繁缕总黄酮、制备方法、用途以及含有它的制剂的制作方法

专利名称：繁缕总黄酮、制备方法、用途以及含有它的制剂的制作方法
技术领域：
本发明涉及繁缕总黄酮、制备方法、用途以及含有繁缕总黄酮的制剂。
繁缕是石竹科植物Stellaria media(L.)Cyr.的干燥全草。历代本草及书籍多处记载它有治疗恶疮、皮肤病的功效。《美国化学文摘》从1920年到2001年第134卷为止，所报道的繁缕属植物的化学成分主要是黄酮及黄酮甙类、皂甙及皂甙原类、环缩氨酸类、阿魏酸及其酯类、绿原酸、新绿原酸、咖啡酸、奎宁酸、抗坏血酸类、草酸及草酸钙、单酰基半乳糖类脂物、生物碱类等等。CN 1377680A公开了一种广谱抗病毒药物的制备方法及其用途，它是从植物繁缕或其同属植物中提取的含易溶于水的硫、氮、钙的总有机酚酸或/和总有机酚酸盐及其糖苷类大极性化合物的组合物，可以抑制艾滋病病毒、肝炎病毒、流感病毒、副流感病毒、腺病毒、鼻病毒、疱疹病毒等。现有文献中还报导了有关繁缕与其它药物组合制成治疗湿疹的膏剂，皮肤再生的化妆品，也有繁缕预防脱发、牙槽炎、肠粘连疾病及用于口腔清洁等方面的用途。
本发明人按照植物化学的提取分离程序对繁缕属植物进行提取分离，以抗疱疹病毒和艾滋病病毒的药效学为指标进行筛选，发现繁缕总黄酮含有结构被确定为6-C-木糖-8-C-葡萄糖-芹黄素苷，即新西兰牡荆甙-1(vicenin-1)，其结构如下图。上述理化常数和波谱数据，与Yasukawa K，etal Yakugaku Zasshi 1986，106(6)517-519和苏亚伦，王玉兰，杨俊山 中草药1993，24(7)343-344，378中报道的基本一致。
6-C-木糖-8-C-葡萄糖-芹黄素苷研究还发现繁缕总黄酮不仅具有抗疱疹病毒和艾滋病病毒的功效，并且毒副作用小，这是现有抗病毒西药所不具备的最大优点；与此同时它还具有良好的止痛作用，可很快减轻患者痛苦，又避免了西药易产生耐药毒株的缺点。从而完成了本发明。
本发明的目的就是提供含有新西兰牡荆甙-1的繁缕总黄酮。
本发明的又一个目的是提供制备含有新西兰牡荆甙-1的繁缕总黄酮的方法。
本发明的另一个目的是提供含有新西兰牡荆甙-1的繁缕总黄酮在制备治疗抗病毒药物的用途。
本发明的再一个目的是提供含有新西兰牡荆甙-1的繁缕总黄酮作为活性成分的药物。
本发明的又一个目的是提供含有新西兰牡荆甙-1的繁缕总黄酮作活性成分的喷雾剂。
本发明所述的含新西兰牡荆甙-1的繁缕总黄酮可以按照提取黄酮的常用方法从繁缕属植物或其它属植物中提取获得的。它们包括繁缕属植物薄叶繁缕Stellaria leptohylla Hance、长瓣繁缕Stellaria hungeana Fenzl.、褐瓣雀舌草Stellaria alsine var.Phaeuspetala Hand.-Mazz.、安徽繁缕Stellariaanhwiensis Migo.、细尖繁缕Stellaria apiculata Wils.4987Stellaria(L)Scop.、薄叶阿里山繁缕Stellaria arisanensis var.Leptophylla Hayata.、北繁缕Stellariaborealis Bigel.、小茸毛繁缕Stellaria tomentalla Ohwi.、大卫繁缕Stellariadavidii Hemsl.、沙生繁缕Stellaria arenaria Maxim.、短瓣繁缕Stellariabrachypetala Bge.、华繁缕Stellaria chinensis Regel.、阿里山繁缕Stellariaarisanensis Hayata.、东北繁缕Stellaria cherleriae(Fisch.)Will.、厚叶繁缕Stellaria crassifolia、皱叶繁缕Stellaria crispate Wall.、雀舌草Stellaria alsineGrimm.、偃卧繁缕Stellaria decumbens Edgew.、二歧聚伞花繁缕Stellariadichasioides Williams.、窄叶双歧繁缕Stellaria dichotoma var.LanceolataBge.、西南繁缕Stellaria delavayi Franch.、石竹叶繁缕Stellaria dianthifoliaWilliams.、针状偃卧繁缕Stellaria decunbens var.Acicularia Edgew.EtHook.f.、双歧繁缕Stellaria dichotoma L.、线叶双歧繁缕Stellaria dichotomavar.Stephenjiana Willd.、泽繁缕Stellaria diversiflora Maxim.、凹脉繁缕Stellaria depressa Schnid.、翻白繁缕Stellaria discolor Turcz.、禾叶繁缕Stellaria graminea L.、铺散繁缕Stellaria diffusa Wills.、杜氏繁缕Stellariaduthiei Gandoger.、线茎繁缕Stellaria filicaulis Mak.、裸蕊异花繁缕Stellariadiversiflora var.Gymnandra Franch.、多花繁缕Stellaria florida Fisch.、长毛繁缕Stellaria pilosa Franch.、线柄繁缕Stellaria filipes Komar.、钝萼繁缕Stellaria amblyosepala Schrenk.、疏柔毛禾叶繁缕Stellaria graminea var.Pilosula Maxim.、变绿禾叶繁缕Stellaria graminea、东繁缕Stellariamaximowixziana Franch var.Viridescens Maxim.、江孜繁缕Stellariagyantsensis Williams.、湖北繁缕Stellaria henryi Williams.、兴安繁缕Stellariahsinganensis Kitagawa.、霞草繁缕Stellaria gypsophiloides Fenzl.、繁缕Stellaria media(L.)Cyr.、小花繁缕Stellaria micrantha Hayata.、内曲繁缕Stellaria infracta Maxim.、柔繁缕Stellaria mitans Williams.、鹅肠繁缕Stellarianeglecta Weihe.、新沼生繁缕Stellaria neo-alustris Kitagawa.、八蕊繁缕Stellaria octandra Fobedim.、红莓繁缕Stellaria oxycoccoides Komar.、石生繁缕Stellaria saxatilis Buch-Ham.、柄花繁缕Stellaria peduncularis Bge.、台湾繁缕Stellaria cicrantha Hayata.、沼生繁缕Stellaria palustria L.、土耳其斯坦繁缕Stellaria turkestanica Schischk.、展叶繁缕Stellaria patentifoliaKitagawa.、假石生繁缕Stellaria pseudosaxatilis Hand.-Mass.、五台繁缕Stellaria wutaica Hand.-Mazz.、网脉繁缕Stellaria reticulivena Hayata.、岩繁缕Stellaria rupestris Hemsl.、抱茎石生繁缕Stellaria saxatilis var.Amplexicaulis Hand.-mazz.、三型繁缕Stellaria trimorpha Nakai.、小繁缕Stellaria pusilla Schmid.、燧瓣繁缕Stellaria radians L.、准葛尔繁缕Stellariasoongorica Roshev.、苏氏繁缕Stellaria souliei Williams.、星毛繁缕Stellariastellato-pilosa Hayata.、园萼繁缕Stellaria stronglosepala Hand.-Mazz.、拟伞花繁缕Stellaria subumbellata Edgew.、湿地繁缕Stellaria uda Williams.、绿花繁缕Stellaria virdiflora Pax et O.Hoffm.、巫山繁缕Stellaria wushanensisWilliams.、伞花繁缕Stellaria umbellate Turcz.、云南繁缕Stellaria yunnanensisfranch.j、及牛繁缕属植物牛繁缕Malachium aquaticum(L.)Fries。
优选通过下列步骤获得含新西兰牡荆甙-1的繁缕总黄酮取繁缕生药或鲜草(折换成干草)用8倍量30～40％的低级醇，于提取罐中加温到40～50℃减压回流提取三次，每次1～3小时，合并提取液；减压将提取物浓缩至40℃下测定密度为1.05-1.1的提取液；向上述浓缩液中加入95％乙醇，使醇浓度达到60-70％，醇沉(醇沉物另用)，过滤得到滤液，将滤液浓缩，真空干燥，得干燥原料药。
本发明所述的繁缕总黄酮的另外一种制备方法包括取繁缕生药或鲜草(折换成干草)用8倍量30～40％的低级醇，于提取罐中加温到40～50℃提取三次，每次1～3小时，合并提取液；减压回收溶媒后再以减压将提取物浓缩至40℃下测定密度为1.05-1.1的提取液；将浓缩后的滤液上D101大孔树脂床分离，以蒸馏水洗脱并弃去该部分洗脱液，再以40-95％的乙醇或甲醇洗脱，洗脱时，对洗脱液采用薄层层析法用对照品新西兰牡荆甙-I作对照进行监控，收集含有对应色斑的洗脱液。该部分洗脱液经减压浓缩，真空干燥得繁缕总黄酮原料药，其中总黄酮含量为50-90％。
本发明所述的繁缕总黄酮的又一种制备方法包括取繁缕生药或鲜草(折换成干草)用8倍量30～40％的低级醇，于提取罐中加温到40～50℃减压回流提取三次，每次1～3小时，合并提取液；减压回收溶媒将提取物浓缩至40℃下测定密度为1.05-1.1的提取液；将浓缩的滤液上聚酰胺柱分离，先以蒸馏水洗脱，再以40-95％的乙醇或甲醇洗脱，洗脱时，对洗脱液采用薄层层析法用对照品新西兰牡荆甙-I作对照进行监控，收集含有对应色斑的洗脱液。该部分洗脱液经减压浓缩，真空干燥得繁缕总黄酮原料药，其中总黄酮含量为70-90％。
其中的低级醇选自于乙醇、甲醇、异丁醇或正丁醇，优选乙醇。
本发明所述的繁缕总黄酮具有抗病毒的活性，本发明所述的病毒包括艾滋病毒、疱疹病毒、呼吸道病毒、肠道病毒、尖锐湿疣病毒、感冒病毒和腺病毒。本发明所述的繁缕总黄酮尤其对艾滋病病毒和疱疹病毒有较好的疗效。所以本发明所述的繁缕总黄酮作为活性成分可以制备成药物治疗上述病毒所引起的疾病，其中的疱疹病毒还包括单纯疱疹病毒-1、单纯疱疹病毒-2和水痘-带状疱疹病毒。单纯性疱疹和水痘-带状疱疹病毒引起的疾病包括皮肤疱疹、性疱疹、眼角膜疱疹或水痘和带状疱疹。
本发明所述的繁缕属总黄酮可以作为活性成分与药学上可接收的载体或赋型剂制备成各种剂型，优选外用剂型。这些剂型包括喷雾剂、乳剂、霜剂、膏剂、贴剂、滴眼剂、滴鼻剂、栓剂、膜剂等，优选喷雾剂。
本发明所述的喷雾剂是由繁缕总黄酮作为活性成分和喷雾剂辅料组成。喷雾剂辅料优选丙二醇、薄荷脑和乙醇。
本发明所述的喷雾剂中繁缕总黄酮的浓度可以是0.25-4％，优选0.25％的浓度。取繁缕总黄酮加水分别配成0.25％、0.5％、1％、2％、4％的成品，其中尼泊金乙酯浓度为0.1％，丙二醇含量为10％，经过药效学筛选确定繁缕总黄酮的浓度为0.25％。
本发明所述的喷雾剂中所用的配液溶媒可以是水或20-75％浓度的乙醇。优选40％乙醇。取总黄酮分别配成含量为4％、20％、40％、60％、75％乙醇溶液，其中水液中加入0.1％尼泊金乙酯，观察各溶液的稳定性、喷雾性、溶液挥发性，放置一段时间后，水液、20％乙醇溶液、40％乙醇溶液均较稳定，而60％和70％乙醇配制成的溶液则均有明显沉淀产生。水液与20％乙醇溶液由于醇含量较低，作为喷雾剂药液喷于皮肤后不宜挥发、吸收，因此选择最终配液浓度40％乙醇。
本发明所述的喷雾剂中所用的助溶剂可以是丙二醇、丙三醇，优选丙二醇，更优选20％丙二醇。分别添加20％丙二醇和20％丙三醇在40％乙醇溶液中，按照喷雾剂的评价方法用直观分析方法分析试验结果选择合适的助溶剂，结果表明，不添加助溶剂的喷雾剂澄明度较好，溶液喷雾性较好，溶液喷于皮肤上分布均匀，但引湿性较差，皮肤触感无粘性；以丙三醇为助溶剂配成的喷雾剂溶液浑浊，溶液喷雾性较好，溶液喷于皮肤上分布均匀，引湿性较好，皮肤触感粘性较大；加丙二醇为助溶剂的喷雾剂溶液澄明度好，溶液喷雾性较好，溶液喷于皮肤上分布均匀，引湿性较好，皮肤触感有轻微粘性。可见丙二醇作为助溶剂配成的喷雾剂溶液澄明度好，引湿性好，丙二醇粘度较小，毒性和刺激性较小，溶解性能良好，增加制剂的产品稳定性，并且有一定的透皮吸收作用，可增强有效成分的吸收，提高疗效。
助溶剂浓度可以选择丙二醇10-30％，优选10％。
本发明所述的喷雾剂任选可以加入芳香剂。优先选用的芳香气味的冰片和薄荷脑。
实施例1取200g繁缕用60％乙醇提取，挥去乙醇后，加500ml水溶解，以等量正丁醇萃取七次，合并萃取液，减压回收正丁醇得含繁缕总黄酮。
实施例2取200g繁缕用60％乙醇提取，挥去乙醇后，加200ml水溶解，上已预处理过的大孔树脂，先用水洗脱，水洗脱液弃去，再用40％乙醇洗脱，收集40％乙醇洗脱液，回收乙醇后，得到含繁缕总黄酮。
实施例3用8倍量的40％乙醇回流提取3次，每次1.5小时，合并提取液，减压回收乙醇至40℃测相对密度为1.10-1.15，上预处理的大孔树脂柱，每10克大孔树脂上样0.8克，先用水洗脱，洗脱至水液近无色，紫外检测无明显吸收峰，再用40％乙醇洗脱，收集洗脱液，减压回收乙醇至40℃测相对密度为1.25，干燥即得繁缕总黄酮。
实施例4取繁缕生药或鲜草(折换成干草)用8倍量40％的甲醇，于提取罐中加温到40～50℃提取三次，每次1～3小时，合并提取液；减压回收溶媒后再以减压将提取物浓缩至40℃下测定密度为1.05-1.1的提取液；将浓缩的滤液上聚酰胺柱分离，先以蒸馏水洗脱，再以80％的乙醇或甲醇洗脱，洗脱时，对洗脱液采用薄层层析法用对照品新西兰牡荆甙-I作对照进行监控，收集含有对应色斑的洗脱液。该部分洗脱液经减压浓缩，真空干燥得繁缕总黄酮原料药，得率为1.73％，其中总黄酮含量为70-90％。
实施例5按照实施例4所述的方法，不同之处是用小花繁缕取代繁缕，得率为1.37％。
实施例6按照实施例4所述的方法，不同之处是用沙生繁缕取代繁缕，得率为1.18％。
实施例7
按照实施例4所述的方法，不同之处是用安徽繁缕取代繁缕，得率为1.69％。
实施例8按照实施例4所述的方法，不同之处是用多叶繁缕取代繁缕，得率为1.52％。
实施例9按照实施例4所述的方法，不同之处是用湖北繁缕取代繁缕，得率为1.39％。
实施例10按照实施例4所述的方法，不同之处是用薄叶繁缕取代繁缕，得率为1.70％。
实施例11按照实施例4所述的方法，不同之处是用华繁缕取代繁缕，得率为1.37％。
实施例12按照实施例4所述的方法，不同之处是用石竹叶繁缕取代繁缕，得率为1.59％。
实施例13取200g长瓣繁缕用60％乙醇提取，挥去乙醇后，加200ml水溶解，上已预处理过的大孔树脂，先用水洗脱，水洗脱液弃去，再用40％乙醇洗脱，收集40％乙醇洗脱液，回收乙醇后，得到含繁缕总黄酮。
实施例14将长毛繁缕用8倍量的40％乙醇回流提取3次，每次1.5小时，合并提取液，减压回收乙醇至40℃测相对密度为1.10-1.15，上预处理的大孔树脂柱，每10克大孔树脂上样0.8克，先用水洗脱，洗脱至水液近无色，紫外检测无明显吸收峰，再用40％乙醇洗脱，收集洗脱液，减压回收乙醇至40℃测相对密度为1.25，干燥即得繁缕总黄酮。
实施例15取皱叶繁缕生药或鲜草(折换成干草)用8倍量40％的甲醇，于提取罐中加温到40～50℃减压回流提取三次，每次1～3小时，合并提取液；减压将提取物浓缩至40℃下测定密度为1.05-1.1的提取液；将浓缩的滤液上聚酰胺柱分离，先以蒸馏水洗脱，再以80％的乙醇或甲醇洗脱，洗脱时，对洗脱液采用薄层层析法用对照品新西兰牡荆甙-I作对照进行监控，收集含有对应色斑的洗脱液。该部分洗脱液经减压浓缩，真空干燥得繁缕总黄酮原料药，其中总黄酮含量为70-95％。
实施例16取200g展叶繁缕用60％乙醇提取，挥去乙醇后，加500ml水溶解，以等量正丁醇萃取七次，合并萃取液，减压回收正丁醇得含繁缕总黄酮。
实施例17取200g台湾繁缕用60％乙醇提取，挥去乙醇后，加200ml水溶解，上已预处理过的大孔树脂，先用水洗脱，水洗脱液弃去，再用40％乙醇洗脱，收集40％乙醇洗脱液，回收乙醇后，得到含繁缕总黄酮。
实施例18取200g的云南繁缕用8倍量的40％乙醇回流提取3次，每次1.5小时，合并提取液，减压回收乙醇至40℃测相对密度为1.10-1.15，上预处理的大孔树脂柱，每10克大孔树脂上样0.8克，先用水洗脱，洗脱至水液近无色，紫外检测无明显吸收峰，再用40％乙醇洗脱，收集洗脱液，减压回收乙醇至40℃测相对密度为1.25，干燥即得繁缕总黄酮。
实施例19取伞叶繁缕生药或鲜草(折换成干草)用8倍量40％的甲醇，于提取罐中加温到40～50℃减压回流提取三次，每次1～3小时，合并提取液；减压回收溶媒将提取物浓缩至40℃下测定密度为1.05-1.1的提取液；将浓缩的滤液上聚酰胺柱分离，先以蒸馏水洗脱，再以80％的乙醇或甲醇洗脱，洗脱时，对洗脱液采用薄层层析法用对照品新西兰牡荆甙-I作对照进行监控，收集含有对应色斑的洗脱液。该部分洗脱液经减压浓缩，真空干燥得繁缕总黄酮原料药，其中总黄酮含量为70-90％。
实施例20喷雾剂的制备用40％的乙醇溶解实施例4中制备的繁缕总黄酮得到澄明均匀的溶液，再加入10％丙二醇作助溶剂和0.5％薄荷脑作芳香剂，配成溶液系统，然后将上述溶液溶入20-65％的抛射剂，装入容器制成。
实施例21乳霜剂繁缕总黄酮5g加亲水性乳剂基质至1000g，分装成15g/支。用于健肤抗病毒。
实施例22凝胶剂取繁缕总黄酮2.5g、冰片10g和尼泊金乙酯1g，加水溶性基质至1000g，分装成15g/瓶。用于单纯性疱疹和水痘-带状疱疹、尖锐湿疣等病毒性疾病的治疗。
实施例23滴眼剂取繁缕总黄酮2.5g、尼泊金乙酯0.3g和氯化钠5.6g，增溶剂适量，加注射用水1000ml，分装成5ml/支。用于治疗由病毒引起的角膜疱疹。
实施例24滴鼻剂取繁缕总黄酮3.0g和丙二醇200g，其它辅料适量配成1000ml，分装成10ml/瓶，用于治疗鼻粘膜单纯疱疹。
实施例25栓剂取繁缕总黄酮5.0g、维生素E 10g和半合成脂肪酸酯1477g，制成1000枚。用于治疗单纯性疱疹-2型、尖锐湿疣等病毒性疾病。
实施例26膜剂取PVA17-8882g，加5-7倍量的蒸馏水，浸泡膨胀后移至水浴上加热，使全部溶解后，另取二氧化钛3g用胶体研磨后加入上清液中，搅匀，然后在搅拌下逐渐加入聚山梨酸酯-80 5g、甘油5g和繁缕总黄酮10g，制成10％乙醇溶液。搅拌均匀后放置过夜，除去气泡，制成膜剂。每张含繁缕总黄酮0.5mg。用于治疗单纯性疱疹-2型、尖锐湿疣等病毒性疾病的治疗。
试验例1含新西兰牡荆甙-1的繁缕总黄酮在细胞培养内对HIV-1、HSV-I、HSV-II和VZV病毒的抑制试验在非洲绿猴肾细胞(VERO)和人胚肺二倍体细胞(2BS)培养内，检测繁缕总黄酮抗水痘-带状疱疹病毒(VZV)和单纯疱疹病毒I型、II型(HSV-I、HSV-II)的作用。证明它具有体外抗上述三种病毒的作用。
采用病毒细胞病变(CPE)法和噻唑蓝(MTT)染色法进行试验，计算半数抑制浓度(IC50)及治疗指数(TI)。试验分一次给药组和三次给药组，并重复三次。
1.1试验1.1.1一次给药组①病毒CPE法VERO细胞和2BS细胞以40万/ml浓度接种96孔培养板，37℃培养24小时，分别加入HSV-I、HSV-II和VZV病毒的10-100TCID50的病毒液，每孔100μl，37℃吸附1小时，弃掉病毒液。加入药液，均以药物的最大无毒浓度二倍稀释10个浓度，每浓度4孔，每孔100μl。即繁缕总黄酮为5000μg/ml、2500μg/ml、1250μg/ml、625μg/ml、312.5μg/ml、156.2μg/ml、78.1μg/ml、39.1μg/ml、19.5μg/ml、9.8μg/ml。无环鸟苷为2500μg/ml、1250μg/ml、625μg/ml、312.5μg/ml、156.3μg/ml、78.1μg/ml、39.1μg/ml、19.5μg/ml、9.8μg/ml、4.9μg/ml。同时设病毒对照和正常细胞对照，37℃、5％CO2培养5-7天，每24小时倒置显微镜下观察病毒CPE，至病毒对照细胞病变(CPE)出现“+++-++++”，计算IC50。
②病毒MTT染色法观察细胞病变CPE结果后，加入MTT染色液每孔10μl，置37℃培养4小时，然后加入10％SDS 100μl使细胞裂解，裂解后用酶标仪波长570nm测定，记录OD值，计算IC50。
1.1.2三次给药组三次给药组方法同一次给药组。三次给药组每24小时将旧药液弃掉，重新加入同浓度药液，病毒对照和细胞对照换维持液，连续三天。
1.2实验结果1.2.1预备试验结果药物细胞的毒性作用繁缕总黄酮和阳性对照药物无环鸟苷，在VERO细胞和2BS细胞培养内比较其对细胞的毒性结果见附表2.及附照1～14。
①繁缕总黄酮对VERO细胞的毒性结果验证药物繁缕总黄酮CPE法最大无毒浓度(TD0)为5000μg/ml，半数中毒浓度(TD50)为7496.7μg/ml。MTT法最大无毒浓度(TD0)为5000μg/ml，半数中毒浓度(TD50)为7811.4g/ml。
阳性对照药物无环鸟苷CPE法最大无毒浓度(TD0)为2500μg/ml，半数中毒浓度(TD50)为3878.7μg/ml。MTT法最大无毒浓度(TD0)为2500μg/ml，半数中毒浓度(TD50)为3945.1μg/ml。
②繁缕总黄酮对2BS细胞的毒性结果验证药物繁缕总黄酮CPE法最大无毒浓度(TD0)为5000μg/ml，半数中毒浓度(TD50)为7833.1μg/ml。MTT法最大无毒浓度(TD0)为5000μg/ml，半数中毒浓度(TD50)为7750.6μg/ml。
阳性对照药物无环鸟苷CPE法最大无毒浓度(TD0)为2500μg/ml，半数中毒浓度(TD50)为3916.8μg/ml。MTT法最大无毒浓度(TD0)为2500μg/ml，半数中毒浓度(TD50)为3892.8μg/ml。
在VERO和2BS细胞培养内测定HSV-I、HSV-II和VZV病毒半数感染量(TCID50)，采用病毒细胞病变CPE法①HSV-I病毒半数感染量(TCID50)为10-7②HSV-II病毒半数感染量(TCID50)为10-7③VZV病毒半数感染量(TCID50)为10-31.2.2正式试验结果(见附表3)本发明所述的繁缕总黄酮和无环鸟苷在VERO和2BS细胞培养内对HSV-I、HSV-II型和VZV病毒的抑制作用。
1.2.2.1繁缕总黄酮对HSV-I型病毒的抑制作用①一次给药组验证药物繁缕总黄酮CPE法，药物半数有效浓度(IC50)为10.6μg/ml，最小有效浓度(MIC)为39.1μg/ml，治疗指数(TI)为127.8。MTT法药物半数有效浓度(IC50)为10.9μg/ml，最小有效浓度(MIC)为39.1μg/ml，治疗指数(TI)为127.8。
阳性对照药物无环鸟苷CPE法，药物半数有效浓度(IC50)为＜4.9μg/ml，最小有效浓度(MIC)为＜4.9μg/ml，治疗指数(TI)为＞510.2。MTT法药物半数有效浓度(IC50)为＜4.9μg/ml，最小有效浓度(MIC)为＜4.9μg/ml，治疗指数(TI)为＞510.2。
②三次给药组验证药物繁缕总黄酮CPE法药物半数有效浓度(IC50)为＜9.8μg/ml，最小有效浓度(MIC)为19.5μg/ml，治疗指数(TI)为256.4。MTT法药物半数有效浓度(IC50)为＜9.8μg/ml，最小有效浓度(MIC)为19.5μg/ml，治疗指数(TI)为256.4。
阳性对照药物无环鸟苷CPE法，药物半数有效浓度(IC50)为＜4.9μg/ml，最小有效浓度(MIC)为＜4.9μg/ml，治疗指数(TI)为＞510.2。MTT法药物半数有效浓度(IC50为＜4.9μg/ml，最小有效浓度(MIC)为＜4.9μg/ml，治疗指数(TI)为＞510.2。
1.2.2.2繁缕总黄酮对HSV-II型病毒的抑制作用①一次给药组验证药物繁缕总黄酮CPE法，药物半数有效浓度(IC50)为18.6μg/ml，最小有效浓度(MIC)为39.1μg/ml，治疗指数(TI)为127.8。MTT法药物半数有效浓度(IC50)为15.7μg/ml，最小有效浓度(MIC)为39.1μg/ml，治疗指数(TI)为127.8。
阳性对照药物无环鸟苷CPE法，药物半数有效浓度(IC50)为4.9μg/ml，最小有效浓度(MIC)为9.8μg/ml，治疗指数(TI)为255.1。MTT法药物半数有效浓度(IC50)为＜4.9μg/ml，最小有效浓度(MIC)为9.8μg/ml，治疗指数(TI)为255.1。
②三次给药组验证药物繁缕总黄酮CPE法，药物半数有效浓度(IC50)为14.0μg/ml，最小有效浓度(MIC)为39.1μg/ml，治疗指数(TI)为127.8。MTT法药物半数有效浓度(IC50)为13.8μg/ml，最小有效浓度(MIC)为39.1μg/ml，治疗指数(TI)为127.8。
阳性对照药物无环鸟苷CPE法，药物半数有效浓度(IC50)为＜4.9μg/ml，最小有效浓度(MIC)为9.8μg/ml，治疗指数(TI)为255.1。MTT法药物半数有效浓度(IC50)为＜4.9μg/ml，最小有效浓度(MIC)为9.8μg/ml，治疗指数(TI)为255.1。
1.2.2.3繁缕总黄酮对VZV病毒的抑制作用①一次给药组验证药物繁缕总黄酮CPE法，药物半数有效浓度(IC50)为13.5μg/ml，最小有效浓度(MIC)为39.1μg/ml，治疗指数(TI)为127.8。MTT法药物半数有效浓度(IC50)为14.7μg/ml，最小有效浓度(MIC)为39.1μg/ml，治疗指数(TI)为127.8。
阳性对照药物无环鸟苷CPE法，药物半数有效浓度(IC50)为＜4.9μg/ml，最小有效浓度(MIC)为9.8μg/ml，治疗指数(TI)为255.1。MTT法药物半数有效浓度(IC50)为＜4.9μg/ml，最小有效浓度(MIC)为9.8μg/ml，治疗指数(TI)为255.1。
②三次给药组验证药物繁缕总黄酮CPE法，药物半数有效浓度(IC50)为12.6μg/ml，最小有效浓度(MIC)为19.5μg/ml，治疗指数(TI)为256.4。MTT法药物半数有效浓度(IC50)为12.8μg/ml，最小有效浓度(MIC)为19.5μg/ml，治疗指数(TI)为256.4。
阳性对照药物无环鸟苷CPE法，药物半数有效浓度(IC50)为＜4.9μg/ml，最小有效浓度(MIC)为9.8μg/ml，治疗指数(TI)为255.1。MTT法药物半数有效浓度(IC50)为＜4.9μg/ml，最小有效浓度(MIC)为9.8μg/ml，治疗指数(TI)为255.1。以上试验结果表明繁缕总黄酮在体外抗病毒药效试验(细胞培养内)中，采用病毒细胞病变CPE法和MTT法，证明它具有抗单纯疱疹病毒I、II型和水痘-带状疱疹病毒的作用。
试验例2含有新西兰牡荆甙-1的繁缕总黄酮抗HIV-1的体外活性试验1材料和方法病毒HIV-1018a是从AZT治疗前的HIV-1感染的个体获得。它由美国加州大学圣地亚哥分校的Douglas Richmen教授提供。
细胞外周血单核细胞(PBMC)使用Ficoll-Hypaque密度梯度离心方法，从未感染HIV的健康供血者的外周血分离得到的。
试验设计抗病毒活性的测定将2×105PBMC/100微升的含新西兰牡荆甙-1的繁缕总黄酮暴露于用接种50微升的HIV-1的100TCID50。同时，给每个孔中加入各种浓度的新西兰牡荆甙100微升。感染4天培后，取上清液测定p24抗原产生。按照操作说明通过完整病毒抗原捕获ELISA(CoulterCorp.，Hialeah FL)复制来定量HIV-1p24抗原。
细胞毒性测定使用包括3H-胸腺嘧啶所测定的细胞增生描述可能的药物细胞毒性作用。在含有各种浓度的新西兰牡荆甙-1的96孔培养皿培养4天后，将1μ Ci胸腺嘧啶(DuPont NEN，Boston MA)加入到2×105细胞/200微升培养基。加入3H-胸腺嘧啶后，在37℃培养6小时并测定3H-TdR。用SigmaPlot Scimtific Graphing System计算50％抑制浓度(IC50)和50％毒性浓度(TC50)，计算治疗指数TI值＝TC50/IC50。
试验结果HIV-1018a p24抗原产生(pg/ml)(感染后4天，用病毒将细胞感染2小时)
结论繁缕总黄酮对相同时间病毒接种的细胞的IC50为20.8μg/ml，TC50为475.5μg/ml，治疗指数为22.8。繁缕总黄酮对HIV-1018a预感染PBMCs3小时的IC50为22.9μg/ml，TC50为475.5μg/ml，治疗指数为20.8。
试验例3本发明喷雾剂对小鼠阴道感染II型单纯疱疹病毒的治疗效果。
1.1试验观察指标(1)小鼠阴道感染HSV-II病毒后，引起病毒性阴道炎，局部红肿，后肢瘫痪死亡，经验证药物和阳性对照药物治疗后，计算其发病率，死亡率，平均生活日，药物保护率和延长生命率与病毒对照组比较，并经统计学处理，计算t值及P值，判断治疗效果。
(2)将治疗前和治疗后所取阴道棉拭子标本，制成1∶5的悬液在VERO细胞培养内采用细胞病变(CPE)法。观察记录试验结果，以25％细胞病变记“+”以26％～50％细胞病变记“++”以51％～75％细胞病变记“+++”以76％～100％细胞病变记“++++”用Reed-Muench法计算50％感染剂量(TCID50)。试验结果与病毒对照组比较，计算药物对HSV-II的抑制率，判断药物治疗效果。
1.1.1感染病毒BaIb/c鼠，雌性，18-20克，随机分组，每组10只。将消毒1毫升注射器配自制的倒刺针头，吸入HSV-II病毒液，旋转插入小鼠阴道内多次划伤阴道内壁，并同时注入10LD50病毒液0.03ml/只。
2.1.2药物分组验证药物本发明喷雾剂选用以最大无毒剂量(TD0)以下二倍稀释2％、1％、0.5％、0.25％、0.125％，5个剂量组。
阳性对照药物3％阿昔洛韦软膏，1个剂量组。
同时设验证药物组对照，阳性药物组对照(不感染病毒划伤阴道内壁后，用药涂抹)。
正常小鼠对照(不感染病毒，不用药)。
病毒对照(感染病毒液为10LD50后，不用药物治疗)。
2.1.3药物治疗小鼠阴道感染HSV-II病毒后第3天出现病毒性阴道炎症状，表现为阴道红肿，排尿困难等现象。随即进行药物治疗，本发明喷雾剂药物剂量选用毒性试验的最大无毒浓度(TD0)以下的2％、1％、0.5％、025％、0.125％五个剂量组。阳性对照药物3％阿昔洛韦软膏。试验采用棉签粘药液和药膏在阴道内涂抹的方法，每组10只小鼠。每日二次，连续治疗六天。另一组感染病毒后第3天出现病毒性阴道炎症状，用药前取阴道棉拭子标本放在(装有0.5毫升的生理盐水的小塑料管中)置-25℃保存。随即用验证药物和阳性对照药物进行治疗，每日二次，连续治疗六天。停药后1天再取阴道标本，(治疗后)将所取标本制成1∶5的悬液在Vero细胞培养内分离测定病毒。试验重复三次。
1.2实验结果1.2.1本发明喷雾剂对小鼠病毒性阴道炎的治疗效果(以保护率、延长生命率为指征，判断药效)小鼠经阴道感染HSV-II病毒，病毒感染量为10LD50，每组10只。病毒感染后第3天出现病毒性阴道炎症状。随即进行药物治疗，验证药物组选用以最大无毒剂量(TD0)以下二倍稀释5个剂量组即2％、1％、0.5％、0.25％、0.125％和3％阿昔洛韦药膏1个剂量组，每日二次，连续治疗6天。三次试验结果见附表4。其药物保护率(％)分别为63％、56％、48％、44％、30％，延长生命率(％)分别为59％、58％、55％、52％、45％，半数有效剂量(ED50)为0.89％。3％阿昔洛韦药膏其保护率(％)为81％，延长生命率(％)为63％。两种药物经统计学处理无显著性差异，P值＜0.01(除0.125％＜0.05外)。说明本发明喷雾剂具有体内抗II型单纯疱疹病毒的作用，与病毒对照组比较效果显著。依据上述试验结果本发明喷雾剂的治疗指数为32。
1.2.2本发明喷雾剂对小鼠病毒性阴道炎的治疗效果(以试验治疗前后采取的小鼠阴道标本悬液在细胞培养内分离病毒测定TCID50的结果为指标，判断药效)小鼠阴道感染HSV-II病毒后，第三天出现明显的病毒性阴道炎症状，进行药物治疗。治疗前采取阴道棉试子标本，随即用验证药物和阳性对照药物进行治疗，每日二次，连续治疗六天。停药后1天再取阴道标本，并制成1∶5的悬液在VERO细胞培养内，采用细胞病变(CPE)法，测定病毒滴度，以判断药效。三批试验结果见附表5.本发明喷雾剂对小鼠阴道感染HSV-II病毒的抑制率(％)分别为73％、67％、63％、57％、40％。阳性对照药物3％阿昔洛韦对小鼠阴道感染HSV-II病毒的抑制率(％)为90％。两种药物经统计学处理无显著性差异，P值均＜0.01。说明本发明喷雾剂具有体内抗II型单纯疱疹病毒的作用，与病毒对照组比较结果显著。依据上述试验结果本发明喷雾物剂的治疗指数为32。
1.3小结根据试验结果表明本发明喷雾剂剂量在0.25％以上具有抗II单纯疱疹病毒的作用。
2.本发明眼药水体内抗单纯疱疹病毒药效试验(家兔眼角膜试验)检测不同浓度的本发明眼药水对家兔病毒性角膜炎的治疗效果，为临床提供试验依据。
2.1试验2.1.1感染病毒家兔雄性，体重500～100克，随机分组。感染前先用无菌的1％的卡因滴入家兔眼内，每只眼滴入0.04ml，约25秒钟后眼球麻醉，使用消毒的眼角膜环钻轻轻在眼角膜上划痕，然后将100ID50的病毒感染家兔角膜，每只眼角膜0.2ml，每组5只家兔。病毒感染后第三天出现病毒性角膜炎症状，表现为眼角膜浑红，眼睑肿大，随即进行药物治疗，验证药物选用外用药物试验的最大无毒浓度(TD0)以下的2％、1％、0.5％、0.25％、0.125％五个剂量，每剂量组外用滴眼5只家兔，每眼滴入约0.15ml。阳性药物阿昔洛韦1mg/ml，每眼滴2滴约0.15ml，外用滴眼5只家兔。每日二次，连续治疗六天。同时设验证药物和阳性药物对照(不给病毒，照常给药，剂量同治疗组)。同时设正常家兔眼角膜对照(不给病毒，滴生理盐水)每眼滴入2滴，约0.15ml，滴眼5只家兔，同时设病毒对照(100ID50病毒量)5只家兔。另一组试验于病毒感染后第三天取眼角膜棉拭子标本(标本放在装有0.5ml的生理盐水的塑料管中)置-25℃保存。随即进行药物治疗，验证药物选用外用药物试验的最大无毒浓度以下的2％、1％、0.5％、0.25％、0.125％五个剂量，每剂量组外用滴眼5只家兔，每眼滴入约0.15ml。阳性药物阿昔洛韦1mg/ml，每眼滴2滴约0.15ml，外用滴眼5只家兔。每日二次，连续治疗六天。停药后第二天再取眼角膜标本。制成1∶5病毒悬液，在Vero细胞培养内，采用细胞变(CPE)法测定病毒滴度(TCID50)。试验重复三次。
2.1.2试验观察2.1.2.1家兔I型单纯疱疹病毒滴眼，引起病毒性角膜炎，随即采用药物治疗，每日二次，连续治疗六天，计录每日病损程度与病毒对照组比较，计算保护率，并经统计学处理以X值P值判断效果。
2.1.2.2家兔I型单纯疱疹病毒滴眼，引起病毒性角膜炎，于病毒感染后第三天(用药前)和停药后第二天(治疗后)分别采取眼角膜棉拭子标本，并制成1∶5病毒悬液，在Vero细胞培养内，采用细胞变(CPE)法测定病毒滴度(TCID50)。(见附表6)与病毒对照组比较，计算药物对疱疹病毒的抑制率，并经统计学处理，以X值P值判断效果。
2.2实验结果2.2.1本发明眼药水对家兔眼角膜感染单纯疱疹病毒药效试验结果。
家兔经100ID50病毒滴入损伤角膜，三天后引起病毒性角膜炎，随即进行药物治疗，验证药物选用外用药物试验的最大无毒浓度以下的2％、1％、0.5％、0.25％、0.125％五个剂量，每剂量组外用滴眼5只家兔，每眼滴入约0.15ml。阳性药物阿昔洛韦1mg/ml，每眼滴2滴约0.15ml，外用滴眼5只家兔。每日二次，连续治疗六天。计录每日病损程度与病毒对照组比较，计算保护率，并经统计学处理以X值P值判断效果。三次试验结果见表明不同浓度的本发明眼药水对家兔眼角膜感染HSV-I病毒的保护率(％)分别为100％、100％、100％、93％、40％。阳性对照药物阿昔洛韦对家兔眼角膜感染HSV-I病毒的保护率(％)为100％。两种药物经统计学处理无显著性差异。P值＜0.01。说明本发明眼药水浓度在0.25％以上具有抗I型单纯疱疹病毒的作用。与病毒对照组比较其结果显著。
2.2.2本发明眼药水对家兔眼角膜感染单纯疱疹病毒药效试验结果。
家兔经100ID50病毒滴入损伤角膜，病毒感染后三天(用药前)和停药后第二天(治疗后)分别采取眼角膜棉拭子标本。并制成1∶5病毒悬液，在Vero细胞培养内，采用细胞变(CPE)法测定病毒滴度(TCID50)。与病毒对照组比较，计算药物对疱疹病毒的抑制率，并经统计学处理，以X值P值判断效果。三次试验结果(见附表8)不同浓度的本发明眼药水对家兔眼角膜感染HSV-I病毒的保护率(％)分别为100％、100％、100％、100％、13％。阳性对照药物阿昔洛韦对家兔眼角膜感染HSV-I％、100％、13％。阳性对照药物阿昔洛韦对家兔眼角膜感染HSV-I病毒的保护率(％)为100％。两种药物经统计学处理无显著性差异。P值＜0.01。说明本发明眼药水浓度在0.25％以上具有抗I型单纯疱疹病毒的作用。与病毒对照组比较其结果显著。
2.3小结根据试验结果表明不同浓度本发明眼药水具有抗I型单纯疱疹病毒的作用。
3本发明喷雾剂体内抗单纯疱疹I型病毒药效试验检测本发明喷雾剂对豚鼠皮肤感染I型单纯疱疹病毒药效试验，为临床应用提供试验依据。
3.1预备试验3.1.1药物毒性测定根据本发明喷雾剂对动物皮肤毒性试验结果，其最大无毒浓度大于5g/kg。
3.1.2 I型单纯疱疹病毒(HSV-I，SM44株)病毒毒力测定先用脱毛剂(8％Bas)将豚鼠背部皮肤(4cm2)脱毛，再用37℃温水将皮肤洗净拭干，然后用“梅花针”重刺已脱毛的皮肤，将已刺过的皮肤分成4份(每块皮肤的面积为1cm2)。将新制备的细胞病毒悬液用生理盐水稀释5个浓度，即10-0、10-1、10-2、10-3、10-4，每浓度5只。每块皮肤用30μl的病毒液涂抹感染皮肤。观察14天，同时设正常豚鼠对照。以Reed Muench法计算半数感染量(LD50)。试验重复三次。
3.2正式试验本发明喷雾剂对豚鼠皮肤感染I型单纯疱疹病毒的疗效测定①豚鼠分组按性别、体重平均分组，每组10只。先用脱毛剂(8％Bas)将豚鼠背部皮肤(4cm2)脱毛，再用37℃温水将皮肤洗净拭干，然后用“梅花针”重刺已脱毛的皮肤，将已刺过的皮肤分成4份(每块皮肤的面积为1cm2)，每块皮肤用30μl的HSV-I病毒原液涂抹感染皮肤。
②感染病毒后第4天，豚鼠背部皮肤即出现典型的疱疹病灶，面积达3.6-4.0cm2(见附照)。随既用本发明喷雾剂进行治疗，本发明喷雾剂药物选用对动物的外用皮肤试验的最大无毒浓度(TD0)以下二倍稀释4个剂量，既2％、1％、0.5％、0.25％和3％阿昔洛韦软膏喷洒和涂抹皮肤疱疹处，每日治疗四次，连续治疗6天。
③同时设病毒对照组(感染病毒后不给药)及正常豚鼠对照组(不感病毒用生理盐水)试验重复三次。
3.3试验结果药物治疗效果观察指标
用药后每日观察记录豚鼠背部皮肤疱疹病灶的变化情况，记录标准如下皮肤疱疹病灶面积为1/4时，病变程度(cm2)记1.0-1.6皮肤疱疹病灶面积为2/4时，病变程度(cm2)记1.8-2.4皮肤疱疹病灶面积为3/4时，病变程度(cm2)记2.6-3.2皮肤疱疹病灶面积为4/4时，病变程度(cm2)记3.4-4.0皮肤疱疹结痂达1/4为记，病变程度(cm2)记0.8-1.0皮肤疱疹结痂达2/4为记，病变程度(cm2)记0.6 0.8皮肤疱疹结痂达3/4为记，病变程度(cm2)记0.4 0.6皮肤疱疹结痂达4/4为记，病变程度(cm2)记0.2 0.4皮肤疱疹脱痂痊愈记03.3.1预备试验结果药物毒性测定本发明喷雾剂药物对动物皮肤外用药的最大无毒浓度为大于5g/kg。
病毒毒力测定I型单纯疱疹病毒(HSV-I)，经对豚鼠皮肤感染试验测定，半数感染量(LD50)为10-0.5，药效试验时用病毒原液。
3.3.2正式试验结果3.3.2.1.本发明喷雾剂对豚鼠皮肤感染单纯疱疹病毒I型的治疗效果豚鼠背部皮肤感染HSV-1疱疹病毒后，第2天即出现1cm2左右的疱疹病灶，第3天达到2-3cm2左右，第4天时病灶面积已达到3.8cm2左右，随即用不同剂量的本发明喷雾剂药物进行治疗。本发明喷雾剂药物选用对动物的外用皮肤试验的最大无毒浓度(TD0)以下二倍稀释4个剂量，既2％、1％、0.5％、0.25％和3％阿昔洛韦软膏喷洒和涂抹皮肤疱疹处，每日治疗四次，连续治疗6天。停药后再观察2天。试验结果见附表9及附照25～33，本发明喷雾剂治疗组与病毒对照组比较其病变抑制率(％)分别为100％、100％、100％、81％。经统计学处理本发明喷雾剂剂量在0.25％以上有明显的治疗作用，P值＜0.01。
3.3.2.2.阿昔洛韦软膏对豚鼠皮肤感染单纯疱疹病毒I型的治疗效果阿昔洛韦软膏对豚鼠皮肤疱疹的病变抑制率为100％。
3.3.2.3.病毒对照组豚鼠背部皮肤感染HSV-1病毒后，第4天背部皮肤即出现典型疱疹病灶，其病变程度达3.8cm2左右，第5-7天病变程度达4.0cm2，并拌有大面积溃烂，及少数(6只)豚鼠出现下肢瘫痪，说明有个别豚鼠病毒感染较重，病毒已侵及下肢神经。
3.3.3试验结果分析本发明喷雾剂药物与病毒对照组比较，用药第2天，豚鼠的皮肤疱疹即有所减轻，用药第3天皮肤疱疹的病变程度(面积)已由3.6cm2缩小到2.0cm2左右，用药第4天疱疹病灶开始干瘪，并出现结痂，用药第6天疱疹病灶部位已全部结痂病变程度(面积)已缩小到0.7cm2左右，皮肤疱疹基本痊愈。而病毒对照组试验第5-7天其病变程度(面积)已发展到4.0cm2，第9天疱疹病灶面积虽也逐渐减小，但病程时间长。阳性对照药物阿昔洛韦软膏的试验结果与本发明喷雾剂的试验结果一致。
3.4小结根据试验结果表明不同剂量的本发明喷雾剂对豚鼠背部皮肤疱疹有明显的治疗作用，与阳性对照药物阿昔洛韦软膏的试验结果一致。证明此药有明显的抗I型单纯疱疹病毒的作用。连续治疗六天，不仅能够降低发病率，而且可明显缩短皮肤感染的病程，与病毒对照组比较有显著性的疗效。
权利要求
1.繁缕总黄酮，含有新西兰牡荆甙-1，其特征在于它可以用下列方法获得将繁缕生药或鲜草(折换成干草)用8-12倍的低级醇在40-50℃减压回流提取，每次1-3小时，合并提取液，减压回收溶媒浓缩提取液至40℃测定密度为1.05-1.1。
2.按照权利要求1所述的繁缕总黄酮，其特征在于向权利要求1所得的繁缕总黄酮浓缩液中加乙醇使醇浓度达到60-70％，醇沉(沉淀物另用)，过滤，滤液浓缩，真空干燥，得到。
3.按照权利要求1所述的繁缕总黄酮，其特征在于将权利要求1的提取浓缩液上大孔树脂床分离，以蒸馏水洗脱，弃去水洗脱液再以40-95％的乙醇或甲醇洗脱，洗脱时，以新西兰牡荆甙-I作对照对洗脱液采用薄层层析法监控，收集含有对应色斑的洗脱液，减压浓缩，70℃以下真空干燥，得到。
4.按照权利要求1所述的繁缕总黄酮，其特征在于将权利要求1所述的提取浓缩液上聚酰胺柱分离，以蒸馏水洗脱，再以40-95％的乙醇或甲醇洗脱，洗脱时，以新西兰牡荆甙-I作对照对洗脱液采用薄层层析法监控，收集含有对应色斑的洗脱液，减压浓缩，70℃以下真空干燥，得到。
5.权利要求1-4中任何一项所述的繁缕总黄酮，其中低级醇为乙醇、甲醇、异丁醇或正丁醇。
6.权利要求1-5中任何一项所述的繁缕总黄酮，还可以从下列植物中提取得到繁缕属植物薄叶繁缕Stellaria leptohyllaHance、长瓣繁缕Stellaria hungeana Fenzl.、褐瓣雀舌草Stellariaalsine var.Phaeuspetala Hand.-Mazz.、安徽繁缕Stellaria anhwiensisMigo.、细尖繁缕Stellaria apiculata Wils.4987Stellaria(L)Scop.、薄叶阿里山繁缕Stellaria arisanensis var.Leptophylla Hayata.、北繁缕Stellaria borealis Bigel.、小茸毛繁缕Stellaria tomentalla Ohwi.、大卫繁缕Stellaria davidii Hemsl.、沙生繁缕Stellaria arenaria Maxim.、短瓣繁缕Stellaria brachypetala Bge.、华繁缕Stellaria chinensisRegel.、阿里山繁缕Stellaria arisanensis Hayata.、东北繁缕Stellariacherleriae(Fisch.)Will.、厚叶繁缕Stellaria crassifolia、皱叶繁缕Stellaria crispate Wall.、雀舌草Stellaria alsine Grimm.、偃卧繁缕Stellaria decumbens Edgew.、二歧聚伞花繁缕Stellaria dichasioidesWilliams.、窄叶双歧繁缕Stellaria dichotoma var.Lanceolata Bge.、西南繁缕Stellaria delavayi Franch.、石竹叶繁缕Stellaria dianthifoliaWilliams.、针状偃卧繁缕Stellaria decunbens var.Acicularia Edgew.Et Hook.f.、双歧繁缕Stellaria dichotoma L.、线叶双歧繁缕Stellariadichotoma var.Stephenjiana Willd.、泽繁缕Stellaria diversifloraMaxim.、凹脉繁缕Stellaria depressa Schnid.、翻白繁缕Stellariadiscolor Turcz.、禾叶繁缕Stellaria graminea L.、铺散繁缕Stellariadiffusa Wills.、杜氏繁缕Stellaria duthiei Gandoger.、线茎繁缕Stellaria filicaulis Mak.、裸蕊异花繁缕Stellaria diversiflora var.Gymnandra Franch.、多花繁缕Stellaria florida Fisch.、长毛繁缕Stellaria pilosa Franch.、线柄繁缕Stellaria filipes Komar.、钝萼繁缕Stellaria amblyosepala Schrenk.、疏柔毛禾叶繁缕Stellariagraminea var.Pilosula Maxim.、变绿禾叶繁缕Stellaria graminea、东繁缕Stellaria maximowixziana Franch var.Viridescens Maxim.、江孜繁缕Stellaria gyantsensis Williams.、湖北繁缕Stellaria henryiWilliams.、兴安繁缕Stellaria hsinganensis Kitagawa.、霞草繁缕Stellaria gypsophiloides Fenzl.、繁缕Stellaria media(L.)Cyr、小花繁缕Stellaria micrantha Hayata.、内曲繁缕Stellaria infractaMaxim.、柔繁缕Stellaria mitans Williams.、鹅肠繁缕Stellarianeglecta Weihe.、新沼生繁缕Stellaria neo-alustris Kitagawa.、八蕊繁缕Stellaria octandra Fobedim.、红莓繁缕Stellaria oxycoccoidesKomar.、石生繁缕Stellaria saxatilis Buch-Ham.、柄花繁缕Stellariapeduncularis Bge.、台湾繁缕Stellaria cicrantha Hayata.、沼生繁缕Stellaria palustria L.、土耳其斯坦繁缕Stellaria turkestanicaSchischk.、展叶繁缕Stellaria patentifolia Kitagawa.、假石生繁缕Stellaria pseudosaxatilis Hand.-Mass.、五台繁缕Stellaria wutaicaHand.-Mazz.、网脉繁缕Stellaria reticulivena Hayata.、岩繁缕Stellariarupestris Hemsl.、抱茎石生繁缕Stellaria saxatilis var.AmplexicaulisHand.-mazz.、三型繁缕Stellaria trimorpha Nakai.、小繁缕Stellariapusilla Schmid.、燧瓣繁缕Stellaria radians L.、准葛尔繁缕Stellariasoongorica Roshev.、苏氏繁缕Stellaria souliei Williams.、星毛繁缕Stellaria stellato-pilosa Hayata.、园萼繁缕Stellaria stronglosepalaHand.-Mazz.、拟伞花繁缕Stellaria subumbellata Edgew.、湿地繁缕Stellaria uda Williams.、绿花繁缕Stellaria virdiflora Pax et O.Hoffm.、巫山繁缕Stellaria wushanensis Williams.、伞花繁缕Stellariaumbellate Turcz.、云南繁缕Stellaria yunnanensis franch.j。
7.权利要求1-6中任何一项所述的繁缕总黄酮在制备治疗艾滋病病毒和疱疹病毒I型，疱疹病毒II型和水痘带状疱疹的药物的用途。
8.一种治疗艾滋病病毒和疱疹病毒I型，疱疹病毒II型和水痘带状疱疹的药物，它含有权利要求1-6所述的繁缕总黄酮作为活性成分和/或药学上可接受的载体或赋型剂。
9.按照权利要求8所述的药物，其中所含的繁缕总黄酮为0.25-4％。
10.按照权利要求9所述的药物，其中所含的繁缕总黄酮为0.25％。
11按照权利要求8-10中任何一项所述的药物，它是喷雾剂。
12.按照权利要求11所述的喷雾剂，其中它用20-75％的乙醇作配液溶液。
13.按照权利要求12所述的喷雾剂，其中它用40％的乙醇作配液溶液。
14.按照权利要求11-13中的任何一项所述的喷雾剂，其中它含有助溶剂丙二醇。
15.按照权利要求14所述的喷雾剂，其中它所含的丙二醇浓度是10％。
16.按照权利要求8-15中任何一项所述的喷雾剂，其中它还含有0.5％的薄荷脑。
全文摘要
本发明公开了含有新西兰牡荆甙－1的繁缕总黄酮、繁缕总黄酮的提取方法及其在制备抗艾滋病病毒和疱疹病毒的药物的用途。本发明还公开了含有繁缕总黄酮的各种药物剂型，尤其是含有繁缕总黄酮的喷雾剂。
文档编号A61P31/00GK1521179SQ03103609
公开日2004年8月18日 申请日期2003年1月30日 优先权日2003年1月30日
发明者楼金, 张龙清, 张兴权, 楼 金 申请人:海南亚洲制药有限公司