可"括抗包含氨基酸序列SEQIDNO;7的B?L3蛋白对由固定的抗CD3抗体刺激 的T细胞的增殖的抑制作用"的BTOL3括抗剂的生物活性可通过W下方式来测定；如实施 例4中所述进行T细胞增殖测定并且W控制方式将括抗剂添加到一些样品中W确定括抗剂 是否影响包含氨基酸序列SEQIDNO;7的BTOL3蛋白的活性。通过类似测试，可测定使由 T细胞达成的T细胞增殖的抑制作用增加的激动性抗体的活性。
[0060] 如本文所指的"抗体"包含免疫球蛋白的重链可变区和/或免疫球蛋白的轻链可 变区。抗体可为包含轻链可变区（VJ、轻链恒定区（片)、重链可变区（Vh)、第一重链恒定 区（句1)、较链区、第二重链恒定区佑战和第立重链恒定区佑战的全长四聚抗体，如IgG、 IgA、I曲、IgM或I班抗体。或者，抗体可为片段，如F油片段或任选地重组片段，如scFv片 段。包含单一可变区Vh区或Vl区的单结构域抗体也是如本文所指的抗体。单结构域抗体在 美国专利申请公布US2006/0062784中有所描述，所述公布描述单结构域抗体的各部分据 此W引用的方式并入。此外，各种形式的单价分子（包括单链抗体，如scFv、F油、scFv-Fc、 结构域抗体W及例如在国际申请WO2009/089004和美国专利5, 837, 821中所述的各种形 式，所述申请和专利的描述性部分W引用的方式并入本文）和多价分子（如F(ab)2和例如 在国际申请W0 2009/089004和美国专利5,837821中所述的那些，所述申请和专利的描述 性部分W引用的方式并入本文）涵盖在"抗体"的含义内。
[0061] 在本文中多处称蛋白质的多聚物质具有的分子量是所述蛋白质的单体物质的分 子量的"至少约"两倍、S倍、四倍、五倍、六倍、走倍、八倍、九倍、十倍、十一倍、十二倍、十S 倍、十四倍、十五倍或十六倍。尽管其含义是普通的，但该个短语明确意图包括比单体大约 四倍、五倍、六倍等的物质而非仅包括所述物质与较大物质的组合或仅包括较大物质。类 似地，在多处称多聚体为"至少"二聚体、S聚体、四聚体等。该个短语明确意图包括为二聚 体、=聚体、四聚体等的物质而非仅包括所述物质与较大物质的组合或仅包括较大物质。此 夕F，在本文中多处称多聚物质具有的分子量为蛋白质的单体物质的分子量的"至多"两倍、 =倍、四倍、五倍、六倍、走倍、八倍、九倍、十倍、十一倍、十二倍、十=倍、十四倍、十五倍或 十六倍。尽管其含义是普通的，但该个短语明确意图包括比单体大约四倍、五倍、六倍等的 物质而非仅包括所述物质与较小物质的组合或仅包括较小物质。类似地，在多处称多聚体 为''至多"二聚体、S聚体、四聚体等。该个短语明确意图包括为二聚体、S聚体、四聚体等 的物质而非仅包括所述物质与较小物质的组合或仅包括较小物质。
[0062] 如本文所指的"B?L3蛋白"包括全长人BTOL3蛋白及其片段和/或变体，其包括由 BTNL3基因的天然存在的等位基因变体编码的蛋白质W及作为在如非人或哺乳动物宿主细 胞的宿主细胞中产生的蛋白质的重组产生的BTOL3蛋白，其相对于天然存在的BTOL3蛋白 可含有一些序列变化。明确涵盖包含全长人B?L3蛋白的可溶性片段的蛋白质，所述可溶 性片段包括大部分或整个细胞外区域，并且不包括跨膜区域。所述蛋白质可连接至如珠粒 或微量滴定板的表面。
[0063] 当患者在大体相同时间段期间，任选地在正好相同时间接受两种或更多种分子 时，患者接受用两种或更多种分子进行的"同时"治疗，所述分子可为例如治疗剂或疫苗的 组分。例如，如果患者用一种分子每日持续给药，并且还用另一种分子一个月一次持续给 药，那么患者将同时接受该两种分子。类似地，用各自每两周，但不在同一天施用的两种不 同分子给药的患者将接受用所述两种分子进行的同时治疗。此外，每周一次持续接受一种 分子，并且每天一次仅持续=天接受另一种分子的患者将接受用该两种分子进行的短时期 同时治疗。
[0064] "scFv"是包含重链可变区（Vh)和轻链可变区（VJ并且不包含抗体的恒定区的单 链抗体。在一些实施方案中，scFv也可在重链可变区与轻链可变区之间包含长度可变的接 头。尽管scFv可融合于其它氨基酸序列，但蛋白质的被称为scFv的部分优选不包含任何 实质量的不同于Vh区、V芯，化及任选地，接合该些序列的接头的氨基酸序列。
[0065] 如本文所指的叩C多肤"是抗体重链的包含Ch2和Ch3结构域和全部或部分较 链区的片段或所述片段的变体。化多肤不包含CJ结构域或Vh结构域。参见例如Kuby， Immunology,第二版，第 110-11 页，W.H.RreemanandCo.，NewYork(1994)。化多肤可具 有IgA、I曲、I班、IgG或IgA同种型，包括IgGl、IgG2、IgG3、IgG4或其它亚型。化多肤可 为多聚的，在一些情况下可为二聚的。所述多聚化多肤在本文中称为'卞C区"。一些化多 肤，例如IgM或IgA化多肤可形成更高级多聚体。多聚化区内的单一多肤链称为'卞C多 肤"。如本文所指的化多肤的变体相对于天然存在的化多肤可包含1至30个（明确包 括至多1、2、3、4、5、6、7、8、9、10个等）单一氨基酸的插入、缺失或取代。天然存在的化多 肤或"天然"化多肤具有在自然界中存在于活生物体中的序列，例如人或小鼠化多肤。因 此，"天然人"化多肤具有见于天然存在的人化多肤中的氨基酸序列。关于何处可耐受变 化而不影响功能的指导可见于本领域中。例如，相关部分W引用的方式并入本文的美国专 利5, 807, 706和国际申请W0 2009/089004中鉴定的氨基酸残基的改变可用于相较于同二 聚体形成来促进异二聚体形成。类似地，对化多肤进行的不阻止新生儿化受体化化的结 合的改变涵盖在可发生在如本文所指的化变体中的改变内。可使用如Biacore3000的 Biacore仪器在约抑6下确定化多肤与化化的结合。可使用标准化学使人化化偶联于 CM5巧片。含有化的蛋白质可为流动相的一部分，并且可用共振单位量度反应。化多肤的 改变描述于例如国际专利申请公布W0 97/34631中，所述公布的相关部分W引用的方式并 入本文。或者，在物种内和物种之间比较例如IgG序列可定位高度保守的氨基酸，该将向本 领域技术人员表明改变那些氨基酸可影响结构和/或功能。较链区、Ch2区和Ch3区（其一起 形成化区）的众多序列比对可在例如K油at等，SequencesofImmunologicalInterest， P^JationalInstitutesofHealth,出版号91-3242,1991中获得，所述出版物的相关部分W 引用的方式并入本文。另一方面，在各种IgG之间变化的氨基酸是在其处变化可能被耐受 而对功能无影响的位点。类似地，具有如增加或降低的效应物功能的其它所需性质的化变 体涵盖在化变体所指的含义内，所述效应物功能包括抗体依赖性细胞毒性和/或导致补体 固定的Clq结合。
[0066] 术语"全长抗体"是指在结构方面类似于大多数天然存在的抗体（例如IgG抗 体），也就是说含有两个完整重链和两个完整轻链的分子。对于天然存在的抗体的结构的 论述，参见例如K油at等（同上）或Kuby，Immunology，第二版，第109-32页，W.H.Rreeman andCo.，NewYork(1994)。该些参考文献的描述全长抗体的结构的部分W引用的方式 并入本文。在"全长抗体"中还包括在结构方面类似于天然存在的仅含有两个完整重链 (常具有异常长的CDR3区）而不含有轻链的单峰驼抗体的抗体。Muldermans等（2001)， J.Biotechnol. 74 ;277-302;Desmyter等（2001)，J.Biol.Chem. 276 ;26285-26290。该些参 考文献的描述该些单峰驼抗体的结构的部分W引用的方式并入本文。
[0067] 如多聚B?L3蛋白的"多聚"蛋白是包含不止一个多肤链的蛋白质。术语"多聚 体"涵盖如"二聚体"、聚体"或"四聚体"的术语，所述术语指定多聚体含有多少个多肤 链。"同多聚体"由相同多肤链的两个或更多个拷贝组成，并且不含有任何不同的多肤链。 类似地，"同二聚体"由相同多肤链的两个拷贝组成，"同S聚体"由相同多肤链的S个拷贝 组成，等。"异多聚体"含有至少两个不同的多肤链。如果异多聚体具有=个或更多个多肤 链，那么它们中的一些可彼此相同，只要至少一个多肤链不同于其它多肤链即可。当称蛋白 质为"至少=聚体"时，是指所述蛋白质为=聚体或更高级多聚体。类似含义将归于"至少 四聚体"、"至少五聚体"等。类似地，为"至多聚体的多聚蛋白是S聚体或二聚体。
[0068] 叩油片段"是包含轻链和一部分重链的抗体片段，所述轻链包含￥^区和（：^区， 所述一部分重链包含Vh区和ChI区。F油片段不包含Ch2区或Ch3区。对于F油片段是什 么的论述，参见例如Kuby，Immunology,第二版，第 110-11 页W.H.RreemanandCo.，New York(1994)。不同种类的F油片段可不含有较链区，含有一部分较链区或整个较链区。
[0069] 如本文所用的"scFv-Fc"是作为scFv与化多肤的融合物的重组蛋白。参见 Li等（2000)，CancerImmunol.Immunother. 49 ;243-252 ;化wers等（2001)，J.Immunol. Methods251 ;123_135;Gilliland等（1996)，TissueAntigens47 ;1_20。scFv-Fc可为二 聚的。
[0070] 如本文所指，"非还原性条件"是蛋白质内的二硫桥键将不被还原W使桥键将被破 坏所处的条件。
[0071] "重组"蛋白或抗体是由遗传工程改造的过程得到的蛋白质或抗体。术语"遗传工 程改造"是指用于产生W升高水平或降低水平表达基因或表达所述基因的突变形式的细胞 的重组DNA或RNA方法。换句话说，细胞已用重组多核巧酸分子转染、转化或转导，并且由 此被改变W导致细胞改变所需多肤的表达。
[0072] 可溶性分泌蛋白质和在细胞表面上表达的蛋白质常包含N末端"信号序列"，其为 在真核细胞中介导蛋白质插入穿过限界内质网巧时的膜的疏水性序列。I型跨膜蛋白质也 包含信号序列。如本文所指的"信号序列"是氨基末端疏水性序列，其通常在蛋白质的部分 或全部穿过ER膜进入ER腔中之后被酶促移除。因此，本领域中已知的是，信号序列可作为 分泌或跨膜蛋白的前体形式的一部分存在，但在蛋白质的成熟形式中通常将不存在。当称 蛋白质包含信号序列时，应了解，尽管蛋白质的前体形式的确含有信号序列，但是蛋白质的 成熟形式将可能不含有信号序列。信号序列含有邻近于裂解位点，并且恰好在裂解位点上 游（-1位置）的一个残基和在-3位置处的另一个残基，所述残基对此酶促裂解来说是重要 的。Nielsen等（1997)'ProteinE；ng. 10(1) ; 1-6;vonHeijne(1983)，Elur.J.Biochem. 133 ; 17-21;vonHeUne(1985)，J.Mol.Biol. 184 ;99-105,所述文献的描述信号序列和如何鉴定 它们的部分W引用的方式并入本文。可如由Nielsen等（同上）所述鉴定信号序列。在哺 乳动物宿主细胞中具有功能的信号肤或信号序列的实例包括W下：美国专利4, 965, 195中 所述的白细胞介素-7 (比-7)的信号序列；Cosman等（（1984)，化化re312 ;768)中所述的 白细胞介素-2受体的信号序列；EP专利0 367 566中所述的白细胞介素-4受体信号肤； 美国专利4, 968, 607中所述的I型白细胞介素-1受体信号序列；EP专利0 460846中所述 的II型白细胞介素-1受体信号肤；人IgK的信号序列（其为METD化LLW化LLWVPGSTG;SEQ IDN0;3) 及人生长激素的信号序列（MATGSRT化LLAFGUXLPWL犯GSA;SEQIDN0;4)。该 些参考文献的相关部分W引用的方式并入本文。许多其它信号序列在本领域中是已知的。
[0073] 如本文所指的"免疫球蛋白样"（Ig样）结构域主要通过其=级结构来区分。参 见例如Bork等（1994)，J.Mol.Biol. 242 ;309-20;Hunkapiller和Hood(1989)，Adv. Immunol. 44 ;1-63;Williams和Barclay(1988)，Ann.Rev.Immunol. 6 ;381-405。然而，可变 和恒定免疫球蛋白样结构域在其一级氨基酸序列内的确含有存在于保守位置处的少数高 度保守的氨基酸。参见例如K油at等（1991)，SequencesofProteinsofImmunological Interest，U.S.Dept,ofHealthandHumanServices，PublicHealthService，National InstitutesofHealth,NIH出版号91-3242。可变区W及ChI和Ch2恒定区中的所述保守 氨基酸详细论述于例如Ha巧az和Chothia(1994)，J.Mol.Biol. 238 ;528-39W及Williams 和Barclay(1988)，Ann.Rev.Immunol. 6 ;381-405中。该些参考文献的论述所述保守残基的 部分W引用的方式并入本文。W适当间隔出现的所述高度保守氨基酸或其保守性变体的存 在可指示IgC样或IgV样结构域的存在。
[0074] 可通过使用计算机程序GAP,即遗传学计算机组佑CG;Madison，WI)威斯康星 (Wisconsin)程序包 10. 0版程