结晶和无定形莫匹罗星钙的制备方法

专利名称：结晶和无定形莫匹罗星钙的制备方法
技术领域：
本发明涉及抗生素假单胞菌酸A(Pseudomonic acid A)的固态化学。优选本发明涉及制备结晶和无定形形式莫匹罗星钙的方法。
背景技术：
假单胞菌酸A为一种主要对革兰氏阳性菌(如金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、酿脓链球菌(Streptococcus pyogenes)、肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae)、肺炎克氏杆菌(Klebsiellapneumoniae))和一些革兰氏阴性菌(如流感嗜血杆菌(Haemophilusinfluenzae)、淋病奈瑟氏球菌(Neisseria gonorrhoeae))具有生长抑制作用的抗生素[A.Ward，D.M.Campoli-Richards，Drugs 32，425-444(1986)]且它的最小抑制浓度处于0.02-0.5mg/dm3范围内。通过抑制异亮氨酸-tRNA合酶，假单胞菌酸A影响病原菌的肽合成[J.Hughes和G.Mellows，Biochem.J.191，209-219(1980)]。该抗生素的一个有利特征是它对人和动物具有非常低的毒性且其在埃姆斯(Ames)试验中为阴性。目前假单胞菌酸A以多种制剂用于人的治疗，以治疗皮肤感染(例如脓疱病、脓皮病)、鼻和外耳感染、痤疮、烧伤、湿疹、牛皮癣、在溃疡情况中用于治疗二次感染，和用于预防医院感染。
假单胞菌酸A的化学结构如由式(I)的描述，为9-{4[5S(2S，3S-环氧-5S-羟基-4S-甲基己基)-3R，4R-二羟基-四氢吡喃-2S-基]-3-甲基丁-2(E)-烯酰氧基}壬酸[E.B.Chain和G.Mellows，J.C.S.Chem.Comm.847-848(1974)；R.G.Alexander，J.P.Clayton，K.Luk，N.H.Rogers，T.J.King，J.C.S.Perkin I.561-565(1978)] 已知荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens)能够产生假单胞菌酸A。按英国专利1,395,907号，荧光假单胞菌NCIB 10586菌株能够生物合成由假单胞菌酸A和它的在C2和C3碳原子之间的双键处于顺式位置的异构体和假单胞菌酸B组成的假单胞菌酸复合体。成分比例为4.5∶4.5∶1。然而，按照日本专利申请52-70083号，荧光假单胞菌Y-11633菌株能够生物合成由以9∶0.5∶0.5的比例存在的假单胞菌酸A、假单胞菌酸B和另外两种具有未知结构的成分组成的假单胞菌酸复合体。
莫匹罗星钙是源自假单胞菌酸的抗生素，目前在美国市场上以Bactroban的商标销售。Bactroban被推荐用于治疗由金黄色葡萄球菌和酿脓链球菌菌株导致的二次感染的创伤性皮肤病变。Bactroban一般作为乳膏剂或鼻软膏剂出售并且具有2％的等价钙盐浓度。根据Bactroban的制造商所述，莫匹罗星钙可以500mg的剂量经口给药，以250mg的剂量经静脉给药，同时没有任何较大的负作用。
莫匹罗星钙抗革兰氏阳性细菌特别有效，但是也可用于抗革兰氏阴性细菌。它可通过不可逆地与细菌的异亮氨酰-tRNA合成酶结合来抑制细菌蛋白合成。
在各种专利中公开了假单胞菌酸钙盐(“莫匹罗星钙”)。英国专利号1,577,545和1,577,730公开了莫匹罗星钙在治疗疾病中的用途，其内容通过引用结合到本文中。其中1,577,545号专利涉及用莫匹罗星钙盐治疗和预防猪痢疾，而1,577,730号专利涉及用莫匹罗星钙盐治疗非人类哺乳动物的呼吸性疾病、性病和由支原体引发的疾病。公开的内容更多集中在莫匹罗星的药效而不是其合成。
美国专利号4,879,287涉及用于局部给药的莫匹罗星钙药物组合物，该组合物包括水合的结晶钙盐和皮质类固醇。该287号专利公开了结晶莫匹罗星钙的各种制剂，其内容通过引用结合到本文中。
美国专利号5,596,672、5,436,266、5,191,093和4,916,155(Baker等)都为同族专利，它们公开了结晶莫匹罗星钙盐，并且要求保护其组合物、制备和给药方法。这些专利均通过引用结合到本文中。其中672号专利涉及用结晶莫匹罗钙或其水合物治疗细菌性感染的方法；266号专利涉及用结晶莫匹罗钙的水解；155号专利涉及无水莫匹罗钙晶体；093号专利涉及通过“使假单胞菌酸根离子溶液与钙离子溶液在含水溶剂中反应，从所述溶液中回收结晶假单胞菌酸钙水合物，然后任选除去结晶水”来制备莫匹罗星钙或其水合物的方法。
Baker等的专利公开了通过从含有50％甲醇的水溶液中结晶，随后在无水乙醚中研磨来制备无定形形式的莫匹罗星钙。在所述专利中获得的无定形莫匹罗星钙显示出70-76℃的较低熔点、较低的含量(89.9％)(以纯的游离假单胞菌酸的百分比表示)以及在高温下迅速分解(093号专利第8和9栏的图表及相关专利)。Baker等的专利公开“已经发现这种盐的易分离的无定形形式为能少量溶于水的物质，具有低熔点和差的热稳定性”(第1栏，第31-33行)。
美国专利号4,639,534公开了从培养液中分离出假单胞菌酸的过程中，以锂盐作为中间体。该534号专利公开了提取培养液，从而获得莫匹罗星锂并且将所述盐水解以获得假单胞菌酸。
本领域存在对用新方法制备莫匹罗星钙二水合物的需求。特别优选不使用共溶剂的方法，因为除去共溶剂是烦锁的步骤并且可导致产品变质。本领域也存在对更纯和更稳定形式的无定形莫匹罗星钙的制备方法的需求。
发明概述一方面，本发明提供了一种制备结晶莫匹罗星钙水合物或其无水化合物的方法，所述方法包括以下步骤制备假单胞菌酸在与水不混溶的溶剂中的溶液，将所述溶液与C2至C12有机羧酸钙在含水溶剂中的溶液或悬浮液合并，从而形成水相和非水相，其中莫匹罗星钙二水合物从水相中沉淀出来，分离所述沉淀并且任选将所述二水合物转变成无水化合物。优选所述水性悬浮液或溶液为不含共溶剂的水或者水与C1至C4醇的混合物。优选的有机羧酸盐为乙酸盐、丙酸盐和己酸盐，更优选为烷基取代的己酸盐，例如2-乙基-己酸盐。
另一方面，本发明提供了一种制备结晶莫匹罗星钙水合物或其无水化合物的方法，所述方法包括以下步骤将假单胞菌酸和C2至C12有机羧酸钙加到含水溶剂中以形成溶液，其中形成了C2至C12有机羧酸，将所述羧酸除去，从含水溶剂中分离出莫匹罗星钙二水合物沉淀，并且任选将所述二水合物转变成无水化合物。优选所述溶剂为水与C1至C4醇的混合物，其中在沉淀步骤之前增加混合物的水含量。优选通过萃取除去所述羧酸。
另一方面，本发明提供了一种制备结晶莫匹罗星钙二水合物或其无水化合物的方法，所述方法包括以下步骤将假单胞菌酸和氧化钙加到不含共溶剂的水中以形成溶液，其中莫匹罗星钙二水合物从所述溶液中沉淀出来，分离出所述莫匹罗星钙二水合物并且任选将所述二水合物转变成无水化合物。
另一方面，本发明提供了一种制备无定形莫匹罗星钙的方法，所述方法包括以下步骤将假单胞菌酸、碱和钙离子源加到C1至C4醇中以形成溶液并且除去所述醇。优选所述醇基本上无水，更优选含有少于大约1％体积的水含量，并且选自甲醇和乙醇。优选所述醇通过蒸发除去。
另一方面，本发明提供了一种制备无定形莫匹罗星钙的方法，所述方法包括以下步骤将假单胞菌酸、碱和钙离子源加到C1至C4醇中以形成溶液，将所述溶液与反溶剂合并以沉淀出无定形莫匹罗星钙，并且分离所述沉淀。优选所述醇含有少于大约1％体积的水含量并且为乙醇或甲醇。所述反溶剂优选为酯和醚，例如甲基-叔丁基醚、二异丙醚和醋酸异丁酯。优选将所述溶液加到反溶剂中。
另一方面，本发明提供了一种制备无定形莫匹罗星钙的方法，所述方法包括以下步骤将假单胞菌酸、碱和钙离子源加到选自水、C1至C4醇及其混合物的溶剂中以形成溶液，并且将所述溶液冷冻干燥。所述醇优选为甲醇。
另一方面，本发明提供了一种制备结晶莫匹罗星钙二水合物或其无水化合物的方法，所述方法包括以下步骤将假单胞菌酸溶于与水不混溶的溶剂中以形成溶液，将所述溶液与碱和钙离子源在含水溶剂中的溶液或悬浮液合并，从而形成水相和非水相，其中莫匹罗星钙二水合物从所述水相中沉淀出来，分离所述二水合物并且任选将所述二水合物转变成无水化合物。优选所述与水不混溶的溶剂选自酯和酮，例如醋酸异丁酯和异丁基甲基酮。
另一方面，本发明提供了一种制备无定形莫匹罗星钙的方法，所述方法包括以下步骤使假单胞菌酸根离子和钙离子在C1至C4的醇溶液中反应并且蒸发所述醇。
另一方面，本发明提供了一种制备无定形莫匹罗星钙的方法，所述方法包括以下步骤使假单胞菌酸根离子和钙离子在C1至C4的醇溶液中反应，将所述溶液加到作为反溶剂的酯或醚中以沉淀出无定形莫匹罗星钙并且分离所述沉淀。
另一方面，本发明提供了一种制备无定形莫匹罗星钙的方法，所述方法包括以下步骤使假单胞菌酸根离子和钙离子在水或水与C1至C4醇的混合物的溶液中反应，并且冷冻干燥所述溶液。
另一方面，本发明提供了一种制备结晶莫匹罗星钙二水合物或其无水化合物的方法，所述方法包括以下步骤提供假单胞菌酸和C2至C8有机羧酸钙，使假单胞菌酸的酸质子与C2至C8有机羧酸盐的钙离子交换，回收莫匹罗星钙二水合物并且任选将所述二水合物转变成无水化合物。
制备无定形和二水合物形式的莫匹罗星钙的方法可合并首先制备无定形形式，然后从所述无定形形式得到二水合物。如果有必要，可任选将所述二水合物脱溶剂以获得无水形式。
本发明提供了无定形莫匹罗星钙药物组合物以及它们在预防或治疗感染中的用途。
附图概述

图1为实施例6的产物的粉末X-射线衍射(″PXRD″)图。
图2为实施例9的产物的PXRD图。
图3为实施例10的产物的PXRD图。
图4为实施例15的产物的PXRD图。
图5为实施例16的产物的PXRD图。
图6为无定形莫匹罗星钙的PXRD图。
图7为无定形莫匹罗星钙的差示扫描量热法(″DSC″)的差示热分析图。
图8为无定形莫匹罗星钙的傅立叶转换红外光谱(″FTIR″)。
图9为由先有技术的方法制备的无定形莫匹罗星钙的热稳定性数据。
图10为由先有技术的方法制备的无定形莫匹罗星钙的热稳定性数据。
图11举例说明了莫匹罗星的各种杂质以及它们在本发明和欧洲药典(“EP”)中所指的物质。
本发明的详细描述术语“假单胞菌酸根”指通过从假单胞菌酸的羧酸基团除去氢后获得的离子。假单胞菌酸钙与莫匹罗星钙同义。
在本文中使用的术语“共溶剂”指与第一种溶剂联合使用的第二种溶剂，其使用量可提供所需的溶解度性能。杂质和痕量溶剂不是共溶剂。因此，不含共溶剂的水可包括少量其它溶剂。
在本文中使用的术语“含量测定”指按照欧洲药典(“EP”)确定纯度/物质的存在量。参见EUROPEAN PHARMACOPOEIA，第四版，第1602-1604页，2001年由Council of Europe在Strasbourg制定。可用高压液相色谱(″HPLC″)进行含量测定。
Baker等测定的是假单胞菌酸的含量。如表-1所示，本发明的含量测定则用不同的形式表示。
表1-Baker等公开的测定含量的换算
*以纯的游离假单胞菌酸的百分比表示。
**以莫匹罗星钙的百分比表示。
***以无水莫匹罗星钙的百分比表示关于无定形莫匹罗星钙，本发明的测定含量可通过乘上因子0.9637而转换成Baker等表示的含量。这个Baker等的89.9％的含量与由本发明方法计算的93.29％测定含量对应。
关于莫匹罗星钙二水合物，Baker等的92.1％的含量与由本发明表示的98.88％测定含量对应。
在本文中使用的术语“总杂质含量”指欧洲药典描述的杂质峰下的所有面积总和。“总杂质含量”可由另一种HPLC法确定，与所述测定含量的方法不同。
以下假设进一步解释测定含量和杂质之间的关系。例如，假设提供的药物组分的化学纯度为99％(+1％的杂质)。在最终干燥后，测定水分含量为3％(KF法)。含量测定分析应为96％。这得到的就是“纯含量”。如果将水分包含在内计算的待干燥含量(或者简称为“测定含量”)，其结果应为99％。
本发明提供高纯度无定形形式的莫匹罗星钙。通过图6提供的样品的粉末X-射线衍射图确定我们制备的材料的非晶体特征和纯度。所述X-射线衍射图没有采用强聚焦反射(intense focusedreflections)。
由本发明制备的无定形莫匹罗星钙也可通过图7描述的DSC差示热分析图表征。所述DSC差示热分析图没有显示任何可辨别的吸热和放热。所述FTIR光谱(图8)显示了与先有技术的无定形莫匹罗星相同的峰。
本发明可提供熔点为大约76℃至大约89℃，更优选大约85℃至大约89℃的无定形莫匹罗星钙。无定形莫匹罗星钙的熔点高证明产物的纯度高。
本发明提供具有高热稳定性的无定形莫匹罗星钙。热稳定性定义为在贮存期间、尤其收在贮存期间的光照条件下的抗化学降解能力。无定形莫匹罗星钙的纯度和熔点越高，其在储存期间越不易被化学降解。
如表2所示，在大约25℃和大约28℃下储存2个月之后，由本发明方法确定的无定形莫匹罗星钙的测定含量为大约96％。另外，在2个月之后的杂质总含量几乎固定为大约3％不变。
表2a-由实施例17的方法制备的一批1Kg的无定形莫匹罗星钙的热稳定性。
表2b-由实施例17的方法制备的一批1Kg的无定形莫匹罗星钙的热稳定性。
表2c-由实施例17的方法制备的一批187.2g的无定形莫匹罗星钙的热稳定性。
表2d-由实施例17的方法制备的一批187.2g的无定形莫匹罗星钙的热稳定性。
由Baker等的方法制备的无定形莫匹罗星钙的热稳定性显示更易变坏。图9和10证明用Baker等的方法制得的无定形莫匹罗星钙在贮存2个月之后，其杂质总量大于大约3.5％(非含量测定方法)，然而根据本发明方法制备的无定形莫匹罗星钙在25℃下贮存至少两个月后杂质总量小于大约3.5％，并且更优选小于大约3.3％(非含量测定方法)。本发明的无定形莫匹罗星钙对标注为MUP II(在欧洲药典(EP)中称为杂质E)的杂质特别稳定，其中在25℃和RH 60％的条件下贮存至少两个月，结果杂质NMT的测定含量为大约1％，更优选小于大约0.8％，然而按照先有技术制备的无定形莫匹罗星钙在贮存一个月后，其杂质含量可达到大于1％的水平。
如图11例示的那样，本发明杂质与EP的对应关系如下EP的IMP A为本发明的B；EP的B为C；EP的C为D；EP的D为I(一)；EP的E为II(二)；并且EP的F为本发明的E。
本发明提供了一种制备无定形莫匹罗星钙的方法，所述方法包括以下步骤将假单胞菌酸、碱和钙离子源加到C1至C4醇中以形成溶液，并且除去所述醇。为了制备溶液，将假单胞菌酸溶解到C1至C4醇中，优选使用甲醇和乙醇。优选所用的醇基本上无水。优选所用的醇包括少于大约2％的水，更优选少于大约1％的水(体积/体积)。
在制备了假单胞菌酸的醇溶液后，将碱加到所述溶液中，致使形成假单胞菌酸根离子。可使用碱例如氢氧化钠或氢氧化钾来中和所述酸。因为用碱中和酸是本领域已知的，因此本领域人员应懂得可使用其它的替代方法。
碱的用量和浓度不需要相当精确。其用量足以中和大部分假单胞菌酸。本领域人员应懂得可用常规方法确定碱的不同用量，并且改变碱的用量不会改变结果。
为了获得无定形莫匹罗星钙，可将钙离子源加到溶剂中。本发明仅要求添加钙离子，并且与所述钙可被什么离子络合无关，只要其它离子不影响所述结果即可。在一个实施方案中，本发明使用了卤素的钙盐，例如氯化钙。所述碱和钙离子源可为一种化学物质，例如氧化钙，或两种不同的化学物质。所述术语“碱和钙离子源”包括使用单一的化学物质。
在加入所有必要的组分后，搅拌所述溶液。搅拌所述溶液大约30分钟至大约两个小时。通常，搅拌会影响晶体的质量和数量，这是本领域人员熟知的。
依赖于使用的碱和钙离子，可用分离步骤来除去杂质，例如因溶液中存在过量离子而形成的盐。在一个实施方案中，可用氢氧化钾和氯化钙作为碱和钙离子源。在加入氢氧化钾和氯化钙之后，未使用的钾和氯离子形成可分离的盐。优选用过滤器分离形成的氯化钾。
然后，从溶液中除去溶剂。最优选通过蒸发除去溶剂。可使用各种本领域熟知的技术蒸发溶剂。例如，根据溶剂的挥发性，可在大气压或减压下蒸发所述溶剂。在另一个实施方案中，可加热所述溶液以加速蒸发。对于高挥发性溶剂如甲醇，不需要额外的加热步骤。也可在大气压或减压下用旋转蒸发器蒸发所述溶剂。
在除去溶剂后，可任选干燥残留物以减少剩余溶剂的量。可根据本领域熟知的方法进行干燥。可在大气压或减压下干燥残留物。可任选加热以加速干燥过程，可是加热温度不应超过无定形莫匹罗星钙的熔点。优选在大约30℃至大约50℃下加热所述产物，最优选不高于大约45℃。可使用本领域熟知的真空烘箱。
在另一个实施方案中，可通过包括以下步骤的方法制备无定形莫匹罗星钙将假单胞菌酸、碱和钙离子源加到C1至C4醇中以形成溶液，将反溶剂与所述溶液合并以形成无定形莫匹罗星钙的沉淀并且分离所述沉淀。在本文中使用的术语“反溶剂”具有其在本领域中的普通含义，意思是加到溶剂中以降低化合物如盐在该溶剂中的溶解度，导致所述盐沉淀的液体。莫匹罗星钙在反溶剂中的溶解度低，导致发生沉淀。可通过合并假单胞菌酸的甲醇溶液、碱(如氢氧化钾)和钙离子源(如氯化钙)来制备所述溶液。然后可如上所述过滤所得的溶液以除去杂质。优选的溶剂为C1至C4醇，尤其是甲醇。优选所用的醇的水分含量少于大约2％，更优选少于大约1％。
然后，将所述反溶剂与所述溶液合并，优选将所述溶液加到所述反溶剂中。所述反溶剂优选为醚，其中醚的每个基团选自C1至C4的基团。这种醚的例子有二异丙醚或甲基叔丁基醚。在另一个实施方案中，所述反溶剂为酯，优选C3至C8的酯，例如醋酸异丁酯。
在大约-20℃至大约+25℃下，优选在大约-15℃至大约0℃下剧烈搅拌所述反溶剂。优选将所述溶液缓慢地(例如逐滴地)加到所述反溶剂中。术语合并包括这种滴加。可搅拌所得的混合物大约4至24小时。可通过本领域熟知的技术分离沉淀。可在温度为大约35℃的流化床干燥器或在真空烘箱中干燥所述沉淀。正如本领域人员熟知的那样，也可使用其它的温度和条件来干燥所述沉淀。
在一个替代的实施方案中，通过包括以下步骤的方法制备无定形莫匹罗星钙将假单胞菌酸、碱和钙离子源加到选自水、C1至C4醇及其混合物的溶剂中以形成溶液，并且冻干所述溶液。所述无定形形式通过冻干或冷冻干燥所述溶液而形成，完全避免了任何结晶或分离步骤，例如完全除去溶剂或加入反溶剂。
对冻干来说，在一个实施方案中所用的溶剂至少含有大约50％的水。含水溶剂优选为水或水与C1至C4醇的混合物。本发明不要求混合物的每个组分用量精确。当然，所述混合物中应有足够的水使其具有含水的特征。在一个实施方案中，水/溶剂的混合比例大约为1∶1至1∶2(体积比)。在另一个实施方案中，水/溶剂为大约3∶1至4∶1。通常优选较高的水与溶剂的比例。所述醇优选为C1至C4醇并且最优选甲醇。理论上，无定形莫匹罗星钙可仅仅从醇中冻干，然而，这个方法不利于健康，应避免使用。
可调整所述溶液，从而获得以水为溶剂，不含共溶剂的溶液。这种调整包括除去非水溶剂，优选通过蒸发除去。有机溶剂如醇，特别是甲醇，通常具有比水高得多的挥发性。这种较高的挥发性使得可在大气压或减压下选择性蒸发所述有机溶剂。优选减压下除去。
可任选加热所述溶液以加速该过程，可是在使用高挥发性溶剂如甲醇时，不需要加热。温度不应超过无定形莫匹罗星钙的熔点或不应导致发生任何化学反应。
为了基本上蒸发完所述醇，大概也会在该过程中损耗一部分水。即使水具有较低的挥发性，然而以足构快的速率蒸发也会导致水损失。可补充损失的水，并且任选在冷冻干燥所述溶液前加入额外的水，从而得到用于冻干的最佳体积。
可根据本领域熟知的方法冻干所述溶液。冻干是一个稳定化过程，其中首先冷冻物质，然后减少溶剂(通常为水)量(先通过升华(称为第一干燥过程)，接着解吸附(称为第二干燥过程))至不再能维持化学反应的量。
本领域人员熟知许多因素可影响冻干的效率，并且通过改变这些因素，可改性所得的样品。这些因素包括样品表面积、共熔温度、真空、冷凝器温度、样品厚度、溶质浓度和仪器因素。
通过上述方法，例如除去溶剂、冻干或者使用反溶剂得到的无定形形式可用于制备莫匹罗星钙二水合物。因为所述无定形形式已经是钙盐，因此不需要中和步骤和加入钙源。可通过溶解无定形形式以形成水溶液并且从水溶液中结晶出所述二水合物，从而简单地一步完成所述方法。例如，可将由上述方法制备的无定形莫匹罗星钙溶于乙醇/水混合物中，随后除去乙醇，并且从水中结晶以回收二水合物。
更具体地讲，可将无定形莫匹罗星钙溶于水中来制备溶液。可将温度降低至大约5℃以加速结晶。在大约几天之后，分离晶体。可通过本领域熟知的技术(例如过滤)分离所述二水合物。在分离之后，用水洗涤所述二水合物。优选随后将所述二水合物干燥。为了干燥，可置于大约25℃至大约50℃的温度下一段足够长的时间。
在另一个由无定形形式制备所述二水合物的实施方案中，将无定形莫匹罗星钙溶于与水不混溶的溶剂中。优选使用C1至C4醇，例如甲醇和乙醇。在制备了溶于低级醇的溶液后，优选用水稀释所述溶液。可通过除去共溶剂(如蒸发)来增加水含量。优选通过在不含共溶剂的水溶液中结晶出所述二水合物。
另一方面，本发明提供了一种制备莫匹罗星钙二水合物的方法，所述方法包括以下步骤将假单胞菌酸和氧化钙加到不含共溶剂的水中以形成溶液，其中莫匹罗星钙二水合物从所述溶液中沉淀出来，分离所述莫匹罗星钙二水合物并且任选将所述二水合物转变成无水化合物。可将假单胞菌酸悬浮于水中。然后将氧化钙加到所述悬浮液中，随后搅拌并过滤。由于没有使用共溶剂，因而不必除去共溶剂。将所述混合物冷却至大约5℃并使其结晶。通过本领域熟知的技术分离所述晶体。可使用室温下的空气循环式烘箱来干燥所述晶体。
另一方面，本发明提供了一种制备结晶莫匹罗星钙二水合物或其无水化合物的方法，所述方法包括以下步骤制备假单胞菌酸在与水不混溶的溶剂中的溶液，将所述溶液与C2至C12有机羧酸钙在含水溶剂中的溶液或悬浮液合并，形成水相和非水相，其中莫匹罗星钙二水合物从水相中沉淀出来，分离所述沉淀物并且任选将所述二水合物转变成无水化合物。
首先将假单胞菌酸溶于与水不混溶的溶剂中。与水不混溶的溶剂指当与含水溶剂合并时可形成两相体系的溶剂。本领域人员熟知存在多种这样的溶剂，并且优选的溶剂可根据含水溶剂中的水含量而改变。与水不混溶的溶剂优选为可溶解假单胞菌酸并形成溶液的溶剂。优选将假单胞菌酸溶于酮(优选C3至C8酮，如叔丁基甲基酮)、醚(优选与水不混溶的醚，其每个基团为C1至C4基团，例如甲基叔丁基醚)或者酯(优选与水不混溶的C3至C8酯，例如醋酸乙酯)。可加热所述溶剂至所述假单胞菌酸完全溶解。优选在大约40℃至大约50℃下加热所述溶剂。
在溶解之后，将含有有机羧酸钙盐(也就是羧酸钙)的水性悬浮液或溶液与所述溶液合并。本发明方法导致假单胞菌酸的酸质子与羧酸钙的钙离子交换。在一个实施方案中，水性悬浮液或溶液的溶剂是不含共溶剂的水。
所述术语“有机羧酸”是本领域熟知的，并且术语羧酸根指除去了酸质子的带电离子。有机羧酸的例子有脂肪酸。所用的有机羧酸为支化的和直链的C2至C12羧酸，优选乙酸、丙酸和己酸，并且更优选己酸。更优选所述羧酸为烷基化羧酸，如2-乙基-己酸。
本发明包括钙源和有机羧酸盐分开添加的实施方案或者在制备最终反应混合物之前有机羧酸钙的各种离子部分地或者完全地互相解离的实施方案。术语羧酸钙包括这些实施方案。
在合并两种液体之后，就形成了两相体系。优选将所述两相体系搅拌几个小时至大约半天，随后分离两相。可除去非水相。用额外的与水不混溶的溶剂萃取含莫匹罗星钙的水相，从而除去任何过量的有机羧酸。
然后，将莫匹罗星钙二水合物从水相中结晶出来。为了获得最佳的结晶，可在结晶之前用水稀释水相。可冷却所得的水层至大约5℃以加速结晶。在结晶之后，可通过本领域熟知的技术分离(如过滤)所述二水合物。过滤后，可任选洗涤所述二水合物。可任选在减压和大约35℃的略微升高的温度下干燥所述二水合物以除去残留的溶剂。
在另一个实施方案中，本发明提供了一种制备结晶莫匹罗星钙二水合物或其无水化合物的方法，所述方法包括以下步骤将假单胞菌酸和C2至C12有机羧酸钙溶于含水溶剂中以形成溶液，其中形成了C2至C12有机羧酸，除去所述羧酸，将沉淀物莫匹罗星钙与溶剂分离并且任选将所述二水合物转变成无水化合物。
在一个实施方案中，将假单胞菌酸溶于含水溶剂如甲醇/水的混合物中，并且与另一种含有羧酸钙的水溶液合并。最优选所述羧酸盐为2-乙基-己酸钙。优选通过蒸发除去其它共溶剂(例如甲醇)，从而获得以水作为溶剂并且不含共溶剂的溶液。最优选仅保留痕量的其它溶剂。
在反应后，形成了2-乙基-己酸。可使用与水不混溶的溶剂如酯(醋酸乙酯)、醚或酮来萃取所述酸，从而得到两相体系。分离所述水相，优选通过蒸发浓缩并让其结晶来进行分离。在大约室温下结晶一或两天后，分离(优选通过过滤分离)所述晶体。在分离之后，可任选用水洗涤所述晶体。所述晶体最好在大约25℃至大约50℃，优选不超过45℃的温度下干燥。
在另一个两相体系的实施方案中，本发明提供了一种制备结晶莫匹罗星钙水合物或其无水化合物的方法，所述方法包括以下步骤将假单胞菌酸溶于与水不混溶的溶剂中以形成溶液，将所述溶液与碱和钙离子源在含水溶剂中的溶液或悬浮液合并，从而形成水相和非水相，其中莫匹罗星钙二水合物从水相中沉淀出来，分离所述二水合物并且任选将所述二水合物转变成无水化合物。适合的与水不混溶的溶剂为如上所述的溶剂。优选水溶液的溶剂为不含共溶剂的水，其中加入了碱和钙离子源(如氧化钙)。在混合后，形成了两相体系。分离水层。然后，莫匹罗星钙可如上所述地从水层中沉淀出来，例如通过冷却至大约5℃并使其结晶。
另一方面，本发明提供了一种用于将所述二水合物去溶剂化以获得结晶无水莫匹罗星钙(“无水形式”)的方法。术语“二水合物”指两个水分子的溶剂化水(“结晶水”)为固相晶体结构的一部分。Baker等公开了可在高于大约70℃的温度将所述二水合物去溶剂化。或者，在干燥剂如五氧化磷存在下并且在大约18℃至80℃的温度下放置一天可干燥所述二水合物。本领域人员熟知也可使用其它条件和技术将所述二水合物去溶剂化。
本发明的方法也可用其它术语描述，例如将假单胞菌酸根离子与钙离子在溶液中反应，然后冻干，除去溶剂或使用反溶剂以获得无水形式。
公开的PXRD数据(图1-5)进一步证实了本发明方法的结果。所述PXRD数据显示莫匹罗星钙二水合物的图案。
下表(表3)举例说明了实施例样品的纯度数据。表中的纯度数据为面积百分比而不是测定含量。
表3-莫匹罗星钙二水合物的纯度
本发明的许多方法涉及在特定的溶剂中结晶。本领域技术人员懂得在不影响所得的多晶型物形式下，可改进与结晶有关的条件。例如，当在溶剂中混合溶质形成溶液时，温热所述混合物可能是必要的，这样可彻底地溶解原材料。如果温热不能让混合物澄清，可将所述混合物稀释或过滤。过滤时，可让热混合物经过滤纸、玻璃过滤器或其它膜材料或澄清剂(例如硅藻土)。取决于所用的设备和溶液的浓度及温度，可能需要将过滤设备预热以避免太早结晶。
也可改变条件来诱导或加速沉淀。诱导结晶的一种优选方法是降低溶剂的溶解性。例如，通过冷却所述溶剂来降低其溶解性。
另一种加速结晶的方法是通过加入产物的晶种或者用玻棒刮结晶容器的内壁。在其它情况下，无需任何诱导可自发地发生结晶。本发明包括诱导/加速结晶或者自发地发生结晶这两种实施方案。不记载单独的结晶步骤是为了强调结晶可自发地发生，但这种强度不是意味本发明的范围与记载了结晶步骤的发明范围不同。本领域人员应懂得本发明提供的结晶条件是用于举例说明，并且更改所述条件未必改变所述结果。
含高纯度无定形莫匹罗星钙的药物组合物根据本发明，包括无定形形式的高纯度莫匹罗星钙可通过本文公开的新方法制备。它们可制成药物组合物，用于治疗感染、尤其是二次感染的创伤性皮肤病变特别有效。这种组合物包括莫匹罗星钙(如无定形形式)和本领域技术人员熟知的药学上可接受的载体和/或赋形剂。
例如，这些组合物可制成经口、非肠道、直肠、透皮、口腔或鼻给药的药剂。适合经口给药的形式包括片剂、压制或糖衣药丸、糖衣丸、小药囊、硬胶囊或明胶胶囊、舌下片剂、糖浆剂和混悬剂。适合的经肠胃外给药的形式包括含水的或无水溶液或乳液，而适合直肠给药形式包括含有亲水或疏水溶媒的栓剂。至于局部给药，本发明提供了本领域熟知的适合的透皮给药体系或主要保持局部效果的制剂。至于经鼻的递药体系，本发明提供了本领域熟知的适合的气溶胶给药体系。
本发明的局部给药组合物可按照先有技术的教导制备。通过引用结合到本文的美国专利4,879,287描述了用作局部给药药膏的组成。所述组合物优选包括少于50％、更优选少于10％并且最优选约2％的活性组分。所述组合物可与含量少于大约5％，最优选少于大约2％的皮质类固醇一起给药。可参考美国专利号4,879,287了解对局部药膏的要求的完整描述。也可用Bactroban作指导。
本发明的药物组合物含有高纯度莫匹罗星钙，包括无定形形式、任选与其它形式莫匹罗星的混合物。除了活性组分，本发明的药物组合物可包括一种或多种赋形剂。出于各种目的，可将赋形剂加入所述组合物中。
稀释剂增加了固体药物组合物的体积并且可制备含有更易于患者和护理人员处理的组成的药物剂量形式。用于固体组合物的稀释剂包括例如微晶纤维素(如Avicel)、超细纤维素、乳糖、淀粉、预糊化淀粉、碳酸钙、硫酸钙、糖、dextrates、糊精、葡萄糖、二代磷酸钙、三代磷酸钙、高岭土、碳酸镁、氧化镁、麦芽糖糊精合剂、甘露糖醇、聚甲基丙烯酸酯(例如Eudragit)、氯化钾、粉状纤维素、氯化钠、山梨糖醇和滑石粉。
压制成药片剂型的固体药物组合物可包括其功能为帮助将活性组分与其它赋形剂在压制后粘合在一起的赋形剂。固体药物组合物的粘合剂包括阿拉伯树胶、褐藻酸、卡波姆(例如聚羧乙烯)、羧甲基纤维素钠盐、糊精、乙基纤维素、明胶、瓜尔胶、氢化植物油、羟乙基纤维素、羟丙基纤维素(例如Klucel)、羟丙基甲基纤维素(例如Methocel)、液态葡萄糖、硅酸铝镁、麦芽糖糊精合剂、甲基纤维素、聚甲基丙烯酸酯、聚乙烯吡咯烷酮(例如Kollidon、Plasdone)、预糊化淀粉、藻酸钠和淀粉。
可通过将崩解剂加入所述组合物来加快压制固体药物组合物在患者胃中的溶解速率。崩解剂包括褐藻酸、羧甲基纤维素钙、羧甲基纤维素钠(例如Ac-Di-Sol、Primellose)、胶状二氧化硅、croscarmellose sodium、交联的聚乙烯吡咯烷酮(如Kollidon、Primellose)、瓜尔胶、硅酸铝镁、甲基纤维素、微晶纤维素、聚克立林钾、粉状纤维素、预糊化淀粉、藻酸钠、淀粉羟乙酸钠(例如Explotab)和淀粉。
也可加入助流剂改进非压制固体组合物的可流动性并提高剂量的准确性。能起到助流剂作用的赋形剂包括胶状二氧化硅、三硅酸镁、粉状纤维素、淀粉、滑石粉和三代磷酸钙。
当通过压制粉状组合物制备这样的药片剂型时，可在冲击机和模具(dye)下压制所述组合物并染色。一些赋形剂和活性组分趋于粘附在冲压机和模具(dye)的表面，这可导致产物有麻点和其它表面缺陷。可将润滑剂加入所述组合物中以减少粘附并且易于从模具中(dye)中释放出产物。润滑剂包括硬脂酸镁、硬脂酸钙、甘油单硬脂酸酯、棕榈硬脂酸甘油酯、氢化蓖麻油、氢化植物油、矿物油、聚乙二醇、苯甲酸钠、十二烷基硫酸钠、十八烷基富马酸钠、硬脂酸、滑石粉和硬脂酸锌。
矫味剂和增香剂使患者感觉剂型更可口。本发明组合物可含的药物制品的通用矫味剂和增香剂包括麦芽酚、香兰素、乙基香兰素、薄荷醇、柠檬酸、富马酸、乙基麦芽酚和酒石酸。
固体和液体组合物也可被药学上可接受的着色剂染色以提高其外观和/或帮助患者辨认产物和单位剂量水平。
在本发明的液体药物组合物中，无定形莫匹罗星钙和任何其它固体赋形剂可溶于或悬浮于液体载体例如水、植物油、醇、聚乙二醇、丙二醇或甘油中。
液体药物组合物可包括乳化剂，从而在所述组合物内均匀分散活性成分或其它不溶于液体载体的赋形剂。可用于本发明液体组合物的乳化剂包括如明胶、蛋黄、干酪素、胆固醇、阿拉伯胶、黄芪胶、角叉菜属、胶质、甲基纤维素、卡波姆、十六醇十八醇混合物和十六醇。
本发明的液体药物组合物也可包括增粘剂以提高产物的口感和/或给胃肠道涂上衬层。这种试剂包括阿拉伯胶、褐藻酸膨润土、卡波姆、羧甲基纤维素钙或钠、十六醇十八醇混合物、甲基纤维素、乙基纤维素、明胶瓜尔胶、羟乙基纤维素、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、麦芽糖糊精合剂、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、碳酸丙二醇酯、丙二醇褐藻酸酯、褐藻酸钠、羟基乙酸淀粉钠、淀粉黄芪胶和黄原胶。
可加入甜味剂如山梨醇、糖精、糖精钠、蔗糖、阿司帕坦、果糖、甘露醇和转化糖以改善味道。
可加入摄入量安全的防腐剂和螯合剂如醇、苯甲酸钠、丁基化羟基甲苯、丁基化羟基苯甲醚、乙二胺四乙酸以提高贮存稳定性。
根据本发明的液体组合物也可包括缓冲剂例如guconic acid、乳酸、柠檬酸或乙酸、sodium guconate、乳酸钠、柠檬酸钠或乙酸钠。
赋形剂的选择和用量由配制科学家基于经验和对标准程序的考虑以及参考本领域的工作而容易地确定。
本发明的固体组合物包括粉末、颗粒、聚集体和压制组合物。剂型包括适合口服、口含、经直肠、非肠道(包括皮下、肌肉和静脉内)、吸入和眼给药的剂型。所述剂型可方便地为单位剂型并且可通过任何药学领域熟知的方法制备。
剂型包括固体剂型如片剂、散剂、胶囊、栓剂、小药囊、药片和losenges以及液体糖浆剂、混悬剂和elixirs。
本发明的一种剂型为含有所述组合物的胶囊，优选为在硬壳或软壳中的粉状或颗粒状本发明固体组合物。所述壳可由明胶制备并且任选含有增塑剂例如甘油和山梨醇以及不透明剂或着色剂。
活性组分和赋形剂可根据本领域熟知的方法配制到组合物和剂型中。
可通过湿法造粒制备用于压制药片或填充胶囊的组合物。在湿法造粒中，可混合一些或全部粉状活性组分和赋形剂，然后在存在液体特别是水时进一步搅拌，使所述粉末结块成为颗粒。筛分和/或研磨所述颗粒，干燥，然后筛分和/或研磨至所述颗粒尺寸。然后将所述颗粒压片并且可在压片前加入其它赋形剂如助流剂和润滑剂。
可通过干燥混合按常规制备的片剂组合物。例如，可将活性组分和赋形剂的混合组合物压制成条或薄片，然后分割成压制颗粒。随后，将压制颗粒压成药片。
作为干法造粒的替换方法，可使用直接压制技术将混合组合物直接压制成压制剂型。直接压制可制备没有颗粒的更均匀的药片。特别适合直接压制药片的赋形剂包括微晶纤维素、喷雾干燥乳糖、磷酸二钙二水合物和胶体二氧化硅。特别具有直接压制药片的经验和技术的本领域技术人员熟知在这些和其它赋形剂直接压制药片时的正确使用方法。
本发明的胶囊填充物可包括任何前述压片中所用的混合物和颗粒，它们仅仅不用经历最终的压制药片的步骤。
500mg的一次口服剂量是允许的，本领域技术人员可据此设计胶囊、片剂和止咳糖以及其它单位剂型。
用如下方法得到表征数据热稳定性用放在含硅胶的铝制层压袋中的玻璃安瓿瓶作为包装体系。相对湿度正好为60％。
水分用Karl Fischer法测定水分。
粉末X-射线衍射装置-Scintag X′TRA-030 X-射线衍射仪。
软件-DMSNT。
辐射源-铜(FK61-10CU)。
X-射线发生器-20×2988型，在45KV和40mA下运行。
监测器-固态。
用3.00Deg./min.的扫描速率在4-40的衍射角范围内得到数据。
衍射角幅度，步长0,050°，时间常数1秒。
DSCMettler TA 3000，DSC 20加热间隔-25-250℃升温速率-5℃/min.
气氛-氮气，40ml/min.
样品池-带孔的Al坩锅TGMettler TA 3000，TG 50加热间隔-25-250℃升温速率-5℃/min.
气氛-氮气，40ml/min.
样品池-陶瓷，150mlIRPerkin Elmer公司的FTIR SPECTRUM 1000用KBr压片，在4000-400cm-1的范围获得光谱莫匹罗星钙杂质的测定在ZorbaxC-8(5um；250×4.6mm)反相柱上完成高效液相色谱(HPLC)测定，洗脱液为在水∶四氢呋喃混合物中的醋酸铵缓冲溶液。用λ＝240nm的紫外光谱检测。
假单胞菌酸杂质的测定在Hypersil Shandan BDSC-18(3um；100×4.6mm)反相柱上完成高效液相色谱(HPLC)测定，梯度洗脱液为在水∶乙腈混合物中的磷酸二氢钠缓冲溶液。用λ＝229nm的紫外光谱检测。
含量测定也使用相同的HPLC装置。
实施例实施例1制备莫匹罗星钙二水合物将无定形莫匹罗星钙(2.50g，2.40mmole)溶于水(10ml)中并且搅拌以得到透明溶液。让所述莫匹罗星钙溶液在5℃下结晶60小时。过滤所述晶体产物并且用水(5ml)清洗。将所述晶体产物在45℃下干燥6小时。
实施例2制备莫匹罗星钙二水合物将无定形莫匹罗星钙(5.00g，4.80mmole)溶于甲醇(15ml)中并且搅拌以得到透明溶液。将水(10ml)加入所述溶液中。在减压下从所述溶液中蒸发掉甲醇，使得最终体积为7ml。让所述莫匹罗星钙溶液在5℃下结晶60小时。过滤所述晶体产物并且用水(5ml)清洗。在30℃下干燥所述产物12小时。
实施例3制备莫匹罗星钙二水合物将假单胞菌酸(2.50g，10mmole)溶于甲醇和水(各为30ml)的混合物中。将2-乙基-己酸钙(0.92，5.00mmole)溶于甲醇和水(分别为60ml和30ml)的混合物中。将2-乙基-己酸钙溶液加到所述假单胞菌酸溶液中，搅拌1小时。在减压下蒸发掉甲醇，使得最终体积为60ml。用醋酸乙酯(2×40ml)萃取2-乙基-己酸，并且在减压下中溶液蒸发掉水层，使得最终体积为50ml。让所述莫匹罗星钙溶液在室温下结晶36小时。过滤所述晶体产物并且用水(10cm3)清洗。在40℃下干燥所述产物8小时。
实施例4制备无定形莫匹罗星钙将假单胞菌酸(4000g，8mole)溶于乙醇(10l)中。将氢氧化钾的乙醇溶液(448.88g，8mole的氢氧化钾和2.6∶1的乙醇)和氯化钙的乙醇溶液(443.96g，5.0mmole的氯化钙和2.6∶1的乙醇)加到所述混合物中。将所述混合物搅拌90分钟，然后过滤除去氯化钾。随后，将3∶1的乙醇加入所述溶液中，在减压下蒸发掉乙醇，使得最终体积为10∶1(溶液A)。在减压下旋转蒸发从1400ml溶液A中蒸出乙醇，得到白色泡沫状固体物。在45℃和真空下干燥所述产物12小时。
实施例5制备莫匹罗星钙二水合物将水(20ml)加到基本按先前实施例一样的技术制备的莫匹罗星钙的乙醇浓缩物(50.84g，约37m/m％)中。减压蒸发从所述溶液中除去乙醇，使得最终体积为20ml。让所述莫匹罗星钙溶液在5℃下结晶24小时。过滤晶体产物并且用水(15ml)清洗。在30℃下干燥所述产物12小时。
在减压下从滤液中蒸发水，使得最终体积为5ml。让所述莫匹罗星钙溶液在5℃下结晶24小时。过滤所述晶体产物并且用水(2×15ml)清洗。在30℃下干燥所述产物12小时。
实施例6制备莫匹罗星钙二水合物将假单胞菌酸(10g)悬浮于水(26ml)中。将氧化钙(0.58g)加到所述悬浮物中。搅拌所述混合物一小时并过滤。将所述混合物冷却至5℃。保持15小时之后，过滤所述晶体产物，用冷水(10ml)清洗并且在室温下，在空气循环烘箱中干燥。得到莫匹罗星钙二水合物(9.4g，87％)。
附上PXRD确认数据(图1)。
实施例7制备莫匹罗星钙二水合物将无定形莫匹罗星钙(14g)溶于水(35ml)中并且搅拌一小时。将所述混合物冷却至5℃并且在这个温度下保持15小时。然后将所述混合物在5℃下搅拌3小时。过滤所述晶体产物并且在室温下，在空气循环烘箱中干燥。得到莫匹罗星钙二水合物(12.5g，83％)。
实施例8制备莫匹罗星钙二水合物在搅拌下，将无定形莫匹罗星钙(20.00g，19.20mmole)加入水(20ml)中。搅拌所述淤浆0.5小时，然后将其冷却至5℃。让所述莫匹罗星钙溶液结晶16小时。用15ml水稀释晶体淤浆，过滤所述晶体产物并且用水(5ml)清洗。在35℃下干燥产物(17.1g)12小时。
实施例9制备莫匹罗星钙二水合物将假单胞菌酸(10g)悬浮于异丁基甲基酮(120ml)中。将氧化钙(0.57g)悬浮于水(68ml)中，并且将所得悬浮液加到假单胞菌酸的溶液中。搅拌所述混合物一小时，并分离各相。真空蒸馏将水相的体积减少至40ml。将所述混合物冷却至5℃，静置15小时之后，过滤晶体产物并且用冷水(10ml)清洗。然后在室温下，在空气循环烘箱中干燥产物。得到莫匹罗星钙二水合物(3.7g，35％)。
附上PXRD确认数据(图2)。
实施例10制备莫匹罗星钙二水合物在40℃下，将假单胞菌酸(10.00g，20mmole)溶于100ml的乙酸乙酯中。将2-乙基-己酸钙(3.32g，10mmole)悬浮于25ml水中。将假单胞菌酸的溶液加到2-乙基-己酸钙的悬浮液中，并且搅拌所得的两相体系14小时。然后分离两相，并且从所述水相中蒸掉任何痕量的乙酸乙酯。在冰箱中将莫匹罗星钙含水悬浮液冷却至5℃，产生沉淀。随后将固态莫匹罗星钙二水合物过滤，用10ml水清洗并且在35℃真空下干燥14小时。产物质量为7.82克。
附上PXRD确认数据(图3)。
实施例11制备莫匹罗星钙二水合物在45℃下，将假单胞菌酸(10.00g，20mmole)溶于甲基叔丁基醚(150ml)中。将2-乙基-己酸钙(3.32g，10mmole)悬浮于水(30ml)中。将假单胞菌酸的溶液加到2-乙基-己酸钙的悬浮液中，并且搅拌所得的两相体系14小时。然后分离所述两相，并且将水(20ml)和甲基叔丁基醚(50ml)加入所述水相，搅拌10分钟。分离所得的两相，从所述水相中蒸掉任何痕量的甲基叔丁基醚。在冰箱中将莫匹罗星钙含水悬浮液冷却至5℃。随后将固态莫匹罗星钙二水合物过滤，用20ml水清洗并且在35℃真空下干燥5小时。产物质量为5.88克。
实施例12制备莫匹罗星钙二水合物在40℃下，将假单胞菌酸(10.00g，20mmole)溶于甲基叔丁基醚(180ml)中。将2-乙基-己酸钙(3.32g，10mmole)悬浮于水(50ml)中。(可通过使用更大量的水或醇/水混合物得到溶液)。将假单胞菌酸的溶液加到2-乙基-己酸钙的悬浮液中，并且搅拌所得的两相体系24小时。然后分离所述两相，将50ml甲基叔丁基醚加入所述水相并且搅拌10分钟。分离所得的两相，并且从所述水相中蒸掉任何痕量的甲基叔丁基醚。在冰箱中将莫匹罗星钙含水悬浮液冷却至5℃。随后将固态莫匹罗星钙二水合物过滤，用水(20ml)清洗并且在35℃真空下干燥14小时。产物质量为8.65克。测定含量95.68％，水分3.48％。
实施例13制备莫匹罗星钙二水合物在40℃下，将假单胞菌酸(10.00g，20mmole)溶于异丁基甲基酮(100ml)中。将2-乙基-己酸钙(3.32g，10mmole)悬浮于水(50ml)中。(可通过使用更大量的水或醇/水混合物得到溶液)。将假单胞菌酸的溶液加到2-乙基-己酸钙的悬浮液中，并且搅拌所得的两相体系24小时。然后分离所述两相，将异丁基甲基酮(25m1)加入所述水相并且搅拌10分钟。分离所得的两相，并且从所述水相中蒸掉任何痕量的异丁基甲基酮。在冰箱中将水性莫匹罗星钙悬浮液冷却至5℃。随后将固态莫匹罗星钙二水合物过滤，用水(20ml)清洗并且在35℃真空下干燥14小时。产物质量为7.95克。测定含量97.72％，水分3.45％。
实施例14制备莫匹罗星钙二水合物在40℃下，将假单胞菌酸(10.00g，20mmole)溶于甲醇(30ml)和水(15ml)的混合物中。将2-乙基-己酸钙(3.32g，10mmo1e)溶于甲醇(60ml)和水(30ml)的混合物中。将2-乙基-己酸钙的溶液加到假单胞菌酸的溶液中，并且搅拌1小时。在减压下从所述溶液中蒸掉甲醇，得到最终体积为45ml。加水(15ml)至所述溶液中。用醋酸乙酯(3×20ml)萃取2-乙基-己酸，并且在减压下从所述溶液中蒸发掉水层，使得最终体积为60ml。让所述莫匹罗星钙溶液在5℃下结晶36小时。过滤所述晶体产物并且用水(10ml)清洗。在35℃下干燥所述产物(3.6g)8小时。
测定含量96.9％水分3.0％。
(这个测定含量与无定形形式的表达不同。表-1应考虑这个问题)。
实施例15制备莫匹罗星钙二水合物在40℃下，将假单胞菌酸(50.00g，0.10mole)溶于甲醇(150ml)中。将2-乙基-己酸钙(15.92g，48.00mmole)悬浮于甲醇/水(250ml和125ml)的混合物中。将假单胞菌酸的溶液加到2-乙基-己酸钙的溶液中，并且搅拌1小时。在减压下从所述溶液中蒸掉甲醇，得到最终体积为125ml。用醋酸乙酯(4×50ml)萃取2-乙基-己酸，并且在减压下从所述溶液中蒸发掉水层，使得最终体积为125ml。让所述莫匹罗星钙溶液在5℃下结晶48小时。过滤所述晶体产物并且用水(10ml)清洗。在35℃下干燥所述产物(18.4g)8小时。
附上PXRD确认数据(图4)。
实施例16制备莫匹罗星钙二水合物将假单胞菌酸溶于醋酸异丁酯(130ml)中。将氧化钙(0.29g)悬浮于水(32ml)中并且加到假单胞菌酸的溶液中。将所述混合物搅拌2小时，并且分离各相。通过真空蒸馏将水相的体积减少至15ml。将所述混合物冷却至5℃。在搅拌2小时之后，过滤所述晶体产物并且用冷水(5ml)清洗。在室温下，在空气循环烘箱中干燥所述产物。得到莫匹罗星钙二水合物(3.3g，62％)。
实施例17制备无定形莫匹罗星钙将假单胞菌酸(5.00g，10mmole)溶于甲醇(5.5ml)中，将氢氧化钾甲醇溶液(0.56g，10mmole氢氧化钾和4ml甲醇)和氯化钙甲醇溶液(0.56g，5.0mmole氯化钙和5ml甲醇)加到所述混合物中。将所述混合物搅拌1小时。然后过滤所述溶液以除去氯化钾(0.60g)。接着在减压下蒸发甲醇以得到白色泡沫状的固体物。将所述产物在真空45℃下干燥12小时，得到4.85g最终产物。测定含量95.9％，水分2.23％[杂质总量3.19％，最高杂质含量1.23％-与测定含量所用方法不同]，熔点85至89℃。
实施例18制备无定形莫匹罗星钙将假单胞菌酸(5.00g，10mmole)溶于乙醇(20ml)中，将氢氧化钾乙醇溶液(0.56g，10mmole氢氧化钾和10ml乙醇)和氯化钙乙醇溶液(0.56g，5.0mmole氯化钙和10ml乙醇)加到所述混合物中。将所述混合物搅拌1小时并且过滤所述溶液以除去氯化钾(0.51g)。然后在减压下蒸发乙醇以得到白色泡沫状的固体物。将所述产物在真空45℃下干燥12小时。产物质量为4.38克。测定含量99.1％，水分2.36％[杂质总量2.44％，最高杂质含量1.10％-与测定含量所用方法不同]。
实施例19制备无定形莫匹罗星钙将假单胞菌酸(4000g，8mole)溶于乙醇(10l)中，将氢氧化钾乙醇溶液(448.88g，8mole氢氧化钾和2.6∶1的乙醇)和氯化钙乙醇溶液(443.96g，5.0mmole氯化钙和2.6∶1的乙醇)加到所述混合物中。将所述混合物搅拌90分钟，并且过滤所述溶液以除去氯化钾。按照1∶3的比例将乙醇加入所述溶液，在减压下蒸发乙醇，得到10∶1的最终体积(溶液A)。
然后在减压下用旋转蒸发器从溶液A(350ml)蒸发乙醇得到白色泡沫状的固体物。将所述产物在真空45℃下干燥12小时，得到最终产物的质量为110.02克。
测定含量98.2％，水分0.36％，熔点84-86℃。
然后在减压下用旋转蒸发器从1400ml溶液A中蒸发乙醇，得到白色泡沫状的固体物。将所述产物在真空45℃下干燥12小时，得到最终产物的质量为513.18克。
测定含量96.8％[杂质总量3.66％，最高杂质含量1.29％-与测定含量所用方法不同]，熔点85-86℃。
实施例20制备无定形莫匹罗星钙将假单胞菌酸(220g)溶于保持在25-27℃下的甲醇(210ml)中。将氢氧化钾(27.9g)独立地溶于甲醇(154ml)。此外，将氯化钙(24.39g)独立地溶于甲醇(133ml)。将所述氢氧化钾溶液加到所述假单胞菌酸溶液中，直至pH＝9.4-9.5(加入147ml氢氧化钾溶液)。然后将氯化钙溶液加到所述莫匹罗星钙溶液中，直至达到pH＝7.6-7.7(加入128ml氯化钙溶液)。在24-25℃下搅拌所述溶液一小时。过滤除去氯化钾，并且将所述溶液标记为溶液B。在搅拌下将溶液B(25ml)加到(-7)℃的二异丙基醚(250ml)中。从所述溶液中沉淀出固态无定形莫匹罗星钙，并且在-7℃下搅拌3小时。将所述固体产物过滤并且用冷二异丙基醚(10ml)清洗。将所述产物在35℃下的流化床干燥器中干燥6小时，然后在35℃下的真空烘箱中干燥12小时。
实施例21通过冻干制备无定形莫匹罗星钙将假单胞菌酸(10.01g，20mmole)溶于甲醇/水(50ml和36ml)的混合物中。将氧化钙(0.78g，14mmole)分部分加到所述混合物中并且搅拌1小时。将所述溶液过滤，并且在减压下从所述滤液中蒸发掉甲醇，使得最终体积为30ml。将水(20ml)加到所述溶液中。然后将所述溶液冻干以获得9.11克产物。
测定含量100％，水1.59％，熔点84-86℃[杂质总量2.64％，最高杂质含量1.35％-与测定含量所用方法不同]，熔点84-86℃。
已经参考特别优选的实施方案对本发明作出描述，同时，通过实施例对其作出举例说明，本领域技术人员应懂得在不偏离说明书所公开的本发明的精神和范围内，可对所描述和所举例说明的本发明作出修改。提供的实施例是为了帮助理解本发明而无意以任何方式限制其范围。所述实施例不包括常规方法的详细描述。这些方法为本领域技术人员所熟知并且在各种出版物中有描述。在Pharmaceutical Solids，Drugs and the Pharmaceutical Sciences(第95卷)中讨论了与固态化学有关的常规方法的详细描述。将本文所提到的参考文献的全部内容都结合到本文中。
权利要求
1.一种制备结晶莫匹罗星钙水合物或其无水化合物的方法，所述方法包括以下步骤a)制备假单胞菌酸在与水不混溶的溶剂中的溶液；b)将所述溶液与C2至C12有机羧酸钙在含水溶剂中的溶液或悬浮液合并，从而形成水相和非水相，其中莫匹罗星钙二水合物从水相中沉淀出来；c)分离所述沉淀；并且d)任选将所述二水合物转变成无水化合物。
2.权利要求1的方法，其中所述含水溶剂为不含共溶剂的水。
3.权利要求1的方法，其中所述含水溶剂为水与C1至C4醇的混合物。
4.权利要求1的方法，其中所述有机羧酸盐为2-乙基-己酸盐。
5.一种制备结晶莫匹罗星钙二水合物或其无水化合物的方法，所述方法包括以下步骤a)将假单胞菌酸和C2至C8有机羧酸钙加到含水溶剂中以形成溶液，其中形成了C2至C8有机羧酸；b)将所述羧酸除去；c)从含水溶剂中分离出莫匹罗星钙二水合物沉淀；并且d)任选将所述二水合物转变成无水化合物。
6.权利要求5的方法，其中所述含水溶剂为水与C1至C4醇的混合物。
7.权利要求6的方法，所述方法还包括在步骤(c)之前增加含水溶剂中水含量的步骤。
8.权利要求5的方法，其中所述除去的步骤通过萃取方法完成。
9.权利要求5的方法，其中所述有机羧酸盐为2-乙基-己酸盐。
10.一种制备结晶莫匹罗星钙二水合物或其无水化合物的方法，所述方法包括以下步骤a)将假单胞菌酸和氧化钙加到不含共溶剂的水中以形成溶液，其中莫匹罗星钙二水合物从所述溶液中沉淀出来；b)分离出所述莫匹罗星钙二水合物；并且c)任选将所述二水合物转变成无水化合物。
11.一种制备无定形莫匹罗星钙的方法，所述方法包括以下步骤a)将假单胞菌酸、碱和钙离子源加到C1至C4醇中以形成溶液；并且b)除去所述醇。
12.权利要求11的方法，其中所述醇基本上是无水的。
13.权利要求12的方法，其中所述醇的水含量低于大约1％体积。
14.权利要求11的方法，其中所述醇选自甲醇和乙醇。
15.权利要求11的方法，其中所述除去的步骤通过蒸发所述醇来完成。
16.一种制备无定形莫匹罗星钙的方法，所述方法包括以下步骤a)将假单胞菌酸、碱和钙离子源加到C1至C4醇中以形成溶液；b)将所述溶液与反溶剂合并以沉淀出无定形莫匹罗星钙；并且c)分离所述沉淀。
17.权利要求16的方法，其中所述醇的水含量低于大约1％体积。
18.权利要求16的方法，其中所述醇选自甲醇和乙醇。
19.权利要求16的方法，其中所述反溶剂选自酯和醚。
20.权利要求19的方法，其中所述醚反溶剂选自甲基-叔丁基醚和二异丙醚。
21.权利要求19的方法，其中所述酯反溶剂为醋酸异丁酯。
22.权利要求16的方法，其中所述合并通过将所述溶液加到反溶剂中来完成。
23.一种制备无定形莫匹罗星钙的方法，所述方法包括以下步骤a)将假单胞菌酸、碱和钙离子源加到选自水、C1至C4醇及其混合物的溶剂中以形成溶液；并且b)将所述溶液冷冻干燥。
24.权利要求23的方法，其中所述醇为甲醇。
25.权利要求23的方法，所述方法还包括在冻干的步骤之前除去非水溶剂以及任选加入水的步骤。
26.一种制备结晶莫匹罗星钙水合物或其无水化合物的方法，所述方法包括以下步骤a)将假单胞菌酸溶于与水不混溶的溶剂中以形成溶液；b)将所述溶液与碱和钙离子源在含水溶剂中的溶液或悬浮液合并，从而形成水相和非水相，其中莫匹罗星钙二水合物从所述水相中沉淀出来；c)分离所述二水合物；并且d)任选将所述二水合物转变成无水化合物。
27.权利要求26的方法，其中所述与水不混溶的溶剂选自酯和酮。
28.权利要求27的方法，其中所述与水不混溶的酯溶剂为醋酸异丁酯。
29.权利要求27的方法，其中所述与水不混溶的酮溶剂为异丁基甲基酮。
30.一种制备结晶莫匹罗星钙二水合物的方法，所述方法包括以下步骤a)将假单胞菌酸、碱和钙离子源加到C1至C4醇中以形成溶液；b)将所述溶液加到作为反溶剂的醚或酯中，沉淀出无定形莫匹罗星钙；c)将所述无定形莫匹罗星钙溶于选自水和水与C1至C4醇的混合物的溶剂中，从而形成溶液，其中莫匹罗星钙二水合物从所述溶液中沉淀出来；并且d)分离所述二水合物。
31.一种制备结晶莫匹罗星钙二水合物的方法，所述方法包括以下步骤a)将假单胞菌酸、碱和钙离子源加到C1至C4醇中以形成溶液；b)蒸发掉所述醇以获得无定形莫匹罗星钙；c)将所述无定形莫匹罗星钙溶于选自水和水与C1至C4醇的混合物的溶剂中，从而形成溶液，其中莫匹罗星钙二水合物从所述溶液中沉淀出来；并且d)分离所述二水合物。
32.一种制备结晶莫匹罗星钙二水合物的方法，所述方法包括以下步骤a)将假单胞菌酸、碱和钙离子源加到选自水和水与C1至C4醇的混合物的溶剂中，形成溶液；b)冻干所述溶液以获得无定形莫匹罗星钙；c)将所述无定形莫匹罗星钙溶于选自水和水与C1至C4醇的混合物的溶剂中，从而沉淀出所述二水合物；并且d)分离出所述二水合物沉淀。
33.一种制备无定形莫匹罗星钙的方法，所述方法包括以下步骤a)使假单胞菌酸根离子和钙离子在C1至C4醇溶液中反应；并且b)蒸发所述醇。
34.一种制备无定形莫匹罗星钙的方法，所述方法包括以下步骤a)使假单胞菌酸根离子和钙离子在C1至C4醇溶液中反应；b)将所述溶液加到作为反溶剂的酯或醚中，沉淀出无定形莫匹罗星钙；并且c)分离所述沉淀。
35.一种制备无定形莫匹罗星钙的方法，所述方法包括以下步骤a)使假单胞菌酸根离子和钙离子在水或水与C1至C4醇的混合物的溶液中反应；并且b)冷冻干燥所述溶液。
36.一种制备结晶莫匹罗星钙二水合物或其无水化合物的方法，所述方法包括以下步骤a)提供假单胞菌酸和C2至C8有机羧酸钙；b)使所述假单胞菌酸的酸质子与C2至C8有机羧酸盐的钙离子交换；c)回收莫匹罗星钙二水合物；并且d)任选将所述二水合物转变成无水化合物。
37.一种药物组合物，所述药物组合物包括a)在大约25℃和RH 60％的条件下贮存至少两个月之后，含有少于大约1％的欧洲药典定义为E的杂质的无定形莫匹罗星钙；和b)药学上可接受的赋形剂。
38.一种药物组合物，所述药物组合物包括a)无水莫匹罗星钙测定含量为至少大约94％的无定形莫匹罗星钙；和b)药学上可接受的赋形剂。
39.权利要求38的组合物，其中所述测定含量为至少大约98％。
40.一种药物组合物，所述药物组合物包括a)无定形莫匹罗星钙，其特征为具有大约77℃至大约89℃的熔点；和b)药学上可接受的赋形剂。
41.权利要求40的药物组合物，其中所述熔点为大约85℃至大约89℃。
42.一种药物组合物，所述药物组合物包括a)在大约25℃和RH 60％的条件下贮存至少两个月之后，含有少于大约3.5％杂质的无定形莫匹罗星钙，其中杂质含量为所有杂质总量；和b)药学上可接受的赋形剂。
43.权利要求42的药物组合物，其中所述杂质少于大约3.3％。
44.一种治疗或预防可用莫匹罗星钙治疗的细菌感染的方法，所述方法包括给予动物权利要求37、38、39、40、41、42和43的药物组合物。
全文摘要
本发明提供了通过使用有机羧酸盐在两相体系中由假单胞菌酸制备莫匹罗星钙二水合物的方法。提供了高纯度无定形莫匹罗星钙组合物，其通过除去溶剂、冷冻干燥和使用反溶剂沉淀的制备方法。也提供了无定形形式的药物组合物以及使用该组合物治疗感染的方法。同样提供了用于制备莫匹罗星钙二水合物和非晶体的组合方法，该组合方法首先制备无定形形式，接着经从水溶液中结晶将无定形形式转变成二水合物。还提供了用于除去二水合物的结晶水以获得无水莫匹罗星钙的方法。
文档编号A61K31/351GK1625394SQ02826391
公开日2005年6月8日 申请日期2002年11月6日 优先权日2001年12月28日
发明者L·久里查, E·梅斯扎罗斯索斯, C·绍博, C·辛格 申请人:拜奥盖尔药厂有限公司