本发明属于功能食品
技术领域：
。更具体地，涉及一种具有抗氧化作用的海参固体饮料及其制备方法。
背景技术：
：人体细胞在正常的新陈代谢过程中会产生活性氧簇产物(ros)，这类产物包括超氧离子、羟基自由基、过氧化氢。其中一些产物，如超氧离子和羟基自由基，属于不稳定的产物，而过氧化氢则相对稳定且容易扩散。人体中同时还存在抗氧化系统，包括超氧化物歧化酶(sod)、过氧化氢酶和谷胱甘肽酶等。除此之外，人体还含有一些具有抗氧化作用的小分子产物，如谷胱甘肽等。正常情况下，人体中的抗氧化系统和氧化系统处于平衡的状态，细胞新陈代谢中产生的氧化产物不会对细胞造成伤害。一旦氧化产物堆积过多，打破了抗氧化系统和氧化系统的平衡状态(即产生了氧化应激)，则会影响人体细胞正常的生理活动，如细胞传导、基因表达、细胞凋亡等，最后导致疾病和衰老的产生。venussosaa等人指出神经退行性疾病(如老年痴呆、帕金森疾病)、糖尿病、心血管疾病、免疫系统疾病、衰老和癌症的产生都与氧化应激有着密切的联系。海参是以海底藻类和浮游生物为食的棘皮类动物，在中国主要分布在南海、黄海及渤海等海域，具有高蛋白、低脂肪的特点，自古以来被人们视作一种营养滋补品。海参的可食部位主要是体壁，其消化道等内脏(含有丰富的海洋活性物质)通常被作为废弃物丢掉，造成了极大的浪费。海参的主要营养成分包括多糖、皂苷、脑苷脂、神经节脂、蛋白质等，大量研究表明海参具有抗氧化活性。如王静等人利用海参的自溶得到能够清除活性氧簇的抗氧化肽；李学鹏等人研究表明海参的酶解液具有良好的抗氧化作用；杨涛等人利用碱性蛋白酶对海参内脏进行酶解，得到具有良好作用的抗氧化活性肽。中国专利201210534393.5中公开了一种以海参为原料，枸杞、香菇为辅料制备的具有增强免疫力、增强人体抗病能力的泡腾片。一方面原料较多，还加有香精，另一方面，其制备工艺会造成抗氧化活性和营养成分的损失。另外，目前海参被捕捞上岸后，主要的处理方式有烘干、熏干、日光照射。通常，渔民在捕捞海参后采用自然日光照射的方式对海参进行干燥，然而这种方法很难保证海参的清洁卫生状况。烘干、熏干不能保证海参的营养成分、口感、颜色等。技术实现要素：本发明要解决的技术问题是克服现有海参利用技术的缺陷和不足，提供一种具有抗氧化功效的海参固体饮料的制备方法，不仅能更好的利用海参的营养价值，还能利用蓝莓与其复配实现协同增效的作用，增强其抗氧化活性以及口感等。本发明的目的是提供一种具有抗氧化作用的海参固体饮料及其制备方法。本发明另一目的是提供该方法制备得到的具有抗氧化作用的海参固体饮料。本发明上述目的通过以下技术方案实现：一种具有抗氧化作用的海参固体饮料的制备方法，将海参加工成粉末，加入蒸馏水和碱性蛋白酶进行第一次酶解；然后加入蓝莓匀浆液和胃蛋白酶进行第二次酶解，除杂后浓缩、冷冻干燥，即得到海参固体饮料粉末。优选地，海参和蓝莓的重量比为10～30：100。更优选地，海参和蓝莓的重量比为20：100。具体地，所述具有抗氧化作用的海参固体饮料的制备方法，包括如下步骤：s1.海参原料制备：迅速用清水将新鲜捕捞的海参洗净，冷冻干燥；s2.第一次酶解：将冻干的海参粉碎至粉末状得海参粉末，加入蒸馏水混匀，调节ph至8～10，加入碱性蛋白酶进行第一次酶解，然后95℃灭酶20min，冷却至室温，得到第一酶解液；s3.蓝莓原料准备：将新鲜的蓝莓清洗干净，匀浆得到蓝莓匀浆液；s4.第二次酶解：将蓝莓匀浆液加入到步骤s1的第一酶解液中，调节ph至1～5，加入胃蛋白酶进行第二次酶解，然后95℃灭酶20min，得到第二酶解液；s5.去除杂质：将步骤s4的第二酶解液离心去除不溶固体杂质，取上清液；s6.浓缩及干燥：对步骤s5的上清液浓缩，浓缩液冷冻，待浓缩液凝结后进行干燥，得到的干燥粉末即是海参固体饮料。其中，优选地，步骤s1所述冷冻干燥是置于冷冻干燥机中进行冷冻干燥。优选地，步骤s2中海参粉末和蒸馏水的料液比为1：3～1：6w/v。优选地，步骤s2中碱性蛋白酶的用量为：海参量的3～7％。优选地，步骤s2所述第一次酶解的酶解温度为40～60℃。优选地，步骤s2所述第一次酶解的酶解时间2～6小时。优选地，步骤s3中蓝莓占海参重量的10～30％。更优选地，步骤s3中蓝莓占海参重量的20％。优选地，步骤s4中胃蛋白酶的用量为：海参量的3～7％。优选地，步骤s4所述第二次酶解的酶解温度30～60℃。优选地，步骤s4所述第二次酶解的酶解时间2～6小时。优选地，步骤s5所述离心的条件为4000～6000r/min。更优选地，步骤s5所述离心的条件为5000r/min。优选地，步骤s6所述冷藏是-80℃条件下冷藏。另外，上述方法制备得到的具有抗氧化作用的海参固体饮料，也在本发明的保护范围之内。蓝莓是世界粮农组织推荐的世界五大健康水果之一，含有丰富的花青素、多酚化合物以及维生素c等，食用蓝莓能显著提高血清的抗氧化能力，降低许多慢性疾病的风险。本发明研究发现，在海参的制备工艺过程中，适当的加入蓝莓进行复配，能够起到显著的协同增效作用，不仅可以增强海参固体饮料的抗氧化活性，还能改善海参固体饮料的口感风味。本发明具有以下有益效果：本发明采用的冷冻干燥技术对捕捞后的新鲜海参进行冷冻干燥，而不是常用的日光照射干燥或烘干熏干手段，极大限度的保留了海参的营养成分，且卫生条件能够得到保证。本发明利用碱性蛋白酶和胃蛋白酶对海参粉末进行酶解，不仅可以得到具有抗氧化作用的海参活肽，使海参的营养价值充分的释放，还能充分的利用海参的内脏等部分，不会造成浪费。另外，本发明将蓝莓提取物制备和海参的第二步酶解结合起来，优化了工艺。蓝莓提取物含有的多酚化合物、虾青素以及维生素c都具有良好的抗氧化活性，该工艺的改进不仅可以增强海参固体饮料的抗氧化活性，还能改善海参固体饮料的口感风味。具体实施方式以下结合具体实施例来进一步说明本发明，但实施例并不对本发明做任何形式的限定。除非特别说明，本发明采用的试剂、方法和设备为本
技术领域：
常规试剂、方法和设备。除非特别说明，以下实施例所用试剂和材料均为市购。实施例1制备海参固体饮料1、海参原料制备：迅速用清水将新鲜捕捞的南海海参洗净，置于冷冻干燥机中，冷冻干燥，冻干后得到海参原料。2、第一次酶解：将冻干的海参粉碎至粉末状，按料液比1：3w/v加入蒸馏水，混匀，调节温度至40℃，调节ph至8，加入碱性蛋白酶进行第一步酶解，酶解时间2小时；然后调节温度至95℃灭酶，灭酶时间20min，冷却到室温，得到第一酶解液。3、蓝莓原料准备：将新鲜的蓝莓(约占海参重量的20％)清洗干净，匀浆，得到蓝莓匀浆液。4、第二次酶解：将蓝莓匀浆液加入到步骤(1)得到的第一酶解液中，调节ph至1，加入胃蛋白酶，调节温度至30℃，酶解时间2小时；然后调节温度至95℃灭酶，灭酶时间20min，得到第二酶解液。5、去除杂质：将步骤(4)得到的第二酶解液在5000r/min的条件下离心，去除不溶固体杂质，取上清液待用。6、浓缩及干燥：利用旋转蒸发仪对步骤(5)的上清液进行浓缩，浓缩液体于-80℃条件下冷藏，待浓缩液凝结后放入冷冻干燥机进行干燥，得到的干燥粉末即是海参固体饮料。实施例2制备海参固体饮料1、海参原料制备：迅速用清水将新鲜捕捞的辽宁海参洗净，置于冷冻干燥机中，冷冻干燥，冻干后得到海参原料。2、第一次酶解：将冻干的海参粉碎至粉末状，按料液比为1：6w/v加入蒸馏水，混匀，调节温度至60℃，调节ph至10，加入碱性蛋白酶进行第一步酶解，酶解时间6小时；然后调节温度至95℃灭酶，灭酶时间20min，冷却到室温，得到第一酶解液。3、蓝莓原料准备：将新鲜的蓝莓(约占海参重量的20％)清洗干净，匀浆，蓝莓匀浆液。4、第二次酶解：将蓝莓匀浆液加入到步骤(1)得到的第一酶解液中，调节ph至5，加入胃蛋白酶，调节温度至60℃，酶解时间6小时；然后调节温度至95℃灭酶，灭酶时间20min，得到第二酶解液。5、去除杂质：将步骤(4)得到的第二酶解液在5000r/min的条件下离心，去除不溶固体杂质，取上清液待用。6、浓缩及干燥：利用旋转蒸发仪对步骤(5)的上清液进行浓缩，浓缩液体于-80℃条件下冷藏，待浓缩液凝结后放入冷冻干燥机进行干燥，得到的干燥粉末即是海参固体饮料。实施例3制备海参固体饮料1、海参原料制备：迅速用清水将新鲜捕捞的南海海参洗净，置于冷冻干燥机中，冷冻干燥，冻干后得到海参原料。2、第一次酶解：将冻干的海参粉碎至粉末状，按料液比为1：3w/v加入蒸馏水，混匀，调节温度至50℃，调节ph至9，加入碱性蛋白酶进行第一步酶解，酶解时间4小时；然后调节温度至95℃灭酶，灭酶时间20min，冷却到室温，得到第一酶解液。3、蓝莓原料准备：将新鲜的蓝莓(约占海参重量的20％)清洗干净，匀浆，蓝莓匀浆液。4、第二次酶解：将蓝莓匀浆液加入到步骤(1)得到的第一酶解液中，调节ph至3，加入胃蛋白酶，调节温度至40℃，酶解时间4小时；然后调节温度至95℃灭酶，灭酶时间20min，得到第二酶解液。5、去除杂质：将步骤(4)得到的第二酶解液在5000r/min的条件下离心，去除不溶固体杂质，取上清液待用。6、浓缩及干燥：利用旋转蒸发仪对步骤(5)的上清液进行浓缩，浓缩液体于-80℃条件下冷藏，待浓缩液凝结后放入冷冻干燥机进行干燥，得到的干燥粉末即是海参固体饮料。实施例4制备海参固体饮料1、海参原料制备：迅速用清水将新鲜捕捞的南海海参洗净，置于冷冻干燥机中，冷冻干燥，冻干后得到海参原料。2、第一次酶解：将冻干的海参粉碎至粉末状，按料液比为1：3w/v加入蒸馏水，混匀，调节温度至40℃，调节ph至8，加入碱性蛋白酶进行第一步酶解，酶解时间2小时；然后调节温度至95℃灭酶，灭酶时间20min，冷却到室温，得到第一酶解液。3、蓝莓原料准备：将新鲜的蓝莓(约占海参重量的20％)清洗干净，匀浆，蓝莓匀浆液。4、第二次酶解：将蓝莓匀浆液加入到步骤(1)得到的第一酶解液中，调节ph至2，加入胃蛋白酶，调节温度至60℃，酶解时间6小时；然后调节温度至95℃灭酶，灭酶时间20min，得到第二酶解液。5、去除杂质：将步骤(4)得到的第二酶解液在5000r/min的条件下离心，去除不溶固体杂质，取上清液待用。6、浓缩及干燥：利用旋转蒸发仪对步骤(5)的上清液进行浓缩，浓缩液体于-80℃条件下冷藏，待浓缩液凝结后放入冷冻干燥机进行干燥，得到的干燥粉末即是海参固体饮料。实施例5海参固体饮料的抗氧化活性测试本实施例通过动物实验测试证明上述实施例1～4制备的海参固体饮料的抗氧化活性效果。1、实验动物：健康合格的昆明小鼠40只(20～22g)，雌雄各半。2、实验方法：将40只昆明小鼠随机分为4组：第一组不做处理，剩余三组小鼠每日皮下注射d-半乳糖(200mg/kg.bw剂量)，连续6周。同时，第一组和第二组小鼠每日灌胃生理盐水(200mg/kg.bw)，第三组小鼠每日灌胃海参酶解提取物，第四组小鼠灌胃本专利方法制备的海参蓝莓复合提取物，连续6周。灌胃实验后，取血清待测。采用sod、mda试剂盒测量血清的sod酶活力和mda产物的含量。实验数据采用平均值±标准差(x±s)表示，以p<0.05为差异有显著意义。3、实验结果如表1所示，与正常组小鼠相比，皮下注射d-半乳糖后小鼠体内的sod酶活力显著下降(p<0.01)，氧化产物mda增加(p<0.05)，表明d-半乳糖诱导了小鼠体内产生氧化应激反应；第三组小鼠体内sod活力显著高于第二组小鼠(p<0.01)，mda含量显著低于第一组和第二组(分别p<0.05，p<0.01)；第四组小鼠体内sod活力显著高于第一组和第二组(分别p<0.05，p<0.01)，mda含量显著低于第一组和第二组(分别p<0.01，p<0.01)。实验结果表明，d-半乳糖诱导了昆明小鼠产生氧化应激反应，体内sod酶活力显著下降，mda含量增加；海参提取物能够缓解d-半乳糖诱导的氧化应激，具有抗氧化作用，而本专利制备的海参提取物具有更强的抗氧化作用，表明在提取海参活性物质的过程中加入蓝莓起到了协同增效的作用，极大的增强了海参提取物的抗氧化作用。表1海参提取物对小鼠血清sod酶活力和mda含量的影响组别sod活力(u/mg)mda含量(nmol/ml)第一组225.16±16.135.45±1.53第二组156.42±25.65**7.89±4.21**第三组234.21±29.98##5.05±2.45*##第四组269.48±22.85*##4.35±2.89**##注：与第一组相比：*p<0.05；**p<0.01。与第二组相比：#p<0.05；##p<0.05.实施例6单酶法/双酶法筛选实验以海参蛋白水解度为指标确定最佳酶解条件，采用甲醛滴定法测定水解度。1、实验方法取冷冻干燥海参粉末100g，料液比1:4，ph值8，温度50℃，按表2条件分别采用单酶法和双酶法进行酶解；酶解后，分别取这3组酶解产物2ml，利用甲醛滴定法测定水解度。2、实验结果实验结果表明单独采用碱性蛋白酶的水解度为26.91％，单独采用胃蛋白酶酶解的水解度为23.52％，采用双酶法酶解的水解度为46.19％。可以看出，双酶法的酶解效率要显著高于单酶法方法，因此本专利采用双酶法进行酶解。表2酶解条件当前第1页12