(一)技术领域
本发明涉及一种提高竹叶抗氧化剂稳定性的方法。
(二)
背景技术：
竹叶抗氧化剂在我国已较早批准为食品添加剂，其基本成分为竹叶黄酮、内酯和酚酸。可广泛应用于多种食品抗氧化，具有来源天然、安全性高等优点。但竹叶抗氧化剂在贮存过程中稳定性尚不够高，有一定的自身被氧化现象，影响其应用价值。目前生产企业采用真空包装、避光储存等方法来减少竹叶抗氧化剂贮存过程中的自身被氧化，但效果并不理想，因而，提高竹叶抗氧化剂自身的稳定性，对其在食品加工中更好的应用，意义重大。
(三)
技术实现要素：
本发明目的是提供一种提高竹叶抗氧化剂稳定性的方法，将竹叶抗氧化剂制成环糊精包合物，减少竹叶抗氧化剂自身被氧化，提高其作为食品添加剂的稳定性，同时具有改善竹叶抗氧化剂风味的作用，使竹叶抗氧化剂能更好的应用于食品。
本发明采用的技术方案是：
本发明提供一种提高竹叶抗氧化剂稳定性的方法，所述方法为：将竹叶抗氧化剂溶于体积浓度30-50％乙醇水溶液中制成竹叶抗氧化剂溶液；再将环糊精用去离子水溶解后加入乳化剂，混匀，制成环糊精溶液；将环糊精溶液加热至30-60℃，缓慢滴加竹叶抗氧化剂溶液，滴加完毕后搅拌反应30-60min，反应液真空蒸馏去除乙醇后干燥，获得竹叶抗氧化剂环糊精包合物，实现竹叶抗氧化剂稳定性的提高；所述乳化剂为吐温80或司盘80；所述竹叶抗氧化剂与环糊精、乳化剂质量比为1:1-10：0.001-0.1；所述乙醇水溶液体积用量以竹叶抗氧化剂质量计为20-40l/kg，所述去离子水体积用量以环糊精质量计为20-50l/kg。
进一步，所述竹叶抗氧化剂中黄酮质量含量为25-40％，所述竹叶抗氧化剂为竹叶提取物，用作食品抗氧化剂，优选购自杭州众芝康菇生物技术有限公司。
进一步，所述乙醇水溶液体积用量以竹叶抗氧化剂质量计优选为20l/kg。
进一步，所述去离子水体积用量以环糊精质量计优选25l/kg。
进一步，所述竹叶抗氧化剂溶液滴加速度为1l/min。
进一步，所述反应液在0.1pa、60℃下真空蒸馏去除乙醇后在120-150℃下喷雾干燥。
进一步，所述竹叶抗氧化剂与环糊精、乳化剂质量比为1:4-7：0.002-0.005。
与现有技术相比，本发明有益效果主要体现在：
本发明所研制的竹叶抗氧化剂环糊精包合物，在抗氧化稳定性上较原料有明显提高，提高了1倍多。通过60℃的加速氧化试验，30天后，原料的自由基清除率不达包合物的一半，充分说明包合物有良好的保持竹叶抗氧化剂性能的作用。同时，竹叶抗氧化剂按本发明的方法以环糊精包合后，提高了水溶性，在纯水中可完全溶解，水溶液可达到无竹叶味，提升了其应用性能。
(四)具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明进行进一步描述，但本发明的保护范围并不仅限于此：
实施例1：
(1)称取竹叶抗氧化剂1000克(分光光度法测定其总黄酮质量含量为30％，购自西安泽朗生物科技有限公司)，溶解于20升体积浓度40％乙醇水溶液中，搅拌使其充分溶解，制成竹叶抗氧化剂溶液。称取6000克食品级环糊精(购自淄博千汇生物科技有限公司)，溶解于150升去离子水中，再称取4.0克食用级乳化剂吐温80，溶于环糊精水溶液中，在搪瓷釜中充分搅拌均匀，形成环糊精吐温80水溶液，并加热至40℃，恒温下在不断搅拌中将竹叶抗氧化剂溶液缓慢加入到环糊精吐温80水溶液中，每分钟加入1升左右，总加入时间20分钟。加入混合完毕，再保持温度继续搅拌50分钟。搅拌完毕在0.1大气压真空度下、60℃真空蒸馏回收乙醇，回收完毕，以140℃的热风温度喷雾干燥，得到竹叶抗氧化剂环糊精包合物6716g。
(2)竹叶抗氧化剂中的总黄酮的测定
以芦丁为标准品，采用分光光度法测定竹叶抗氧化剂中的总黄酮，以总黄酮的包合率表征环糊精包合的效果。检测方法如下：
1)标准曲线：芦丁标准品，纯度98.5％，购于中国药品生物制品检定所。芦丁标准溶液配制：准确称取芦丁标准品11.6mg，用体积浓度60％的乙醇水溶液溶解并定容于50ml容量瓶中，得到浓度为0.232mg·ml-1的芦丁标准溶液。
用移液管分别取芦丁标准溶液2.0，3.0，4.0，5.0，6.0，7.0，8.0ml，分别置于25ml容量瓶中，加体积浓度60％乙醇水溶液补充至10ml，分别往各瓶中加入0.7ml的质量浓度5％亚硝酸钠水溶液，摇匀放置5min，然后加入0.7ml的质量浓度10％硝酸铝水溶液，摇匀放置5min，再加入5ml的质量浓度4.3％氢氧化钠水溶液，摇匀放置5min，最后用体积浓度60％乙醇水溶液定容置25ml刻度线处，摇匀。用紫外分光光度计在510nm处测其吸光度值，以不加芦丁标准溶液为空白对照。以芦丁浓度c(mg·ml-1)为纵坐标，所测得的吸光度值(a)为横坐标，绘制标准曲线，得到芦丁的浓度c(mg·ml-1)与吸光度值a标准曲线的回归方程式为：c＝0.0935a-0.0011，r2＝0.9996，结果表明，吸光度与芦丁的浓度呈良好的线性关系。
2)样品总黄酮的检测：取0.05g样品，用体积浓度60％的乙醇水溶液溶解并定容于50ml的容量瓶中，用移液管取5.0ml置于25ml容量瓶中，根据以上标准曲线的测定方法在510nm处测其吸光度值，根据测得的吸光度值并按照回归方程计算样品中黄酮的浓度。
(3)竹叶抗氧化剂环糊精包合物总黄酮包合率的测定：
包合物表面黄酮的含量测定：准确称取0.6g竹叶抗氧化剂包合物产品，加入20ml无水乙醇，充分振荡、洗涤后，转移到50ml容量瓶中，然后用无水乙醇定容，静置，过滤，取2ml滤液按芦丁为标准品分光光度法测定滤液的吸光度，计算包合物表面黄酮的含量。
包合物产品黄酮总量的测定：准确称取0.6g竹叶抗氧化剂环糊精包合物产品，加20ml蒸馏水加热溶解后，转移到50ml容量瓶中，然后用无水乙醇定容，经超声充分振荡静置，过滤，取1ml滤液按芦丁为标准品分光光度法测定滤液的吸光度，计算包合物总黄酮的含量。
按下式计算包合物的包合率:
a(％)＝(1-b/c)×100％
式中，a为包合物的包合率(％)；b为包合物表面的黄酮质量(mg)；c为包合物中总黄酮质量(mg)。
(4)检测竹叶抗氧化剂环糊精包合物的稳定性，参照《中华人民共和国药典》2010年版加速试验方法，以竹叶抗氧化剂原料为对照，采用邻二氮菲fe2+氧化法测定竹叶抗氧化剂包合物与原料的活性自由基清除率，作为抗氧化稳定性的评价，具体方法为：将竹叶抗氧化剂粉末和竹叶抗氧化剂环糊精包合物置于(60±2)℃恒温箱中，进行抗氧化稳定性试验，每隔五天取一次样，采用邻二氮菲fe2+氧化法测定其对活性自由基的清除率。
方法操作如下：取0.2ml5×10-3mol·l-1邻二氮菲水溶液和1ml50mmol·l-1tris-hcl缓冲溶液(ph＝7.4，以去离子配制)于5ml容量瓶中，加入0.2ml7.5×10-3mol·l-1feso4水溶液，立即摇匀，加入200μl浓度为10μg/ml的样品水溶液，再加入0.2ml质量浓度l％的h2o2，用乙醇定容。充分摇匀后，置于37℃水浴中保温60min，然后以分光光度计在536nm处测其吸光度值。其清除率按下式计算：
n＝[(a2－a3)/(a1－a3)]×100％
式中：n是清除率(％)；a1是不加h2o2和样品时的吸光度；a2是加入h2o2和样品时的吸光度；a3是加入h2o2，但不加样品时的吸光度。
所得包合物经检测，总黄酮包合率达88％，经60℃恒温箱中加速氧化试验，第15天竹叶抗氧化剂环糊精包合物清除自由基率保留93％，原料清除自由基率保留78％，第20天竹叶抗氧化剂环糊精包合物清除自由基率保留86％，原料清除自由基率保留60％，第30天竹叶抗氧化剂环糊精包合物保留66％，原料清除自由基率保留31％。
称取竹叶抗氧化剂环糊精包合物1.0g，加入10ml去离子水，在室温下搅拌，可完全溶解为清澈溶液。样品溶液经品尝，与竹叶抗氧化剂的40％乙醇溶液比较，无竹叶味。
实施例2：
称取竹叶抗氧化剂1000克(分光光度法测定其总黄酮含量为25％，购自杭州众芝康菇生物技术有限公司)，溶解于40升体积浓度30％乙醇水溶液中，搅拌使其充分溶解，制成竹叶抗氧化剂溶液。称取4000克食品级环糊精(购自海盐六和淀粉化工有限公司)，溶解于180升去离子水中，再称取3.0克食用级乳化剂司盘80，溶于环糊精水溶液中，在搪瓷釜中充分搅拌均匀，形成环糊精司盘80水溶液，并加热至30℃，恒温下在不断搅拌中将竹叶抗氧化剂溶液缓慢加入到环糊精司盘80水溶液中，每分钟加入1升左右，总加入时间20分钟。加入混合完毕，再保持温度继续搅拌30分钟。搅拌完毕在0.1大气压真空度下60℃真空蒸馏回收乙醇，回收完毕，以150℃的热风温度喷雾干燥，得到竹叶抗氧化剂环糊精包合物4702g。
采用实施例1方法，所得包合物经检测，总黄酮包合率达85％，经60℃恒温箱中加速氧化试验，第15天竹叶抗氧化剂包合物清除自由基率保留91％，原料清除自由基率保留79％，第20天竹叶抗氧化剂包合物清除自由基率保留85％，原料清除自由基率保留61％，第30天竹叶抗氧化剂包合物保留65％，原料清除自由基率保留30％。
称取竹叶抗氧化剂环糊精包合物1.0g，加入10ml去离子水，在室温下搅拌，可完全溶解为清澈溶液。样品溶液经品尝，与竹叶抗氧化剂的40％乙醇溶液比较，无竹叶味。
实施例3：
称取竹叶抗氧化剂1000克(分光光度法测定其总黄酮含量为40％，购自陕西柏威生物科技有限公司)，溶解于30升体积浓度50％乙醇水溶液中，搅拌使其充分溶解，制成竹叶抗氧化剂溶液。称取7000克食品级环糊精(购自无锡市涧兴淀粉制品有限公司)，溶解于140升去离子水中，再称取5.0克食用级乳化剂吐温80，溶于环糊精水溶液中，在搪瓷釜中充分搅拌均匀，形成环糊精吐温80水溶液，并加热至60℃，恒温下在不断搅拌中将竹叶抗氧化剂溶液缓慢加入到环糊精吐温80水溶液中，每分钟加入1升左右，总加入时间20分钟。加入混合完毕，再保持温度继续搅拌60分钟。搅拌完毕在0.1大气压真空度下60℃真空蒸馏回收乙醇，回收完毕，以120℃的热风温度喷雾干燥，得到竹叶抗氧化剂环糊精包合物7708g。
采用实施例1方法，所得包合物经检测，总黄酮包合率达88％，经60℃恒温箱中加速氧化试验，第15天竹叶抗氧化剂包合物清除自由基率保留94％，原料清除自由基率保留79％，第20天竹叶抗氧化剂包合物清除自由基率保留86％，原料清除自由基率保留61％，第30天竹叶抗氧化剂包合物保留67％，原料清除自由基率保留31％。
称取竹叶抗氧化剂环糊精包合物1.0g，加入10ml去离子水，在室温下搅拌，可完全溶解为清澈溶液。样品溶液经品尝，与竹叶抗氧化剂的40％乙醇溶液比较，无竹叶味。
实施例4：
称取竹叶抗氧化剂1000克(分光光度法测定其总黄酮含量为30％，购自陕西康跃生物科技有限公司)，溶解于30升体积浓度50％乙醇水溶液中，搅拌使其充分溶解，制成竹叶抗氧化剂水溶液。称取5000克食品级环糊精(购自无锡市涧兴淀粉制品有限公司)，溶解于160升去离子水中，再称取2.0克食用级乳化剂吐温80，溶于环糊精水溶液中，在搪瓷釜中充分搅拌均匀，形成环糊精吐温80水溶液，并加热至50℃，恒温下在不断搅拌中将竹叶抗氧化剂溶液缓慢加入到环糊精吐温80水溶液中，每分钟加入1升左右，总加入时间20分钟。加入混合完毕，再保持温度继续搅拌40分钟。搅拌完毕在0.1大气压真空度下60℃真空蒸馏回收乙醇，回收完毕，以130℃的热风温度喷雾干燥，得到竹叶抗氧化剂环糊精包合物5705g。
采用实施例1方法，所得包合物经检测，总黄酮包合率达87％，经60℃恒温箱中加速氧化试验，第15天竹叶抗氧化剂包合物清除自由基率保留93％，原料清除自由基率保留79％，第20天竹叶抗氧化剂包合物清除自由基率保留85％，原料清除自由基率保留60％，第30天竹叶抗氧化剂包合物保留65％，原料清除自由基率保留30％。
称取竹叶抗氧化剂环糊精包合物1.0g，加入10ml去离子水，在室温下搅拌，可完全溶解为清澈溶液。样品溶液经品尝，与竹叶抗氧化剂的40％乙醇溶液比较，无竹叶味。