一种分离单个细胞的装置制造方法
【专利摘要】本实用新型公开了一种分离单个细胞的装置，所述装置包括依次连接的细胞采集管、手持管、连通管、微孔过滤器和口吸管；其中，所述细胞采集管被设置用于从样品中吸取单个细胞；所述手持管被设置用于控制所述细胞采集管；所述微孔过滤器被设置用于阻隔微生物。使用本实用新型的分离单个细胞的装置，通过口吸法可以简单有效地挑取单个细胞，以用于后续的细胞培养、基因组测序等科学研究。
【专利说明】一种分离单个细胞的装置
【技术领域】
[0001]本实用新型涉及生物【技术领域】，具体地涉及一种分离单个细胞的装置。
【背景技术】
[0002]近年来，单细胞水平的研宄已广泛应用于单细胞PCR扩增、基因组测序和组织工程研宄等领域。随着研宄的深入，单个肿瘤细胞的有效分离和培养成为了肿瘤细胞发生的分子机制、肿瘤细胞的靶向治疗以及微环境相互作用等研宄中迫切解决的难题之一。
[0003]当前的单细胞分离方法包括:(I)荧光流式细胞技术分离法:该方法可有效获得单个细胞，但是对细胞仪的性能要求较高，仪器价格高昂；(2)激光显微切割术:能够从组织中分离单个细胞，但是不适用于细胞培养与扩增，需要操作者熟练掌握技术；(3)显微操控仪:采用显微操控技术从单细胞悬液中吸取单细胞，但成本高，操作复杂；(4)手工机械分离法:在倒置显微镜下直接分离细胞，但容易损伤细胞。
[0004]有鉴于现有技术的上述缺陷，本领域技术人员致力于开发一种简单、有效、低成本的单细胞分离装置。
实用新型内容
[0005]为了解决现有技术中单个细胞分离困难、设备要求高、技术依赖性强的问题，本实用新型提供了一种结构简单、容易操作的分离单个细胞的装置，利用该装置进行分离的单个细胞可用于后续细胞培养，或者用于核酸或蛋白分析的方法。
[0006]基于以上目的，本实用新型提供了一种分离单个细胞的装置，所述装置包括依次连接的:
[0007]细胞采集管、手持管、连通管、微孔过滤器和口吸管。
[0008]其中，所述细胞采集管被设置用于从样品中吸取单个细胞；
[0009]所述手持管被设置用于控制所述细胞采集管；
[0010]所述微孔过滤器被设置用于阻隔微生物。
[0011]在另一优选例中，所述装置还包括第一接头，所述细胞采集管和所述手持管通过所述第一接头连接。
[0012]在另一优选例中，所述第一接头由硅胶制成，在所述接头的一端设有供所述细胞采集管插入的孔。
[0013]在另一优选例中，所述手持管中填充有吸附材料，所述吸附材料优选为脱脂棉。
[0014]在另一优选例中，所述手持管由硬质透明材料制成。所述硬质透明材料包括但不限于玻璃、塑料等。
[0015]在另一优选例中，所述装置还包括第二接头，所述微孔过滤器和所述口吸管通过所述第二接头连接。
[0016]在另一优选例中，所述微孔过滤器的过滤面积为口吸管横截面面积的2-10倍，优选地为3-5倍。
[0017]在另一优选例中，所述微孔过滤器孔径为0.1-0.5 μ m，优选地为0.1-0.22 μ m。
[0018]在另一优选例中，所述细胞采集管为微径玻璃管。
[0019]在另一优选例中，所述微径玻璃管直径为15-50 μ m，优选地为25-45 μ m，更优选地为30 μπ?ο
[0020]在另一优选例中，所述连通管的长度为30cm-60cm，优选地为50cm。
[0021]在另一优选例中，所述连通管由柔性的材质制成，所述柔性的材质包括但不限于橡胶、PVC、聚烯烃热塑弹性体(TPE)。
【专利附图】
【附图说明】
[0022]图1是本实用新型一个较佳实施方式的结构示意图。
【具体实施方式】
[0023]下面结合具体实施例，进一步阐述本实用新型。应理解，这些实施例仅用于说明本实用新型而不用于限制本实用新型的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件。
[0024]实施例1
[0025]如图1所示，本实用新型的分离单个细胞的装置包括依次连接的细胞采集管1、手持管3、连通管4、微孔过滤器5和口吸管6 ;所述细胞采集管I被设置用于从样品中吸取单个细胞；所述手持管3被设置用于控制所述细胞采集管，通过握持手持管3控制细胞采集管的运动方向；所述微孔过滤器5被设置用于阻隔微生物。
[0026]本实施例中，细胞采集管I为内径为30 μπι的微径玻璃管。所述装置还包括第一接头2，所述细胞采集管I和所述手持管3通过所述第一接头2连接。接头2由硅胶制成，在所述接头2的一端设有供所述细胞采集管I插入的孔。该设计方便随时更换细胞采集管1，以分离不同的细胞，或处理不同的样品，而不用更换整个细胞分离装置。
[0027]在手持管3为外径为10_的中空中性玻璃管，填充有脱脂棉，可以吸取使用过程中产生的水汽，也可以吸取过量吸入的细胞培养液。
[0028]本实施例中，连通管4为50cm长的内径为8mm外径为12mm的橡胶管，一端于手持管3连接，另一端宇微孔过滤器5连接。
[0029]微孔过滤器5的孔径为0.2 μ m，可以有效的将人与细胞样品相隔离，既能有效的防止人的呼出气体对细胞样品的污染，也可以防止细胞样本可能带有的微生物对人造成感染。微孔过滤器5的过滤面积远大于口吸管横截面的面积，使得吸气更顺畅，操作更稳定。
[0030]在其它实施方式中，在微孔过滤器5和口吸管6之间设置第二连接头，在口吸管6内放入适量干净的吸水纸，以吸附呼出气体中的水蒸气，当需要更换口吸管时，可以方便地将口器管6取下更换，而不需要更换整个的分离装置。
[0031]在使用本实用新型的装置前，需要检测装置的气密性，将装置置于水中，从口吸管6吹气，观察各个连接处是否有气泡产生，如果没有气泡产生，而且只有细胞采集管I处冒气泡，说明装置气密性好，可以用于单细胞挑取实验。
[0032]使用方法:
[0033]挑取细胞之前，用细胞采集管蘸少量PBS无菌溶液，在4倍物镜下，将细胞采集管缓慢插入到细胞悬液中，显微镜观察控制，在操作过程当中，要确保细胞采集管没有吸入细胞悬液。将显微镜切换至10倍镜下，观察显微镜下的细胞采集管和细胞，将细胞采集管移至只有I个细胞的视野，然后对准细胞，轻微口吸，保证细胞进入到细胞采集管。吸取过程中保持呼吸均匀，不能用力过猛，防止吸取多个细胞。
[0034]将吸入细胞的细胞采集管移出，插入细胞培养液或者细胞裂解液，小心吹出。如果是后续培养，则将吸取的细胞置于细胞培养液中；如果是后续进行核酸或蛋白分析，则将细胞置于相应的裂解液中，立即进行细胞裂解。
[0035]本实用新型的操作简单，耗时短，成本低，具有很好的应用价值。
[0036]实施例2 —种用于后续培养的活的单个细胞的分离
[0037]取培养好的细胞悬液100 μ L,置于96孔板的一个小孔中，使用实施例1中的分离单个细胞的装置进行单细胞分离。
[0038](I)在倒置显微镜下面观察96孔板中的细胞，确定细胞挑取视野。
[0039](2)先将细胞采集管插入PBS中并迅速取出再插入PBS，由于毛细管吸附和大气压强的作用，玻璃口吸管中会自动吸入由一个气泡分隔成两段的PBS液体。
[0040](3)在4倍物镜下，将细胞采集管缓慢插入到细胞悬液中，在显微镜下观察管孔，直到能清楚地看到管孔为止，在操作过程当中，要确保细胞采集管没有吸入细胞悬液。根据目的细胞大小，将显微镜切换至10倍或20倍镜下，观察显微镜下的细胞采集管和细胞，将细胞采集管管孔移至只有I个细胞的视野，然后管孔对准细胞，轻微用口吸取，保证细胞进入到细胞采集管。吸取过程中保持呼吸均匀，不能用力过猛，防止吸取多个细胞。
[0041](4)将吸入细胞的细胞采集管移出，插入细胞培养液中，小心吹出至PBS气泡处。将吸取的细胞置于细胞培养液中进行进一步细胞培养。
【权利要求】
1.一种分离单个细胞的装置，其特征在于，所述装置包括依次连接的细胞采集管、手持管、连通管、微孔过滤器和口吸管； 其中，所述细胞采集管被设置用于从样品中吸取单个细胞； 所述手持管被设置用于控制所述细胞采集管； 所述微孔过滤器被设置用于阻隔微生物。
2.如权利要求1所述的分离单个细胞的装置，其特征在于，所述装置还包括第一接头，所述细胞采集管和所述手持管通过所述第一接头连接。
3.如权利要求1所述的分离单个细胞的装置，其特征在于，所述手持管中填充有脱脂棉。
4.如权利要求1所述的分离单个细胞的装置，其特征在于，所述手持管由硬质透明材料制成。
5.如权利要求1所述的分离单个细胞的装置，其特征在于，所述装置还包括第二接头，所述微孔过滤器和所述口吸管通过所述第二接头连接。
6.如权利要求1所述的分离单个细胞的装置，其特征在于，所述微孔过滤器的过滤面积为口吸管横截面面积的2-10倍。
7.如权利要求1所述的分离单个细胞的装置，其特征在于，所述微孔过滤器孔径为0.1-0.5 μ m。
8.如权利要求1所述的分离单个细胞的装置，其特征在于，所述细胞采集管为微径玻璃管。
9.如权利要求8所述的分离单个细胞的装置，其特征在于，所述微径玻璃管内径为25-45 μm0
10.如权利要求1所述的分离单个细胞的装置，其特征在于，所述连通管的长度为30cm_60cmo
【文档编号】C12M1/12GK204224593SQ201420693779
【公开日】2015年3月25日 申请日期:2014年11月18日 优先权日:2014年11月18日
【发明者】张桢珍, 李晶, 楼敬伟, 许骋, 吴云鸣, 易静, 丁飞飞 申请人:上海张江转化医学研发中心有限公司, 上海宝藤生物医药科技有限公司, 上海宝藤医学检验所有限公司