所述特征量是基于从具有各不相同的熔解温度的核酸的存在比各不相同的多个核酸混合物各自得出的表示温度与检测信号的关系的熔解曲线、从包含各不相同的熔解温度的多个温度范围内的熔解曲线的检测信号中得出的。此外，该标准信息可由输入单元输入。而且，基于测定对象核酸混合物的熔解曲线的与多个温度范围分别对应的温度范围内的熔解曲线的检测信号，计算特征量之比，并基于所计算出的特征量之比和标准信息，计算核酸存在比，从而测定待测物中的核酸存在比。这样，基于表示多个核酸存在比与各核酸的从包含熔解温度的多个温度范围内的熔解曲线的检测信号中得出的特征量之比的关系的标准信息，和从测定对象核酸混合物的与多个温度范围分别对应的温度范围内的熔解曲线的检测信号中得出的特征量之比，简易地计算核酸存在比，从而可测定待测物中的核酸存在比。此外，本发明的核酸存在比测定装置的其他形态中，上述特征量之比可以为从一个熔解温度附近(大致相当于熔解温度)的检测信号水平减去背景水平所得的值与从其他熔解温度附近的检测信号水平减去背景水平所得的值之比；从一个熔解温度附近的检测信号的微分值减去背景水平所得的值与从其他熔解温度附近的检测信号的微分值减去背景水平所得的值之比；一个温度范围内的检测信号的微分值之和与其他温度范围内的检测信号的微分值之和之比；或者从一个温度范围内的检测信号的微分值之和减去背景水平之和所得的值与从其他温度范围内的检测信号的微分值之和减去背景水平之和所得的值之比。熔解温度附近的检测信号，原本理想的是使用熔解温度的检测信号，但考虑到因试剂条件(待测物的状态)、循环数而产生的熔解温度的偏移、因测定装置的检测灵敏度 (例如，以rc为单位进行测定)而产生的误差，熔解温度附近的检测信号意味着使用熔解温度附近的检测信号。另外，熔解温度附近的检测信号包含熔解温度的检测信号。此外，本发明的核酸存在比测定装置的其他形态中，上述特征量之比可以为在表示温度与检测信号的微分值的关系的熔解曲线中，由通过一个温度范围的下限值所对应的点和上述一个温度范围的上限值所对应的点所作的直线与熔解曲线所围成的部分的面积， 与由通过其他温度范围的下限值所对应的点和上述其他温度范围的上限值所对应的点所作的直线与熔解曲线所围成的部分的面积之比。此外，本发明的核酸存在比测定装置的其他形态中，上述温度范围的上限值或下限值可以为在表示温度和检测信号的微分值的关系的熔解曲线中的两个峰间检测信号的微分值为最小时的温度；在表示温度和检测信号的微分值的关系的熔解曲线中峰的峰脚所对应的温度；或在表示温度和检测信号的微分值的关系的熔解曲线中距离峰士 15°C以内的温度。此外，本发明的核酸存在比测定装置的其他形态中，上述温度范围的上限值或下限值可以为在表示温度和检测信号的微分值的关系的熔解曲线中距离峰士 10°c以内的温度。此外，本发明的核酸存在比测定装置的其他形态中，上述温度范围的上限值或下限值可以为在表示温度和检测信号的微分值的关系的熔解曲线中距离峰士7°C以内的温度。此外，本发明的核酸存在比测定装置的其他形态中，上述一个温度范围的上限值与含有高于上述一个温度范围的温度范围的下限值可以为不同的值。此外，本发明的核酸存在比测定装置的其他形态中，从上述一个温度范围的下限值到上限值的宽度与从上述其他温度范围的下限值到上限值的宽度可以为同一宽度。此外，本发明的核酸存在比测定装置的其他形态中，从上述一个温度范围的下限值到上限值的宽度与从上述其他温度范围的下限值到上限值的宽度可以为不同的宽度。此外，本发明的核酸存在比测定装置的其他形态可以进一步含有以下结构温度控制单元，控制上述核酸混合物的温度变化；测量单元，测量吸光度、荧光强度或相对荧光强度作为上述检测信号。通过该结构，使用从待测物测量出的检测信号，能够测定待测物中的核酸存在比。此外，本发明的核酸存在比测定方法可以为包括以下工序的方法检测工序，在不同的温度范围内检测具有1个以上熔解温度的核酸混合物的熔解曲线的检测信号；存在比计算工序，基于从上述检测工序中检测出的检测信号中得出的特征量之比和标准信息，计算核酸存在比。根据本发明的核酸存在比测定方法，在检测工序中，在不同的温度范围内检测具有1个以上熔解温度的核酸混合物的熔解曲线的检测信号。而且，在存在比计算工序中， 基于从上述检测工序中检测出的检测信号中得出的特征量之比和标准信息，计算核酸存在比，从而测定待测物中的核酸存在比。此外，本发明的核酸存在比测定方法的其他形态可以为包括以下工序的方法标准信息制作工序，制作表示特征量之比与存在比的关系的标准信息，所述特征量是基于从具有各不相同的熔解温度的核酸的存在比各不相同的多个核酸混合物各自得出的表示温度与检测信号的关系的熔解曲线、从包含上述熔解温度的多个温度范围内的上述熔解曲线的检测信号中得出的；特征量之比计算工序，基于测定对象核酸混合物的熔解曲线的与上述多个温度范围分别对应的温度范围内的熔解曲线的检测信号，计算特征量之比；存在比计算工序，基于上述特征量之比计算工序中计算出的特征量之比和上述标准信息制作工序中制作出的标准信息，计算核酸存在比。经由这些工序计算核算存在比，从而能够测定核酸存在比。此外，本发明的核酸存在比测定程序可以为用于使计算机作为存在比计算单元发挥作用从而使计算机测定待测物中的核酸存在比的程序；存在比计算单元，读取在不同的温度范围内检测出的检测信号，并基于从读取的检测信号中得出的特征量之比和标准信息，计算核酸存在比，其中，所述检测信号为具有1个以上熔解温度的核酸混合物的熔解曲线的检测信号。此外，本发明的核酸存在比测定程序的其他形态可用于使计算机作为获取标准信息的获取单元、特征量之比计算单元、及存在比计算单元发挥作用。获取单元，从存储有表示特征量之比与存在比的关系的标准信息的存储单元获取该标准信息，或者获取由输入单元输入的上述标准信息；其中，所述特征量是基于从具有各不相同的熔解温度的核酸的存在比各不相同的多个核酸混合物各自得出的表示温度与检测信号的关系的熔解曲线、从包含上述熔解温度的多个温度范围内的上述熔解曲线的检测信号中得出的；特征量之比计算单元，基于测定对象核酸混合物的熔解曲线的与上述多个温度范围分别对应的温度范围内的熔解曲线的检测信号，计算特征量之比；以及存在比计算单元，基于由上述特征量之比计算单元计算出的特征量之比和由上述获取单元获取的标准信息，计算核酸存在比。由此，能够使计算机测定待测物中的核酸存在比。此外，作为本发明的核酸存在比测定程序的其他形态，可以使上述计算机作为控制单元发挥作用，控制单元用于使其他计算机执行上述检测信号、一部分的计算。此外，本发明的判断方法为以下方法基于使用上述核酸存在比测定装置、上述核酸存在比测定方法或上述核酸存在比测定程序而得到的核酸存在比和预先确定的核酸存在比与患者的状态的关系，判断患者的状态。此外，本发明的判断方法为以下方法基于使用上述核酸存在比测定装置、上述核酸存在比测定方法或上述核酸存在比测定程序而得到的核酸存在比和预先确定的核酸存在比与体质及相适于体质的药剂处方量中至少一者的关系，判断体质及相适于体质的药剂处方量中至少一者。此外，本发明的核酸存在比测定试剂盒为以下核酸存在比测定试剂盒其被使用在上述核酸存在比测定装置、上述核酸存在比测定方法或上述核酸存在比测定程序中测定上述核酸存在比之际，该试剂盒含有能够杂交到上述核酸混合物中的核酸中可能存在的包含靶变异的核酸序列区域的探针；能够扩增上述核酸混合物中的核酸中可能存在的包含靶变异的核酸序列的引物对。此外，也可基于预先确定的核酸存在比与体质及相适于体质的药剂处方量中至少一者的关系，将本发明的核酸存在比测定试剂盒用于判断体质及相适于体质的药剂处方量中至少一者。此外，本发明的核酸存在比测定装置可以包括以下结构存储单元，存储表示特征量之比与存在比的关系的标准信息；其中，所述特征量是基于从多个核酸存在比各不相同的多个核酸混合物各自的表示温度与检测信号的关系的熔解曲线、从包含大小各不相同的熔解温度的多个温度范围内的熔解曲线的检测信号中得出的；特征量之比计算单元，基于测定对象核酸混合物的熔解曲线的与上述多个温度范围分别对应的温度范围内的熔解曲线的检测信号，计算特征量之比；存在比计算单元，基于由上述特征量之比计算单元计算出的特征量之比和上述存储单元中存储的标准信息，计算核酸存在比。发明的效果如以上说明的那样，根据本发明的核酸存在比测定装置、核酸存在比测定方法以及核酸存在比测定程序，基于从具有不同的熔解温度的核酸混合物的熔解曲线的检测信号中得出的特征量之比和标准信息，能够得到以下效果通过简易地计算核酸存在比即可测定待测物中的核酸存在比。此外，根据本发明的判断方法和判断试剂盒，能够得到以下效果使用通过本发明的核酸存在比测定装置、核酸存在比测定方法或核酸存在比测定程序而得到的核酸存在比，能够判断患者的状态。
图1为表示本实施方式的核酸存在比测定装置的结构的框图。图2中，(A)为表示核酸混合物的熔解曲线的一个例子、⑶为表示微分熔解曲线的一个例子的图。
图3为表示微分熔解曲线的其他例子的图。图4为表示标准曲线的一个例子的图。图5为表示本实施方式的核酸存在比测定装置中核酸存在比测定处理例程的内容的流程图。图6为表示实施例中的核酸混合物的各样品的微分熔解曲线的图。图7为表示实施例中的测定对象核酸混合物的熔解曲线的图。图8为表示实施例中的测定对象核酸混合物的微分熔解曲线的图。图9为表示核酸混合物的㈧熔解曲线及⑶微分熔解曲线的其他例子的图。图10为用于对特征量之比的其他例子进行说明的图。图11为表示微分熔解曲线中两个温度范围分离的例子的图。图12为表示微分熔解曲线中基值偏移的例子的图。附图标记说明10核酸存在比测定装置12操作部14显示部16计算机20CPU22R0M24RAM26存储器
具体实施例方式以下，参照附图详细说明本发明的核酸存在比测定装置的实施方式。如图1所示，本实施方式的核酸存在比测定装置10具备操作部12，由键盘、鼠标、触摸面板、条形码读取器等读取装置构成且用于通过操作而输入各种信息；显示部14， 用于显示核酸存在比的测定结果；以及计算机16，实行核酸存在比的测定处理。计算机16含有以下结构CPU20，控制核酸存在比测定装置10总体；R0M22，作为存储后述核酸存在比测定处理等的各种程序的存储介质；RAM24，作为工作区暂时存储数据；存储器26，作为存储有各种信息的存储单元；输入输出端口(I/O端口)28 ；网络接口 (网络I/F) 30 ；以及连接这些构件的总线。I/O端口 28上连接着操作部12及显示部14。 另外，还可设置HDD。此外，存储器26，存储有标准曲线，所述标准曲线表示从包含大小各不相同的熔解温度的两个温度范围内的熔解曲线的检测信号的微分值之和减去背景水平之和所得的值之比与两种核酸的存在比的关系；其中，所述从包含大小各不相同的熔解温度的两个温度范围内的熔解曲线的检测信号的微分值之和减去背景水平之和所得的值是基于从两种核酸存在比各不相同的多个核酸混合物各自的熔解曲线。另外，标准曲线也可预先存储在 R0M22或HDD。此外，本实施方式中，虽然对于在计算前事先读取预先存储的标准曲线的情况进行说明，但也可以用条形码读取器读取包含标准曲线的信息的条码，或者用各种读取装置读取记录在IC芯片、RFID中的标准曲线的信息等从操作部12输入标准曲线的信息，还可以从介由I/O端口 28、网络I/F30连接的外部装置接收标准曲线的信息。这里，对标准曲线的制作方法进行说明。首先，例如，制作使野生型核酸Wt和突变型核酸Mt这两种核酸的存在比各不相同的多个核酸混合物，对于多个核酸混合物的每一个，使用熔解曲线分析装置而得到熔解曲线。图2中，(A)表示某一个核酸混合物的由温度与吸光度或荧光强度等检测信号的关系所表示的熔解曲线，(B)表示由温度与检测信号的微分值的关系所表示的熔解曲线 (也称作微分熔解曲线)。通过从该微分熔解曲线检测峰，从而检测核酸Wt的熔解温度Tmw 及核酸Mt的熔解温度TmM，设定分别包含Tmw及TmM的温度范围。作为包含Tmw的温度范围 ATW，例如，可以设定成以Tmw与TmM之间检测信号的微分值最小时的温度为下限、以检测信号的峰的峰脚所对应的温度为上限的温度范围。此外，作为包含TmM的温度范围Δ Tm,例如， 可以设定成以Tmw与TmM之间检测信号的微分值最小时的温度为上限、以检测信号的峰的峰脚所对应的温度为下限的温度范围。另外，温度范围ΔΤ 及温度范围ΔΤΜ可以如图2的 (B)所示那样设定成同一宽度(例如10°C )，或者，如图3所示那样设定成不同的宽度(例如，温度范围Δ 1 为71，温度范围ATM*16°C)。此外，温度范围Δ Tw及温度范围Δ Tm可以设定成从各自的熔解温度Tm加上X°C、减去X°C的宽度(X°C为例如15°C以内，优选10°C 以内，更优选7°C以内)。自动地进行这样的温度范围的设定是容易的。接着，对于各个温度范围ATw及温度范围Δ TM，求出由通过微分熔解曲线的温度范围的下限所对应的点和上限所对应的点所作的直线与微分熔解曲线所围成的面积(图2 的(B)的斜线部分)。作为面积的求法的一个例子，具体可按以下方式求得。设温度T下的检测信号的微分值为f (T)，设温度T下的基值为B(T)，根据下述式(1)求得。面积S = {f (Tsh) -B (Ts+1) } + {f (Ts+2) -B (Ts+2)}+…+ {f(IV1)-B(Th)}··· (1)其中，Ts为各温度范围的下限值，Te为上限值。此外，各温度T的基值B(T)为根据下述式(2)求得的值，表示检测信号中所包含的背景水平。通过从检测信号的微分值减去该基值，从而能够更适当地去除检测信号中所包含的背景的影响。
其中，
根据上述式(1)及式(2)，对各核酸混合物，求出温度范围Δ Tw下的面积Sw及温度范围△ Tm下的面积SM，制作表示面积比与各核酸混合物的存在比的关系的标准曲线。图 4表示横轴采用存在比(核酸Mt相对于核酸混合物的总量的比例)、纵轴采用面积比(Sm/ Sff)的标准曲线的一个例子。将这样制作的标准曲线预先存储在存储器26中。另外，面积比可以设定为SW/SM。接着，参照图5，对于本实施方式的核酸存在比测定装置10中所实行的对测定对象核酸混合物的核酸存在比测定处理例程进行说明。在步骤100中，读取存储在存储器26中的标准曲线。接着，在步骤102中，获取两种核酸存在比未知的待测物(测定对象核酸混合物) 的熔解曲线的数据。熔解曲线的数据，可以从介由网络I/F30连接的熔解曲线分析装置等的外部装置获取，或者通过读取记录在记录介质的数据来获取。
接着，在步骤104中，将上述步骤102中获取的熔解曲线的检测信号对温度进行微分，从而计算表示温度与检测信号的微分值的关系的微分熔解曲线。接着，在步骤106中，对上述步骤104中计算的微分熔解曲线，设定与在制作上述步骤100中读取的标准曲线时设定的各个温度范围AR Δ Tm对应的温度范围ΔΤ’ 及 ΔΤ’μ。另外，温度范围NV ΔΤ’Μ可以设定成与制作标准曲线时设定的温度范围ATw 及Δ Tm相同的温度范围，也可设定成与温度范围L、R ΔΤΜ近似的温度范围。而且，对于各个温度范围ΔΤ’ w及温度范围ΔΤ’ M，求出由通过微分熔解曲线的温度范围的下限所对应的点和上限所对应的点所作的直线与微分熔解曲线所围成的面积。具体而言，根据式(1)及式(2)，采用与制作标准曲线时计算各温度范围的面积所用相同的方法，计算温度范围八1~’ 下的面积5’ 及温度范围八1~’ 下的面积5’ 。接着，在步骤108中，使用上述步骤106中计算的面积S’w及S’M，计算面积比S’M/ S，
O ffo接着，在步骤110中，基于上述步骤108中计算出的面积比S’ M/S’ w和上述步骤 100中读取的标准曲线，计算与面积比S，M/S’ 对应的核酸存在比，从而测定待测物的核酸存在比。即，测定待测物的变异的比例。接着，在步骤112中，按照显示部14中显示上述步骤110中的测定结果的方式，输出测定结果，从而结束处理。另外，上述例程中，步骤102中，在读取熔解曲线之前，事前读取标准曲线(步骤 100)，只要在步骤110中的基于面积比及标准曲线测定核酸存在比(变异的比例)之前，则可以在任一阶段进行标准曲线的读取。如以上说明的那样，根据本实施方式的核酸存在比测定装置，基于表示两种核酸存在比与各核酸的从包含熔解温度的两个温度范围内的微分熔解曲线得出的面积比的关系的标准曲线，和从存在比未知的测定对象核酸混合物的微分熔解曲线的与两个温度范围分别对应的温度范围内的微分熔解曲线得出的面积比，简易地计算待测物的核酸存在比， 从而简易地测定待测物的核酸存在比。即，可简易地测定待测物的变异的比例。[实施例1]以下，使用c-kit基因的部分序列作为测定对象核酸，对本发明的一个实施例进行说明。作为样品使用表3所示的核酸混合物的样品(IO3拷贝/反应液)，使用全自动 SNPs检查装置(商品名i-densy (商标)，爱科来株式会社制)进行PCR及Tm分析。PCR反应液组成如表1所示，PCR及Tm分析的条件如表4所示。[表 1]
50μ 的PCR反应液中:_
Ix反应缓冲液1.25UTaq 聚合Sl 1.5mmol/L MgCl2 0.2mmol/L dNTP Ιμπιο /LF 引物(※)
权利要求
1.一种核酸存在比测定装置，其包括检测单元，在不同的温度范围内检测具有1个以上熔解温度的核酸混合物的熔解曲线的检测信号；存在比计算单元，基于从由上述检测单元检测出的检测信号中得出的特征量之比和标准信息，计算核酸存在比。
2.根据权利要求1所述的核酸存在比测定装置，其包括存储单元，存储表示特征量之比与存在比的关系的标准信息；或输入单元，用于输入上述标准信息；其中，所述特征量是基于从具有各不相同的熔解温度的核酸的存在比各不相同的多个核酸混合物各自得出的表示温度与检测信号的关系的熔解曲线、从包含上述熔解温度的多个温度范围内的上述熔解曲线的检测信号中得出的。
3.根据权利要求1所述的核酸存在比测定装置，其中，上述特征量之比为从一个熔解温度附近的检测信号水平减去背景水平所得的值与从其他熔解温度附近的检测信号水平减去背景水平所得的值之比；从一个熔解温度附近的检测信号的微分值减去背景水平所得的值与从其他的熔解温度附近的检测信号的微分值减去背景水平所得的值之比；一个温度范围内的检测信号的微分值之和与其他温度范围内的检测信号的微分值之和的比；或者从一个温度范围内的检测信号的微分值之和减去背景水平之和所得的值与从其他温度范围内的检测信号的微分值之和减去背景水平之和所得的值之比。
4.根据权利要求1所述的核酸存在比测定装置，其中，上述特征量之比为在表示温度与检测信号的微分值的关系的熔解曲线中，由通过一个温度范围的下限值所对应的点和上述一个温度范围的上限值所对应的点所作的直线与熔解曲线所围成的部分的面积，与由通过其他温度范围的下限值所对应的点和上述其他温度范围的上限值所对应的点所作的直线与熔解曲线所围成的部分的面积之比。
5.根据权利要求4所述的核酸存在比测定装置，其中，上述温度范围的上限值或下限值为在表示温度和检测信号的微分值的关系的熔解曲线中的两个峰间检测信号的微分值为最小时的温度；在表示温度和检测信号的微分值的关系的熔解曲线中峰的峰脚所对应的温度；或在表示温度和检测信号的微分值的关系的熔解曲线中距离峰士 15°C以内的温度。
6.根据权利要求4所述的核酸存在比测定装置，其中，上述温度范围的上限值或下限值为在表示温度和检测信号的微分值的关系的熔解曲线中距离峰士 10°c以内的温度。
7.根据权利要求4所述的核酸存在比测定装置，其中，上述温度范围的上限值或下限值为在表示温度和检测信号的微分值的关系的熔解曲线中距离峰士7°C以内的温度。
8.根据权利要求4所述的核酸存在比测定装置，其中，上述一个温度范围的上限值与含有高于上述一个温度范围的温度范围的下限值为不同的值。
9.根据权利要求4所述的核酸存在比测定装置，其中，从上述一个温度范围的下限值到上限值的宽度与从上述其他温度范围的下限值到上限值的宽度为同一宽度。
10.根据权利要求4所述的核酸存在比测定装置，其中，从上述一个温度范围的下限值到上限值的宽度与从上述其他温度范围的下限值到上限值的宽度为不同的宽度。
11.根据权利要求1所述的核酸存在比测定装置，其包括温度控制单元，控制上述核酸混合物的温度变化；测量单元，测量吸光度、荧光强度或相对荧光强度作为上述检测信号。
12.一种核酸存在比测定方法，其包括检测工序，在不同的温度范围内检测具有1个以上熔解温度的核酸混合物的熔解曲线的检测信号；存在比计算工序，基于从上述检测工序中检测出的检测信号中得出的特征量之比和标准信息，计算核酸存在比。
13.一种核酸存在比测定方法，其包括标准信息制作工序，制作表示特征量之比与存在比的关系的标准信息，其中，所述特征量是基于从具有各不相同的熔解温度的核酸的存在比各不相同的多个核酸混合物各自得出的表示温度与检测信号的关系的熔解曲线、从包含上述熔解温度的多个温度范围内的上述熔解曲线的检测信号中得出的；特征量之比计算工序，基于测定对象核酸混合物的熔解曲线的与上述多个温度范围分别对应的温度范围内的熔解曲线的检测信号，计算特征量之比；存在比计算工序，基于上述特征量之比计算工序中计算出的特征量之比和上述标准信息制作工序中制作出的标准信息，计算核酸存在比。
14.一种判断方法，其基于使用权利要求1所述的核酸存在比测定装置而得到的核酸存在比和预先确定的核酸存在比与患者的状态的关系，判断患者的状态。
15.一种判断方法，其基于使用权利要求1所述的核酸存在比测定装置而得到的核酸存在比和预先确定的核酸存在比与体质及相适于体质的药剂处方量中至少一者的关系，判断体质及相适于体质的药剂处方量中至少一者。
16.一种核酸存在比测定试剂盒，其被使用在权利要求1所述的核酸存在比测定装置中测定上述核酸存在比之际，该试剂盒含有能够杂交到上述核酸混合物中的核酸中可能存在的包含靶变异的核酸序列区域的探针；能够扩增上述核酸混合物中的核酸中可能存在的包含靶变异的核酸序列的引物对。
17.根据权利要求16所述的核酸存在比测定试剂盒，其中，上述探针为标记探针。
全文摘要
提供能够简易地测定核酸存在比的核酸存在比测定装置、核酸存在比测定方法、判断方法以及核酸存在比测定试剂盒。一种核酸存在比测定装置，其包括检测单元，在不同的温度范围内检测具有1个以上熔解温度的核酸混合物的熔解曲线的检测信号；存在比计算单元，基于从由上述检测单元检测出的检测信号中得出的特征量之比和标准信息，计算核酸存在比。
文档编号C12M1/34GK102311915SQ20111019359
公开日2012年1月11日 申请日期2011年7月7日 优先权日2010年7月7日
发明者小森真理子, 平野胜靖 申请人:爱科来株式会社