本发明涉及水产保鲜技术领域，具体是一种墨鱼保鲜剂及其制备方法。
背景技术：
墨鱼，是软体动物门头足纲乌贼目的动物，也是将食物的美食功能与医药保健功能结合在一起的宝物。墨鱼每百克肉含蛋白质 13 克，脂肪仅 0.7 克，还含有碳水化合物和维生素 A、B 族维生素及钙、磷、铁等人体所必需的物质。墨鱼肉中含有一种可降低胆固醇的氨基酸，可防止动脉硬化，常吃墨鱼，可提高免疫力，防止骨质疏松，缓解倦怠乏力，对食欲不振等作用显著，是一种高蛋白低脂肪滋补食品。按照中医理论，乌贼味咸、性平，入肝、肾经 ；具有养血、通经、催乳、补脾、益肾、滋阴、调经、止带之功效。
海鲜产品含有丰富的蛋白质和多种不饱和脂肪酸，水分含量高，在保存的过程中易发生脂肪氧化和微生物滋生，在一般条件下很易被腐败性微生物分解而变质。比如鳀鱼因为其体内含有活力很高的酶，在短短的几天甚至几个小时内就会因自溶而腐烂掉。近年来，我国海水养殖产业发展迅速，以鲜活销售为主的方式已经不能适应其产量快速增长的状况。利用冰藏或冻藏进行海水养殖鱼贝类的保鲜，意义重大。然而鱼贝类在低温贮藏期间仍会发生一系列的变化，这些变化严重影响着鱼贝肉的鲜度和食用品质。保鲜就是制约海鲜产业发展的主要因素之一。
目前，国内外常用的水产品保鲜技术主要有低温保鲜、化学保鲜、气调保鲜和辐照保鲜等。物理保鲜方法的成本昂贵、局限性大，随着人们环保意识的提高与保鲜技术的发展，化学保鲜的安全性也逐渐引起人们的担忧，一些以天然无毒的生物保鲜剂为原料进行的生物保鲜技术逐渐引起人们的关注，并开始应用于水产品的加工、贮藏、运输与消费过程中。天然生物保鲜剂对水产品进行保鲜可以减少化学合成杀菌剂对人类健康的不良影响，并有效防止病原菌的抗药性。被认为是食品添加剂研究领域最有前景的发展方向，是开发新型高效海鲜生物防腐保鲜剂的重要途径。
现有水产保鲜剂如授权公告号为CN102406218B的中国发明专利，公开了一种水产品保鲜剂；授权公告号为CN102972508B的中国发明专利，公开了一种应用于海洋鱼类的复合保鲜剂及其使用方法；授权公告号为CN103734274B的中国发明专利，公开了一种新型复合水产品保鲜剂及其制备方法。上述水产保鲜剂对墨鱼的保鲜效果不理想，需要一种针对墨鱼的保鲜剂。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供一种保鲜时间长，护色效果好，肉质风味不变的墨鱼专用保鲜剂及其制备方法。
本发明针对背景技术中提到的问题，采取的技术方案为：
保鲜剂成份及其重量份为：30~40 份含羞草总黄酮提取物，35~45 份密茱萸总黄酮提取物，15~35份橘子总黄酮提取物，20~35份乌梅粉，10~25份琥珀酸和0.0001~0.0003份砒霜，1~3份多元不饱和磷脂胆碱、0.1~0.5份山嵛基三甲基氯化铵和0.5~1.8份酪氨酸磷酸肽。上述保鲜剂具有明显抑制细菌生长和繁殖的能力，延缓墨鱼肉质变质腐烂的速度。经上述保鲜剂处理后的海洋鱼类表面能形成一层均匀的薄膜，具有优良的护色、保水能力，安全无毒可食用，能有效延长储藏期限。
特别地，含羞草总黄酮提取物制备步骤为：
1）预处理：将含羞草药材粉碎，过 15~25 目筛，得到含羞草粉末；
2）提取：按料液比1:30~1:40往粉末中加入60~70%含水乙醇，超声波提取，提取时间为30~35min，过滤，滤渣进行二次提取，往滤渣加入70~80%含水乙醇，超声波提取，提取时间为20~25min，提取剂含水乙醇中均溶有0.001~0.004份氯化亚铜和0.003~0.007份硫酸铁。对含羞草粉末进行两次提取，含水乙醇中加入微量氯化铜和硫酸铁可使含羞草总黄酮溶出率提高，过滤，合并两次滤液，滤液旋转蒸发得到含羞草提取物浓缩液；
3）大孔树脂吸附纯化：将得到的浓缩液通过大孔吸附树脂分离富集，依次用水、10% 含水乙醇、25% 含水乙醇、35% 含水乙醇、45% 含水乙醇、55% 含水乙醇、70% 含水乙醇进行梯度洗脱，最后用60~70% 丙酮洗脱，分别收集2~4 倍柱体积的各部位洗脱液，收集合并30% 含水乙醇、40% 含水乙醇、50% 含水乙醇、60% 含水乙醇各部位的洗脱液，将合并的洗脱液进行低温真空浓缩干燥，即得含羞草总黄酮提取物干粉。纯化得到的含羞草总黄酮提取物的纯度高，空间结构没有被破坏，活性强，具有较强的抗氧化性。
特别地，密茱萸总黄酮提取物制备步骤为：
1）将密茱萸药材粉碎打成粗粉，过20~40目筛；
2）渗漉提取：将密茱萸粗粉装入渗漉筒中，用65~75% 含水乙醇浸泡8~12 小时后，用65~75% 含水乙醇进行渗漉提取，若原料重量为1kg 则含水乙醇的用量为12 升，流速为6mL/min，收集渗漉液。密茱萸总黄酮提取物溶出率高，提取率高；
3）闪蒸浓缩：将渗漉液在水浴温度75~85℃，真空度为0.085~0.095Mpa，进液流速为240~260mL·min-1的条件下进行真空薄膜浓缩，回收乙醇。对乙醇进行回收再利用，密茱萸总黄酮结构不会被破坏，活性强；
4）大孔树脂吸附纯化：：将得到的浓缩液通过大孔吸附树脂分离富集，依次用水、10% 含水乙醇、25% 含水乙醇、35% 含水乙醇、45% 含水乙醇、55% 含水乙醇、70% 含水乙醇进行梯度洗脱，最后用65~75% 丙酮洗脱，分别收集2~4倍柱体积的各部位洗脱液，收集合并25% 含水乙醇、35% 含水乙醇、45% 含水乙醇和55% 含水乙醇各部位的洗脱液，将合并的洗脱液浓缩干燥，即得到密茱萸总黄酮提取物干粉。纯化得到的密茱萸总黄酮提取物的纯度高，空间结构没有被破坏，活性强，具有较强的抗氧化性。
与现有技术相比，本发明的优点在于：制备的保鲜剂具有明显抑制细菌生长和繁殖的能力，延缓墨鱼肉质变质腐烂的速度。经上述保鲜剂处理后的海洋鱼类表面能形成一层均匀的薄膜，具有优良的护色、保水能力，安全无毒可食用，能有效延长储藏期限；提供含羞草总黄酮提取物和密茱萸总黄酮提取物高提取率的制备方法，制备的总黄酮纯度高，活性强，抗氧化性好；上述保鲜剂的制备方法简单，适合工厂化生产，经济效益高。
具体实施例
下面通过实施例对本发明方案作进一步说明：
实施例1：
一种墨鱼保鲜剂及其制备方法，具体步骤为：
保鲜剂成份及其重量份为：30~40 份含羞草总黄酮提取物，35~45 份密茱萸总黄酮提取物，15~35份橘子总黄酮提取物，20~35份乌梅粉，10~25份琥珀酸和0.0001~0.0003份砒霜，1~3份多元不饱和磷脂胆碱、0.1~0.5份山嵛基三甲基氯化铵和0.5~1.8份酪氨酸磷酸肽。上述保鲜剂具有明显抑制细菌生长和繁殖的能力，延缓墨鱼肉质变质腐烂的速度。经上述保鲜剂处理后的海洋鱼类表面能形成一层均匀的薄膜，具有优良的护色、保水能力，安全无毒可食用，能有效延长储藏期限。
特别地，含羞草总黄酮提取物制备步骤为：
1）预处理：将含羞草药材粉碎，过 15~25 目筛，得到含羞草粉末；
2）提取：按料液比1:30~1:40往粉末中加入60~70%含水乙醇，超声波提取，提取时间为30~35min，过滤，滤渣进行二次提取，往滤渣加入70~80%含水乙醇，超声波提取，提取时间为20~25min，提取剂含水乙醇中均溶有0.001~0.004份氯化亚铜和0.003~0.007份硫酸铁。对含羞草粉末进行两次提取，含水乙醇中加入微量氯化铜和硫酸铁可使含羞草总黄酮溶出率提高，过滤，合并两次滤液，滤液旋转蒸发得到含羞草提取物浓缩液；
4）大孔树脂吸附纯化：将得到的浓缩液通过大孔吸附树脂分离富集，依次用水、10% 含水乙醇、25% 含水乙醇、35% 含水乙醇、45% 含水乙醇、55% 含水乙醇、70% 含水乙醇进行梯度洗脱，最后用60~70% 丙酮洗脱，分别收集2~4 倍柱体积的各部位洗脱液，收集合并30% 含水乙醇、40% 含水乙醇、50% 含水乙醇、60% 含水乙醇各部位的洗脱液，将合并的洗脱液进行低温真空浓缩干燥，即得含羞草总黄酮提取物干粉。纯化得到的含羞草总黄酮提取物的纯度高，空间结构没有被破坏，活性强，具有较强的抗氧化性。
特别地，密茱萸总黄酮提取物制备步骤为：
1）将密茱萸药材粉碎打成粗粉，过20~40目筛；
2）渗漉提取：将密茱萸粗粉装入渗漉筒中，用65~75% 含水乙醇浸泡8~12 小时后，用65~75% 含水乙醇进行渗漉提取，若原料重量为1kg 则含水乙醇的用量为12 升，流速为6mL/min，收集渗漉液。密茱萸总黄酮提取物溶出率高，提取率高；
3）闪蒸浓缩：将渗漉液在水浴温度75~85℃，真空度为0.085~0.095Mpa，进液流速为240~260mL·min-1的条件下进行真空薄膜浓缩，回收乙醇。对乙醇进行回收再利用，密茱萸总黄酮结构不会被破坏，活性强；
4）大孔树脂吸附纯化：：将得到的浓缩液通过大孔吸附树脂分离富集，依次用水、10% 含水乙醇、25% 含水乙醇、35% 含水乙醇、45% 含水乙醇、55% 含水乙醇、70% 含水乙醇进行梯度洗脱，最后用65~75% 丙酮洗脱，分别收集2~4倍柱体积的各部位洗脱液，收集合并25% 含水乙醇、35% 含水乙醇、45% 含水乙醇和55% 含水乙醇各部位的洗脱液，将合并的洗脱液浓缩干燥，即得到密茱萸总黄酮提取物干粉。纯化得到的密茱萸总黄酮提取物的纯度高，空间结构没有被破坏，活性强，具有较强的抗氧化性。
将墨鱼宰杀洗净，让其在配置好的保鲜剂中于3~6℃浸泡20~40min，捞出、沥干，放入包装袋中，用气体比例混合器进行混气，用气调包装机经抽真空、充气和封口进行气调包装。气调包装充入的气体由体积比的以下物质组成：CO2 为70~78%、O2 为2~15%、N2 为15~20% 。将气调包装好的海洋鱼类进行冷藏，冷藏温度为1~4℃。
实施例2：
一种墨鱼保鲜剂及其制备方法，最优选步骤为：
保鲜剂成份及其重量份为：30份含羞草总黄酮提取物，40份密茱萸总黄酮提取物，25份橘子总黄酮提取物，30份乌梅粉，15份琥珀酸和0.0001份砒霜，2份多元不饱和磷脂胆碱、0.1份山嵛基三甲基氯化铵和1.2份酪氨酸磷酸肽。上述保鲜剂具有明显抑制细菌生长和繁殖的能力，延缓墨鱼肉质变质腐烂的速度。经对比实验，多元不饱和磷脂胆碱、山嵛基三甲基氯化铵和酪氨酸磷酸肽的组合物能强化上述其他制剂，使保鲜剂处理后的海洋鱼类表面能形成一层均匀的薄膜，具有优良的护色、保水能力，安全无毒可食用，能有效延长储藏期限。
特别地，含羞草总黄酮提取物制备步骤为：
1）预处理：将含羞草药材粉碎，过 20 目筛，得到含羞草粉末；
2）提取：按料液比1:30往粉末中加入65%含水乙醇，超声波提取，提取时间为30min，过滤，滤渣进行二次提取，往滤渣加入75%含水乙醇，超声波提取，提取时间为23min，提取剂含水乙醇中均溶有0.002份氯化亚铜和0.004份硫酸铁。对含羞草粉末进行两次提取，含水乙醇中加入微量氯化铜和硫酸铁可使含羞草总黄酮溶出率提高，过滤，合并两次滤液，滤液旋转蒸发得到含羞草提取物浓缩液；
3）大孔树脂吸附纯化：将得到的浓缩液通过大孔吸附树脂分离富集，依次用水、10% 含水乙醇、25% 含水乙醇、35% 含水乙醇、45% 含水乙醇、55% 含水乙醇、70% 含水乙醇进行梯度洗脱，最后用70% 丙酮洗脱，分别收集3倍柱体积的各部位洗脱液，收集合并30% 含水乙醇、40% 含水乙醇、50% 含水乙醇、60% 含水乙醇各部位的洗脱液，将合并的洗脱液进行低温真空浓缩干燥，即得含羞草总黄酮提取物干粉。纯化得到的含羞草总黄酮提取物的纯度高，空间结构没有被破坏，活性强，具有较强的抗氧化性。
特别地，密茱萸总黄酮提取物制备步骤为：
1）将密茱萸药材粉碎打成粗粉，过30目筛；
2）渗漉提取：将密茱萸粗粉装入渗漉筒中，用70% 含水乙醇浸泡10 小时后，用70% 含水乙醇进行渗漉提取，若原料重量为1kg 则含水乙醇的用量为12 升，流速为6mL/min，收集渗漉液。密茱萸总黄酮提取物溶出率高，提取率高；
3）闪蒸浓缩：将渗漉液在水浴温度80℃，真空度为0.09Mpa，进液流速为250mL·min-1的条件下进行真空薄膜浓缩，回收乙醇。对乙醇进行回收再利用，密茱萸总黄酮结构不会被破坏，活性强；
4）大孔树脂吸附纯化：：将得到的浓缩液通过大孔吸附树脂分离富集，依次用水、10% 含水乙醇、25% 含水乙醇、35% 含水乙醇、45% 含水乙醇、55% 含水乙醇、70% 含水乙醇进行梯度洗脱，最后用70% 丙酮洗脱，分别收集3倍柱体积的各部位洗脱液，收集合并25% 含水乙醇、35% 含水乙醇、45% 含水乙醇和55% 含水乙醇各部位的洗脱液，将合并的洗脱液浓缩干燥，即得到密茱萸总黄酮提取物干粉。纯化得到的密茱萸总黄酮提取物的纯度高，空间结构没有被破坏，活性强，具有较强的抗氧化性。
将墨鱼宰杀洗净，让其在配置好的保鲜剂中于5℃浸泡30min，捞出、沥干，放入包装袋中，用气体比例混合器进行混气，用气调包装机经抽真空、充气和封口进行气调包装。气调包装充入的气体由体积比的以下物质组成：CO2 为74%、O2 为6%、N2 为16% 。将气调包装好的海洋鱼类进行冷藏，冷藏温度为2℃。
以上所述的实施例对本发明的技术方案进行了详细说明，应理解的是以上所述仅为本发明的具体实施例，并不用于限制本发明，凡在本发明的原则范围内所做的任何修改、补充或类似方式替代等，均应包含在本发明的保护范围之内。