人btnl3蛋白、核酸和抗体及其用图
【专利说明】人BTNL3蛋白、核酸和抗体及其用途
[0001] 相关申请的交叉引用
[0002] 本申请要求2012年7月19日提交的美国临时申请号61/673, 639的权益，所述申 请W引用的方式并入本文。
[000引领域
[0004] 本发明设及一种嗜乳脂蛋白化utyrophilin)样蛋白质及其片段、变体和衍生物、 编码所述蛋白质的核酸、结合该些蛋白质的抗体W及该些蛋白质的激动剂和括抗剂。还涵 盖含有所述分子的药物组合物W及所述分子或含有它们的组合物的用途。
[000引背景
[0006] 在各种治疗环境中，调节免疫或炎症性反应可为有价值的。在各种种类的自身免 疫性或炎症性疾病的治疗中，可希望下调免疫或炎症性反应。增强任何免疫反应对例如扩 大对特定抗原的反应而言可为有价值的，所述抗原如疫苗中含有的抗原和/或优先在癌细 胞、介导纤维化疾病的细胞或病原体上表达的抗原。因此，能够调节免疫或炎症性反应的分 子在多种病理性环境中潜在地具有治疗价值。本发明提供用W诊断和治疗特征在于炎症和 /或免疫反应不当、不足和/或异常的疾病的治疗剂。该些药剂中的一些可刺激免疫反应。 其它药剂可抑制炎症和/或免疫反应。
[0007] 概述
[0008] 本发明提供B?L3蛋白及其变体、编码它们的核酸W及结合它们的抗体。更具体 地说，本文所述的BTOL3蛋白是可为分离的蛋白质和/或可溶性蛋白质的多聚蛋白和/或 融合蛋白。BNTL3蛋白可连接至表面和/或在细胞表面上表达。还提供B?L3蛋白的用途 W及BTOL3的括抗剂和激动剂，包括抗BTOL3抗体的用途。
[0009] 在一个实施方案中，本发明涵盖一种分离的多聚BTOL3蛋白，任选地为可溶性蛋 白质，或连接至如微珠的表面或在细胞表面上表达的BTOL3蛋白，其包含（a)氨基酸序列与 SEQIDNO;2 的氨基酸 18-236 或与SEQIDNO;9 的氨基酸 18-166 至少 90%、95%、96%、 97%、98%、99%或100%相同的多肤W及化）氨基酸序列与SEQIDN0;2的氨基酸18-236 或与SEQIDN0;9 的氨基酸 18-166 至少 90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同 的第二多肤，其中（a)和化）的多肤的氨基酸序列与SEQIDNO;2的氨基酸18-236或与 SEQIDN0;9的氨基酸18-166的比对窗的长度为至少50、60、70、80或100个氨基酸，其中 BTOL3蛋白为至少二聚体、S聚体或四聚体，其中BTOL3蛋白已由非人宿主细胞产生，并且 其中多聚BTNL3蛋白可抑制由固定的抗CD3抗体刺激的T细胞的增殖。在略微不同的实 施方案中，本发明提供分离的多聚BTNL3蛋白，任选地为可溶性蛋白质，其包含（a)氨基酸 序列与SEQIDNO;2的氨基酸18-236或与SEQIDNO;9的氨基酸18-166至少90%相同 的多肤，W及化）氨基酸序列与SEQIDNO;2的氨基酸18-236或与SEQIDNO;9的氨基 酸18-166至少90%相同的第二多肤，其中（a)和化）的多肤的氨基酸序列与SEQIDNO; 2的氨基酸18-236或与SEQIDNO;9的氨基酸18-166的比对窗的长度为至少50、60、70、 80或100个氨基酸，其中BTOL3蛋白具有的分子量为（a)的单体多肤的分子量的至少约两 倍、=倍或四倍大和/或为（a)的单体多肤的分子量的至少约五倍、六倍、走倍、八倍、九倍、 十倍、^--倍、十二倍、十S倍、十四倍、十五倍或十六倍大，其中B?L3蛋白已由非人宿主 细胞产生，并且其中多聚BTOL3蛋白可抑制由固定的抗CD3抗体刺激的T细胞的增殖。或 者或此外，在该些实施方案的任一个中，（a)和化）的多肤可包含相对于SEQIDNO; 2的氨 基酸18-236或SEQIDNO;9的氨基酸18-166具有至多20、15、12、10、8或5个单一氨基酸 的插入、缺失或取代的序列。在一些实施方案中，多聚BTOL3蛋白可为（a)的单体多肤的至 多=倍、四倍、五倍、六倍、走倍、八倍、九倍、十倍、十一倍、十二倍、十=倍、十四倍、十五倍 或十六倍大。该些实施方案的任一个中的多聚BTOL3蛋白也可为至少二聚体、S聚体、四聚 体、五聚体、六聚体、走聚体、八聚体、九聚体、十聚体和/或更高级多聚体，该也意味着多聚 B?L3 蛋白可为二聚体、S聚体、四聚体、五聚体、六聚体、^;：聚体、八聚体、九聚体、十聚体和 /或更高级多聚体。在一些实施方案中，多聚BTOL3蛋白可为至多S聚体、四聚体、五聚体、 六聚体、^；：聚体、八聚体、九聚体或十聚体。多聚81'化3蛋白可包含来自569ID^;2的氨 基酸18、19、20、21、22或23至234、235、236、237或238的氨基酸序列或来自569 10側；9 的氨基酸18、19、20、21、22或23至164、165、166、167或168的氨基酸序列。在一些实施方 案中，（a)和化）的多肤的氨基酸序列不包含SEQIDNO;2的氨基酸237至259或SEQID NO;9的氨基酸167至189,并且在一些实施方案中，该些氨基酸序列可包含为例如化多肤 的氨基酸序列的另外的氨基酸序列。所述化多肤可包含（i)天然人化区的氨基酸序列或 (ii)大致上与天然人化区的氨基酸序列类似的氨基酸序列，其相对于天然人化区的氨基 酸序列具有至多15、至多10或至多5个单一氨基酸的插入、缺失或取代。天然人化可具 有IgG(包括IgGl、IgG2、IgG3或IgG4)、IgA、I曲、IgM或I班同种型。多聚B?L3蛋白可 为同二聚体、同S聚体、同四聚体、同五聚体、同六聚体、同走聚体、同八聚体、同九聚体、同 十聚体、更高级同多聚体、异多聚体或物质混合物。多聚BTOL3蛋白具有的分子量可为：约 (a)或化）的多肤的分子量的4倍大；约（a)的多肤的两倍分子量加化）的多肤的两倍分 子量的总和；约（a)的多肤的S倍分子量加化）的多肤的分子量的总和；或约（a)的多肤的 分子量加化）的多肤的S倍分子量的总和。还提供编码所述多聚BTNL3蛋白的核酸W及包 含该些核酸的载体和含有所述载体和/或所述核酸的宿主细胞。
[0010] 在另一个实施方案中，本发明提供一种BTOL3融合蛋白，其包含（a)含有与SEQID NO;2 的氨基酸 18-236 或与SEQIDNO;9 的氨基酸 18-166 至少 90%、95%、96 %、97%、 98%、99%或100%相同的氨基酸序列的第一多肤，其中BTOL3融合蛋白的氨基酸序列与 SEQIDNO;2的氨基酸18-236或与SEQIDNO;9的氨基酸18至166的比对窗的长度为 至少80个氨基酸，W及化）氨基酸序列不同于第一多肤的氨基酸序列，并且不包含来自 SEQIDNO;2的氨基酸237至466、长度为至少20个氨基酸的序列的片段的第二多肤，其 中BTNL3融合蛋白可抑制由固定的抗CD3抗体刺激的T细胞的增殖。融合蛋白可为分离的 蛋白质和/或可溶性蛋白质。第二多肤可为化多肤，其中化多肤具有与天然人化区的氨 基酸序列相同或大致上类似，并且相对于天然人化区含有至多5、10、15或20个单一氨基 酸的插入、缺失或取代的氨基酸序列。天然人化区可具有IgG(包括IgGl、IgG2、IgG3或 IgG4)、IgA、I曲、I班或IgM同种型。B?L3融合蛋白可包含SEQIDNO;2的氨基酸18-236 或SEQIDNO;9的氨基酸18-166。B?L3融合蛋白可包含大致上类似于SEQIDNO;7的 氨基酸序列，其中所述氨基酸序列相对于SEQIDNO;7包含至多5、10、15或20个单一氨基 酸的插入、缺失或取代，和/或B?L3融合蛋白可包含SEQIDN0;7。B?L3融合蛋白可为 至少二聚体、s聚体、四聚体、五聚体、六聚体、走聚体、八聚体、九聚体或十聚体。在一些实 施方案中，BTOL3融合蛋白可为至多二聚体、S聚体、四聚体、五聚体、六聚体、走聚体、八聚 体、九聚体或十聚体。BTOL3融合蛋白可包含接头。在一些实施方案中，BTOL3融合蛋白不 包含接头。所述BTNL3融合蛋白可为多聚体，其中所述多聚体具有的分子量可为单体BTNL3 融合蛋白的分子量的至少约四倍、五倍、六倍、走倍、八倍、九倍、十倍、十一倍、十二倍、十= 倍、十四倍、十五倍或十六倍大。在另一方面，一些所述多聚体具有的分子量可为单体B?L3 融合蛋白的分子量的至多约四倍、五倍、六倍、走倍、八倍、九倍、十倍、十一倍、十二倍、十= 倍、十四倍、十五倍或十六倍大。还提供编码所述BTNL3融合蛋白的核酸化及包含该些核酸 的载体和含有所述载体和/或所述核酸的宿主细胞。
[0011] 在另一个实施方案中，本发明提供一种BTOL3蛋白，任选地为可溶性蛋白质，或连 接至如微珠的表面或在细胞表面上表达的BTOL3蛋白，其包含SEQIDNO;2的自SEQID NO;2、6或9的约位置25延伸至131的片段的氨基酸序列，或其相对于SEQIDNO;2、6或 9的氨基酸25-131包含至多5或10个单一氨基酸的插入、缺失或取代的变体，其中B?L3 蛋白也不包含SEQIDNO;2的自SEQIDNO;2的约位置132延伸至236的片段的氨基酸 序列或其相对于SEQIDNO;2的氨基酸132至236包含至多20、15、10、10或5个单一氨基 酸的插入、缺失或取代的变体，并且其中BTOL3蛋白可抑制由固定的抗CD3抗体刺激的T细 胞的增殖。BTOL3蛋白可在非人或哺乳动物宿主细胞中制备。BTOL3蛋白或连接至如微珠 的表面或在细胞表面上表达的B?L3蛋白相对于SEQIDNO;2、6或9的氨基酸25至131 可包含至多5个单一氨基酸的插入、缺失或取代。或者，在另一方面，可溶性BTOL3蛋白的 氨基酸序列可与SEQIDN0;2的氨基酸25至131至少90%、95%、96%、97%、98%、99% 或100%相同。可溶性BTOL3蛋白或连接至如微珠的表面或在细胞表面上表达的BTOL3蛋 白可为至少二聚体、S聚体、四聚体、五聚体、六聚体、走聚体、八聚体、九聚体或十聚体。所 述BTOL3蛋白或连接至如微珠的表面或在细胞表面上表达的BTOL3蛋白也可为二聚体、S 聚体、四聚体、五聚体、六聚体、走聚体、八聚体、九聚体、十聚体、更高级多聚体或该些物质 的混合物。在另一方面，可溶性BTOL3蛋白或连接至如微珠的表面或在细胞表面上表达的 BTOL3蛋白可为至多S聚体、四聚体、五聚体、六聚体、走聚体、八聚体、九聚体或十聚体。所 述可溶性BTOL3蛋白或连接至如微珠的表面或在细胞表面上表达的BTOL3蛋白可为多聚 体，其中所述多聚体具有的分子量为单体可溶性BTNL3蛋白的分子量的至少约两倍、S倍、 四倍、五倍、六倍、^；：倍、八倍、九倍、十倍、^^一倍、十二倍、十=倍、十四倍、十五倍或十六倍 大。在另一方面，所述可溶性BTOL3蛋白或连接至如微珠的表面或在细胞表面上表达的 BTOL3蛋白可为多聚体，其具有的分子量为单体可溶性BTOL3蛋白的分子量的至多约S倍、 四倍、五倍、六倍、走倍、八倍、九倍、十倍、十一倍、十二倍、十=倍、十四倍、十五倍或十六倍 大。所述可溶性BTOL3蛋白或连接至如微珠的表面或在细胞表面上表达的BTOL3蛋白还可 包含另一个多肤，例如像抗体的化片段和/或接头。还提供编码所述可溶性BTOL3蛋白的 核酸W及包含该些核酸的载体和含有所述载体和/或所述核酸的宿主细胞。
[0012] 或者，BTOL3蛋白，任选地为可溶性蛋白质，或连接至如微珠的表面或在细胞表面 上表达的B?L3蛋白可包含SEQIDN0;2或6的自SEQIDN0;2或6的约位置132延伸 至236的片段的氨基酸序列或其相对于SEQIDNO;2或6的氨基酸132至236包含至多 20、15、10或5个单一氨基酸的插入、缺失或取代的变体，其中BTOL3蛋白还不包含SEQID NO;2的自SEQIDNO;2或6的位置25延伸至131的片段的氨基酸序列或其相对于SEQID NO;2或6的氨基酸25至131包含至多10个单一氨基酸的插入、缺失或取代的变体，并且 其中B?L3蛋白可抑制由固定的抗CD3抗体刺激的T细胞的增殖。B?L3蛋白可在非人或 哺乳动物宿主细胞中制备。所述可溶性BTOL3蛋白或连接至如微珠的表面或在细胞表面 上表达的所述BTOL3蛋白可为至少二聚体、S聚体、四聚体、五聚体、六聚体、走聚体、八聚 体、九聚体、十聚体或更高级多聚体。在另一方面，可溶性BTOL3蛋白或连接至如微珠的表 面或在细胞表面上表达的BTOL3蛋白可为至多二聚体、S聚体、四聚体、五聚体、六聚体、走 聚体、八聚体、九聚体、十聚体。所述BTOL3蛋白或连接至如微珠的表面或在细胞表面上表 达的所述BTOL3蛋白还可包含另一个多肤，例如像抗体的化片段和/或接头。所述可溶 性BTOL3或连接至如微珠的表面或在细胞表面上表达的所述BTOL3蛋白可为多聚体，其中 所述多聚体具有的分子量为单体可溶性BTNL3蛋白的分子量的至少约两倍、S倍、四倍、五 倍、六倍、走倍、八倍、九倍、十倍、十一倍、十二倍、十=倍、十四倍、十五倍或十六倍大。此 夕F，可溶性BTOL3蛋白或连接至如微珠的表面或在细胞表面上表达的BTOL3蛋白可为多聚 体，其中所述多聚体具有的分子量为单体可溶性BTOL3蛋白的分子量的至多约两倍、S倍、 四倍、五倍、六倍、^；：倍、八倍、九倍、十倍、^^一倍、十二倍、十=倍、十四倍、十五倍或十六倍 大。还提供编码所述BTNL3融合蛋白的核酸W及包含该些核酸的载体和含有所述载体和/ 或所述核酸的宿主细胞。
[001引在另一个实施方案中，提供一种由DNA编码的BTOL3融合蛋白，其中所述DNA包含W下；（a)编码多肤的