专利名称：用于治疗神经障碍的非遗传修饰性重编程细胞的组合物和方法
用于治疗神经障碍的非遗传修饰性重编程细胞的组合物和方法优先权声明本申请要求对以下美国临时专利申请的优先权2010年2月4日提交的美国临时专利申请61/337，522、2010年7月I日提交的美国临时专利申请61/360，841，上述申请參考并入本文。
背景技术：
胚胎干细胞能够分化为多种类型的人体细胞。大部分体细胞是終末分化细胞，并被认为缺乏转变成其它类型体细胞的能力。诱导型多能干细胞(iPSC)和转分化领域近来的进展已经改变了这ー范式。体细胞可以被重编程为诱导型多能干细胞(iPSC)，gp，通过病毒转导使四种转录因子异位表达，即0ct4(例如SEQ ID NO :1)、Sox2(例如SEQID NO :2)、Klf4(SEQ ID NO 3)以及 cMyc (例如 SEQ ID NO 4) (Okita 等，Nature 448， 313-317(2007) ;Takahashi 和 Yamanaka，Cell 126，663-676 (2006))。进ー步发展了ー些改良的遗传方法来产生潜在风险更低的iPSC，包括采用非整合型腺病毒来传递重编程基因(Stadtfeld 等，Science 322,945-949 (2008)),瞬时转染重编程质粒(Okita 等,Science322、949-953(2008))，使用piggyBac转座子系统以及使用Cre-可切除的病毒等(Soldner等，Cell 136,964-977(2009) ;Woltjen 等，Nature 458，766-770 (2009))。此外，在某些细胞类型中利用内源性基因表达的策略也使得重编程更容易和/或需要的外源基因更少(Aasen 等，Nat Biotechnol 26，1276-1284 (2008) ;Kim 等，Nature 454，646-650 (2008);Shi等，Cell Stem Cell 2，525-528 (2008))。而且，还发现了能够增强重编程效率和替代某些重编程因子的小分子(Huangfu 等，Nat Biotechnol 26, 795-797 (2008) ;Huangfu 等，Nat Biotechnol 26，1269-1275 (2008) ;Li 等，Cell Stem Cell 4，16-19 (2009) ;Shi 等，Cell Stem Cell 3，568-574 (2008) ;Shi 等，Cell Stem Cell 2,525-528(2008))。然而，现有的所有这些方法仍然涉及使用遗传物质，其缺陷在于需要向目标细胞中通过外源序列引入未知的、不需要的，或者甚至有害的基因组修饰，而且对转基因的表达水平也没有足够的控制。为了解决这些缺点，本领域需要重编程细胞的方法，其不依赖于或不引入外源遗传物质，如外源基因或DNA片段或包含外源DNA或基因的载体等。发明概述本披露的一方面涉及包含效应结构域的转导物质。效应结构域一旦转导进入生物样品就能够使生物样品发生重编程改变。在某些实施方式中，效应结构域天然地能够转导进入生物样品中。在某些实施方式中，转导物质还包含共价或非共价结合或连接于效应结构域的转导结构域。在某些实施方式中，转导结构域通过接头共价连接于效应结构域。在某些实施方式中，转导物质能够选择性转导进入ー种或多种特定生物样品中，或者在生物样品周围特定环境中变得可转导。本披露的另一方面涉及包含生物样品和转导物质的组合物，其中转导物质已经转导进入生物材料。本披露的另一方面涉及通过将生物样品暴露于包含转导物质的组合物中而重编程生物样品的方法。本披露的另一方面涉及治疗生物体中疾病或状态的方法，包括将包含转导物质的药物组合物向生物体给药。本披露的另一方面涉及开发基于细胞的疗法的方法，所述疗法针对各种疾病或状态，所述方法包括用转导物质将iPSC、胚胎干细胞或祖细胞重编程为可移植体细胞或可移植祖细胞的步骤。
本披露的另一方面涉及开发疾病模型的方法，包括用转导物质将iPSC、胚胎干细胞或祖细胞重编程为可移植体细胞或可移植祖细胞的步骤。本披露的另一方面涉及识别效应结构域的方法，包括将测试效应结构域共价或非共价结合于转导结构域以形成测试转导分子，将测试分子暴露于生物样品以及測定生物样品的重编程水平。附图简要说明图I :转导物质的鉴定(I)。(A)转导物质0ct4-llR(SEQ ID NO :12)、Sox2_llR(SEQID NO :13)、Klf4-1 IR(SEQ ID NO :14)以及 cMyc_llR(SEQ ID NO : 15)、接头SEQ ID NO :55 ;效应结构域0ct4(SEQ ID NO :1)、Sox2(SEQ ID NO :2)、Klf4(SEQ ID NO :3)或cMyc(SEQ IDNO 4)的蛋白表达载体的示意图。(B)Western印迹分析测定的四种转导物质(0ct4_llR、Sox2-llR、Klf4-llR和cMyc-llR)在细胞培养条件下的稳定性。图2:转导物质的鉴定(II)。通过免疫细胞化学检测IlR标记的转导物质进入0G2-MEF细胞的蛋白转导。0ct4 :0ct4-llR转导的MEF细胞(绿色)，Sox2 :Sox2_llR转导的MEF细胞(红色)，Klf4 :Klf4-llR转导的MEF细胞(红色)WlcMyc :cMyc_llR转导的MEF细胞(绿色)。DAPI :用DAPI对细胞染色以显示细胞核(蓝色)，再将图像合井。图3 :转导物质的鉴定(III)。蛋白诱导的多能干细胞(PiPS)在化学确定的培养基和无滋养条件下克隆増殖和自我更新。图4 :通过转导物质 0ct4_llR、Sox2_llR、Klf4_llR 和 cMyc-llR 产生 piPS 细胞。(A)piPS细胞产生的时间线。(B)第30-35天左右初始观察的0ct4-GFP+piPS细胞集落。相代表性的相差图；GFP :荧光图。(C)0ct4-GFP+piPS细胞在常规mESC生长条件下维持长期自我更新。(D)长期扩增的PiPS细胞以紧密且凸起的集落生长，強烈表达典型的多能标记ALP。(E)免疫荧光检测到piPS细胞表达其它典型的多能标记=SEA-I (红色)、Sox2 (红色)、0ct4(红色)以及Nanog(红色)。DAPI :DAPI染色以显示细胞核(蓝色)，将图合并。(F)RT-PCR分析piPS细胞中内源性多能基因表达。(G)用亚硫酸氢盐基因组测序法分析0ct4启动子的甲基化。空心圆和实心圆分别表示未甲基化和甲基化的CpG。图5 piPS细胞在体外和体内的多能性(I)。piPS细胞在体外有效地分化为三胚层的细胞Tujl :特征性的TUJI+神经元细胞-外胚层(红色)；Bryt :Brachyury+中胚层细胞(红色)；以及Soxl7 :Soxl7+确定的内胚层细胞。将图与DAPI (蓝色)染色图合井。图6 piPS细胞在体外和体内的多能性(II)。(A) RT-PCR分析piPS细胞的体外分化。(B)将PiPS细胞聚集的胚胎转移至假孕小鼠(上图)后获得嵌合胚胎(13.5dpc，7只中有2只，左图)。在嵌合胚胎中分离的生殖嵴组织中，这种PiPS细胞形成了生殖细胞(0ct4-GFP 阳性)(下图)。图7 :转导物质的蛋白表达载体的示意图。His6:SEQ ID NO :59 ;效应结构域Ngn3(SEQ ID NO :8)、PDXl(SEQ ID NO 9) ；MafA(SEQ ID NO :10)或 Foxp3(SEQ IDNO :11)；接头SEQ ID NO :55。图8 :在小鼠中通过转导物质His6-Ngn3-11R(SEQ ID NO :30)、His6_PDXl_llR(SEQID NO 31)和His6-MafA-llR(SEQ ID NO :32)将肝脏和胰腺外分泌细胞重编程为产生胰岛素的P细胞(I)。小鼠-1、小鼠-2和小鼠-3用牛血清白蛋白(BSA)处理(对照组)。小鼠 _4、小鼠-5 和小鼠-6 用 His6-Ngn3-llR、His6-PDXl-llR 和 His6_MafA_llR 处理(处理组)。A)小鼠-I肝脏的免疫荧光分析(IFA) ；B)小鼠-2肝脏的IFA分析；以及C)小鼠-3肝脏的IFA分析。
图9 :在小鼠中通过转导物质 His6-Ngn3-11R、His6_PDXl_llR 和 His6_MafA_llR将肝脏和胰腺外分泌细胞重编程为产生胰岛素的P细胞(II)。小鼠-1、小鼠-2和小鼠-3用牛血清白蛋白(BSA)处理(对照组)。小鼠-4、小鼠-5和小鼠-6用His6-Ngn3-11R、His6-PDX1-11R和His6-MafA-llR处理(处理组)。A)小鼠-4肝脏的IFA分析(I) ；B)小鼠_4肝脏的IFA分析⑵；C)小鼠-5肝脏的IFA分析⑴；D)小鼠-5肝脏的IFA分析(2) ；E)小鼠-6肝脏的IFA分析(I) ；F)小鼠-6肝脏的IFA分析(2)。
图10 :在小鼠中通过转导物质 His6-Ngn3-llR、His6-PDXl-llR 和 His6-MafA-llR将肝脏和胰腺外分泌细胞重编程为产生胰岛素的P细胞(III)。小鼠-1、小鼠-2和小鼠-3用牛血清白蛋白(BSA)处理(对照组)。小鼠-4、小鼠-5和小鼠-6用His6-Ngn3-11R、His6-PDX1-11R和His6-MafA-llR处理(处理组)。A)小鼠-I胰腺的IFA分析；B)小鼠-2胰腺的IFA分析⑴；C)小鼠-2胰腺的IFA分析⑵；以及D)小鼠-3胰腺的IFA分析。图11 :在小鼠中通过转导物质 His6-Ngn3-llR、His6-PDXl-llR 和 His6-MafA-llR将肝脏和胰腺外分泌细胞重编程为产生胰岛素的P细胞(IV)。小鼠-1、小鼠-2和小鼠-3用牛血清白蛋白(BSA)处理(对照组)。小鼠-4、小鼠-5和小鼠-6用His6-Ngn3-11R、His6-PDX1-11R和His6-MafA-llR处理(处理组)。A)小鼠-4胰腺的IFA分析(I) ；B)小鼠_4胰腺的IFA分析⑵；C)小鼠-5胰腺的IFA分析⑴；D)小鼠-5胰腺的IFA分析
(2)；以及E)小鼠-6胰腺的IFA分析。图12 :通过转导物质His6-Foxp3_llR(SEQ ID NO :33)将T细胞重编程为Treg细胞(IA)。缺少CD14单核细胞的PBMC中CD4和CD25蛋白表达的流式细胞计数分析同型对照、PBS对照、样品缓冲液对照以及蛋白(BSA 100iig/ml)对照。图13 :通过转导物质His6-Foxp3_llR将T细胞重编程为Treg细胞(IB)。缺少⑶14单核细胞的PBMC中⑶4和⑶25蛋白表达的流式细胞计数分析，所述PBMC用10 y g/ml>20 u g/ml 或 50 u g/ml Hisl6-Foxp3_llR 处理。图14 :通过转导物质His6-Foxp3_llR将T细胞重编程为Treg细胞(IIA)。PBMC中CD4和CD25蛋白表达的流式细胞计数分析同型对照和PBS对照。图15 :通过转导物质His6-Foxp3_llR将T细胞重编程为Treg细胞(IIB)。PBMC中⑶4和⑶25蛋白表达的流式细胞计数分析样品缓冲液对照以及蛋白(BSA 100 u g/ml)对照。图16 :通过转导物质His6-Foxp3_llR将T细胞重编程为Treg细胞(IIC)。PBMC中⑶4和⑶25蛋白表达的流式细胞计数分析，所述PBMC用10 y g/ml或50 y g/mlHisl6-Foxp3-llR 处理。图17 :通过转导物质His6-Foxp3-llR将T细胞重编程为Treg细胞(IID)。PBMC中⑶4和⑶25蛋白表达的流式细胞计数分析，所述PBMC用100 u g/ml Hisl6-Foxp3_llR处理。图18 :通过转导物质将星型胶质细胞重编程为神经细胞，所述转导物质为His-Dlx2-llR(b)、His-Ngn2_llR(c)、His_Dlx2_llR 和 His-Ngn2_llR(d)以及作为对照的缓冲液(a)。用Tujl抗体(緑色，与神经细胞标记物结合)对染色的转导细胞进行IFA分祈。图像与DAPI (蓝色)染色的图片合井。图19 :示例性效应结构域的序列。图20 :示例性转导物质效应结构域-IlR的序列。 图21 :示例性转导物质His6_效应结构域-IlR的序列。发明详述本披露的一方面涉及包含效应结构域的转导物质。在某些实施方式中，本披露所用的转导物质是指非DNA或非来源于DNA的物质或分子，其能够穿过或转导或被穿过生物样品的膜(例如，细胞膜)，以至于转导物质可以从生物样品的外部进入或被带入生物样品的内部，并发挥重编程功能。例如，转导物质可以与细胞表面受体相互作用，通过受体介导的内吞作用促进物质进入细胞。在某些实施方式中，转导物质是选择性转导物质，相比于其它生物样品，其更容易转导进入特定类型的生物样品(例如，癌或肿瘤细胞)或在生物样品中或周围的特定微环境(例如，癌或肿瘤周围的微环境)中变得可转导。例如，选择性转导物质包含将选择性转导物质优先递送进入特定类型生物样品的转导结构域，或在生物样品周围微环境中变得可转导的转导结构域(例如，细胞靶向性肽或激活的细胞穿膜肽)。不限定于任何理论，预期转导物质可以穿过细胞膜，进入细胞质对诸如翻译、翻译后修饰、信号通路、凋亡通路等细胞质中的活动进行重编程。进ー步预期，转导物质可以穿过核膜，对DNA或染色体复制、基因转录以及RNA剪接进行重编程或调节。效应结构域是一旦在生物样品内部就能够使生物样品发生重编程改变的基序或分子。效应结构域可以与生物样品中(如在细胞质中或细胞核中)的分子(例如，蛋白、DNA、RNA、糖以及脂质)相互作用，导致如増殖、分化、去分化、转分化、反分化、转决定、凋亡以及形态发生等改变。效应结构域可以是1)多肽，或其片段或模拟物；2)多核苷酸，它不是一旦转导或包含进生物样品的基因组就进行表达的基因，也不会导致遗传修饰，但是却能够与生物样品中的分子相互作用(例如，核酶、反义分子、siRNA或miRNA、寡核苷酸等等)；以及3)小分子或其它化学化合物(例如，化学治疗药物)。在某些实施方式中，效应结构域是天然可转导的，例如roxi (例如SEQ ID NO 9)以及 NeuroD (例如 SEQ ID NO :7)。效应结构域的一个例子是多肽，如转录因子、染色体重塑蛋白、抗体、或其片段或模拟物。效应结构域的另ー个例子是小分子，它不是聚合物，且能够与如蛋白、核酸或多糖等生物聚合物结合，并且改变生物聚合物的活性或功能。小分子的例子包括，但不限干，乙酰化抑制剂、转录活化剂、信号通路活化剂、信号通路抑制剂以及甲基化抑制剂。
在另ー个实施方式中，效应结构域可以是至少ー种多肽，其将体细胞重编程为干细胞或将细胞状态由ー种变为另ー种。例如，效应结构域可以是1)选自下组的多肽Klf4(例如 SEQ ID NO :3)、Sox2(例如 SEQ ID NO :2)、Lin28 (例如 SEQ ID N0:5)、0ct4(例如 SEQ ID NO :1)、cMyc (例如 SEQ ID NO 4)、Nanog (例如 SEQ ID NO 6)以及其任意组合；2)选自下组的多肽Klf4、Sox2、0ct4、cMyc及其任意组合；3)选自下组的多肽Sox2、0ct4、Lin28、Nanog及其任意组合；4)选自下组的多肽:Ngn3(例如SEQ ID NO :8)、PDX1(例如 SEQ ID NO 9)、MafA(例如 SEQ ID NO 10)、NeuroD(例如 SEQ ID NO 7)及其任意组合；5)包含 Foxp3(例如 SEQ ID NO 11)的多肽；6)选自下组的多肽0ct4、Sox2、Klf4、Lin28、Nanog'cMyc'Ngr^JDXl'MafA'NeuroD'FoxpS 及其任意组合；7)多妝 0ct4、Sox2、Klf4 以及cMyc的组合；8)多肽Ngn3、H)Xl以及MafA的组合；9)选自下组的多肽pax6、ASCLl、Brn2、MYT1L、Neurodl、Neurod6> Prdm8> Npas4、Mef2c> D lxl、Tbrl> ISLl、Foxpl、Foxp2、Nhlh2、50叉2、81114、拖81、抱85、し1 2、011§02、呢112(例如5￡0 ID NO :67)、Dlx2 (例如SEQ ID NO:68)、Zicl、NAP1L2、Nrip3> Satb2、Chd5、Smarcal、Brm(Smarca2)、Brgl (Smarca4)及其任意组合(示例性的序列如表I所示)；10)选自下组的多肽NeUrod6、Satb2、ZiCl及其任意组合；以及11)选自下组的多肽Dlx2、Ngn2及其组合。表I效应结构域的示例性序列
权利要求
1.一种包含效应结构域的转导物质，其中所述效应结构域为多肽、小分子或多核苷酸，并且其中所述多妝选自pax6、ASCLl、Brn2、MYTlL、Neurodl、Neurod6、Prdm8、Npas4、Mef2c、Dlxl> Tbrl> ISL1、Foxpl、Foxp2、Nhlh2、Sox2、Brn4、Hesl、Hes5、Lhx2、01igo2、Ngn2、Dlx2、Zicl> NAP1L2、Nrip3、Satb2、Chd5、Smarcal> Brm> Brgl、其同源序列和其任意组合。
2.如权利要求I所述的转导物质进一步包含蛋白，所述蛋白选自0ct4、Klf4、Lin28、Nanog、cMyc、Ngn3、PDXU MafA> NeuroD> Foxp3、其同源序列和其任意组合。
3.如权利要求I所述的转导物质，其中所述同源序列指的是与所述蛋白中至少一个的序列至少70%相同的氨基酸序列。
4.如权利要求3所述的转导物质，其中所述同源序列与所述蛋白中至少一个具有基本相同的活性。
5.如权利要求I所述的转导物质进一步包含转导结构域。
6.如权利要求5所述的转导物质，其中所述转导结构域与效应结构域共价、非共价或通过接头相连接。
7.如权利要求I所述的转导物质，其中所述效应结构域是天然可转导的。
8.如权利要求I所述的转导物质，其中所述效应结构域选自Ngn2、Dlx2、其同源序列和其任意组合。
9.如权利要求8所述的转导物质，其中所述效应结构域具有氨基酸序列，所述氨基酸序列选自SEQ ID NO 67, SEQ ID NO :68、其同源序列和其组合。
10.如权利要求5所述的转导物质，其中所述转导结构域选自蛋白转导结构域、细胞穿膜肽、细胞渗透肽、激活的细胞穿膜肽、细胞靶向性肽以及聚合物。
11.如权利要求10所述的转导物质，其中所述蛋白转导结构域选自TAT、聚精氨酸、穿膜肽、突触足穿膜肽、VP22、转运肽、MAP、MTS、PEP-1、精氨酸/色氨酸类似物、RRWRRWWRRffffRRW、聚胍类肽、聚胍类肽、天然蛋白转导结构域、SEQ ID NO : 56、SEQ ID NO:57、HIV-I Rev、兽棚病毒衣壳肽、DNA结合肽、c-Fos、c_Jun、酵母GCN4以及融合HA2肽。
12.如权利要求10所述的转导物质，其中所述细胞靶向性肽是具有选自下列氨基酸序列的多肽NGR、RGD、SEQ ID NO 45, SEQ ID NO 46, SEQ ID NO 47, SEQ ID NO 48, SEQ IDNO 49,SEQ ID NO :50、SEQ ID NO :51、SEQ ID NO :52、SEQ ID NO :53、SEQ ID NO :54 和 SEQID NO 58o
13.如权利要求10所述的转导物质，其中所述聚合物选自阳离子脂类聚合物和纳米粒。
14.如权利要求I所述的转导物质，其中所述转导物质能够选择性地转导进入一种或多种特定生物样品中，或者能够在所述生物样品周围特定环境中变得可转导。
15.如权利要求6所述的转导物质，其中所述接头具有SEQID 55所示的氨基酸序列。
16.如权利要求15所述的转导物质，其中所述蛋白转导结构域是聚精氨酸。
17.如权利要求16所述的转导物质，其中所述转导物质包含多肽，所述多肽含有选自SEQ ID NO 69, SEQ ID NO :70、其同源序列和其任意组合多肽的氨基酸序列。
18.如权利要求5所述的转导物质进一步包含一个或多个基序，所述基序不妨碍所述效应结构域或所述转导结构域的功能。
19.如权利要求18所述的转导物质，其中所述基序共价连接于所述效应结构域或所述转导结构域。
20.如权利要求19所述的转导物质，其中所述基序具有SEQID :59所示的氨基酸序列。
21.如权利要求20所述的转导物质，其中所述转导物质包含多肽，所述多肽含有选自SEQ ID NO 7U SEQ ID NO :72、其同源序列及其组合的氨基酸序列。
22.—种重编程生物样品的方法，包括将所述生物样品暴露于至少一种如权利要求I所述的转导物质中。
23.如权利要求22所述的方法，其中所述生物材料来源于生物体的细胞、组织或器官。
24.如权利要求23所述的方法，其中所述生物体是微生物、植物或动物。
25.如权利要求22所述的方法，其中所述生物样品被重编程，以引起增殖、分化、转分化、反分化、转决定、去分化、凋亡或形态发生。
26.如权利要求23所述的方法，其中所述细胞被重编程，从第一种类型的细胞改变为第二种类型的细胞。
27.如权利要求26所述的方法，其中所述第一种类型的细胞是神经胶质细胞，所述第二种类型的细胞是神经细胞。
28.如权利要求27所述的方法，其中所述第一种类型的细胞是星型胶质细胞，并且所述第二种类型的细胞是神经细胞。
29.如权利要求27所述的方法，其中所述转导物质包含多肽，所述多肽选自pax6-llR、ASCLl-I IR、Brn2_llR、MYT1L-11R、Neurodl-llR、Neurod6_llR、Prdm8_llR、Npas4-llR、Mef2c-llR、Dlxl-llR、Tbrl-llR、ISLl-llR、Foxpl-llR、Foxp2-llR、Nhlh2-llR、Sox2-llR、Brn4-11R、Hesl-llR、Hes5_llR、Lhx2_llR、01igo2_llR、Ngn2_llR、Dlx2_llR、Zicl-llR、NAP1L2-11R、Nrip3_llR、Satb2_llR、Chd5_llR、Smarcal-llR、Brm-IlR 和Brgl-IlRo
30.一种包含权利要求I所述的转导物质的药物组合物。
31.如权利要求30所述的药物组合物进一步包含表观遗传试剂。
32.如权利要求31所述的药物组合物，其中所述表观遗传试剂包括曲古抑菌素A、丙戊酸或氮杂-2’ -脱氧胞苷。
33.一种包含生物样品和权利要求I所述转导物质的组合物，其中所述转导物质已经转导进入所述生物样品。
34.一种将权利要求I所述的转导物质用于制备药物的用途，所述药物用于治疗生物体的神经障碍。
35.如权利要求34所述的用途，其中所述神经障碍选自缺血性和出血性中风、脊髓损伤、脑损伤、亨廷顿病、阿尔茨海默症、帕金森病、精神分裂症、自闭症、共济失调、肌萎缩性脊髓侧索硬化症、葛雷克氏症、莱姆病、脑膜炎、偏头痛、运动神经元病、神经病变、疼痛、脑损伤、脑功能障碍、脊髓损伤、外围神经系统紊乱、颅神经紊乱、自主神经系统疾病、痉挛疾病例如癫痫、运动障碍疾病例如帕金森病、睡眠障碍、头痛、下背部和颈部疼痛、神经病理性疼痛、谵妄与失智症例如阿尔茨海默症、头晕和眩晕、木僵和昏迷、颅脑外伤、中风、神经系统肿瘤、多发性硬化症和其他脱髓鞘疾病、脑部或脊髓感染和朊蛋白类疾病。
36.一种治疗生物体的疾病或状态的方法，包括从所述生物体中取出生物样品；将所述生物样品暴露于如权利要求I所述的转导物质；并将所述转导物质转导过的所述生物样品移植回所述生物体。
37.一种开发基于细胞的疗法的方法，所述疗法针对各种疾病或状态，所述方法包括 通过将iPSC、胚胎干细胞或祖细胞暴露于至少一种如权利要求I所述的转导物质中而使所述iPSC、所述胚胎干细胞或所述祖细胞重编程为可移植的体细胞或可移植的祖细胞； 将所述可移植的体细胞或祖细胞移植进生物样品或生物体中；以及 评估所述可移植的体细胞或祖细胞的治疗效果。
38.一种开发疾病模型的方法,包括 将iPSC、胚胎干细胞或祖细胞暴露于至少一种如权利要求I所述的转导物质中而使之重编程为可移植的体细胞或可移植的祖细胞； 将所述可移植的体细胞或祖细胞移植进生物样品或生物体中；开发具有所述可移植的 体细胞或祖细胞的疾病模型。
39.一种开发药物筛选或毒性模型的方法,包括 通过暴露于至少一种权利要求I所述的转导物质而使体细胞、祖细胞或多潜能细胞重编程为iPSC ； 通过或不通过暴露于所述转导物质而从iPSC产生衍生细胞；并且用所述iPSC和/或所述iPSC衍生的细胞来筛选不同化合物的效果和/或毒性。
全文摘要
本发明涉及重编程其他细胞(比如神经胶质细胞)成为神经细胞的组合物和方法，所述重编程不引入外源基因。本发明尤其涉及能够转导进入生物样品的转导物质，所述转导物质不是基因、也不会导致遗传修饰。本发明还涉及用转导组合物重编程生物样品的通路或治疗疾病的方法。
文档编号C12N5/10GK102753690SQ201180008446
公开日2012年10月24日 申请日期2011年2月1日 优先权日2010年2月4日
发明者包骏, 吴时丽, 朱勇 申请人:帷幄生物技术公司