一种生产(2r,3s)含碘甲基丙酸甲酯的生物还原法
【专利摘要】一种生产 (2R,3S) 含碘甲基丙酸甲酯的生物还原法。 一种生物还原制备手性医药中间体(?)-(2R,3S)-3-（4-碘苯基）-3-羟基-2-甲基丙酸甲酯的方法，反应罐中加入磷酸盐缓冲液，加入白土调控底物、产物浓度，用 耶氏 解脂假丝酵母细胞进行生物还原反应，得到产物，产品收率高，对映体过量率高，具有很好的应用前景。
【专利说明】一种生产（2R,3S)含碘甲基丙酸甲酯的生物还原法
【技术领域】
[0001] 本发明属于制药工程【技术领域】，特别涉及到耶氏解脂假丝酵母细胞生物还原制 备手性医药中间体（_)-(2R，3S)-3- (4-碘苯基）-3-羟基-2-甲基丙酸甲酯的技术。
【背景技术】
[0002] 羟基手性酯是合成手性药物、精细化学品、农药品和其他特殊材料的重要中间体。 生物催化羰基化合物的不对称还原具有环境友好、条件温和、选择性高等优点，作为绿色 高效制备羟基手性酯的优先途径，被越来越多地应用于生产一些高附加值的羟基手性酯。 生物催化制备羟基手性酯具有很好的应用前景。
[0003] 生物催化具有催化效率高、选择性强、条件温和、环境友好等突出优点，是可持续 发展过程中替代和拓展传统有机化学合成的重要方法。其中手性拆分和不对称合成是生物 催化最具吸引力的应用领域。在作为生物催化剂的六大类酶中，水解酶能够催化动力学拆 分外消旋体得到手性产品，在工业生物催化中一直扮演着重要角色。近几年来，氧化还原 酶在工业上的应用得到了迅速增长。目前，采用水解酶动力学拆分法、生物还原法和生物 氧化法工业制备光学活性手性化合物的比例为4:2:1。
[0004] 生物还原法相对于动力学拆分法而言，最大的优势在于理论收率可达100%，原子 经济性好。然而生物还原反应需要辅酶或辅因子的参与，一定程度上限制了其应用。由于 辅酶依赖性的缘故，生物还原反应中多釆用整细胞作为催化剂，实现体内辅酶循环再生的 同时免去了酶的分离纯化步骤。
[0005] (_)-(2R，3S)-3- (4-碘苯基）-3-羟基-2-甲基丙酸甲酯是合成手性药物、精细 化学品、农药品的重要手性砌块，由于有2个手性中心，使得化学合成较为困难，成本高。本 发明将采用生物催化制备（_)-(2R，3S)-3- (4-碘苯基）-3-羟基-2-甲基丙酸甲酯。
【发明内容】
[0006] 本发明采用耶氏解脂假丝酵母细胞催化制备（-)-(2R，3S) -3-(4-碘苯基)-3_羟 基-2-甲基丙酸甲酯，反应式如下：
【权利要求】
1. 一种耶氏解脂假丝酵母细胞生物还原制备（_)-(2R，3S)-3- (4-碘苯基）-3_羟 基-2-甲基丙酸甲酯的方法，其特征在于反应罐中加入磷酸盐缓冲液，装料系数为 0. 6-0. 7，pH为7. 8，加入吸附了底物的白土，使底物2-( 4-氟苯甲酰)-2_丙烯酸甲酯添加量 为80-90 g/L，麦芽浸膏22-26 g，葡萄糖18-22 g/L，木糖12-13 g/L，山梨坦单月桂酸酯为 20-22g/L，12rC高压灭菌30分钟；冷却至32-33°C时，加入湿酵母细胞使浓度为29-32g/ L，通气比为0. 13-0. 16VAV分钟)，进行生物还原反应，反应时间为95-100小时；反应结束 后，分别滤出细胞、白土，用乙酸乙酯萃取反应液、萃取白土，合并乙酸乙酯萃取液和萃取白 土的乙酸乙酯，蒸出乙酸乙酯，得到产物（_)-(2R，3S)-3- (4-氟苯基）-3_羟基-2-甲基 丙酸甲酯，反应转化率94-96 %，产品收率92-94 %，对映体过量率97-98 %。
2. 权利要求1所述的方法，其特征在于湿酵母细胞制备过程如下：耶氏解脂假丝酵母 经斜面、摇瓶、种子罐培养得到种子液；发酵罐加入培养液，装料系数为0. 6-0. 7,121°C高 压灭菌30分钟，冷却至28-29°C，将耶氏解脂假丝酵母种子液接种至发酵罐，接种比例为 6-6. 5%，通气比为0. 5-1V/ (V分钟)，28-29°C培养42-48小时，用过滤式离心机离心得到 湿酵母细胞，用作生物还原反应催化剂。
3. 权利要求1所述的方法，其特征在培养液成份为：葡萄糖20-25 g/L，酵母浸膏 10-15 g/L，KH2PO4 4. 4-5.5 g/L，MgSO4 7H20 0.5-0. 6 g/L，玉米油 5-7 g/L，黄豆粉 16-20 区凡，口11值为7.8。
4. 权利要求1所述的方法，其特征在于所述吸附了底物的白土制作方法为，将底物溶 于乙酸乙酯，底物与乙酸乙酯的比率为0.5 :2,得到底物的乙酸乙酯溶液，用白土吸收此溶 液，然后，烘干、回收乙酸乙酯，即得到吸附底物的白土，调节底物与白土用量，使得底物与 白土的质量比率为〇. 29-0. 33。
【文档编号】C12P7/62GK104313066SQ201410518180
【公开日】2015年1月28日 申请日期:2014年10月1日 优先权日:2014年10月1日
【发明者】刘均洪, 曹延俊, 刘慧 , 张银, 隋洪南 申请人:青岛科技大学