本发明涉及一种促生长的微生物饲料添加剂及其制备方法，属于饲料添加剂领域。
背景技术：
：饲料添加剂是指在饲料生产加工或使用过程中添加的少量或微量物质，其在饲料的用量虽少，但是作用显著。饲料添加剂是现代饲料工业必然使用的原料，其对于强化饲料的营养价值、提高动物营养性能、保证动物健康、降低饲料成本、改善畜产品品质等当面都有重要的作用。微生物饲料添加剂是一种取代或平衡动物生态系统中一种或多种菌系的微生物制品。通常其能够激发动物自身的有益菌繁殖增长，而抵制有害菌系生长。食品安全已成为一个世界性的挑战和全球重要的公共卫生问题，动物源食品的安全是全世界关注的焦点，而抗生素和化学药物残留问题是影响动物源食品安全的重要因素之一。饲用抗生素虽能预防动物下痢等疾病，促进动物生长，提高养殖业经济效益，但是动物长期、过量或违规使用饲用抗生素后，导致养殖产品药物残留，通过食物链被人体吸收产生严重不良后果，同时引起耐药菌株扩散，对动物、人和生态环境造成危害，引起动物菌群失调，抑制动物的免疫力，继发二次感染。技术实现要素：本发明的目的是提供一种促生长的微生物饲料添加剂及其制备方法，采用混合菌种进行培养得到的菌液制得，得到的饲料添加剂不仅可以促进动物生长，降低料肉比，提高动物免疫力，同时对猪链球菌病的明显的治疗效果。一种促生长的微生物饲料添加剂，制备方法为：(1)把混合菌种1接种于培养基1中进行培养，混合菌种1与培养基1的重量比例为1.2-1.8:10，调节培养基pH为6.8-7.2，培养温度为28-32℃，培养220-260h，得到菌液1；(2)把混合菌种2接种于培养基2中进行培养，混合菌种2与培养基2的重量比例为1.0-1.5:10，调节培养基pH为7.0-7.4，培养温度为26-30℃，培养180-220h，得到菌液2；(3)把混合菌种3接种于培养基3中进行培养，混合菌种3与培养基3的重量比例为1.3-1.5:10，调节培养基pH为7.2-7.4，培养温度为25-27℃，培养250-270h，得到菌液3；(4)将各个菌液分别真空干燥得到菌粉，混合，即得。混合菌种1由下列质量份数的菌种组成：枯草芽孢杆菌50-60份、嗜酸乳杆菌35-45份、地衣芽孢杆菌20-25份、酿酒酵母16-24份、两歧双歧杆菌15-20份。混合菌种2由下列质量份数的菌种组成：干酪乳杆菌42-48份、戊糖片球菌30-40份、产朊假丝酵母23-27份、沼泽红假单胞菌12-18份、青春双歧杆菌10-15份。混合菌种3由下列质量份数的菌种组成：嗜热链球菌45-55份、罗伊氏乳杆菌32-38份、动物双歧杆菌25-35份、米曲霉20-30份、迟缓芽孢杆菌16-20份。培养基1的组成成分为：玉米淀粉15-25wt％、葡萄糖5-15wt％、黄豆粉5-15wt％、蛋白胨5-15wt％、CaCl21.5-2.5wt％、CaCO33.5-4.5wt％、NaCl0.5-1.5wt％、中药提取物a0.5-1.5wt％，用余量的蒸馏水混合溶解制成。培养基2的组成成分为：葡萄糖20-30wt％、黄豆粉10-20wt％、淀粉10-20wt％、琼脂5-10wt％、Na2SO40.5-1.0wt％、柠檬酸氢二铵1.0-2.0wt％、(NH4)2SO41.0-2.0wt％、NaCl1.0-2.0wt％、MnSO40.03-0.05wt％、中药提取物b1.0-2.0wt％，用余量的蒸馏水混合溶解制成。培养基3的组成成分为：可溶性淀粉20-30wt％、黄豆粉10-20wt％、酵母膏3-5wt％、葡萄糖20-30wt％、吐温805-10wt％、K2PO40.5-1.0wt％、FeSO40.05-0.1wt％、CaCO33.0-5.0wt％、中药提取物c1.0-2.0wt％，用余量的蒸馏水混合溶解制成。中药提取物a由下列质量份数的中药制成：荷叶5-15份、枸杞子5-10份、香橼2-8份，制备方法为：把荷叶粉碎，按固液比1g：8-12ml的比例加70％乙醇70-80℃加热回流50-70min，过滤，得滤渣，把滤渣、枸杞子、香橼混合成混合药物，按固液比1g：10-14ml的比例加蒸馏水煎煮100-140min，过滤，把滤液减压浓缩至原体积的1/3，即得中药提取物a。中药提取物b由下列质量份数的中药制成：决明子12-18份、佛手7-13份、葛根5-10份，制备方法为：把决明子按固液比1g：13-17ml的比例加乙醚超声提取40-50min，过滤，得滤液，把佛手和葛根分别粉碎后加入到滤液中浸泡10-14h，过滤，把滤液减压浓缩挥干溶剂，即得中药提取物b。中药提取物c由下列质量份数的中药制成：桑叶15-20份、莱菔子11-15份、紫苏6-10份，制备方法为：把莱菔子粉碎，按固液比1g：15-17ml的比例加蒸馏水200W微波提取30-40分钟，过滤，得滤液Ⅰ，把桑叶粉碎，按固液比1g：11-13ml的比例加95％乙醇60-70℃浸提80-120min，过滤，得滤液Ⅱ，把滤液Ⅰ和Ⅱ合并，加粉碎后的紫苏，70-80℃加热回流70-90min，过滤，得滤液Ⅲ，把滤液Ⅲ减压浓缩至无醇味，即得中药提取物c。本发明的优点在于：1、采用多种混合菌种为原料，不含抗生素，安全环保。2、根据混合菌种的特性，不同的混合菌种对应不同特定的培养基，使制得的产品更高效。3、在培养基中添加中药提取物，中药提取物选用特定的中药再采用一定的提取方法，培养出得到的菌液制得的添加剂可以促进动物生长，降低料肉比，提高动物免疫力，同时对猪链球菌病的明显的治疗效果。具体实施例：实施例1：一种促生长的微生物饲料添加剂，制备方法为：(1)把混合菌种1接种于培养基1中进行培养，混合菌种1与培养基1的重量比例为1.2:10，调节培养基pH为6.8，培养温度为28℃，培养220h，得到菌液1；(2)把混合菌种2接种于培养基2中进行培养，混合菌种2与培养基2的重量比例为1.0:10，调节培养基pH为7.0，培养温度为26℃，培养180h，得到菌液2；(3)把混合菌种3接种于培养基3中进行培养，混合菌种3与培养基3的重量比例为1.3:10，调节培养基pH为7.2，培养温度为25℃，培养250h，得到菌液3；(4)将各个菌液分别真空干燥得到菌粉，混合，即得。混合菌种1由下列质量份数的菌种组成：枯草芽孢杆菌50份、嗜酸乳杆菌35份、地衣芽孢杆菌20份、酿酒酵母16份、两歧双歧杆菌15份。混合菌种2由下列质量份数的菌种组成：干酪乳杆菌42份、戊糖片球菌30份、产朊假丝酵母23份、沼泽红假单胞菌12份、青春双歧杆菌10份。混合菌种3由下列质量份数的菌种组成：嗜热链球菌45份、罗伊氏乳杆菌32份、动物双歧杆菌25份、米曲霉20份、迟缓芽孢杆菌16份。培养基1的组成成分为：玉米淀粉15wt％、葡萄糖5wt％、黄豆粉5wt％、蛋白胨5wt％、CaCl21.5wt％、CaCO33.5wt％、NaCl0.5wt％、中药提取物a0.5wt％，用余量的蒸馏水混合溶解制成。培养基2的组成成分为：葡萄糖20wt％、黄豆粉10wt％、淀粉10wt％、琼脂5wt％、Na2SO40.5wt％、柠檬酸氢二铵1.0wt％、(NH4)2SO41.0wt％、NaCl1.0wt％、MnSO40.03wt％、中药提取物b1.0wt％，用余量的蒸馏水混合溶解制成。培养基3的组成成分为：可溶性淀粉20wt％、黄豆粉10wt％、酵母膏3wt％、葡萄糖20wt％、吐温805wt％、K2PO40.5wt％、FeSO40.05wt％、CaCO33.0wt％、中药提取物c1.0wt％，用余量的蒸馏水混合溶解制成。中药提取物a由下列质量份数的中药制成：荷叶5份、枸杞子5份、香橼2份，制备方法为：把荷叶粉碎，按固液比1g：8ml的比例加70％乙醇70℃加热回流50min，过滤，得滤渣，把滤渣、枸杞子、香橼混合成混合药物，按固液比1g：10ml的比例加蒸馏水煎煮100min，过滤，把滤液减压浓缩至原体积的1/3，即得中药提取物a。中药提取物b由下列质量份数的中药制成：决明子12份、佛手7份、葛根5份，制备方法为：把决明子按固液比1g：13ml的比例加乙醚超声提取40min，过滤，得滤液，把佛手和葛根分别粉碎后加入到滤液中浸泡10h，过滤，把滤液减压浓缩挥干溶剂，即得中药提取物b。中药提取物c由下列质量份数的中药制成：桑叶15份、莱菔子11份、紫苏6份，制备方法为：把莱菔子粉碎，按固液比1g：15ml的比例加蒸馏水200W微波提取30分钟，过滤，得滤液Ⅰ，把桑叶粉碎，按固液比1g：11ml的比例加95％乙醇60℃浸提80min，过滤，得滤液Ⅱ，把滤液Ⅰ和Ⅱ合并，加粉碎后的紫苏，70℃加热回流70min，过滤，得滤液Ⅲ，把滤液Ⅲ减压浓缩至无醇味，即得中药提取物c。实施例2：一种促生长的微生物饲料添加剂，制备方法为：(1)把混合菌种1接种于培养基1中进行培养，混合菌种1与培养基1的重量比例为1.5:10，调节培养基pH为7.0，培养温度为30℃，培养240h，得到菌液1；(2)把混合菌种2接种于培养基2中进行培养，混合菌种2与培养基2的重量比例为1.2:10，调节培养基pH为7.2，培养温度为28℃，培养200h，得到菌液2；(3)把混合菌种3接种于培养基3中进行培养，混合菌种3与培养基3的重量比例为1.4:10，调节培养基pH为7.3，培养温度为26℃，培养260h，得到菌液3；(4)将各个菌液分别真空干燥得到菌粉，混合，即得。混合菌种1由下列质量份数的菌种组成：枯草芽孢杆菌55份、嗜酸乳杆菌40份、地衣芽孢杆菌22份、酿酒酵母20份、两歧双歧杆菌18份。混合菌种2由下列质量份数的菌种组成：干酪乳杆菌45份、戊糖片球菌35份、产朊假丝酵母25份、沼泽红假单胞菌15份、青春双歧杆菌12份。混合菌种3由下列质量份数的菌种组成：嗜热链球菌50份、罗伊氏乳杆菌35份、动物双歧杆菌30份、米曲霉25份、迟缓芽孢杆菌18份。培养基1的组成成分为：玉米淀粉20wt％、葡萄糖10wt％、黄豆粉10wt％、蛋白胨10wt％、CaCl22.0wt％、CaCO34.0wt％、NaCl1.0wt％、中药提取物a1.0wt％，用余量的蒸馏水混合溶解制成。培养基2的组成成分为：葡萄糖25wt％、黄豆粉15wt％、淀粉15wt％、琼脂8wt％、Na2SO40.8wt％、柠檬酸氢二铵1.5wt％、(NH4)2SO41.5wt％、NaCl1.5wt％、MnSO40.04wt％、中药提取物b1.5wt％，用余量的蒸馏水混合溶解制成。培养基3的组成成分为：可溶性淀粉25wt％、黄豆粉15wt％、酵母膏4wt％、葡萄糖25wt％、吐温808wt％、K2PO40.8wt％、FeSO40.07wt％、CaCO34.0wt％、中药提取物c1.5wt％，用余量的蒸馏水混合溶解制成。中药提取物a由下列质量份数的中药制成：荷叶10份、枸杞子7份、香橼5份，制备方法为：把荷叶粉碎，按固液比1g：10ml的比例加70％乙醇75℃加热回流60min，过滤，得滤渣，把滤渣、枸杞子、香橼混合成混合药物，按固液比1g：12ml的比例加蒸馏水煎煮120min，过滤，把滤液减压浓缩至原体积的1/3，即得中药提取物a。中药提取物b由下列质量份数的中药制成：决明子15份、佛手10份、葛根7份，制备方法为：把决明子按固液比1g：15ml的比例加乙醚超声提取45min，过滤，得滤液，把佛手和葛根分别粉碎后加入到滤液中浸泡12h，过滤，把滤液减压浓缩挥干溶剂，即得中药提取物b。中药提取物c由下列质量份数的中药制成：桑叶18份、莱菔子13份、紫苏8份，制备方法为：把莱菔子粉碎，按固液比1g：16ml的比例加蒸馏水200W微波提取35分钟，过滤，得滤液Ⅰ，把桑叶粉碎，按固液比1g：12ml的比例加95％乙醇65℃浸提100min，过滤，得滤液Ⅱ，把滤液Ⅰ和Ⅱ合并，加粉碎后的紫苏，75℃加热回流80min，过滤，得滤液Ⅲ，把滤液Ⅲ减压浓缩至无醇味，即得中药提取物c。实施例3：一种促生长的微生物饲料添加剂，制备方法为：(1)把混合菌种1接种于培养基1中进行培养，混合菌种1与培养基1的重量比例为1.8:10，调节培养基pH为7.2，培养温度为32℃，培养260h，得到菌液1；(2)把混合菌种2接种于培养基2中进行培养，混合菌种2与培养基2的重量比例为1.5:10，调节培养基pH为7.4，培养温度为30℃，培养220h，得到菌液2；(3)把混合菌种3接种于培养基3中进行培养，混合菌种3与培养基3的重量比例为1.5:10，调节培养基pH为7.4，培养温度为27℃，培养270h，得到菌液3；(4)将各个菌液分别真空干燥得到菌粉，混合，即得。混合菌种1由下列质量份数的菌种组成：枯草芽孢杆菌60份、嗜酸乳杆菌45份、地衣芽孢杆菌25份、酿酒酵母24份、两歧双歧杆菌20份。混合菌种2由下列质量份数的菌种组成：干酪乳杆菌48份、戊糖片球菌40份、产朊假丝酵母27份、沼泽红假单胞菌18份、青春双歧杆菌15份。混合菌种3由下列质量份数的菌种组成：嗜热链球菌55份、罗伊氏乳杆菌38份、动物双歧杆菌35份、米曲霉30份、迟缓芽孢杆菌20份。培养基1的组成成分为：玉米淀粉25wt％、葡萄糖15wt％、黄豆粉15wt％、蛋白胨15wt％、CaCl22.5wt％、CaCO34.5wt％、NaCl1.5wt％、中药提取物a1.5wt％，用余量的蒸馏水混合溶解制成。培养基2的组成成分为：葡萄糖30wt％、黄豆粉20wt％、淀粉20wt％、琼脂10wt％、Na2SO41.0wt％、柠檬酸氢二铵2.0wt％、(NH4)2SO42.0wt％、NaCl2.0wt％、MnSO40.05wt％、中药提取物b2.0wt％，用余量的蒸馏水混合溶解制成。培养基3的组成成分为：可溶性淀粉30wt％、黄豆粉20wt％、酵母膏5wt％、葡萄糖30wt％、吐温8010wt％、K2PO41.0wt％、FeSO40.1wt％、CaCO35.0wt％、中药提取物c2.0wt％，用余量的蒸馏水混合溶解制成。中药提取物a由下列质量份数的中药制成：荷叶15份、枸杞子10份、香橼8份，制备方法为：把荷叶粉碎，按固液比1g：12ml的比例加70％乙醇80℃加热回流70min，过滤，得滤渣，把滤渣、枸杞子、香橼混合成混合药物，按固液比1g：14ml的比例加蒸馏水煎煮140min，过滤，把滤液减压浓缩至原体积的1/3，即得中药提取物a。中药提取物b由下列质量份数的中药制成：决明子18份、佛手13份、葛根10份，制备方法为：把决明子按固液比1g：17ml的比例加乙醚超声提取50min，过滤，得滤液，把佛手和葛根分别粉碎后加入到滤液中浸泡14h，过滤，把滤液减压浓缩挥干溶剂，即得中药提取物b。中药提取物c由下列质量份数的中药制成：桑叶20份、莱菔子15份、紫苏10份，制备方法为：把莱菔子粉碎，按固液比1g：17ml的比例加蒸馏水200W微波提取40分钟，过滤，得滤液Ⅰ，把桑叶粉碎，按固液比1g：13ml的比例加95％乙醇70℃浸提120min，过滤，得滤液Ⅱ，把滤液Ⅰ和Ⅱ合并，加粉碎后的紫苏，80℃加热回流90min，过滤，得滤液Ⅲ，把滤液Ⅲ减压浓缩至无醇味，即得中药提取物c。对比例1：一种促生长的微生物饲料添加剂，制备方法为：混合菌种1由下列质量份数的菌种组成：枯草芽孢杆菌40份、嗜酸乳杆菌50份、地衣芽孢杆菌15份、酿酒酵母30份、两歧双歧杆菌12份。混合菌种2由下列质量份数的菌种组成：干酪乳杆菌50份、戊糖片球菌25份、产朊假丝酵母30份、沼泽红假单胞菌10份、青春双歧杆菌17份。混合菌种3由下列质量份数的菌种组成：嗜热链球菌40份、罗伊氏乳杆菌40份、动物双歧杆菌20份、米曲霉35份、迟缓芽孢杆菌13份。其余同实施例1。对比例2：一种促生长的微生物饲料添加剂，制备方法为：混合菌种1由下列质量份数的菌种组成：枯草芽孢杆菌55份、地衣芽孢杆菌22份、酿酒酵母20份、两歧双歧杆菌18份。混合菌种2由下列质量份数的菌种组成：干酪乳杆菌45份、戊糖片球菌35份、沼泽红假单胞菌15份、青春双歧杆菌12份。混合菌种3由下列质量份数的菌种组成：嗜热链球菌50份、罗伊氏乳杆菌35份、动物双歧杆菌30份、米曲霉25份。其余同实施例2。对比例3：一种促生长的微生物饲料添加剂，制备方法为：中药提取物a由下列质量份数的中药制成：荷叶15份、枸杞子10份，制备方法为：把荷叶粉碎，按固液比1g：12ml的比例加70％乙醇80℃加热回流70min，过滤，得滤渣，把滤渣、枸杞子混合成混合药物，按固液比1g：14ml的比例加蒸馏水煎煮140min，过滤，把滤液减压浓缩至原体积的1/3，即得中药提取物a。中药提取物b由下列质量份数的中药制成：决明子18份、桑叶13份、紫苏10份，制备方法为：把决明子按固液比1g：17ml的比例加乙醚超声提取50min，过滤，得滤液，把桑叶和紫苏分别粉碎后加入到滤液中浸泡14h，过滤，把滤液减压浓缩挥干溶剂，即得中药提取物b。中药提取物c由下列质量份数的中药制成：佛手20份、莱菔子15份、葛根10份，制备方法为：把莱菔子粉碎，按固液比1g：17ml的比例加蒸馏水200W微波提取40分钟，过滤，得滤液Ⅰ，把佛手粉碎，按固液比1g：13ml的比例加95％乙醇70℃浸提120min，过滤，得滤液Ⅱ，把滤液Ⅰ和Ⅱ合并，加粉碎后的葛根，80℃加热回流90min，过滤，得滤液Ⅲ，把滤液Ⅲ减压浓缩至无醇味，即得中药提取物c。其余同实施例3。1.本发明对生猪生长情况的影响选择养殖场体重为25kg左右的健康杜洛克猪350头，经统计分析体重差异不显著。随机分成7组，每组5个重复,每个重复10头。试验组在生猪日粮中分别添加实施例1-3和对比例1-3制得的饲料添加剂，添加剂的添加量为生猪日粮的0.2％；生猪自由采食和饮水，按常规进行免疫及驱虫，30天后结料并称重，计算平均日增重、采食量、料肉比(采食量/增重)；对照组不添加任何饲料添加剂，其他同试验组。实验结果见表1。表1本发明对生猪生长情况的影响从表1可知，本发明制得的饲料添加剂(实施例1-3)可以提高生猪的日增重、降低料肉比，而且效果明显优于对比例1(原料配比不同)和对比例2(原料少几个菌种)、对比例3(培养基中的中药提取物不同)，尤其是以实施例2的效果最优，可见菌种原料的选择、配比和培养基的中药成分均对制得的饲料添加剂的效果有影响，因此本发明采用了特定的菌种原料、原料配比、培养基的中药成分，制得的促生长的微生物饲料添加剂能促进动物生长，显著降低料肉比。2.本发明对猪链球菌病的治疗效果1)人工接种：给每头试验猪接种猪溶血性链球菌，感染剂量为每头猪腹部皮下接种含6.6亿个菌。2)给药：随机选取养猪场的体重约40kg的健康杜洛克猪210头，分成7组，每组30头，公母各半，其中6组作为试验组，在生猪日粮中分别添加实施例1-3和对比例1-3制得的饲料添加剂，添加剂的添加量为生猪日粮的0.2％，剩余1组为对照组，不添加任何饲料添加剂，其他同试验组。待生猪发病后给药，连续给药3天.3)自给药之日起，连续观察7天，观察结果见表2；4)判断标准：①有效:经用药治疗后临床症状明显减轻，精神及饮食均好转。②治愈:经用药治疗后临床症状完全消失，精神及饮食恢复正常，不再出现跛行等症状。③无效:经用药治疗后症状未消失，病情未好转或治疗期间因本病死亡。表2本发明对猪链球菌病的治疗试验结果试验组总数治愈数有效数无效数对照组300228实施例1302172实施例2302640实施例3302451实施例4302361对比例1301785对比例2301596对比例3301578从表1可知，本发明制得的饲料添加剂(实施例1-3)对猪链球菌病有明显的的治疗效果，而且疗效明显优于对比例1(原料配比不同)和对比例2(原料少几个菌种)、对比例3(培养基中的中药提取物不同)，尤其是以实施例2的效果最优，可见菌种原料的选择、配比和培养基的中药成分均对制得的饲料添加剂的效果有影响，因此本发明采用了特定的菌种原料、原料配比、培养基的中药成分，制得的促生长的微生物饲料添加剂对猪链球菌病有一定的治疗效果。3.本发明对体液免疫功能(免疫球蛋白G、A、M)的影响取健康大鼠(100～180g)70只，随机分为7组(即对照组、实施例1-3组、对比例1-3组，对照组不给药，实施例1-3组和对比例1-3组分别以0.5g/kg灌胃给实施例1-3组和对比例1-3组制得的添加剂)，每天灌胃1次，连续给药12d，待末次给药24h后，将动物用乙醚麻醉，取血、离心，取血清测血清免疫球蛋白IgG、IrA、IgM3项指标，试验数据采用SPSS13.0分析软件进行统计分析。实验结果见表3。表3本发明对体液免疫试验的结果从表1可知，本发明制得的饲料添加剂(实施例1-3)可以明显升高动物体液中免疫球蛋白G、A、M的含量，而且效果明显优于对比例1(原料配比不同)和对比例2(原料少几个菌种)、对比例3(培养基中的中药提取物不同)，尤其是以实施例2的效果最优，可见菌种原料的选择、配比和培养基的中药成分均对制得的饲料添加剂的效果有影响，因此本发明采用了特定的菌种原料、原料配比、培养基的中药成分，制得的促生长的微生物饲料添加剂能显著提高动物机体的体液免疫功能。当前第1页1 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