专利名称：参与神经干细胞分化的基因鉴定及应用的制作方法
技术领域：
本发明属于再生医学领域，涉及神经干细胞分化的基因和遗传工程，以及利用这些基因及其产物作为干细胞分化的调控靶标。
背景技术：
人类基因组测序已全部完成，探究浩如烟海的基因的功能是目前生物医学面临的重大挑战。这些基因功能的鉴定对于揭示包括神经干细胞分化机理在内的生命过程具有理论意义，更重要的是对神经退行性疾病的治疗具有临床意义。神经干细胞是指具有分化为神经元、星形胶质细胞、少突胶质细胞的能力，并能进行自我更新、足以提供脑组织细胞的可再生细胞。在哺乳动物中枢神经系统发育，保持中枢神经系统的功能具有重要作用。神经干细胞分化是一个极为复杂的过程。影响神经干细胞分化的因子很多，如CNTF(睫状神经营养因子)能促进神经干细胞分化为胶质细胞，而BDNF (脑源性神经营养因子)则促进干细胞分化为神经元。对参与神经干细胞分化的基因的研究，为进一步探讨神经元的发生、分化和多种神经疾病的诊治提供了新机会。神经干细胞的分化受控于相关基因的表达，从全基因组层面研究神经干细胞分化特异基因表达的调控有助于形成对神经干细胞发育、分化的整体认识，进而加深对这一过程的分子机制的理解。
发明内容
本发明的目的在于提供参与神经干细胞分化过程的基因。本发明的另一个目的是提供检测这些基因表达调控的方法，包括检测基因是否表达和相对表达水平，并提供以这些基因及其编码产物为靶标， 调控神经干细胞分化的方法。本发明包括下列步骤寻找神经干细胞分化过程中差异表达的基因；研究这些基因所在的特定信号传导途径；异源表达这些基因；将这些基因及其产物作为靶标，控制神经干细胞的分化。具体包括以下方案1.神经干细胞的分离和培养从孕鼠(14天)纹状体分离神经干细胞，置于培养液中。[DMEM/F12 (I 1,V V),谷氨酰胺(2mmol/L)，青霉素(100U/mL)，B27(2% )]，细胞种植浓度为 lX106/mL，37°C，5%CO2培养。2. RNA 分离用SK311 Trizol RNA isolation kit 分离细胞—Trizol ImL —氯仿 200uL —振荡30s — 4°C，12000g离心5分钟一加入等体积异丙醇一70%乙醇洗二次，干燥一O.1 %DEPC水，3倍体积无水乙醇，-70°C保存。3.微矩阵分析总RNA — cDNA —与人类基因(14000)杂交分析。图像分析软件ArrayGuage software ；
基因功能分析PubMed(NCBI),Drosophila BanR04.新功能基因的克隆将获得的差异表达基因克隆至T-vector及表达载体。通过与人类14000个基因杂交分析，共有1406个基因差异表达，148个基因呈现2倍以上差异，60个基因呈现3倍以上差异，新功能序列46个。
具体实施例方式实施例1神经干细胞的分离和培养从孕鼠(14天)纹状体分离神经干细胞，置于培养液中。[DMEM/F12 (I 1,V V),谷氨酰胺(2mmol/L)，青霉素(100U/mL)，B27(2% )]，细胞种植浓度为 3X106/mL, 37°C, 5%CO2培养。RNA 分离用SK311 Trizol RNA isolation kit 分离细胞一Trizol ImL —氯仿 200uL —振荡30s — 4°C，12000g离心5分钟一加入等体积异丙醇一70%乙醇洗二次，干燥一0.1 %DEPC水，3倍体积无水乙醇，_70°C保存。微矩阵分析a)总RNA — cDNA —与人类基因(14000)杂交分析。b)图像分析软件Array Guage software ；c)基因功能分析PubMed(NCBI), Drosophila BanR0部分差异表达的基因列表
权利要求
1.一组与神经干细胞分化有关的基因，包括SEQ ID :1(AL046825)、2(J02966)、3(BF258548)、4(U79291)、5(D23660)、6(NM001660)、7 (AWO14022)、8 (AB032951)、9 (AI698743)、10(AF037439)、11(S78187)。
2.含有序列SEQNo. 1-11中任何一个或几个核苷酸序列的表达载体。
3.含有权利要求2所述的表达载体的寄主细胞。
4.一种监测神经干细胞分化相关基因表达的方法，其特征是包括如下步骤提供样品，将权利要求1所述的多核苷酸与样品的核苷酸在高严紧度下杂交，形成一个或多个杂交复合物，检测杂交复合物的形成，阳性结果表示样品表达了多核苷酸。
全文摘要
本发明提供了参与神经干细胞分化的基因及其编码的多肽。本发明也提供了这些基因表达使用的载体、寄主细胞和相关抗体。本发明提供了与这些基因杂交的特异核酸探针。这些基因和相关分子可以作为神经干细胞分化的靶标和标记，进行干细胞定向分化的诱导和调控。
文档编号C12Q1/68GK103060328SQ20111032363
公开日2013年4月24日 申请日期2011年10月24日 优先权日2011年10月24日
发明者田杰 申请人:北京清美联创干细胞科技有限公司