一种脱脂植物粕中蛋白质复合酶解方法
【专利摘要】本发明提供一种脱脂植物粕中蛋白质复合酶解方法，其特征在于，包括:1)预处理：将脱脂植物粕粉碎过筛；2)提取酶解：粉碎后的脱脂植物粕进行提取和复合酶解，固液分离；3)酶灭活：对步骤2)中获得的上清液进行酶灭活，固液分离；4)浓缩干燥：将步骤3)获得的上清液浓缩干燥，获得多肽产品。得到的多肽产品经检测同时具有抑制血管紧张素转化酶活性(降压活性)、抗氧化活性、抗菌性、抗炎症活性和提高免疫力活性。方法工艺简单、容易控制、通用性强，易于放大生产。
【专利说明】一种脱脂植物粕中蛋白质复合酶解方法
【技术领域】
[0001 ] 本发明涉及生物化工【技术领域】，特别涉及脱脂植物柏中蛋白质复合酶解方法
【背景技术】
[0002]目前，从植物中提取的油类品种繁多，因而存在多种脱脂植物柏资源值得深入开发。从植物脱脂柏类制备的植物分离蛋白降解物中存在大量生物活性多肽，这些多肽部分的活性种类十分丰富，与蛋白来源、使用的酶种类、制备工艺、分子量范围及序列长度密切相关。目前，被证明的植物分离蛋白降解出的多肽生物活性种类包括:抑制血管紧张素转化酶活性、抑制血小板凝结活性、抗氧化活性、抗肿瘤活性、抗菌性、抗炎症活性、提高免疫力活性、组织修复活性等。
[0003]常用的多肽制备方法主要有:生物酶降解法、化学合成法、酸/碱降解法及基因工程法等。生物酶法:酶法工艺是当今多肽产品研究与开发、规模化生产以及产品创新的主要方向，从蛋白的酶解产物中筛选具有特殊功效的多肽是近年来多肽领域的研究热点。化学合成法:主要以经特殊处理后的氨基酸为原料定向合成某种单肽，该技术主要用于医药、药品原料中间体、用于诊断试剂等。化学水解法:主要包括酸解法或碱解法，在高温条件下经过强酸或强碱破坏多肽链，将蛋白质降解形成多肽。基因工程法:采用基因工程的方法通过DNA重组技术再通过发酵的方法制备多肽，这种方法多用来生产长肽和蛋白质，而生物活性肽许多都是短肽，限制该技术的大规模应用。
[0004]如何将植物蛋白酶解成具有不同生理活性的多肽是现在的研究热点。如专利(CN200910231736.9)以小麦蛋白为原料，先采用胃蛋白酶酶解，后采用胰蛋白酶或胰酶进行酶解，经灭酶、冷却、离心后，收集上清液干燥得到具有阿片活性的多肽。再如专利(CN03158292.3)以杆菌内切酶水解小麦胚芽提取物，得到具有降血压、提高免疫力和抗氧化作用的多肽混合物。再如专利(CN201210394066.4)用碱性蛋白酶和中性蛋白酶将玉米蛋白粉酶解为低聚肽水解液，再进行复合风味蛋白酶酶解、双氧水脱色、过氧化氢酶酶解和高温灭酶，最后加入微量元素进行螯合反应，从而获得玉米低聚肽螯合物，既能补充人体所必须的功能性小分子多肽，又能补充人体所需的各种微量元素。然而，这些方法都是针对某种植物蛋白的，缺少通用性的植物蛋白酶解方法。
【发明内容】
[0005]本发明目的在于提供一种脱脂植物柏中蛋白质复合酶解方法，利用不同种类蛋白酶相互搭配，对脱脂植物柏中的蛋白质进行酶解，然后经灭酶、浓缩、干燥得到多肽产品，得到的多肽产品经检测同时具有抑制血管紧张素转化酶活性(降压活性)、抗氧化活性、抗菌性、抗炎症活性和提高免疫力活性。该方法操作工艺简单、容易控制、通用性强，易于放大生产。
[0006]本发明的目的是这样实现的:以脱脂植物柏为原料，在提取过程中加入枯草芽孢杆菌蛋白酶、菠萝蛋白酶和木瓜蛋白酶，在提取的同时进行酶解，然后经酶灭活、浓缩、干燥等步骤得到具有多种活性的多肽产品，具体方法步骤如下:
[0007]I)预处理
[0008]将脱脂植物柏粉碎，过50?200目筛。
[0009]2)提取酶解
[0010]按脱脂植物柏重量:水体积比为1:4?1:10的比例，将脱脂植物柏和水放置于容器中，25?85°C下搅拌，按脱脂植物柏重量的0.3?I %加入复合酶，复合酶含有枯草芽孢杆菌蛋白酶、菠萝蛋白酶和木瓜蛋白酶，配比为(6?12): (2?4): (I?3)，提取酶解30?180分钟，完成后离心分离，收集上清液。
[0011]具体实施过程中，优选地，所述复合酶加入量为脱脂植物柏重量的0.4?0.8%，所述提取酶解温度为30°C?80°C，所述浸提时间为60?150分钟。
[0012]3)酶灭活
[0013]将步骤2)收集的上清液煮沸或调节pH，灭酶，离心收集上清液。
[0014]具体实施过程中，灭酶方式优选为煮沸10分钟。
[0015]4)浓缩干燥
[0016]将步骤3)收集的上清液浓缩、干燥，得到多肽产品。该产品经检测具有降压活性、抗氧化活性、抗菌性、抗炎症活性和提高免疫力活性。
[0017]5)多肽精制
[0018]对得到的多肽混合物，可以通过层析、超滤等方法进行分离，获得具有不同活性的多肽产品。
[0019]与现有技术相比，本方法提供的脱脂植物柏蛋白联合水解技术具有以下优点:
[0020](I)通用性强，脱脂花生柏、脱脂大豆柏、脱脂小麦胚芽柏、脱脂玉米柏均能得到具有多种活性的多肽产品；
[0021](2)使用的酶均属于国家允许添加的食品添加剂，无需处理即可用于食品行业；
[0022](3)工艺稳定、操作简便、设备标准化、成本低廉，便于推广应用。
【具体实施方式】
[0023]以下参照具体的实施例来说明本发明。本领域技术人员能够理解，这些实施例仅用于说明本发明，其不以任何方式限制本发明的范围。
[0024]实施例1
[0025]I)将脱脂花生柏1kg粉碎，过100目筛。
[0026]2)在粉碎后的花生柏中加入50kg水，放置于提取罐中，50°C下搅拌，加入50g复合酶，复合酶含有枯草芽孢杆菌蛋白酶、菠萝蛋白酶和木瓜蛋白酶，配比为7:2:1，提取酶解120分钟，完成后离心分离，收集上清液。
[0027]3)将步骤2)收集的上清液煮沸，灭酶，离心收集上清液。
[0028]4)将步骤3)收集的上清液浓缩、干燥，得到多肽产品3.28kg。
[0029]实施例2
[0030]I)将脱脂大豆柏1kg粉碎，过100目筛。
[0031]2)在粉碎后的大豆柏中加入70kg水，放置于提取罐中，60°C下搅拌，加入30g复合酶，复合酶含有枯草芽孢杆菌蛋白酶、菠萝蛋白酶和木瓜蛋白酶，配比为10:3:3，提取酶解150分钟，完成后离心分离，收集上清液。
[0032]3)将步骤2)收集的上清液煮沸，灭酶，离心收集上清液。
[0033]4)将步骤3)收集的上清液浓缩、干燥，得到多肽产品2.87kg。
[0034]实施例3
[0035]I)将脱脂小麦胚芽柏1kg粉碎，过100目筛。
[0036]2)在粉碎后的小麦胚芽柏中加入40kg水，放置于提取罐中，50°C下搅拌，加入70g复合酶，复合酶含有枯草芽孢杆菌蛋白酶、菠萝蛋白酶和木瓜蛋白酶，配比为8:2:3，提取酶解90分钟，完成后离心分离，收集上清液。
[0037]3)将步骤2)收集的上清液煮沸，灭酶，离心收集上清液。
[0038]4)将步骤3)收集的上清液浓缩、干燥，得到多肽产品2.76kg。
[0039]实施例4
[0040]I)将脱脂玉米柏1kg粉碎，过100目筛。
[0041]2)在粉碎后的玉米柏中加入10kg水，放置于提取罐中，65°C下搅拌，加入30g复合酶，复合酶含有枯草芽孢杆菌蛋白酶、菠萝蛋白酶和木瓜蛋白酶，配比为6:3:3，提取酶解180分钟，完成后离心分离，收集上清液。
[0042]3)将步骤2)收集的上清液煮沸，灭酶，离心收集上清液。
[0043]4)将步骤3)收集的上清液浓缩、干燥，得到多肽产品2.27kg。
[0044] 申请人:声明，本发明通过上述实施例来说明本发明的技术方案，但本发明并不局限于上述实施例，即不意味着本发明必须依赖上述实施例才能实施。所属【技术领域】的技术人员应该明了，对本发明的任何改进，对本发明所选用原料的等效替换及辅助成分的添加、具体方式的选择等，均落在本发明的保护范围和公开范围之内。
【权利要求】
1.一种脱脂植物柏中蛋白质复合酶解方法，其特征在于，包括: 1)预处理:将脱脂植物柏粉碎过筛； 2)提取酶解:粉碎后的脱脂植物柏进行提取和复合酶解，固液分离； 3)酶灭活:对步骤2)中获得的上清液进行酶灭活，固液分离； 4)浓缩干燥:将步骤3)获得的上清液浓缩干燥，获得多肽产品。
2.如权利要求1所述的脱脂植物柏中蛋白质复合酶解方法，其特征在于，步骤I)中，所述脱脂植物柏包括但不限于花生柏、大豆柏、芝麻柏、玉米柏、小麦胚芽柏。
3.如权利要求1或2所述的脱脂植物柏中蛋白质复合酶解方法，其特征在于，步骤I)中进行筛分时，所优选筛目范围为50?200目，更优选为100目。
4.根据权利要求1或2所述的脱脂植物柏中蛋白质复合酶解方法，其特征在于，步骤2)中，所述脱脂植物柏与水的按g/ml的重量体积比为1:4?1:10，所述复合酶加入量为脱脂植物柏重量的0.3?1%，所述复合酶包括枯草芽孢杆菌蛋白酶、菠萝蛋白酶和木瓜蛋白酶，配比为(6?12): (2?4): (I?3)，所述提取酶解温度为25°C?85°C，所述浸提时间为30?180分钟； 优选地，所述复合酶加入量为脱脂植物柏重量的0.4?0.8%，所述提取酶解温度为30°C?80°C，所述浸提时间为60?150分钟。
5.根据权利要求1或2所述的脱脂植物柏中蛋白质复合酶解方法，其特征在于，步骤3)中，所述酶灭活方式为煮沸或调节pH，优选为将步骤2)中收集的上清液煮沸。
6.根据权利要求1或2所述的脱脂植物柏中蛋白质复合酶解方法，其特征在于，步骤4)中，将步骤3)中收集的上清液浓缩、干燥，制备具有多种生物活性的多肽产品。
7.根据权利要求1或2所述的脱脂植物柏中蛋白质复合酶解方法，其特征在于，还包括使用层析、超滤等方法对步骤4)获得的多肽产品进行进一步精制。
【文档编号】C12P21/06GK104313094SQ201410559079
【公开日】2015年1月28日 申请日期:2014年10月21日 优先权日:2014年10月21日
【发明者】杨子丰, 孔英俊, 张贵锋, 马啸宇, 张泽玉, 陈静, 康跻耀 申请人:河北子丰生物科技有限公司