牛胆盐及制备方法和制备的牛胆盐在干粉细菌培养基生产中的应用的制作方法
【专利摘要】本发明公开了一种可用于干粉细菌培养基原料的牛胆盐及制备方法和制备的牛胆盐在干粉细菌培养基生产中的应用，生产的牛胆盐胆酸含量＞55﹪，干燥失重＜5﹪，灰分＜19﹪，酸价＜145，对大肠菌有较强的抑制作用，菌落＜2㎜，对沙门氏菌和痢疾志贺氏菌无抑制作用，菌落＞1.5㎜；其制备方法包括皂化、氧化、酸化、脱脂、洗涤、钡化、去钡离子、活性炭脱色步骤，工艺成熟可行，在脱脂处理过程中，增加钡化步骤，进一步去掉了产品中的脂类物质，同时，产品中加入10﹪～15﹪的阴离子表面活性剂，使得在用于干粉细菌培养基原料时，溶液不混浊；121℃高压15分钟后不混浊，隔夜放置后，溶液澄清明亮，无上浮物出现。
【专利说明】牛胆盐及制备方法和制备的牛胆盐在干粉细菌培养基生产 中的应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种牛胆盐的制备方法，具体地说是一种从牛胆膏（汁）中制备牛胆盐 及制备方法，特别是涉及一种可用于干粉细菌培养基原料的牛胆盐及制备方法和制备的牛 胆盐在干粉细菌培养基生产中的应用。
【背景技术】
[0002] 干粉细菌培养基在药品、食品、水质、化妆品、进出口商品和医学临床中用于检测 细菌。牛胆盐是干粉细菌培养基中一种必需和十分重要的原料。随着干粉细菌培养基应用 量的不断增加，对牛胆盐的需求也在不断增加。但是，我国牛胆盐产品质量一直没有过关， 目前，只能从英、美等国进口。
[0003] 中国农业出版社1995出版，陈天寿主编的《微生物培养基的制造与应用》(P120? 124页）介绍了多种胆盐的生产方法。
[0004] 如方法一：牛胆汁干燥成块一乙醇溶解胆块一过滤去杂质一上清液分馏回收乙醇 -剩下的膏状物用乙醚去脂一回收乙醚后干燥产品一粉碎一成品。
[0005] 如方法二：牛胆膏(汁）一加碱水解一脱脂一酸化一洗涤烘干一溶解一脱色一过滤 -成盐一蒸馏去乙醇一烘干一粉碎一成品。等等。
[0006] 以上方法存在工艺时间长，且脱脂处理不彻底，生产的牛胆盐在用于生产干粉细 菌培养基时，出现加入2 %的蛋白胨煮沸时溶液不澄明清亮，特别是在121°C高压15分钟后 溶液混浊，甚至有上浮物出现。
【发明内容】
[0007] 本发明的目的是提供一种可用于干粉细菌培养基原料的牛胆盐及制备方法和制 备的牛胆盐在干粉细菌培养基生产中的应用。
[0008] 本发明是采用如下技术方案实现其发明目的的， 一种牛胆盐，外观为白色或淡黄色粉末，胆酸含量> 55 %，干燥失重< 5 %，灰分< 19 %，酸价< 145 ;对大肠菌有较强的抑制作用，菌落< 2 mm，对沙门氏菌和痢疾志贺氏菌无抑 制作用，菌落> 1.5醒。
[0009] 一种上述牛胆盐的制备方法，它包括下列步骤： ⑴皂化：以重量计，按1 :4. 0?5.0 :0. 5?0.6比例取牛胆膏、水和含量> 96 %的氢 氧化钠加入反应釜中皂化，反应温度l〇5°C?110°C，反应时间20小时?24小时； 为避免加入的氢氧化钠的量太多，浓度太高时，破坏牛胆膏中的胆酸，本发明在步骤⑴ 中，首先加入65 %?75 %的氢氧化钠，氢氧化钠先溶于水中成为氢氧化钠溶液；其余的氢 氧化钠另外溶于水中，皂化时分批加入，以补充皂化反应时消耗的碱和保持溶液的总体积， 直至使牛胆膏彻底皂化。
[0010] ⑵氧化：待皂化液冷却至室温，调pH值8. 0?8. 5,往反应釜中加入浓度为8 %? 10 %的双氧水，直至使皂化液的颜色由棕黑色变成棕黄色； ⑶酸化：往反应釜中加入浓度为18 %?22 %的硫酸或盐酸，边加边搅，直至pH值 2. 5?3. 0 ;煮沸，使溶液表面浮出颗粒状粗酸； ⑷脱脂：待溶液冷却至室温，取出颗粒状粗酸离心甩干后，移入反应釜中，加入颗粒状 粗酸重量1. 2倍?1. 5倍的溶剂脱脂剂，加热到20°C?35°C，搅拌15分钟?20分钟，放出， 再离心甩干； 为尽量去除颗粒状粗酸中的脂类物质，本发明所述步骤⑷重复1?3次。
[0011] 本发明在步骤⑷中，所述溶剂脱脂剂为6号溶剂油或乙醚或120号溶剂油。
[0012] (5)洗涤：对步骤⑷脱脂后的颗粒状粗酸用浓度为95 %的酒精在40°C搅拌洗涤，取 出尚心甩干； (6)钡化：以重量计，按1 :0. 18?0. 2 :5?6比例取洗涤后的颗粒状粗酸、氯化钡和浓 度为75 %的酒精加入反应釜中，所述氯化钡先溶于2倍?3倍的水中；加氢氧化钠溶液，调 pH值为7.8,加温80°C?90°C，回流4小时，放出冷却沉淀，取上清液在反应釜中分馏； ⑴去钡离子：首先，按步骤(6)分馏后的固体物重加4倍?5倍水，加碳酸钠调pH值 13?14,煮沸2小时?4小时，分离去沉淀，取上清液；然后，对上清液加入硫酸调pH值 7. 2?7. 4,蒸发水分至粘稠状； ⑶活性炭脱色：首先，按步骤(7)所得粘稠状物重加5倍?6倍量浓度为95 %的酒精， 加温至全部溶解，冷却，过滤，取液体在反应釜中分馏；然后，以重量计，按1 :〇. 05?0. 06 : 5?6比例取分馏后的固体物、活性炭和浓度为75 %?80 %的酒精，不加温搅拌褪色1小 时?2小时，放出沉淀，过滤去活性炭；最后，取液体在反应荃中分馈，回收酒精，剩余固体 物干燥、粉碎得牛胆盐； 为尽量析出粘稠状物中已溶于浓度为95 %的酒精中的无机盐(硫酸钠)，本发明在步骤 ⑶中，所述冷却为将溶液置于0°C?4°C下冷藏5小时?6小时。
[0013] 制备的牛胆盐外观为白色或淡黄色粉末，胆酸含量> 55 %，干燥失重< 5 %，灰分 < 19 %，酸价< 145 ;对大肠菌有较强的抑制作用，菌落< 2 mm，对沙门氏菌和痢疾志贺氏 菌无抑制作用，菌落> 1. 5 mm。
[0014] 一种如上所述牛胆盐在干粉细菌培养基生产中的应用，在牛胆盐用于干粉细菌培 养基原料时，以重量计，加入牛胆盐重10 %?15 %的阴离子表面活性剂。
[0015] 本发明所述阴离子表面活性剂优选为十二烷基硫酸钠。
[0016] 一种牛胆盐，牛胆盐中加入牛胆盐重10 %?15 %的阴离子表面活性剂，所述阴离 子表面活性剂优选为十二烷基硫酸钠；外观为白色或淡黄色粉末，胆酸含量> 55 %，干燥 失重< 5 %，灰分< 19 %，酸价< 145 ;对大肠菌有较强的抑制作用，菌落< 2 mm，对沙门氏 菌和痢疾志贺氏菌无抑制作用，菌落> 1. 5 mm ;在1〇〇毫升水中，加入1克牛胆盐，牛胆盐全 部溶解于水中，澄清，无沉淀，pH值7. 5?9. 0 ;在100毫升水中，加入0. 5克牛胆盐，2克蛋 白胨煮沸时，溶液不混浊；121°C高压15分钟后不混浊，隔夜放置后，溶液澄清明亮，无上浮 物出现。
[0017] 一种上述牛胆盐的制备方法，它包括下列步骤： ⑴皂化：以重量计，按1 :4. 0?5.0 :0. 5?0.6比例取牛胆膏、水和含量> 96 %的氢 氧化钠加入反应釜中皂化，反应温度l〇5°C?110°C，反应时间20小时?24小时； 为避免加入的氢氧化钠的量太多，浓度太高时，破坏牛胆膏中的胆酸，本发明在步骤⑴ 中，首先加入65 %?75 %的氢氧化钠，氢氧化钠先溶于水中成为氢氧化钠溶液；其余的氢 氧化钠另外溶于水中，皂化时分批加入，以补充皂化反应时消耗的碱和保持溶液的总体积， 直至使牛胆膏彻底皂化。
[0018] ⑵氧化：待阜化液冷却至室温，调pH值8. 0?8. 5,往反应荃中加入浓度为8 %? 10 %的双氧水，直至使皂化液的颜色由棕黑色变成棕黄色； ⑶酸化：往反应釜中加入浓度为18 %?22 %的硫酸或盐酸，边加边搅，直至pH值 2. 5?3. 0 ;煮沸，使溶液表面浮出颗粒状粗酸； ⑷脱脂：待溶液冷却至室温，取出颗粒状粗酸离心甩干后，移入反应釜中，加入颗粒状 粗酸重量1. 2倍?1. 5倍的溶剂脱脂剂，加热到20°C?35°C，搅拌15分钟?20分钟，放出， 再离心甩干； 为尽量去除颗粒状粗酸中的脂类物质，本发明所述步骤⑷重复1?3次。
[0019] 本发明在步骤⑷中，所述溶剂脱脂剂为6号溶剂油或乙醚或120号溶剂油。
[0020] (5)洗涤：对步骤⑷脱脂后的颗粒状粗酸用浓度为95 %的酒精在40°C搅拌洗涤，取 出尚心甩干； (6)钡化：以重量计，按1 :0. 18?0. 2 :5?6比例取洗涤后的颗粒状粗酸、氯化钡和浓 度为75 %的酒精加入反应釜中，所述氯化钡先溶于2倍?3倍的水中；加氢氧化钠溶液，调 pH值为7. 8,加温80°C?90°C，回流4小时，放出冷却沉淀，取上清液在反应釜中分馏； ⑴去钡离子：首先，按步骤(6)分馏后的固体物重加4倍?5倍水，加碳酸钠调pH值 13?14,煮沸2小时?4小时，分离去沉淀，取上清液；然后，对上清液加入硫酸调pH值 7. 2?7. 4,蒸发水分至粘稠状； ⑶活性炭脱色：首先，按步骤(7)所得粘稠状物重加5倍?6倍量浓度为95 %的酒精， 加温至全部溶解，冷却，过滤，取液体在反应釜中分馏；然后，以重量计，按1 :〇. 05?0. 06 : 5?6比例取分馏后的固体物、活性炭和浓度为75 %?80 %的酒精，不加温搅拌褪色1小 时?2小时，放出沉淀，过滤去活性炭；最后，取液体在反应荃中分馈，回收酒精，剩余固体 物干燥、粉碎得牛胆盐； 为尽量析出粘稠状物中已溶于浓度为95 %的酒精中的无机盐(硫酸钠)，本发明在步骤 ⑶中，所述冷却为将溶液置于0°C?4°C下冷藏5小时?6小时。
[0021] ⑶加入添加剂：按步骤⑶所得牛胆盐加入10 %?15 %的阴离子表面活性剂。
[0022] 本发明所述阴离子表面活性剂优选为十二烷基硫酸钠。
[0023] 制备的牛胆盐外观为白色或淡黄色粉末，胆酸含量> 55 %，干燥失重< 5 %，灰分 < 19 %，酸价< 145 ;对大肠菌有较强的抑制作用，菌落< 2 mm，对沙门氏菌和痢疾志贺氏 菌无抑制作用，菌落> 1. 5 mm ;在1〇〇毫升水中，加入1克牛胆盐，牛胆盐全部溶解于水中， 澄清，无沉淀，pH值7. 5?9. 0 ;在100毫升水中，加入0. 5克牛胆盐，2克蛋白胨煮沸时，溶 液不混浊；121°C高压15分钟后不混浊，隔夜放置后，溶液澄清明亮，无上浮物出现。
[0024] 由于采用上述技术方案，本发明较好的实现了发明目的，工艺成熟可行，在脱脂处 理过程中，增加钡化步骤，进一步去掉了产品中的脂类物质，同时，产品中加入10 %?15 % 的阴离子表面活性剂，使得在用于干粉细菌培养基原料时，溶液不会混浊；生产的牛胆盐胆 酸含量> 55 %，干燥失重< 5 %，灰分< 19 %，酸价< 145。
【具体实施方式】
[0025] 下面结合实施例对本发明作进一步说明。
[0026] 实施例1 : 一种牛胆盐，外观为白色或淡黄色粉末，胆酸含量> 55 %，干燥失重< 5 %，灰分< 19 %，酸价< 145 ;对大肠菌有较强的抑制作用，菌落< 2 mm，对沙门氏菌和痢疾志贺氏菌无抑 制作用，菌落> 1.5醒。
[0027] -种上述牛胆盐的制备方法，它包括下列步骤： ⑴皂化：以重量计，按1 :4. 0?5.0 :0. 5?0.6比例取牛胆膏、水和含量> 96 %的氢 氧化钠加入反应釜中皂化，反应温度l〇5°C?110°C，反应时间20小时?24小时； 为避免加入的氢氧化钠的量太多，浓度太高时，破坏牛胆膏中的胆酸，本发明在步骤⑴ 中，首先加入65 %?75 %的氢氧化钠，氢氧化钠先溶于水中成为氢氧化钠溶液；其余的氢 氧化钠另外溶于水中，皂化时分批加入，以补充皂化反应时消耗的碱和保持溶液的总体积， 直至使牛胆膏彻底皂化。
[0028] 本实施例取80 kg牛胆膏，其胆酸平均含量为41 %，自来水320 kg，氢氧化钠(片碱） 44 kg ;在500立升的反应釜中，氢氧化钠先加入30 kg，加入时，氢氧化钠先溶于水中成为氢 氧化钠溶液，加温至l〇5°C，搅拌至全部溶解，保持此沸腾状态24小时；剩余14 kg氢氧化钠 另外溶于水中，在沸腾过程中不断补充氢氧化钠水溶液，以补充皂化反应时消耗的碱和保 持溶液的总体积，直至使牛胆膏彻底皂化。
[0029] ⑵氧化：待阜化液冷却至室温，调pH值8. 0?8. 5,往反应荃中加入浓度为8 %? 10 %的双氧水，直至使皂化液的颜色由棕黑色变成棕黄色； 本实施例用稀硫酸或稀盐酸调皂化液的pH值8. 2,将双氧水间断慢慢加入皂化液中 (加入时防止液体鼓泡溢出反应釜)，氧化24小时，直至使皂化液的颜色由棕黑色变成棕黄 色为止。
[0030] ⑶酸化：往反应釜中加入浓度为18 %?22 %的硫酸或盐酸，边加边搅，直至pH值 2. 5?3. 0 ;煮沸，使溶液表面浮出颗粒状粗酸； 本实施例先向氧化液中缓慢加入浓度为20 %的稀硫酸，边加边搅直至pH值2. 5,停止 加酸，再煮沸2?3分钟，使溶液表面浮出颗粒状粗酸。
[0031] ⑷脱脂：待溶液冷却至室温，取出颗粒状粗酸离心甩干后，移入反应釜中，加入颗 粒状粗酸重量1. 2倍?1. 5倍的溶剂脱脂剂，加热到20°C?35°C，搅拌15分钟?20分钟， 放出，再离心甩干； 为尽量去除颗粒状粗酸中的脂类物质，本发明所述步骤⑷重复1?3次。
[0032] 本发明在步骤⑷中，所述溶剂脱脂剂为6号溶剂油或乙醚或120号溶剂油。
[0033] 本实施例待冷至室温后，取出颗粒状粗酸在离心甩干机中甩出剩余酸水，然后再 移入反应釜中，加入颗粒状粗酸重1. 5倍的6号溶剂油，加热到35°C，搅拌20分钟，放出，迅 速离心甩干，颗粒状粗酸中的脂类物质极大部分溶于6号溶剂油内被去除，为尽量去除颗 粒状粗酸中的脂类物质，重复上述步骤2次。
[0034] 所述6号溶剂油即6号大豆抽提溶剂油，由无锡万隆化工有限公司生产。为基本 的有机化工原料之一，可作清洗剂，清洗电子零件，也可用作金属脱油去污清洗剂，广泛用 于印刷、五金、电子、胶水、橡胶、国防工业、油漆、化工、油脂等行业。
[0035] (5)洗涤：对步骤⑷脱脂后的颗粒状粗酸用浓度为95 %的酒精在40°C搅拌洗涤，取 出尚心甩干； 本实施例将脱脂后的颗粒状粗酸在夹层锅中用浓度为95 %的酒精40°C搅拌洗涤，再 将颗粒状粗酸取出离心甩干，可提高颗粒状粗酸中的胆酸含量7 %?10 %。
[0036] (6)钡化：以重量计，按1 :0. 18?0. 2 :5?6比例取洗涤后的颗粒状粗酸、氯化钡和 浓度为75 %的酒精加入反应釜中，所述氯化钡先溶于2倍?3倍的水中；加氢氧化钠溶液， 调pH值为7. 8,加温80°C?90°C，回流4小时，放出冷却沉淀，取上清液在反应釜中分馏； 本实施例按所得颗粒状粗酸36公斤，加7. 0公斤氯化钡(先溶于14公斤水中)、浓度为 75 %的酒精180公斤于反应釜中，加氢氧化钠溶液，调pH值为7.8,加温90°C回流4小时， 放出冷却沉淀，取上清液在反应荃中分馈回收酒精，剩余固体物35公斤。
[0037] (7)去钡离子：首先，按步骤(6)分馏后的固体物重加4倍?5倍水，加碳酸钠调pH 值13?14,煮沸2小时?4小时，分离去沉淀，取上清液；然后，对上清液加入硫酸调pH值 7. 2?7. 4,蒸发水分至粘稠状； 本实施例按剩余固体物35公斤重加170公斤水，加碳酸钠调pH值13,煮沸2小时，分 离去沉淀，沉淀物为碳酸钡，然后，取上清液(牛胆酸钠，即牛胆盐)加入硫酸调pH值7. 3,并 可进一步去除上清液中的钡离子，再蒸发水份至粘稠状。
[0038] (8)活性炭脱色：首先，按步骤(7)所得粘稠状物重加5倍?6倍量浓度为95 %的 酒精，加温至全部溶解，冷却，过滤，取液体在反应釜中分馏；然后，以重量计，按1 :〇. 05? 0. 06 :5?6比例取分馏后的固体物、活性炭和浓度为75 %?80 %的酒精，不加温搅拌褪 色1小时?2小时，放出沉淀，过滤去活性炭；最后，取液体在反应釜中分馏，回收酒精，剩余 固体物干燥、粉碎得牛胆盐； 为尽量析出粘稠状物中已溶于浓度为95 %的酒精中的无机盐(硫酸钠和氯化钠)，本发 明在步骤⑶中，所述冷却为将溶液置于0°C?4°C下冷藏5小时?6小时。
[0039] 本实施例按上步骤所得粘稠物40公斤重加200公斤浓度为95 %的酒精，加温至 全部溶解，将溶液置于2°C下冷藏5小时，析出1. 5公斤无机盐类(硫酸钠)，过滤，取液体在 反应釜中分馏回收酒精，按留在反应釜中分馏后的固体物重加2. 0公斤药用级活性炭、200 公斤浓度为80 %的酒精，不加温搅拌脱色1小时，放出沉淀3小时?4小时，取上清液用中 速滤纸过滤去活性炭；最后，取液体在反应釜中分馏，回收酒精，剩余固体物干燥、粉碎得牛 胆盐34公斤成品，牛胆盐中胆酸含量为70 %。
[0040] 制备的牛胆盐外观为白色或淡黄色粉末，胆酸含量> 55 %，干燥失重< 5 %，灰分 < 19 %，酸价< 145 ;对大肠菌有较强的抑制作用，菌落< 2 mm，对沙门氏菌和痢疾志贺氏 菌无抑制作用，菌落> 1. 5 mm。
[0041] 实施例2: 一种牛胆盐在干粉细菌培养基生产中的应用，在牛胆盐用于干粉细菌培养基原料时， 以重量计，加入牛胆盐重10 %?15 %的阴离子表面活性剂。
[0042] 本发明所述阴离子表面活性剂优选为十二烷基硫酸钠。
[0043] 本实施例取由实施例1制备的牛胆盐，加入牛胆盐重12 %的阴离子表面活性剂， 所述阴离子表面活性剂优选为十二烷基硫酸钠，用于干粉细菌培养基原料。在100毫升水 中，加入1克牛胆盐，牛胆盐全部溶解于水中，澄清，无沉淀，pH值7. 5?9. Ο ;在100毫升水 中，加入0. 5克牛胆盐，2克蛋白胨煮沸时，溶液不混浊；121°C高压15分钟后不混浊，隔夜 放置后，溶液澄清明亮，无上浮物出现。
[0044] 实施例3 : 一种牛胆盐，牛胆盐中加入牛胆盐重10 %?15 %的阴离子表面活性剂，所述阴离子表 面活性剂优选为十二烷基硫酸钠；外观为白色或淡黄色粉末，胆酸含量> 55 %，干燥失重 < 5 %，灰分< 19 %，酸价< 145 ;对大肠菌有较强的抑制作用，菌落< 2 mm，对沙门氏菌和 痢疾志贺氏菌无抑制作用，菌落> 1. 5 mm ;在1〇〇毫升水中，加入1克牛胆盐，牛胆盐全部溶 解于水中，澄清，无沉淀，pH值7. 5?9. 0 ;在100毫升水中，加入0. 5克牛胆盐，2克蛋白胨 煮沸时，溶液不混浊；121°C高压15分钟后不混浊，隔夜放置后，溶液澄清明亮，无上浮物出 现。
[0045] 一种上述牛胆盐的制备方法，它包括下列步骤： ⑴皂化：以重量计，按1 :4. 0?5.0 :0. 5?0.6比例取牛胆膏、水和含量> 96 %的氢 氧化钠加入反应釜中皂化，反应温度l〇5°C?110°C，反应时间20小时?24小时； 为避免加入的氢氧化钠的量太多，浓度太高时，破坏牛胆膏中的胆酸，本发明在步骤⑴ 中，首先加入65 %?75 %的氢氧化钠，氢氧化钠先溶于水中成为氢氧化钠溶液；其余的氢 氧化钠另外溶于水中，皂化时分批加入，以补充皂化反应时消耗的碱和保持溶液的总体积， 直至使牛胆膏彻底皂化。
[0046] 本实施例取80 kg牛胆膏，其胆酸平均含量为41 %，自来水320 kg，氢氧化钠(片碱） 44 kg ;在500立升的反应釜中，氢氧化钠先加入30 kg，加入时，氢氧化钠先溶于水中成为氢 氧化钠溶液，加温至l〇5°C，搅拌至全部溶解，保持此沸腾状态24小时；剩余14 kg氢氧化钠 另外溶于水中，在沸腾过程中不断补充氢氧化钠水溶液，以补充皂化反应时消耗的碱和保 持溶液的总体积，直至使牛胆膏彻底皂化。
[0047] ⑵氧化：待阜化液冷却至室温，调pH值8. 0?8. 5,往反应荃中加入浓度为8 %? 10 %的双氧水，直至使皂化液的颜色由棕黑色变成棕黄色； 本实施例用稀硫酸或稀盐酸调皂化液的pH值8. 2,将双氧水间断慢慢加入皂化液中 (加入时防止液体鼓泡溢出反应釜)，氧化24小时，直至使皂化液的颜色由棕黑色变成棕黄 色为止。
[0048] ⑶酸化：往反应釜中加入浓度为18 %?22 %的硫酸或盐酸，边加边搅，直至pH值 2. 5?3. 0 ;煮沸，使溶液表面浮出颗粒状粗酸； 本实施例先向氧化液中缓慢加入浓度为20 %的稀硫酸，边加边搅直至pH值2. 5,停止 加酸，再煮沸2?3分钟，使溶液表面浮出颗粒状粗酸。
[0049] ⑷脱脂：待溶液冷却至室温，取出颗粒状粗酸离心甩干后，移入反应釜中，加入颗 粒状粗酸重量1. 2倍?1. 5倍的溶剂脱脂剂，加热到20°C?35°C，搅拌15分钟?20分钟， 放出，再离心甩干； 为尽量去除颗粒状粗酸中的脂类物质，本发明所述步骤⑷重复1?3次。
[0050] 本发明在步骤⑷中，所述溶剂脱脂剂为6号溶剂油或乙醚或120号溶剂油。
[0051] 本实施例待冷至室温后，取出颗粒状粗酸在离心甩干机中甩出剩余酸水，然后再 移入反应釜中，加入颗粒状粗酸重1. 5倍的6号溶剂油，加热到35°C，搅拌20分钟，放出，迅 速离心甩干，颗粒状粗酸中的脂类物质极大部分溶于6号溶剂油内被去除，为尽量去除颗 粒状粗酸中的脂类物质，重复上述步骤2次。
[0052] 所述6号溶剂油即6号大豆抽提溶剂油，由无锡万隆化工有限公司生产。为基本 的有机化工原料之一，可作清洗剂，清洗电子零件，也可用作金属脱油去污清洗剂，广泛用 于印刷、五金、电子、胶水、橡胶、国防工业、油漆、化工、油脂等行业。
[0053] (5)洗涤：对步骤⑷脱脂后的颗粒状粗酸用浓度为95 %的酒精在40°C搅拌洗涤，取 出尚心甩干； 本实施例将脱脂后的颗粒状粗酸在夹层锅中用浓度为95 %的酒精40°C搅拌洗涤，再 将颗粒状粗酸取出离心甩干，可提高粗胆酸含量7 %?10 %。
[0054] (6)钡化：以重量计，按1 :0. 18?0. 2 :5?6比例取洗涤后的颗粒状粗酸、氯化钡和 浓度为75 %的酒精加入反应釜中，所述氯化钡先溶于2倍?3倍的水中；加氢氧化钠溶液， 调pH值为7. 8,加温80°C?90°C，回流4小时，放出冷却沉淀，取上清液在反应釜中分馏； 本实施例按所得颗粒状粗酸36公斤，加7. 0公斤氯化钡(先溶于14公斤水中)、浓度为 75 %的酒精180公斤于反应釜中，加氢氧化钠溶液，调pH值为7.8,加温90°C回流4小时， 放出冷却沉淀，取上清液在反应荃中分馈回收酒精，剩余固体物35公斤。
[0055] (7)去钡离子：首先，按步骤(6)分馏后的固体物重加4倍?5倍水，加碳酸钠调pH 值13?14,煮沸2小时?4小时，分离去沉淀，取上清液；然后，对上清液加入硫酸调pH值 7. 2?7. 4,蒸发水分至粘稠状； 本实施例按剩余固体物35公斤重加170公斤水，加碳酸钠调pH值13,煮沸2小时，分 离去沉淀，沉淀物为碳酸钡，然后，取上清液(牛胆酸钠，即牛胆盐)加入硫酸调pH值7. 3,并 可进一步去除上清液中的钡离子，再蒸发水份至粘稠状。
[0056] (8)活性炭脱色：首先，按步骤(7)所得粘稠状物重加5倍?6倍量浓度为95 %的 酒精，加温至全部溶解，冷却，过滤，取液体在反应釜中分馏；然后，以重量计，按1 :〇. 05? 0. 06 :5?6比例取分馏后的固体物、活性炭和浓度为75 %?80 %的酒精，不加温搅拌褪 色1小时?2小时，放出沉淀，过滤去活性炭；最后，取液体在反应釜中分馏，回收酒精，剩余 固体物干燥、粉碎得牛胆盐； 为尽量析出粘稠状物中已溶于浓度为95 %的酒精中的无机盐(硫酸钠和氯化钠)，本发 明在步骤⑶中，所述冷却为将溶液置于0°C?4°C下冷藏5小时?6小时。
[0057] 本实施例按上步骤所得粘稠物40公斤重加200公斤浓度为95 %的酒精，加温至 全部溶解，将溶液置于2°C下冷藏5小时，析出1. 5公斤无机盐类(硫酸钠)，过滤，取液体在 反应釜中分馏回收酒精，按留在反应釜中分馏后的固体物重加2. 0公斤药用级活性炭、200 公斤浓度为80 %的酒精，不加温搅拌脱色1小时，放出沉淀3小时?4小时，取上清液用中 速滤纸过滤去活性炭；最后，取液体在反应釜中分馏，回收酒精，剩余固体物干燥、粉碎得牛 胆盐34公斤成品，牛胆盐中胆酸含量为70 %。
[0058] ⑶加入添加剂：按步骤(8)所得牛胆盐加入10 %?15 %的阴离子表面活性剂。
[0059] 本发明所述阴离子表面活性剂优选为十二烷基硫酸钠。
[0060] 本实施例按步骤⑶所得34公斤牛胆盐加入12 %阴离子表面活性剂，所述阴离子 表面活性剂优选为十二烷基硫酸钠。
[0061] 制备的牛胆盐外观为白色或淡黄色粉末，胆酸含量> 55 %，干燥失重< 5 %，灰分 < 19 %，酸价< 145 ;对大肠菌有较强的抑制作用，菌落< 2 mm，对沙门氏菌和痢疾志贺氏 菌无抑制作用，菌落> 1. 5 mm ;在1〇〇毫升水中，加入1克牛胆盐，牛胆盐全部溶解于水中， 澄清，无沉淀，pH值7. 5?9. 0 ;在100毫升水中，加入0. 5克牛胆盐，2克蛋白胨煮沸时，溶 液不混浊；121°C高压15分钟后不混浊，隔夜放置后，溶液澄清明亮，无上浮物出现。
[0062] 实施例4 : 本发明在步骤⑷中，所述溶剂脱脂剂为120号溶剂油即120#橡胶工业溶剂油，又叫工 业庚烷，为无色透明液体，易燃，易挥发，不含四乙基铅，硫含量低，是一种用途广泛的 有机溶剂。由上海嘉荣贸易有限公司销售。
[0063] 余同实施例1。
[0064] 实施例5 : 本发明在步骤⑷中，所述溶剂脱脂剂为120号溶剂油即120#橡胶工业溶剂油，又叫工 业庚烷，为无色透明液体，易燃，易挥发，不含四乙基铅，硫含量低，是一种用途广泛的 有机溶剂。由上海嘉荣贸易有限公司销售。
[0065] 余同实施例3。
【权利要求】
1. 一种牛胆盐，其特征是外观为白色或淡黄色粉末，胆酸含量> 55 %，干燥失重< 5 %，灰分< 19 %，酸价< 145 ;对大肠菌有较强的抑制作用，菌落< 2 mm，对沙门氏菌和痢疾 志贺氏菌无抑制作用，菌落> 1. 5 mm。
2. -种牛胆盐，其特征是牛胆盐中加入牛胆盐重10 %?15 %的阴离子表面活性剂， 所述阴离子表面活性剂优选为十二烷基硫酸钠；外观为白色或淡黄色粉末，胆酸含量> 55 %，干燥失重< 5 %，灰分< 19 %，酸价< 145 ;对大肠菌有较强的抑制作用，菌落< 2 mm， 对沙门氏菌和痢疾志贺氏菌无抑制作用，菌落> 1. 5 mm ;在1〇〇毫升水中，加入1克牛胆盐， 牛胆盐全部溶解于水中，澄清，无沉淀，pH值7. 5?9. 0 ;在100毫升水中，加入0. 5克牛胆 盐，2克蛋白胨煮沸时，溶液不混浊；121°C高压15分钟后不混浊，隔夜放置后，溶液澄清明 亮，无上浮物出现。
3. -种如权利要求1所述牛胆盐的制备方法，其特征是它包括下列步骤： ⑴皂化：以重量计，按1 :4. 0?5.0 :0. 5?0.6比例取牛胆膏、水和含量> 96 %的氢 氧化钠加入反应釜中皂化，反应温度l〇5°C?110°C，反应时间20小时?24小时； ⑵氧化：待皂化液冷却至室温，调pH值8. 0?8. 5,往反应釜中加入8 %?10 %的双 氧水，直至使皂化液的颜色由棕黑色变成棕黄色； ⑶酸化：往反应釜中加入18 %?22 %的硫酸或盐酸，边加边搅，直至pH值2. 5?3. 0 ; 煮沸，使溶液表面浮出颗粒状粗酸； ⑷脱脂：待溶液冷却至室温，取出颗粒状粗酸离心甩干后，移入反应釜中，加入颗粒状 粗酸重量1. 2倍?1. 5倍的溶剂脱脂剂，加热到20°C?35°C，搅拌15分钟?20分钟，放出， 再离心甩干； (5) 洗涤：对步骤⑷脱脂后的颗粒状粗酸用浓度为95 %的酒精在40°C搅拌洗涤，取出 尚心甩干； (6) 钡化：以重量计，按1 :0. 18?0. 2 :5?6比例取洗涤后的颗粒状粗酸、氯化钡和浓 度为75 %的酒精加入反应釜中，所述氯化钡先溶于2倍?3倍的水中；加氢氧化钠溶液，调 pH值为7.8,加温80°C?90°C，回流4小时，放出冷却沉淀，取上清液在反应釜中分馏； ⑴去钡离子：首先，按步骤(6)分馏后的固体物重加4倍?5倍水，加碳酸钠调pH值 13?14,煮沸2小时?4小时，分离去沉淀，取上清液；然后，对上清液加入硫酸调pH值 7. 2?7. 4,蒸发水分至粘稠状； ⑶活性炭脱色：首先，按步骤(7)所得粘稠状物重加5倍?6倍量浓度为95 %的酒精， 加温至全部溶解，冷却，过滤，取液体在反应釜中分馏；然后，以重量计，按1 :〇. 05?0. 06 : 5?6比例取分馏后的固体物、活性炭和浓度为75 %?80 %的酒精，不加温搅拌褪色1小 时?2小时，放出沉淀，过滤去活性炭；最后，取液体在反应荃中分馈，回收酒精，剩余固体 物干燥、粉碎得牛胆盐； 制备的牛胆盐外观为白色或淡黄色粉末，胆酸含量> 55 %，干燥失重< 5 %，灰分< 19 %，酸价< 145 ;对大肠菌有较强的抑制作用，菌落< 2 mm，对沙门氏菌和痢疾志贺氏菌无抑 制作用，菌落> 1.5醒。
4. 一种如权利要求2所述牛胆盐的制备方法，其特征是它包括下列步骤： ⑴皂化：以重量计，按1 :4. 0?5.0 :0. 5?0.6比例取牛胆膏、水和含量> 96 %的氢 氧化钠加入反应釜中皂化，反应温度l〇5°C?110°C，反应时间20小时?24小时； ⑵氧化：待皂化液冷却至室温，调pH值8. 0?8. 5,往反应釜中加入浓度为8 %?10 % 的双氧水，直至使皂化液的颜色由棕黑色变成棕黄色； ⑶酸化：往反应釜中加入浓度为18 %?22 %的硫酸或盐酸，边加边搅，直至pH值 2. 5?3. 0 ;煮沸，使溶液表面浮出颗粒状粗酸； ⑷脱脂：待溶液冷却至室温，取出颗粒状粗酸离心甩干后，移入反应釜中，加入颗粒状 粗酸重量1. 2倍?1. 5倍的溶剂脱脂剂，加热到20°C?35°C，搅拌15分钟?20分钟，放出， 再离心甩干； (5) 洗涤：对步骤⑷脱脂后的颗粒状粗酸用浓度为95 %的酒精在40°C搅拌洗涤，取出 尚心甩干； (6) 钡化：以重量计，按1 :0. 18?0. 2 :5?6比例取洗涤后的颗粒状粗酸、氯化钡和浓 度为75 %的酒精加入反应釜中，所述氯化钡先溶于2倍?3倍的水中；加氢氧化钠溶液，调 pH值为7. 8,加温80°C?90°C，回流4小时，放出冷却沉淀，取上清液在反应釜中分馏； ⑴去钡离子：首先，按步骤(6)分馏后的固体物重加4倍?5倍水，加碳酸钠调pH值 13?14,煮沸2小时?4小时，分离去沉淀，取上清液；然后，对上清液加入硫酸调pH值 7. 2?7. 4,蒸发水分至粘稠状； ⑶活性炭脱色：首先，按步骤(7)所得粘稠状物重加5倍?6倍量浓度为95 %的酒精， 加温至全部溶解，冷却，过滤，取液体在反应釜中分馏；然后，以重量计，按1 :〇. 05?0. 06 : 5?6比例取分馏后的固体物、活性炭和浓度为75 %?80 %的酒精，不加温搅拌褪色1小 时?2小时，放出沉淀，过滤去活性炭；最后，取液体在反应荃中分馈，回收酒精，剩余固体 物干燥、粉碎得牛胆盐； ⑶加入添加剂：在步骤⑶所得牛胆盐中加入牛胆盐重10 %?15 %的阴离子表面活性 剂； 制备的牛胆盐外观为白色或淡黄色粉末，胆酸含量> 55 %，干燥失重< 5 %，灰分< 19 %，酸价< 145 ;对大肠菌有较强的抑制作用，菌落< 2 mm，对沙门氏菌和痢疾志贺氏菌无抑 制作用，菌落> 1. 5 mm ;在1〇〇毫升水中，加入1克牛胆盐，牛胆盐全部溶解于水中，澄清，无 沉淀，pH值7. 5?9. 0 ;在100毫升水中，加入0. 5克牛胆盐，2克蛋白胨煮沸时，溶液不混 浊；121°C高压15分钟后不混浊，隔夜放置后，溶液澄清明亮，无上浮物出现。
5. 根据权利要求3或4所述牛胆盐的制备方法，其特征是在步骤⑴中，首先加入65 %?75 %的氢氧化钠，氢氧化钠先溶于水中成为氢氧化钠溶液；其余的氢氧化钠另外溶于 水中，皂化时分批加入，以补充皂化反应时消耗的碱和保持溶液的总体积，直至使牛胆膏彻 底皂化。
6. 根据权利要求3或4所述牛胆盐的制备方法，其特征是在所述步骤⑷重复1?3次。
7. 根据权利要求3或4所述牛胆盐的制备方法，其特征是在步骤⑷中，所述溶剂脱脂剂 为6号溶剂油或乙醚或120号溶剂油。
8. 根据权利要求3或4所述牛胆盐的制备方法，其特征是在步骤(8)中，所述冷却为将溶 液置于〇°C?4°C下冷藏5小时?6小时。
9. 根据权利要求4所述牛胆盐的制备方法，其特征是在步骤(9)中，所述阴离子表面活 性剂优选为十-烧基硫酸纳。
10. -种如权利要求3所述牛胆盐的制备方法制备的牛胆盐在干粉细菌培养基生产中 的应用，其特征是在牛胆盐用于干粉细菌培养基原料时，以重量计，加入牛胆盐重10 %? 15 %的阴离子表面活性剂；所述阴离子表面活性剂优选为十二烷基硫酸钠。
【文档编号】C12N1/20GK104152387SQ201410413922
【公开日】2014年11月19日 申请日期:2014年8月21日 优先权日:2014年8月21日
【发明者】曹国华, 曹梦兰, 曹梦恺 申请人:曹国华