包含甘露糖结合凝集素的药用组合物的制作方法

专利名称：包含甘露糖结合凝集素的药用组合物的制作方法
技术领域：
本发明涉及包含甘露糖结合的凝集素的药用组合物。进一步说，本发明涉及到用所述的药用组合物治疗临床疾病的方法，以及所述的药用组合物在制备药物中的应用。
背景技术：
MBL是凝集素家族的蛋白，其特点在于有寡聚体结构的亚基。每一亚基由三个相同的多肽附着在胶质杆状物而组成，每一多肽由钙依赖型C型碳水化合物的识别结构域(CRD)组成。
虽然MBL分子亚基的数量是可变的(Lipscombe RJ，et al，1995)，但是一般认为，具有生物活性的多肽是由三个以上亚基组成的寡聚体。血浆中自然生成的MBL主要包括由三个以上亚基组成的寡聚体，同时也包括变性的结构损伤的蛋白形式，其电泳条带如SDS凝胶电泳在MBL主要条带和更多寡聚体的MBL条带之间。
重组MBL也显示出了与血浆来源的MBL相似的寡聚体的可变性(Vorup-Jensen T et al.，2001)。然而，重组的MBL，一般比血液来源的MBL含有更多低分子量形式的寡聚体。低分子量形式的MBL包括，例如单一多肽链，单一亚基，以及二聚体亚基。
MBL在结构上与补体成分C1的亚片段C1q相关，似乎是MBL通过与经典途径中的C1r和C1s成分相似的、被称为MASPs(Matsushita，M.，1992)或p100(Ji，Y-H.et al.，1993)的丝氨酸相关蛋白酶激活了补体系统。MBL补体激活途径被称为MBLectin途径。根据对上述途径推定的机理，MBL结合包括细菌，酵母，寄生的原生生物和病毒在内的(Turner，M.W，1996)一系列微生物表面上的特异性的碳水化合物的结构区域，激活了末端裂解的补体途径成分(Kawasaki，N et al.，1989)或对胞噬作用有促进作用(Kuhlman，Met al.，1989)，而显示出它的抗微生物活性。
据报道，血浆中MBL的浓度水平可能是由遗传上决定的(Sumiya，M etal.，199l，Lipscombe，R.J.et al.，1992，Madsen H.O.et al.，1994)。MBL缺陷与孩提时代(Super，M et al.，1989，Garred，P.et al.，1995)，也可能是成年时代(Garred，P.et al.，1995，Summerfield，J.A.et al.1995)易频繁感染各种微生物病菌相关。最近的研究信息显示，MBL缺陷与HIV感染以及感染AIDS后更加速病人死亡相关(Nielsen，S.L et al.，1995，Garred，P.et al.，1997)。MBL结合风湿性关节炎病人中浓度升高的半乳糖基形式的IgG(G0)，然后激活补体(Malhotra，R et al.，1995)。MBL缺陷也与易患反复发作的自发性流产(Kilpatrick，D.C.et al.，1995)，也与系统性狼疮红斑(Davies，e.j ET AL.，1995)的发生相关。
MASP-1(MBL相关丝氨酸蛋白酶1)是结构上与补体途径的C1r和C1s相似的丝氨酸蛋白酶，尽管它具有胰蛋白酶以及与胰蛋白酶类似的丝氨酸蛋白酶的组氨酸环结构的型式。MASP-1被认为是参与了MBL介导的补体激活。编码MASP-1的cDNA克隆已经有过报道，它编码一个推定的19个氨基酸的前导肽再接着一个680个氨基酸的残基，而形成一个成熟的多肽。
MASP-2(MBL相关丝氨酸蛋白酶2)(Thiel，S et al.，1997)也是结构上与补体途径的C1r和C1s相似的丝氨酸蛋白酶。与C1r和C1s相似，而与MASP-1相反，它没有胰蛋白酶以及与胰蛋白酶类似的丝氨酸蛋白酶的组氨酸环的结构型式。MASP-2也被认为是参与了MBL介导的补体激活。MASP-3也显示了与MASP-1，MASP-2，以及两个C1q相关丝氨酸蛋白酶C1r和C1s有一些同源性。
从血液提纯的MBL以前用于还包含人血清白蛋白的药用制剂中，以治疗两种MBL缺陷的病人，所述的MBL治疗使病菌感染大幅降低(Valdimarson et al.，1998)。此外，各种其他的MBL药用制剂也已在现有文献中有过记载Valdimarsson et al.描述了一种在0.15M NaCl和1％w/v(＝10mg/ml)人血清白蛋白中的包含200μg/ml MBL的输注用溶液。
US5,270,199描述了一种包括5-100μg/ml MBL和/或其片段的MBL制剂。
WO 99/64453描述了各种包含MBL和稳定剂的MBL制剂。提到的优选的例子是，在含0.5％w/v白蛋白PBS中(＝5mg/ml)包含300-400μg/mlMBL的制剂。
然而，上述的这些MBL制剂，或者是MBL的含量低，或者是/和包含有高浓度的其他蛋白。
发明概述然而，需要一种MBL制剂，其中包含稳定的MBL，特别是需要包含低含量的包括稳定剂的蛋白，如低含量的人血清白蛋白。
几乎所有的蛋白或多肽作为有效成分的药用制剂，也会包括一种或多种所述蛋白或多肽的稳定剂。特别地，所述的稳定剂可以是去污剂(detergent)或包含蛋白质的稳定剂(protein containing stabilizer)。然而为了达到某些目的，希望省去或减少各种添加剂的量，例如希望减少药用组合物中稳定剂的使用量，特别是希望减少包含蛋白质的稳定剂含量，但是，过多减少包含蛋白质的稳定剂量，又会降低活性蛋白成分的稳定性。
本申请的发明人探索出了一种制备高浓度MBL的方法。令人惊奇的是，发明人的研究显示，包含高浓度MBL的制剂可以充分稳定地用在药物制剂中，即使不加入包含蛋白质的稳定剂或只加入少量的包含蛋白质的稳定剂。
因此，本发明的第一个方面是，提供了一种药用组合物，包括药学上可接受的添加剂，以及a)至少200μg/ml的蛋白内含物，其中甘露糖结合的凝集素(MBL)和/或至少占总蛋白的35％(w/w)的MBL变异体；或b)至少400μg/ml的甘露糖结合的凝集素(MBL)和/或MBL变异体本发明的第二个方面是，提供了一种药用组合物，其包含药学上可接受的添加剂；和甘露糖结合的凝集素(MBL)和/或其变异体；以及至少一种二价的阳离子。
本发明的第三个方面是，提供了所说药物组合物的制备方法，包括以下步骤a)提供甘露糖结合的凝集素(MBL)和/或其变异体；b)将所述的MBL和/或其变异体与药学上可接受的添加剂，可选择地与二价阳离子混合；c)由此得到了所述的药用组合物。
本发明的另一个方面是，提供了一种需要治疗病人的临床疾病的治疗方法，包括给予所述的药用组合物。所述治疗包括治愈，缓解，减轻或预防治疗，或补充治疗。
本发明的再一个方面是，提供了上述的组合物在制备治疗患者临床疾病的药物中的应用。
本发明的还一个方面是，提供了治疗有此需要的患者临床疾病的药物，其包括上述的组合物。
本发明的最后一个方面是，提供了给予上述的药用组合物进行诊断的方法，或者说是，提供了一种所述的药用组合物在诊断目的中的应用。
附图简述

图1显示了+4℃，-20℃储存12个月的1mg/ml MBL制剂样品与对照MBL相比较的C4激活数据。
图2从上至下分别显示了标准对照，+4℃储存的1mg/ml稳定样品，-20℃储存的1mg/ml稳定样品的SEC层析图。冷藏样品中检测到了一个小的前峰，其相当于整个MBL蛋白含量的1％。
图3显示了质谱数据。对照蛋白和储存12个月的MBL样品有相似的峰，这表明，储存期间MBL多肽链没有变化。
序列表简述SEQ ID NO1人MBL蛋白序列SEQ ID NO2人MASP-1蛋白序列SEQ ID NO3人MASP-2蛋白序列SEQ ID NO4人MASP-3蛋白序列发明详述MBL及其变异体本发明提供了包含MBL和/或其变异体的药用组合物。药用组合物总的来说，应该包含高浓度的MBL，例如，所述组合物可以包含至少200μg/ml，如至少250μg/ml，例如至少300μg/ml，如至少500μg/ml，例如至少750μg/ml，如至少1000μg/ml，例如至少1300μg/ml的MBL和/或其变异体。
相应地，所述组合物可以包含200-10,000μg/ml，如200-5000μg/ml，例如200-3000μg/ml，如200-2000μg/ml，例如200-1500μg/ml的MBL和/或其变异体。
具体地说，本发明的药用组合物包含二价的阳离子是优选的，所述的组合物包括至少10μg/ml，如至少25μg/ml，至少50μg/ml，至少100μg/ml，至少150μg/ml，至少200μg/ml，至少250μg/ml，至少300μg/ml，至少500μg/ml，至少750μg/ml，至少1000μg/ml，至少1500μg/ml，至少2000μg/ml，至少2500μg/ml，至少3000μg/ml，至少3500μg/ml，至少4000μg/ml，至少5000μg/ml，至少6000μg/ml，至少7000μg/ml，至少8000μg/ml，至少9000μg/ml，至少10000μg/ml的MBL和/或其变异体。
总的来说，MBL的浓度应该通过确定和/或计算构成MBL的氨基酸的重量来确定。一般来说，计算得到的重量相当于非糖基化形式的MBL。因此，一般地，MBL的重量不包括任何糖基，也不包括水。具体地，MBL的浓度可以用下述的氨基酸分析来确定。
通过氨基酸分析估算MBL的浓度并不是所有的氨基酸都可以用氨基酸分析来测定，但是，在确定纯的或者相当纯的MBL溶液的浓度的时候，通常不可测氨基酸的质量可以容易地通过组合物中可测氨基酸的量估算出来。
估算MBL的浓度可以用多种不同的方法。优选地，可以采用下述的两种方法之一，更优选地，可以采用下述的方法2。
糖基的含量往往不进行估算，也就是说，所称的蛋白浓度往往只表示肽的含量。当然，也可以从氨基酸的量来确定整个多肽+糖基的重量。
不可测氨基酸在估算MBL的量时，不可测的氨基酸是*色氨酸(Trp会酸裂解)；多肽链中有3个Trp*组氨酸(His会与Tris共洗脱)；多肽链中只有1个His*羟基赖氨酸(Hyl校准过程中不使用)；肽链中可能最多有4个Hyl*羟基脯氨酸(Hyp)；多肽链中最多有8个，典型的是有4个Hyp可测但不能确切估算的氨基酸是*赖氨酸(Lys部分羟基化)；多肽链中有15-19个Lys；可能最多有4个Lys被羟基化
*脯氨酸(Pro部分羟基化)；多肽链中有10-18个Pro；可能最多有8个Pro被羟基化方法1分析样品中的可测氨基酸的摩尔和不可测氨基酸的摩尔不可测氨基酸＝Trp，His，Hyp和Hyl估计每个多肽分子中平均有4个Hyp，4个Hyl，14个Pro，15个Lys不可测氨基酸的摩尔数＝[Trp]+[His]+[Hyp]+[Hyl]＝3+1+4+4＝12不可测氨基酸摩尔数的校正系数＝全部摩尔数/可测摩尔数＝全部摩尔数/(全部摩尔数-不可测摩尔数)＝228/(228-12)＝1.0556不可测氨基酸＝Trp，His，Hyp和Hyl不可测氨基酸的重量＝[MTrp]+[MHis]+[MHyp]+[MHyl]＝3*186.21+1*137.14+4*113.11+4*144.17＝1725.89可测氨基酸的重量＝[MAsx]+[MThr]+[MSer]+[MGlx]+[MPro]+[MGly]+[MAla]+[MCys]+[MVal]+[MMet]+[MIle]+[MLeu]+[MTyr]+[MPhe]+[MLys]+[MArg]＝25*115.09+15*101.11+13*87.08+27*129.12+31*57.05+16*71.08+7*103.15+10*99.13+2*131.20+8*113.16+17*113.16+1*163.18+9*147.18+15*128.17+6*156.19＝22429.93不可测氨基酸分子量的校正系数＝全部氨基酸的分子量/可测氨基酸的分子量＝(可测氨基酸的分子量+不可测氨基酸的分子量)/可测氨基酸的分子量＝1.0769方法2不可测氨基酸＝Trp，His，Pro/Hyp，Lys/Hyl估计每个多肽分子中平均有4个Hyp，4个Hyl，14个Pro，15个Lys。
不可测氨基酸的摩尔数＝[Trp]+[His]+[Pro/Hyp]+[Lys/Hyl]＝3+1+18+19＝41。
不可测氨基酸摩尔数的校正系数＝全部摩尔数/可测摩尔数＝全部摩尔数/(全部摩尔数-不可测摩尔数)＝228/(228-41)＝1.2193分析样品中可测氨基酸的质量和不可测氨基酸的质量每种氨基酸的质量以摩尔数乘摩尔质量来计算(去除肽键的水予以修正)
例如[MThr]＝[Thr]*(119.12-18.01)＝[Thr]*101.11不可测氨基酸＝Trp，His，Pro/Hyp，Lys/Hyl不可测氨基酸的质量＝[MTrp]+[MHis]+[MPro]+[MHyp]+[MLys]+[MHyl]＝3*186.21+1*137.18+97.12+19*128.17＝4879.16可测氨基酸的质量＝[MAsx]+[MThr]+[MSer]+[MGlx]+[MGly]+[MAla]+[MCys]+[MVal]+[MMet]+[MIle]+[MLeu]+[MTyr]+[MPhe]+[MArg]＝25*115.09+15*101.11+13*87.08+27*129.12+31*57.05+16*71.08+7*103.15+10*99.13+2*131.20+8*113.16+17*113.16+1*163.18+9*147.18+6*156.19＝19147.70不可测氨基酸质量的校正系数＝全部氨基酸的质量/可测氨基酸的质量＝(可测氨基酸的质量+不可测氨基酸的质量)/可测氨基酸的质量＝1.2548比较计算方法1和计算方法2方法1是基于大约95％的氨基酸计算的，而方法2是基于大约仅75％的氨基酸进行计算的。
一般来说，氨基酸含量的计算通过两种方法都可以计算，通常观察不到结果有显著的差别。方法2没有假定Hyl和Hyp的含量，因此是优选的。
为了某些需要，MBL的浓度以摩尔浓度表示，而不是以重量/体积表示。因为MBL可能以包含不同数量亚基的寡聚体的形式出现，因此，很难确定1克分子的MBL。在本发明的范围内，1克分子的MBL优选是指1克分子的单一MBL多肽链。所述的单一MBL多肽链，可以是非糖基化的，部分糖基化的，或者完全糖基化的多肽链。优选以非糖基化的MBL计算其摩尔浓度。
非糖基化的单一MBL多肽链的分子量是24800Da。完全糖基化的单一MBL多肽链的分子量是25900Da。最常见的自然形式的糖基化单一MBL多肽链的分子量是25500Da。
因此，根据MBL的糖基化状况，1mg/ml的MBL，对应于38-41μM，优选是38.6-40.3μM。一般实际应用中，1mg/ml MBL相应于大约39.2μM。不过，1mg/ml非糖基化的MBL相应于大约40.3μM，而1mg/ml完全糖基化的MBL相应于大约38.6μM。
以上的计算是指SEQ ID No.1所示的MBL。
当然，上述方法也可用于计算MBL片段和/或其变异体的浓度，这是显而易见的。
为了某些需要，希望药用组合物含有低含量的除了MBL蛋白之外的杂蛋白(见下文)。
因此，药用组合物是优选的，其中MBL或其变异体占总蛋白的至少35％(w/w)，如至少40％(w/w)，至少50％(w/w)，至少60％(w/w)，至少70％(w/w)，至少80％(w/w)，至少90％(w/w)，至少95％(w/w)，至少98％(w/w)，至少99％(w/w)，至少99.5％(w/w)，至少99.8％(w/w)。
本发明的一个具体方面，MBL构成了基本上所有的总体蛋白。术语“基本上所有的”是指包括了“所有可检测的蛋白”，优选是可由考马斯亮蓝染色检测到的所有蛋白。
本发明的另一个具体方面，药用组合物可以包括通常使用的蛋白添加剂，例如用作稳定剂的蛋白或含有此蛋白的稳定剂。用作稳定剂的蛋白，包括例如人血清白蛋白，或其他种类的血清白蛋白。而且，含蛋白的稳定剂可以以天然的人类血清或其部分成分的方式提供。
总的来说，药用制剂包含有合适的蛋白浓度，对其稳定性是非常重要的。一般地，如果蛋白的浓度很低，将很有可能发生目的蛋白非特异性地粘附到储存容器或类似容器的表面。而且，蛋白-蛋白的相互作用能使蛋白的三维结构稳定，并且高蛋白浓度因此而可以减少蛋白的变性。另一方面，包含高浓度蛋白目的的蛋白溶液，一般是不稳定的，因为所说蛋白会以较快速率发生聚集(Frokjaer and Hovgaard，p.102，Wang，1999)。要克服上述的问题，一般要在含蛋白的药用制剂中加入稳定剂，例如加入含蛋白的稳定剂如白蛋白(Akers et al.，2000，pp.166-167)，或者加入例如去污剂。
但是，也并不总是希望在药用制剂中加入稳定剂。通常使用的含稳定剂如白蛋白的蛋白，往往是从血清中提纯的。不希望使用这种蛋白稳定剂，因为会有传播来自血清供体致病原的危险。另外，为了使生产过程尽可能的简单，一般希望减少加入到药用组合物中添加剂的量。生产步骤简单，将使生产过程容易操作，降低生产成本，以及也减少了蛋白损失和降解的风险。因此，更优选的是不加蛋白稳定剂，例如，不加含蛋白的稳定剂和去污剂。
令人惊奇的是，一方面，本发明公开了包含MBL的药用制剂，其中所述的药用组合物不包含任何的蛋白稳定剂，也就是说，药用制剂不包含其他可检测的除了MBL的蛋白，并且所述制剂不包含任何的去污剂。
因此，本发明优选的一个具体方面是，MBL基本上构成了药用组合物的所有总体蛋白。特别地，组合物不包含从血清或其他人或动物体样品提纯的蛋白，是优选的。因为有传播来自供体病毒或其他致病原的危险，一般希望给予的药用组合物，不包含从血清或其他人或动物体样品纯化得到的化合物。
因此，本发明优选的一个具体方面，药用组合物不包含从血清或其他人或动物体样品提纯得到的蛋白或含蛋白的物质。具体地，优选所有或基本上所有的含蛋白的物质是用重组方法制备的。
本发明的一个具体方面，MBL或其变异体为了进一步增强稳定性，可以被修饰。因此，MBL或其变异体可以被聚乙二醇化，乙酰化，或者以其他方式被修饰，以增加MBL或其变异体在体内的半衰期，也包括在本发明的范围之内。
术语MBL，MBL变异体是指包括任何形式的MBL或其任何功能同系物。特别地，MBL及其变异体可以是包含至少一个如SEQ ID 1所示氨基酸序列多肽的蛋白或其功能同系物。
本发明的MBL可以包含一个或多个亚基。每个MBL亚基一般由3个单一多肽组成，优选每个单一多肽包含如SEQ ID 1所示的氨基酸序列或其功能同系物片段。例如，MBL可以是亚基单聚体，二聚体，三聚体，四聚体，五聚体，六聚体，七聚体，八聚体，九聚体，十聚体，11聚体，12聚体，或者MBL甚至可以包括多于12个亚基。优选地，MBL包括两个以上的亚基。
本发明的MBL可以来自任何适当的途径，例如MBL可以是自然生成的MBL，或者MBL也可以是重组生成的MBL。重组MBL在本发明中使用时，优选所述的重组MBL有与自然生成MBL相似的分子大小分布。因此，优选至少50％，如至少70％，至少80％，至少90％，至少95％，至少99％的MBL用非还原性的SDS-PAGE鉴定时，其表现分子量大于200kDa。
本发明中，MBL可以是人MBL或其他动物种类的MBL，其中，其免疫系统与人免疫系统作用相似，例如，但不限于，来自黑猩猩和恒河猴的MBL。
本发明的一个具体方面，MBL是纯化的自然生成的人血清MBL。本发明的另一个具体方面，MBL是重组产生的。优选MBL是重组生产的。
重组MBL的优选制备方法的例子，在PCT申请WO00/70043中有记载，因此并入此处作为参考。特别地，本发明中的重组MBL可以用PCT申请WO00/70043实施例1中记载的方法制备。在那个实施例中，重组MBL是用包含人MBL基因序列的表达载体制备的。MBL也可以用下文实施例1中公开的方法制备。
为了获得含有非常浓缩的MBL和/或其变异体的药用组合物，需要浓缩已浓缩的MBL和/或其变异体组合物。浓缩可以用任何常规的方法进行，例如用过滤器施加一个离心力。但是，对于大量蛋白的浓缩，应该优选其他的方法。
本发明也涉及包含MBL变异体的药用组合物及其使用方法。MBL变异体例如可以是MBL的功能同系物(如见下文)。包含MBL的任何功能同系物的分离的MBL多肽，可以具体地包括至少80个氨基酸残基，如至少100个氨基酸残基，至少150个氨基酸残基，至少200个氨基酸残基，至少220个氨基酸残基，至少250个氨基酸残基。
其他蛋白本发明的药用组合物可以包括除了MBL的其他蛋白。
例如组合物可以包括至少300μg/ml，如至少500μg/ml，至少750μg/ml，至少1000μg/ml，至少1300μg/ml的总体蛋白或含蛋白的物质。因此，组合物可以包括例如300-3000μg/ml，500-3000μg/ml，750-3000μg/ml，1000-3000μg/ml，1300-3000μg/ml，1000-2000μg/ml的总体蛋白或含蛋白的物质。
其他蛋白可以是任何合适的蛋白。在一个实施方案中，药用组合物可以包括除了MBL的一种或多种MBL天然相关蛋白。
因此具体地，本发明涉及药用组合物，其中除了MBL的总体蛋白进一步包括一种或多种MBL相关丝氨酸蛋白酶(MASP)或其变异体。例如MASP及其变异体可以选自下列由SEQ ID NO2所示的MASP-1，SEQ ID NO3所示的MASP-2，SEQ ID NO4所示的MASP-3及其片段和功能同系物组成的组。MASP蛋白的功能同系物在下文中有记载。
药用组合物一方面，本发明涉及药用组合物。药用组合物可以制成多种不同的制剂，这取决于药用组合物的特定目的。例如药用组合物可以制成用于特定的给药方式的药物。优选的给药方式在下文中有描述。
具体的一个方面，药用组合物可以制成液体。例如组合物可以是蛋白溶液或组合物可以是蛋白的悬浮液。所述的液体适于肠胃外给药，例如注射或输注。
本发明优选的一个具体方面是，药用组合物适于大药丸注射(bolusinjection)，其中需要MBL的浓度足够高，以使用于药丸注射给药的一定体积中含有合适量的MBL剂量(优选的MBL剂量见下文)。用于药丸注射的药用组合物，优选包括至少500μg/ml，更优选至少750μg/ml，再优选至少1000μg/ml，如至少1300μg/ml的MBL和/或其变异体。
液体制剂可以是任何可用的液体，但是，一般优选液体制剂是水性液体。为了某些需要，特别地，液体制剂用于肠胃外给药时，更优选液体制剂是无菌的。灭菌可以用任何常规方法进行，例如过滤，辐射，或加热。
另外，肠胃外给药的药用组合物，优选要进行病毒去除步骤，也就是说，病毒过滤和/或酸处理。病毒过滤的目的是，减少任何病毒的污染。一般来说，使用的过滤器是由几组中空的纤维膜制成的，其中病毒和其他污染物因大小排析而与蛋白溶液分离。分离原理是因为MBL与病毒通过中空纤维的渗透性不同。当溶液通过多层纤维膜时，蛋白和病毒渗透性的差异就会大大增加，因此，优选使用的滤膜包括多层。病毒过滤可以用本领域技术人员已知的任何常规方法进行，例如下文实施例1中记载的方法。
本发明的一个具体方面，液体制剂可以包括一种或多种亲脂载体，例如一种或多种适于控制MBL和/或其变异体释放的亲脂载体。
液体制剂可以进一步包括任何合适的药学上可接受的添加剂。优选的药学上可接受的添加剂在下文中有记载。
为了储存需要，蛋白溶液或蛋白悬浮液可以储存在任何合适的温度下，例如-100℃-0℃，0℃-4℃，4℃-10℃，10℃-15℃，15℃-25℃，15℃-35℃。
相应地，本发明的一个具体方面，所述溶液或悬浮液可以被冷冻。大多数情况下，溶液或悬浮液仅仅为了储存目的而冷冻，而且必须在使用之前解冻。
药用组合物可以以单一剂量单位包装，这对使用者来说将更为方便。因此，用于大药丸注射的药用组合物，可以以例如至多10ml，优选至多8ml，更优选至多6ml，如至多5ml，至多4ml，至多3ml，大约2.2ml的剂量单位包装。
药用组合物可以包装在任何合适的容器中。举个例子，药用组合物的单一剂量可以包装在注射器中。
本发明的另一个具体方面是，药用组合物是干燥的组合物。干燥的组合物也同样可以使用，但是，大多数情况下，组合物是干燥的组合物仅仅为了储存。在使用之前，干组合物可以在适当的液体组合物如无菌水中溶解或悬浮。
因此，药用组合物可以 是包含冷冻干燥蛋白的干燥的组合物。优选地，所述的干燥的组合物能形成溶液或悬浮液。
蛋白可以用本领域技术人员已知的任何常规方法冷冻干燥。为了冷冻干燥，必需加入一种或多种冷冻保护剂。优选的冷冻保护剂的例子见下文。
本发明的一个具体方面，药用组合物除了MBL和/或其变异体外还包括一种或多种其他的活性化合物。这样的药用组合物也可以以试剂盒的形式提供。
给药药用组合物可以制成适于一种或多种特定给药方式给药的组合物。而且，本文记载的治疗方法可以有不同的给药方式。
总之，任何给药方式，其中MBL以此种方式给药给病人，活性MBL可以到达疾病部位，都可以用在本发明中。
例如，本发明的药用组合物可以肠胃外给药，例如静脉内，肌肉内，皮下，鼻内，直肠内，阴道内，或腹膜内给药。组合物也可以吸入给药，如口鼻吸入给药。上述给药的合适剂量形式，如气雾剂或有剂量刻度的吸入器，都可以用常规技术制备。
因此，本发明的一个具体方面，给药方式可以选注射，输注，鼻内给药，经皮给药，肺部给药，或定向离子电渗给药。
一般来说，用于注射和输注的药用制剂应该是无菌液体。
注射可以注射到合适的任意位点，例如注射可以选静脉内，皮下，动脉内，肌肉内，腹膜内注射组成的组。输注一般是静脉内输注。
本发明优选的一个具体方面，给药方式是大药丸注射。在这个具体方面中，药用组合物包含高浓度的MBL是优选的，以便可以给药足够的MBL。本发明的优点在于，提供的药用组合物有高的MBL浓度从而允许有足够的MBL以药丸注射的方式被给予。
而且，给药方式可以是典型的粘膜给药。本发明药物制剂给药的粘膜，可以是生物活性物质给药的哺乳动物的任何粘膜，如鼻内，阴道，眼睛，口腔，生殖道，肺，胃肠道，或直肠。
本发明的药用组合物可以给药一次或多于一次，例如可以给药2-5次，如5-10次，10-20次，20-50次，50-100次，多于100次。
MBL的给药剂量取决于治疗的病人以及临床情况。一般地，以每10kg体重0.1mg-10mg，如0.5mg-5mg，大约1mg的MBL剂量给药。本发明的一个具体方面，成人每次给药的剂量是2-12mg，如3-10mg，4-9mg，5-8mg，6-7mg，大约6.6mg的MBL。
本发明的药用组合物可以与至少一种其他的活性化合物组合给药。化合物可以以分离的制剂或单位剂量组合形式的制剂同时给药，或者依次给药。
本发明的一个具体方面，药用组合物可以作为诊断过程的一部分给药。例如，诊断可以确定病人的一种或多种化合物的水平。为了诊断目的，需要例如在所述的诊断之前给予所述病人包含高浓度MBL的药用组合物。
药用组合物的稳定性优选地，本发明的药用制剂是稳定的，也就是说，它们可以长期储存，而没有活性的大量丢失和/或没有分子大小性状的明显变化。特别地，优选包含在药用组合物中的MBL和/或其变异体是稳定的，更优选MBL和/或其变异体在长期储存过程中是稳定的。
术语“稳定”是指，包含在药用组合物中的MBL和/或其变异体最好能在长期储存中保持至少部分的初始活性。因此，优选的MBL和/或其变异体在长期储存后包括至少20％，更优选至少30％，更优选至少40％，更优选至少50％，更优选至少60％，更优选至少70％，更优选至少80％，更优选至少85％，更优选至少90％，如至少95％，至少96％，至少97％，至少98％，至少99％的初始活性，例如基本所有的初始活性。
可选择地，优选长期储存的MBL和/或其变异体样品，包含至少20％，如至少30％，至少40％，至少50％，至少60％，至少70％，至少80％，至少85％，至少90％，至少95％，至少96％，至少97％，至少98％，至少99％，以及基本上所有的储存在-80℃的MBL样品的活性。
MBL的活性例如可以通过它能激活或不能激活补体系统的能力来确定。C4被MBL/MASP复合物裂解时，暴露出有活性的硫醇酯，C4就共价结合到附近的亲核基团上。在包被的塑料板孔中进行分析时，绝大部分的C4b将会附着在包被的塑料板孔上，这些C4b可以用抗C4抗体检测。MBL活性的定量免疫荧光分析试验(TRIFMA)，可以以下列的步骤进行，1)用1g甘露糖/100l缓冲液包被微滴定板；2)用Tween-20封闭；3)加入预先确定量的MBL复合物；4)加入试验样品；5)加入纯化的5g/ml的补体因子C4；6)在37℃温育一小时；7)加入Eu标记的抗C4抗体；8)加入增强溶液(enhancement solution)；9)读取Eu随时间的可分辨荧光读数。(用酶联免疫分析测定可以相似地进行，例如在步骤7中加入生物素标记的抗C4抗体；8)加入碱性磷酸酶标记的亲和素；9)加入底物；以及10)读取显色强度)。除了步骤8和步骤9之间，在每一步骤之间，孔板在室温下温育，洗涤。标准曲线用稀释的有已知活性的MBL构建。分析试验优选在排除C4被经典或旁路补体激活途径激活的条件下进行。C4的激活可以完全被丝氨酸蛋白酶抑制剂苯甲脒抑制。经典途径的激活可以通过在足够高的离子强度(0.7-2.0M NaCl；优选大约1.0M NaCl)下进行步骤3)而有效地消除。高离子强度不影响MBL复合物，但是可以完全破坏Clqrs复合物；旁路途径的激活可以有效地通过在如上所述的稀释的情况下分析而被排除。
但是，根据下文实施例9中记载的C4激活分析来确定MBL的活性是优选的。
优选地，稳定的MBL和/或其变异体经过长期储存不会分解，或只有限量地分解，也就是说，优选稳定的MBL和/或其变异体经过储存不会分解或只有限量地物理和/或化学分解。因此，包含在MBL和/或其变异体内多肽中的大多数，在储存后与储存前有相同的长度(即包含相同数量的氨基酸)。MBL和/或其变异体的长度，氨基酸含量，以及MBL的蛋白浓度，可以通过多种不同的方法确定，例如通过氨基酸分析，阴离子交换层析，通过还原性MBL的考马斯亮蓝染色分析或者非还原性MBL的western印迹，通过质谱或大小排阻层析。
因此，优选至少10％，如至少20％，至少30％，至少40％，至少50％，至少60％，至少70％，至少80％，至少85％，至少90％，至少95％，至少96％，至少97％，至少98％，至少99％的MBL/MBL变异体多肽有至少50％，如至少60％，至少70％，至少80％，至少85％，至少90％，至少95％，至少96％，至少97％，至少98％，至少99％，大约100％的初始长度。
进一步，优选至少50％，如至少60％，至少70％，至少80％，至少85％，至少90％，至少95％，至少96％，至少97％，至少98％，至少99％的MBL/MBL变异体多肽，在储存后用质谱分析时其多肽链没有变化。
另外，优选至少50％，如至少60％，至少70％，至少80％，至少85％，至少90％，至少95％，至少96％，至少97％，至少98％，至少99％的储存后的MBL/MBL变异体多肽洗脱物，与初始MBL/MBL变异体或-80℃储存的MBL/MBL变异体用大小排阻层析分析时大致相同。大小排阻层析例如可以以下文实施例10中记载的方法进行。
术语“初始长度”是指，MBL/MBL变异体多肽在储存之前的长度，或者可选择地，是MBL/MBL变异体多肽储存在-80℃的长度，具体到本发明的一个优选实施方案中其对应于全长的MBL，例如SEQ ID NO.1所示的全长多肽。总之，MBL/MBL变异体的长度，可以通过测定以道尔顿计算的MBL/MBL变异体多肽的分子量而确定。
术语“长期储存”是指，储存1-4周，1-3月，3-6月，6-12月，1-2年，2-3年，3-5年，5-7年，7-10年，或者10年以上。优选地，长期储存是1-2年，更优选是2-5年。
MBL和/或其变异体的稳定性取决于储存的条件。优选地，MBL和/或其变异体储存在如-80℃--20℃，-25℃--15℃，-15℃-0℃，0℃-4℃，2℃-10℃，5℃-15℃，-10℃-20℃，15℃-35℃，15℃-30℃，15℃-25℃的温度下是稳定的。本发明优选的一个具体方面，MBL和/或其变异体可以储存在大约4℃的温度，本发明优选的另一个具体方面，MBL和/或其变异体可以储存在大约20℃的温度，本发明优选的另一个具体方面，MBL和/或其变异体可以储存在大约37℃的温度。
MBL和/或其变异体的稳定性，进一步取决于药用组合物的性质。例如，当药用组合物是溶液、悬浮液、或干粉时，MBL和/或其变异体的稳定性是不同的。
功能同系物本发明多肽的功能同系物(functional homologue)是指，包括任何的具有与特定的预先确定序列的多肽基本上相同或部分相同功能的多肽序列。
因此，本发明的功能同系物，包括与上文描述的预先确定的多肽序列至少有一些同源性的氨基酸序列多肽。
优选地，人MBL的功能同系物，包括与SEQ ID NO 1所示多肽至少有一些同源性的多肽。优选地，人MASP-1的功能同系物，包括与SEQ ID NO2所示多肽至少有一些同源性的多肽。优选地，人MASP-2的功能同系物，包括与SEQ ID NO 3所示多肽至少有一些同源性的多肽。优选地，人MASP-3的功能同系物，包括与SEQ ID NO 4所示多肽至少有一些同源性的多肽。
例如，这样的多肽，与上文描述的预先确定的多肽序列有至少约40％，如至少约50％，至少约60％，至少约70％，至少约75％，至少约80％，至少约85％，至少约90％，至少92％，至少94％，至少95％，至少96％，至少97％，至少98％，至少99％的同源性。
优选地，同源性可以用任何合适的算法或所述算法的计算机执行程序来进行计算，例如Intelligenetics公司PC/Gene程序中的GLUSTAL算法，或者Genetics Computer Group(GCG)公司 Wisconsin Genetics SoftwarePackage程序中的GAP，BESTFIT，BLAST，FASTA，TFASTA算法。氨基酸序列的同源性可以进一步使用已知的矩阵程序来计算，例如BLOSUM30，BLOSUM 40，BLOSUM 45，BLOSUM 50，BLOSUM 55，BLOSUM 60，BLOSUM 62，BLOSUM 65，BLOSUM 70，BLOSUM 75，BLOSUM 80，BLOSUM 85，BLOSUM 90中的任意一种矩阵程序。
功能同系物可以包括至少一个氨基酸被其他任何氨基酸取代的氨基酸序列。例如，取代可以是保守的氨基酸取代，也可以是非保守的氨基酸取代。
保守的氨基酸取代是，一个预先确定的氨基酸组中的氨基酸被相同组内的另一氨基酸的取代，其中预先确定的氨基酸组内的氨基酸有相似或基本上相似的特点。本文中使用的术语“保守氨基酸取代”是指，一个氨基酸被有如下特点的氨基酸组内的另一氨基酸所取代，i)极性侧链(Asp，Glu，Lys，Arg，His，Asn，Gln，Ser，Thr，Tyr，以及Cys，)ii)非极性侧链(Gly，Ala，Val，Leu，Ile，Phe，Trp，Pro，以及Met)
iii)脂肪族侧链(Gly，Ala，Val，Leu，Ile)iv)环状侧链(Phe，Tyr，Trp，His，Pro)v)芳香族侧链(Phe，Tyr，Trp)vi)酸性侧链(Asp，Glu)vii)碱性侧链(Lys，Arg，His)viii)酰胺侧链(Asn，Gln)ix)羟基侧链(Ser，Thr)x)含硫侧链(Cys，Met)，以及xi)单氨基-二羧基或单氨基-单羧基-单酰胺羧酸的氨基酸(Asp，Glu，Asn，Gin)。
本发明的功能同系物可以有多于一个氨基酸的取代，例如两个氨基酸取代，三个或四个氨基酸取代，五个或六个氨基酸取代，七个或八个氨基酸取代，10-15个氨基酸取代，15-25个氨基酸取代，25-30个氨基酸取代，30-40个氨基酸取代，40-50个氨基酸取代，50-75个氨基酸取代，75-100个氨基酸取代，多于100个氨基酸取代。
氨基酸的添加或缺失可以是2-5个氨基酸，5-10个氨基酸，10-20个氨基酸，20-50个氨基酸的添加或缺失。但是，多于50个氨基酸的添加或缺失，如50-200个氨基酸的添加，也包括在本发明的范围之内。
根据本发明的多肽包括任何变异体及其功能同系物，其可以具体包括5个以上的氨基酸残基，如10个以上的氨基酸残基，20个以上的氨基酸残基，25个以上的氨基酸残基，50个以上的氨基酸残基，75个以上的氨基酸残基，100个以上的氨基酸残基，150个以上的氨基酸残基，200个以上的氨基酸残基。
在用本发明的方法确定功能同系物时，也要考虑其他的因素。例如，功能同系的物应该能与对本发明多肽特异性的抗血清相结合。
N-末端烷基化以及C-末端酯化的多肽，也包括在本发明的范围之内。功能同系物也包括翻译后修饰的多肽，例如糖基化的多肽。
药学上可接受的添加剂包含MBL或其变异体的药用组合物，可以用任何常规技术制备，例如用RemingtonThe Science and Practice of Pharmacy 1995，edited by E.W.Martin，Mack Publishing Company，19th edition，Easton，Pa.一书中所描述的方法。
药学上可接受的添加剂，可以是任何通常使用的药学上可接受的添加剂，可以根据特定剂型，给药方式等进行选择。例如，药学上可接受的添加剂可以是Nema et al，1997中提到的任何一种添加剂。进一步地，药学上可接受的添加剂可以是FDA“惰性成分清单”中所列出的任何一种可接受的添加剂，它可以从例如因特网址http//www.fda.gov/cder/drug/iig/default.htm获得。
本发明的某些具体方面，优选药用组合物包括等渗剂。特别是，药用组合物用于注射或输注给药时，加入等渗剂往往是优选的。
因此，组合物可以包括至少一种药学上可接受的添加剂如等渗剂。
药用组合物可以是等渗的，低渗的，或高渗的。但是，一般优选的是，用于注射或输注的药用组合物在给药时，基本上是等渗的。因此，用于储存的药用组合物优选是等渗的或高渗的。如果药用组合物是高渗的用于储存，它可以在给药之前稀释成等渗溶液。
等渗剂可以是离子等渗剂如盐，或者是非离子的等渗剂如碳水化合物。
离子等渗剂的例子包括但不限于NaCl，CaCl2，KCl，和MgCl2。非离子等渗剂的例子包括但不限于甘露醇和甘油。
至少一种药学上可接受的添加剂是缓冲液，也包含在本发明的范围之内。为了某些需要，例如，药用组合物用于注射或输注时，往往希望组合物包含能缓冲pH在4-10，如5-9，6-8范围内的缓冲液。
不过，本发明的另一个具体方面，药用组合物可以根本不包括缓冲液，或者仅仅包含微摩尔量的缓冲液。
缓冲液例如可以选自由TRIS，乙酸盐，谷氨酸盐，乳酸盐，马来酸盐，酒石酸盐，磷酸盐，柠檬酸盐，碳酸盐，甘氨酸盐，组氨酸，甘氨酸，琥珀酸盐，以及三乙醇胺缓冲液组成的组。因此，缓冲液可以是K2HPO4，Na2HPO4或柠檬酸钠。
TRIS缓冲液是已知的，它有多种不同的其他名称，例如氨丁三醇(fromethamine)，氨丁三醇USP，THAM，Trizma，Trisamine，Tris胺，以及trometamol。TRIS的命名包括所有以前提到的命名。
缓冲液可以进一步选自例如USP相容缓冲液用于肠胃外给药，特别是在药用制剂用于肠胃外给药时。例如，缓冲液可以选自由一元酸如乙酸，苯甲酸，葡糖酸，甘油酸，乳酸；二元酸如乌头酸，脂肪酸，抗坏血酸，碳酸，谷氨酸，苹果酸，琥珀酸，酒石酸；多元酸如柠檬酸，磷酸；以及碱如氨，二乙醇胺，甘氨酸，三乙醇胺，TRIS组成的组。
本发明优选的一个具体方面是，本发明的药用组合物不包含稳定剂，特别优选的是药用组合物不包含含蛋白的稳定剂，更优选药用组合物不包含含蛋白的稳定剂和去污剂。活性成分是蛋白或多肽的药用制剂，一般包含一种或多种稳定剂。所述的稳定剂，通常是一种或多种蛋白，或一种或多种去污剂。但是，通常希望减少药用组合物中添加剂的量。因此，本发明优选的药用组合物，不包含任何蛋白和/或去污剂。
然而，本发明的另一个具体方面，药用组合物可以包括至少一种药学上可接受的添加剂如稳定剂。稳定剂例如可以是去污剂，氨基酸，脂肪酸，聚合物，多羟基醇，金属离子，还原剂，鳌合剂，或抗氧化剂，但是，任何其他合适的稳定剂也可以用在本发明中。
例如，稳定剂可以选自由泊洛沙姆(poloxamers)，Tween-20，Tween-40，Tween-60，Tween-80，Brii，金属离子，氨基酸，聚乙烯乙二醇，Triton，EDTA，以及抗坏血酸组成的组。
进一步，稳定剂可以选自由氨基酸如甘氨酸，丙氨酸，精氨酸，亮氨酸，谷氨酸，天冬氨酸；去污剂如聚山梨酯20，聚山梨酯80，泊洛沙姆407；脂肪酸如磷脂酰胆碱乙醇胺，乙酰色氨酸酯(acethyltryptophanate)；聚合物如聚乙二醇，聚乙烯吡咯烷酮；多羟基醇如山梨醇，甘露醇，甘油，蔗糖，葡萄糖，丙二醇，乙烯乙二醇，乳糖，海藻糖；抗氧化剂如抗坏血酸，半胱氨酸HCL，甘油硫醇，硫代乙醇酸(thioglycolic acid)，山梨硫醇(thiosorbitol)，谷胱甘肽；还原剂如一些硫醇；鳌合剂如EDTA盐，谷氨酸，天冬氨酸；以及金属离子如Ca++，Ni++，Mg++，Mn++组成的组。
用在本发明中的抗氧化剂和还原剂的其他例子包括，丙酮重亚硫酸钠，抗坏血酸，重亚硫酸钠，丁基羟基苯甲醚，丁基羟基甲苯，半胱氨酸/HCl半胱氨酸，连二亚硫酸钠，龙胆酸，龙胆酸乙醇胺，谷氨酸钠，甲醛次硫酸钠(formaldehydesulfoxylate sodium)，偏重亚硫酸钾，偏重亚硫酸钠，甘油单硫醇，丙基棓酸，亚硫酸钠，以及乙二硫醇钠。
本发明的药用组合物也包括一种或多种低温防护剂。特别地，当组合物包括冷冻干燥蛋白或组合物应该冷冻储存时，在药用组合物中加入低温防护剂是优选的。
低温防护剂可以是任何有用的低温防护剂，例如低温防护剂可以选自由葡聚糖，甘油，聚乙烯乙二醇，蔗糖，海藻糖，以及甘露醇组成的组。
因此，药学上可接受的添加剂可以包括，选自由等渗盐，高渗盐，缓冲液，以及稳定剂组成的组中的一种或多种物质。进一步，药学上可接受的添加剂可以包括选自由等渗剂，缓冲液，稳定剂，以及低温防护剂组成的组中的一种或多种物质。例如，药学上可接受的添加剂包括，单水合葡萄糖(glucosemonohydrate)，甘氨酸，NaCl，和聚乙烯乙二醇3350。
另一方面，本发明涉及包含一种或多种阳离子的MBL组合物。
令人惊奇地是，MBL溶液中加入阳离子，可以增强MBL和/或其变异体的稳定性。优选地，组合物包括0.01mM-1000mM，更优选0.05mM-500mM，更优选0.1mM-100mM，更优选0.2mM-50mM，更优选0.3mM-25mM，更优选0.5mM-10mM，如0.5mM-5mM，0.5mM-2mM，大约1mM的二价阳离子。阳离子优选是二价阳离子，因此，本发明涉及包含一种或多种二价阳离子的MBL组合物。
二价阳离子优选是金属二价阳离子。例如，二价阳离子可以选自由Ca++，Ni++，Mg++，以及Mn++组成的组。不过，优选的二价阳离子是Ca++。Ca++可以以任何合适的盐加入到溶液中，例如CaCl2。
本发明优选的一个具体方面，MBL组合物如上所述，是关于含MBL的组合物。
可治疗的临床疾病许多临床疾病可以用本发明的药用组合物治疗。然而，特别是可以治疗下列临床疾病感染MBL缺陷免疫缺损的疾病(immunocompromised condition)感染例如可以是被细菌，真菌，病毒，以及寄生物感染。例如，由选自如下的一种或多种细菌造成的感染木糖氧化产碱菌(Achromobacterxylosoxidans)，乙酸钙不动杆菌(Acinetobacter calcoaceticus)，优选无硝不动杆菌(A.anitratus)，溶血不动杆菌(A.haemolyticus)，A.alcaligenes，以及鲁氏不动杆菌(A.lwoffii)，衣氏放线菌(Actinomyces israelii)，嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophilia)，产碱菌属(Alcaligenes)所有菌种，优选粪产碱菌(A.faecalis)，气味产碱菌(A.odorans)，以及反硝化产碱菌(A.denitrificans)，欣氏亚利桑那菌(Arizona hinshawii)，炭疽芽孢杆菌(Bacillus anthracis)，蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus)，脆弱拟杆菌(Bacteroides fragilis)，产黑素拟杆菌(bacteroides melaninogenicus)，百日咳博德特氏菌(Bordetella pertussis)，布氏疏螺旋体(Borrelia burgdorferi)，回归热疏螺旋体(Borrelia recurrentis)，布鲁氏菌属所有菌种，优选流产布鲁氏菌(B.abortus)，猪布鲁氏菌(B.suis)，马尔他布鲁氏菌(B.melitensis)，以及狗布鲁氏菌(B.canis)，肉芽肿鞘杆菌(Calymmatobacterium granulomatis)，胚胎弯曲杆菌肠亚种(Campylobacterfetus intestinalis)，胚胎弯曲杆菌空肠亚种(Campylobacter fetus jejuni)，衣原体属(Chlamydia)所有菌种，优选鹦鹉热衣原体(C.psittaci)和沙眼衣原体(C.trachomatis)，紫色色杆菌(chromobacterium violaceum)，柠檬酸杆菌属(citrobacter)所有菌种，优选弗氏柠檬酸杆菌(C.freundii)和差异柠檬酸杆菌(C.diversus)，肉毒梭菌(Clostridium botulinum)，产气荚膜梭菌(Clostridiumperfringens)，艰难梭菌(Clostridium difficile)，破伤风梭菌(Clostridium tetani)，白喉棒杆菌(Corynebacterium diphtheriae)，棒杆菌属(Corynebacterium)所有菌种，优选溃疡棒杆菌(C.ulcerans)，溶血棒杆菌(C.Haemolyticum)，以及假白喉棒杆菌(C.pseudotuberculosis)，伯氏考克斯氏体(Coxiella burnetii)，迟钝爱德华氏菌(Edwardsiella tarda)，啮蚀艾肯氏菌(Eikenella corrodens)，肠杆菌属(Enterobacter)所有菌种，优选阴沟肠杆菌(E.cloacae)，产气肠杆菌(E.aerogenes)，峰房哈夫尼菌(E.hafniae)(也称(Hafnia alvei)，以及E.agglomerans，猪红斑丹毒丝菌(Erysipelothrix rhusiopathiae)，大肠癌西氏菌(Escherichia coli)，脑膜脓毒性黄杆菌(Flavobacterium meningosepticum)，兔热病杆菌(Francisella tularensis)，具核梭杆菌(usobacterium nucleatum)，阴道加德菌(Gardnerella vaginalis)，软性下疳嗜血杆菌(Haemophilus ducreyi)，流感嗜血杆菌Haemophilus influenzae，缠绕杆菌属(Helicobacter)所有菌种，克雷白氏杆菌属(Klebsiella)所有菌种，优选肺炎克雷白氏菌(K.pneumoniae)，K.ozaenae以及K.rhinoscleromatis，军团杆菌属(Legionella)所有菌种，问号钩端螺旋体(Leptospira interrogans)，单核细胞增多性李司忒氏菌(Listeriamonocytogenes)莫拉氏菌属(Moraxella)所有菌种，优选腔隙莫拉氏菌(M.lacunata)和奥斯陆莫拉氏菌(M.osloensis)，鸟分枝杆菌(Mycobacterioumbovis)，麻风分枝杆菌(Mycobacterium leprae)，结核分支杆菌(Mycobacteriumtuberculosis)，支原体所有菌种，优选肺炎支原体(M.pneumoniae)，淋病奈瑟氏菌(Neisseria gonorrhoeae)，脑膜炎双球菌(Neisseria meningitides)，诺卡氏菌属(Nocardia)所有菌种，优选星状诺卡氏菌(N.asteroides)和巴西诺卡氏菌(N.brasiliensis)，出血败血性巴斯德菌(Pasterurella haemolytica)，多杀巴斯德(氏)菌(Pasteurella multocida)，大消化球菌(Peptococcus magnus)，类志贺(氏)毗邻单胞菌(Plesiomonas shigelloides)，肺炎球菌(Pneumococci)，变形菌属所有菌种，优选奇异变形菌(P.mirabilis)，普通变形菌(P.vulgaris)，P.rettgeri以及P.morganii(也分别称为雷氏普罗威登斯菌(Providencia rettgeri)和摩根(氏)菌(Morganella morganii))，普罗威登斯菌属(Providencia)所有菌种，优选产碱普罗威登氏菌(P.alcalifaciens)，斯氏普罗威登氏菌(P.stuartii)，以及雷氏普罗威登氏菌(P.rettgeri)(也称为雷氏变形菌(Proteus rettgeri))，绿脓假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)，鼻疽假单胞菌(Pseudomonas mallei)，类鼻疽假单胞菌(Pseudomonas pseudomallei)，立克次体(Rickettsia)，Rochalimaia henselae，沙门氏菌属所有菌种，优选肠炎沙门氏菌(S.enteridis)，伤寒沙门氏菌(S.typhi)以及S.derby，最优选沙门氏菌DTl04，灵杆菌(Serratia)属所有菌种，优选S.marcescens，志贺(氏)痢疾菌(Shigella dysenteriae)，弗氏志贺氏菌(S.flexneri)，鲍氏志贺氏菌(S.boydii)以及索氏志贺氏菌(S.sonnei)，小螺菌(Spirillum minor)，金黄色酿脓葡萄球菌(Staphylococcus aureus)，表皮葡萄球菌(Staphylococcus epidermidis)，腐生性葡萄球菌(Staphylococcussaprophyticus)，念珠状链杆菌(Streptobacillus moniliformis)，链球菌(Streptococcus)，优选粪链球菌(S.faecalis)，屎链球菌(S.faecium)，以及耐久链球菌(S.durans)，无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)，肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae)，化脓性链球菌(Streptococcus pyogenes)，品他病密螺旋体(Treponema carateum)，密螺旋体属(Treponeam pallidum)，细弱密螺旋体(Treponema pertenue)，优选极细密螺旋体(T.pallidum)，尿素分解尿素原体(Ureaplasma urealyticum)，霍乱弧菌(Vibrio choletae)，副溶血性弧菌(Vibrioparahaemolyticus)，小肠结肠炎耶尔森(氏)菌(Yersinia enterocolitica)，以及鼠疫耶尔森(氏)菌，鼠疫耶氏菌(Yersinia pestis)。
免疫缺损的疾病包括任何一种或多种免疫系统成分的功能缺陷，例如一种或多种细胞免疫系统的成分如免疫细胞，或者一种或多种体液免疫系统的成分。所述缺陷可以是由缺乏某种成分或某种成分量的减少而引起，或者可以是由某种成分或该成分的某些部分的功能改变而引起。
例如，免疫缺损的疾病可以是MASP的缺陷。
需用MBL治疗的个体需用MBL治疗或需要本发明包含MBL药物的个体，可以是任何个体，例如可以是有临床症状的个体，或者是有临床患病危险的个体。优选地，个体是人类。
本发明优选的一个具体方面，治疗个体表现出一种如上所述的临床症状。本发明优选的另一个具体方面，治疗个体有获得如上所述的临床症状的高风险。
例如，治疗个体有获得感染的高风险。高风险可能是由多种不同的原因引起，但是通常高风险是与一种或多种免疫系统成分的功能缺陷相关的。免疫系统的功能缺陷，可以是细胞免疫系统和/或体液免疫系统的缺陷。
细胞免疫系统的成分包括，例如嗜中性粒细胞，T-细胞，B-细胞，嗜碱性粒细胞，以及巨噬细胞。功能缺陷可能由一种或多种所说细胞的数量减少或者功能异常而引起。
体液免疫系统的成分包括，例如补体途径的成分以及凝集素补体途径的成分。因此，本发明的一个具体方面，治疗个体是有MBL功能缺陷的个体。例如，治疗个体有低于正常的血清MBL水平。
低于正常的MBL血清水平是指，血清中MBL的浓度低于MBL的正常血清浓度。例如，MBL血清水平可以是＜2000ng/ml，如＜1500ng/ml，＜1000ng/ml，＜900ng/ml，＜800ng/ml，＜700ng/ml，＜600ng/ml，＜500ng/ml，＜400ng/ml，＜300ng/ml，＜200ng/ml，＜100ng/ml。
实施例下面的实施例对本发明作出了选择性地具体解释，因此，不应认为是对本发明的限制。
实施例1MBL制剂含有成分浓度MBL 1mg/ml
Tris缓冲液 10mM，pH7.4NaCl 140mMMBL是重组的人MBL，可以按照PCT申请WO00/70043中记载的方法制备和纯化。简单地说，基因组人MBL基因通过PCR扩增，再插入到pREP9载体中(cat.no.V009-50，Invitrogen)。将HEK 293EBNA细胞用构建的载体质粒转染，接着使MBL/pREP9转染细胞的培养基通过装有FractogelTSK HW-75珠粒的柱子(cat.no.14985，Merck KgaA，Darmstadt，Germany)，该柱结合了甘露醇，并且已用15mL 0.1M甘氨酸预洗，和用TBS/0.05％(v/v)Tween-20，2mM CaCl2平衡，将柱用75mL TBS，2mM CaCl2再洗涤。
重组MBL在最后的纯化步骤中用包含10mM Tris缓冲液和140mMNaCl的缓冲液洗脱。接着，MBL制剂用有150层滤膜组成的能高效去除病毒(7logs)的Planova过滤器进行病毒过滤。
有多种Planova过滤器，可以选择75N和35N的过滤器用于MBL溶液的病毒过滤。用不同孔径的Planova过滤器对MBL的回收进行了研究之后，选择了75N和35N过滤器。15N和20N过滤器是商业上可获得的，但是其孔径对过滤MBL来说太小。75N过滤器只能过滤较大的病毒如HIV，将它用作预过滤器比用作病毒去除过滤器更合适。Planova 35N过滤器能去除大于35nm的病毒，包括呼吸道肠道病毒但是不包括更小的病毒如脊髓灰质炎病毒和细小病毒。对于更小的病毒，MBL纯化步骤中的酸处理认为可以有效使病毒失活。
首先，将MBL溶液通过75N过滤器，接着，将滤液而后再通过35N过滤器。进行两次过滤之后，过滤就结束了。以实验室的规模，需要用0.01m2的滤膜。以试生产的规模，需要用0.3m2的滤膜。
最后，将MBL溶液用10mM Tris缓冲液和140mM NaCl稀释至1mg/ml的终浓度，再用0.22μm过滤器进行无菌过滤，将其分成2.2ml等分。
上述制剂适合肠胃外给药。特别地，1等分剂量可以给药一个儿童(按年龄)，3等分剂量可以给药一个成年人。
实施例2MBL制剂含有成分 1ml制剂中含有
MBL 1mgTris缓冲液1.2mgNaCl 5.8mg甘露醇7.3mgMBL是用PCT申请WO00/70043中记载的方法制备和纯化的重组人MBL。将重组MBL在最后的纯化步骤中用含有1.2mg/ml Tris缓冲液和5.8mg/ml NaCl的缓冲液洗脱。接着，将7.3mg/ml甘露醇加入到MBL溶液中。在使用之前，将制剂进行无菌过滤。
上述制剂适合用作肠胃外给药。
实施例3MBL制剂含有成分 1ml制剂中含有MBL 1mgTris缓冲液1.2mgNaCl 5.8mg甘露醇7.3mgTween-80 0.1mgMBL是用PCT申请WO00/70043中记载的方法制备和纯化的重组人MBL。将重组MBL在最后的纯化步骤中用含有1.2mg/ml Tris缓冲液和5.8mg/ml NaCl的缓冲液洗脱。接着，将7.3mg/ml甘露醇和0.1mg Tween-80加入到MBL溶液中。在使用之前将制剂进行无菌过滤和病毒过滤(见实施例1)。
上述制剂适合用作肠胃外给药。
实施例4MBL制剂10mg/ml MBL10mM tris，pH＝7.4140mM NaCl重组MBL用实施例1中记载的方法制备。MBL接着用过滤机在3500×G浓缩。在使用之前将制剂进行无菌过滤和病毒过滤(见实施例1)。
上述制剂适合用作肠胃外给药。
实施例5MBL1mg/mlTris缓冲液10mMNaCl140mMCaCl21mM重组MBL用实施例1中记载的方法制备。再加入CaCl2至1mM的终浓度。在使用之前将制剂进行无菌过滤和病毒过滤(见实施例1)。
上述制剂适合用作肠胃外给药。
实施例6MBL5mg/mlTris缓冲液10mMNaCl140mMCaCl21mM重组MBL用实施例1中记载的方法制备。MBL接着用过滤机在3500×G浓缩。再加入CaCl2至1mM的终浓度。在使用之前将制剂进行无菌过滤和病毒过滤(见实施例1)。
上述制剂适合用作肠胃外给药。
实施例7MBL10mg/mlTris缓冲液10mMNaCl140mMCaCl21mM重组MBL用实施例1中记载的方法制备。MBL接着用过滤机在3500×G浓缩。再加入CaCl2至1mM的终浓度。在使用之前将制剂进行无菌过滤和病毒过滤(见实施例1)。
上述制剂适合用作肠胃外给药。
实施例8包含MBL的药用制剂的稳定性重组MBL被制成液体溶液制剂，在可用作液体蛋白储存的储存容器中进行稳定性测试。有不同MBL浓度的三种不同制剂进行了试验，一种制剂进行了钙离子稳定性效果的试验。
1mg/ml没有任何蛋白稳定剂的制剂在冷冻储存(-20℃)和低温储存(+4℃)12个月时显示出了令人惊奇的高度稳定性。在用质谱分析时，它既没有活性的减少，也没有多肽链的变化。在用氨基酸分析或阴离子交换层析分析时，其蛋白含量也没有改变。在对还原的MBL进行考马斯亮蓝染色分析或者对非还原的MBL进行western印迹时，也没有发现降解产物。在用大小排阻层析时，观察到了可能由凝集的MBL引起的一个小的前峰，其只相应于整个MBL蛋白含量的大约1％。更高浓度MBL制剂的分析结果(10mg/ml和5mg/ml)显示，可能形成了因有压力的浓缩步骤而不是储存引起的凝集。加入钙离子显示出了显著的稳定效果，其活性在+37℃储存两个月后没有变化。
引言三种包含有重组甘露糖结合凝集素(rMBL)的药用制剂已制备得到，并被装入可用于药物储存的储存材料中。用无菌安瓿，橡皮塞进行无菌封装，并且在薄层气蓬(laminar airhood)中操作。上述采用的制剂类型，储存材料，以及封装过程要能使制剂高度代表临床使用的MBL药物产品。对在不同温度和储存时间的这些制剂进行稳定性试验。对储存设备进行全程温度监控。
研究了下列MBL制剂-PE02381mg/ml MBL溶解在10mM tris，140mM NaCl溶液中，pH＝7.4-PE030510mg/ml MBL溶解在10mM tris，140mM NaCl溶液中，pH＝7.4-PE04075mg/ml MBL溶解在10mM tris，140mM NaCl，1mM CaCl2溶液中，pH＝7.4这些研究中的所有涉及制剂都保存在-80℃，并且认为在使用时是稳定的。
方法C4活化分析C4活化分析用本文实施例9中记载的方法进行。C4激活分析是测量MBL结合MASPs(甘露糖结合蛋白相关蛋白酶)以及其与糖基结合后激活MASPs的能力。MBL/MASP复合物接着断裂C4，引发凝集素的补体激活途径。因此，C4的活化是MBL生物活性的测量指标。
此分析是主要的MBL稳定性指示分析。
大小排阻层析(SEC)SEC如本文实施例10所述，是在Superose 6柱(Amersham Biosciences)上进行的层析分析。MBL和其他组分由于分子体积大小不同而被分离，对球蛋白来说，分子体积与分子质量是成比例的。
SEC分析用于确定高质量结构的MBL。层析中分子量高的寡聚体被早洗脱，而非寡聚体被晚洗脱。而且，比MBL寡聚体更大的聚集体也能被检测出，如果样品中存在的话。最后，分析也可以用于对MBL的含量进行定量。
质谱分析(MALDI-MS)开始，样品用常规工艺还原和纯化以除去非蛋白成分，降低背景信号。
MALDI-MS用于确定MBL多肽链的分子质量分布图以及多肽链的可能的降解产物。
结果C4活化分析PE0238C4活化分析显示，在-20℃，+4℃储存12个月的1mg/ml制剂，与对照制剂相比有相同的活性。结果在图1中以六点作图显示，与对照制剂EC50值为100％相比，+4℃的储存制剂其EC50值为105％，-20℃的储存制剂其EC50值为104％。
PE0305本制剂的初始活性相当于10mg/ml制剂标准参照活性的94％。2.5个月后，冷冻样品和冷藏样品的活性下降至大约80％，+37℃样品下降至36％。5个月后，冷冻和冷藏样品的活性仍为大约80％，而+37℃样品则下降至14.3％。C4活化稳定性曲线获得的结果以EC50值列于表1。只有多于-15％的变化才认为是显著差异。
表1.样品稳定性的C4活化分析。T＝0的分析是单样分析。活性是相对于MBL标准品以EC50百分数计算。三份样品的测量数据是以标准误差表示的。PE0407对5mg/ml制剂进行了活性测试，令人惊奇的是，+37℃储存的样品只有很少的活性降低，而且与冷冻样品相比没有显示出活性的变化。冷冻样品的活性为91％，冷藏样品的活性为92％，+37℃样品的活性为94％。无钙离子的对照样品在+37℃储存，其活性测量为19％。C4活化曲线获得的结果以EC50值列于表2。
表2与对照制剂N105-11A，EC50＝100％相比，5mg/ml样品的稳定性的C4激活数据。
SEC数据PE0238对1mg/ml制剂进行分析，检测到了分子量的变化。参照制剂在20.4分钟处以单一峰被洗脱。冷藏储存制剂在15分钟处有一个小的前锋洗脱，前锋相应于整个蛋白含量的大约1％。冷冻储存制剂的峰与参照制剂是相同的，没有检测到前锋。图2顶部给出了参照标准制剂的SEC层析图，下面接着是+4℃ 1mg/ml样品和-20℃ 1mg/ml样品的层析图。冷藏储存样品中检测到了一个小的前峰，其相应于整个MBL含量的1％。
PE30510mg/ml制剂的SEC数据显示产生了一个前峰。前峰中MBL含量是以整个MBL蛋白含量的相对数来计算的，在表3中以前峰占总体MBL的百分数进行说明。
根据表3，所有样品中都检测到了前峰，冷冻储存样品和冷藏储存样品其前峰相应于总体MBL的3％-5％。+37℃储存样品，在2.5个月后观察到了占总体MBL含量40％的前峰，5个月后观察到了占总体MBL含量56％的前峰。
表3前峰中MBL含量以占总体MBL的％表示。所有测量是双份取样数据。
PE04075mg/ml制剂中观察到了前峰，其量在1％-3％之间。无钙离子+37℃储存的对照制剂，其前峰MBL含量为62％。
表4前峰中MBL含量以占总体MBL的％表示。所有测量是单一取样数据。
MS数据PE238对还原的MBL的质谱分析显示，-20℃和+4℃储存12个月后仍然有一个完整的MBL多肽链，即使+37℃储存6个月后也仍然没有观察到任何变化。MS质谱图如图3所示。
MBL因为不同的羟基化和糖基化而没有显示为一个单峰，而是总共有7个峰，其主峰大约25450Da。数据没有显示去糖基化蛋白以及多肽随储存时间的变化。
图3显示了与参照制剂相似的峰，表明储存12个月的样品在MBL多肽链中没有显示出变化。
讨论1mg/ml制剂冷冻储存是12个月稳定的，其C4活化活性没有变化，也没有检测到凝集，其多肽链也没有变化。做的其他分析是，AIEC对含量的分析，非还原性western印迹对分子大小的分析，考马斯亮蓝对降解产物的分析，以及氨基酸分析对确认含量的分析。冷冻和冷藏样品储存12个月后这些分析没有显示出任何变化。样品冷藏储存12个月后，大约有99％的总体MBL洗脱，这与参照MBL相似。
10mg/ml制剂的所有分析样品的C4活性都有所减少，冷冻和冷藏储存2.5和5个月后其活性减少至大约80％，这表明MBL被浓缩至10mg/ml时，它还是稳定的。零时间点时的C4活化值为94％。SEC分析显示，冷冻和冷藏储存2.5和5个月后的样品都有大约4％的蛋白凝集。蛋白凝集量不随温度和储存时间变化表明，凝集可能在研究开始就在浓缩制剂中出现了，它是因浓缩步骤而不是因储存而引起的。任何浓度高于1mg/ml的制剂，可以用离心过滤器在3500×G浓缩而得到。这对任何蛋白而言都是极端加压(extremely stressful)的工艺步骤，而且已知是一般会引起蛋白凝集的处理工艺。
5mg/ml制剂的冷冻，冷藏甚至+37℃的样品与参照制剂相比，其C4活化值为91％-94％。无钙离子+37℃放置的对照制剂，储存2个月后有19％的活性。SEC分析显示，冷冻和冷藏样品有占整个MBL含量1％-3％的蛋白凝集，+37℃储存的对照蛋白则有62％的蛋白凝集。样品没有用Maldi-MS分析。
三种稳定性研究的数据都显示，MBL在冷冻和冷藏下是一个特别稳定的蛋白。最终结论是，1mg/ml MBL液体制剂是高度稳定的，可以不加任何稳定赋形剂用作肠胃外给药。加入钙离子对浓缩制剂有显著的稳定效果。+37℃储存2个月没有任何活性损失的5mg/ml制剂，是优越的蛋白制剂。
实施例9C4活化分析用甘露糖包被FluoroNunc板将FluoroNunc微滴定板用100μl/孔的溶解在50mM NaCO3pH9.6缓冲液中的10μg/ml甘露糖溶液(Sigma-Aldrich，powder#M7504)在20±4℃恒湿箱中包被过夜。将滴定板用TBS(Tris(10mM)，NaCl(150mM)pH7.4)洗涤两次之后，用200μl/孔补加了1mg/ml HSA(Statens Serum Institute，Copenhagen)的TBS缓冲液在20±4℃将滴定板覆盖1小时。每孔再用TBST缓冲液洗涤三次。
C4活化分析MASP纯化自有MBL缺陷且没有抗甘露糖抗体的个体。rMBL标准参照蛋白来自纯化的预稀释在LISA缓冲液(Tris/Base(20mM)，NaCl(150mM)，CaCl2(10mM)，HSA 1mg/ml，Triton×-100(0.05％)，pH7.4)至100mg/ml终浓度且储存在-80℃的rMBL参照产品。
将rMBL标准蛋白和测试样品在LISA缓冲液中预稀释至5mg/ml。预稀释的rMBL标准蛋白和样品与MASP以1∶1的体积比混合，在37℃温育10分钟。
C4补体因子纯化自新鲜血液，冷冻储存在C4，1M NaCl，20mM Tris，50mM 6-氨基己糖，5mM EDTA，0.02％W7v NaN3pH7.4溶液中。将C4在冰上解冻，用B1缓冲液(Barbital(16mM)，NaCl(580mM)，CaCl2(8mM)，MgCl2(4mM)pH7.4.Cat.No.210050 Bie Berntsen)以1∶2000稀释。再将预稀释的rMBL∶MASP复合物和测试样品以1∶10稀释在C4∶B1缓冲液中，这样就获得了经过两倍连续稀释的稀释混合液。
将甘露糖包被的孔板放置在冰上，把样品加入孔板。当样品被转移至37℃的温育箱时，反应开始。
将孔板在37℃可控温的温育箱中温育90分钟，然后在洗槽中用TBST/Ca2+缓冲液(Tris(10mM)，NaCl(150mM)，Tween-20(0.05％w/v)，CaCl2(100mM)pH7.4)洗涤三次。加入100μl/孔以1∶1000稀释在TBST/Ca2+缓冲液中的生物素标记的人抗C4抗体(羊抗人C4，来自DAKO)(1μg/ml)，在25℃加热塔中温育90分钟。然后将孔板在洗槽中再用TBST/Ca2+缓冲液洗涤三次。将100μl/孔的Europium-streptavidin(铕-链霉亲和素)溶液(Wallac1244-360)用Europium(铕(63号元素，符号Eu))稀释缓冲液(Tris(10mM)，NaCl(150mM)，Tween-20(0.05％)，EDTA(25μM))以1∶1000稀释，在25℃加热塔中温育60分钟。在洗槽中再用TBST/Ca2+缓冲液将孔板洗涤三次。每孔加入100μl的Enhancement溶液(Wallac 1244-105)，将样品在摇床上震荡5分钟。样品静置大约5分钟后，插入Wallac Victor 2dMulticounter 1420仪。用Europium标准程序测出Eu3+的荧光值。
从测试分析读数获得的数据应该如下作图分析x轴为MBL的浓度，y轴为Eu的计数(cpm)。MBL浓度应该以自然对数而Eu荧光值应该以线性数据作图。
用Hill系数等式和4个参数进行数据分析和EC50的计算。
按如下方式根据rMBL标准参照蛋白确定rMBL样品的相对活性相对活性＝(标准参照的EC50值/试验样品的EC50值)*100实施例10大小排阻层析(SEC)所有的分析样品应该没有可视的沉淀物，并用带有隔片的帽(caps withsepta)在HPLC瓶中制备。将蛋白溶液室温加入到用Tris缓冲液(pH＝7.4)平衡过的Superose柱中。
Superose 6 HR10/30柱由Amersham Biosciences公司组装提供。
根据下面的说明进行层析树脂类型 Superose 6树脂型号 面积0.78cm2，高度30cm温度 25℃溶剂流速 在整个层析中38cm/hr(0.5mL/min)洗脱梯度 无梯度洗脱；每次40mL洗脱缓冲液，洗脱时间80mins检测 280nm(检测蛋白)，灵敏度辅助范围(AuxiliaryRange)＝2，范围
(Range)＝1，响应值(Response)＝4(重要！)洗脱时间 80min加样频率 5Hz(0.2s一次)溶剂洗脱缓冲液 Tris(0.1M) 将Tris(24.2g)，(储存) NaCl(1.4M) NaCl(163.6g)，以及2.0mLNaN3(0.01％w/v)natriumazid(10％)溶解于pH＝7.4(20℃) 水中(调整至2000mL)。
溶解过程中，pH用5MHCl调整。
预计储存时间长期洗脱缓冲液 Tris(10mM) 将洗脱缓冲液(储NaCl(140mM) 存)(200mL)用水稀释(调NaN3(0.001％w/v) 整至2000mL)。需要调节pH＝7.4(20℃) 最终溶液的pH值。
预计储存时间中长期再生缓冲液 HCl(0.1M) 将HCl(5M，10mL)溶解于(酸性) 水中(调整至500mL)。
预计储存时间长期再生缓冲液 NaOH(0.5M) 将NaOH(20g)溶解于水(碱性) 中(调整至1000mL)。
预计储存时间长期参考文献Akers，J.M.and Defelippis，R.M.，2000，Pharmaceutical FormulationDevelopment of Peptides and Proteins，edited by S.Frokjaer and L.Hovgaard，pp.166-167，LondonTaylor and Francis.
Davies，E.J.，Snowden，N.，Hillarby，M.C.，Carthy，D.Grennan，D.M.，Thomson，W.and Ollier，W.E.R.Mannose-binding protein gene polymorphismin systemic lupus erythematosus.Arthritis Rheum.38，110-114(1995).
Frokjaer，S.and Hovgaard，L.，Pharmaceutical formulation development ofpeptides and proteins，Taylor and Francis，pp.100-109.
Garred，P.，Madsen，H.O.，Hofmann，B.& Svejgaard，A.Increasedfrequency of homozygosity of abnormal mannan-binding-protein alleles inpatients with suspected immunodeficiency.Lancet 346，941-943(1995).
Garred，P.，Madsen，H.O.，Balslev，U.，Hofmann，B.，Pedersen，C.，Gerstoft，J.and Svejgaard，A.Susceptibility to HIV infection and progression ofAIDS in relation to variant alleles of mannose-binding lectin.Lancet 349，236-240(1997).
Ji，Y-H.etal.Activation of the C4 and C2 components of complement by aproteinase in serum bactericidal factor，Ra reactive factorJ.Immunol.150，571-578(1993).
Kawasaki，N.，Kawasaki，T.& Yamashina，1.A serum lectin(mannan-binding protein)has complement-dependent bactericidal activity.J.Biochem.106，483-489(1989).
Kilpatrick，D.C.，Bevan，B.H.and Liston，W.A.Association betweenmannan-binding protein deficiency and recurrent miscarriage.Mol.Hum.Reprod.1，2501-2505(1995).
Kuhlman，M.，Joiner，K.& Ezekowitz，R.A.B.The humanmannose-binding protein functions as an opsonin.J.Exp.Med.169，1733-1745(1989).
Lipscombe，R.J.et aL High frequencies in African and non-Africanpopulations of independent mutations in the mannose binding protein gene.Hum.Mol.Genet.1，709-715(1992).
Lipscombe RJ，et alDistinct physicochemical characteristics of humanmannose binding protein expressed by individuals of differing genotype，Immunology 85(1995)660-667.
Madsen H.O.et al.A new frequentallele is the missing link in the structuralpolymorphism of the human mannan-binding protein.Immunogenetics 40，37-44(1994).
Malhotra，R.Wormald，M.R.，Rudd，P.M.，，Fischer，P.B.，Dwek，R.A.and Sim，R.B.Glycosylation changes of IgG associated with rheumatoidarthritis can activate complement via the mannose-binding protein.Nature Med.1，237-243(1995).
Matsushita，M.& Fujita，T.4)Activation of the classical complementpathway by mannose-binding protein in association with a novelCls-like serineprotease J.Exp.Med.176，1497-1502(1992).
Nema S，Washkuhn RJ and Brendel RJ，1997，Journal of PharmaceuticalScience & Technology，51166-171.
Nielsen，S.L.，Andersen，P.L.，Koch，C.，Jensenius，J.C.& Thiel，S.Thelevel of the serum opsonin，mannan-binding protein inHIV-1 antibody-positivepatients.Clin.Exp.Immunol.100，219-222(1995).
Sumiya，M.et aL Molecular basis of opsonic defect in immunodeficientchildren.Lancet 337，1569-1570(1991).
Super，M.，Thiel，S.，Lu，J.，Levinsky，R.J.& Turner，M.W.Association oflow levels of mannan-binding protein with a common defect of opsonisation.Lancetii，1236-1239(1989).
Summerfield，J.A.et a/.Mannose binding protein gene mutations associatedwith unusual and severe infections in adults.Lancet 345，886-889(1995).
Thiel，S.，Vorup-Jensen，T.，Stover，C.M.，Schwable，W.，Laursen，S.B.，Poulsen，K.，Willis，A.C.，Eggleton，P.，Hansen，S.，Holmskov，U.，Reid，K.B.M.，Jensenius，J.C.(1997)，A second serine protease associated withmannan-binding lectin that activates complement，Nature，386，506-510.
Turner，M.W.Mannose-binding lectinthe pluripotent molecule of theinnate immune system.Immunol.Today，17，532-540(1996).
Valdimarson et al.，1998，Scand.J.Immunol.48116-123.
Vorup-Jensen T et alRecombinant expression of human mannan-bindinglectin，Int Immunopharm 1(2001)677-687.
序列表<110>纳蒂芒公司(丹麦，哥本哈根)<120>包含甘露糖结合凝集素的药用组合物<130>P 625 DK00<160>4<170>PatentIn version 3.1<210>1<211>248<212>PRT<213>人<400>1Met Ser Leu Phe Pro Ser Leu Pro Leu Leu Leu Leu Ser Met Val Ala1 5 10 15Ala Ser Tyr Ser Glu Thr Val Thr Cys Glu Asp Ala Gln Lys Thr cys20 25 30Pro Ala Val Ile Ala Cys Ser Ser Pro Gly Ile Asn Gly Phe Pro Gly35 40 45Lys Asp Gly Arg Asp Gly Thr Lys Gly Glu Lys Gly Glu Pro Gly Gln50 55 60Gly Leu Arg Gly Leu Gln Gly Pro Pro Gly Lys Leu Gly Pro Pro Gly65 70 75 80Asn Pro Gly Pro Ser Gly Ser Pro Gly Pro Lys Gly Gln Lys Gly Asp85 90 95Pro Gly Lys Ser Pro Asp Gly Asp Ser Ser Leu Ala Ala Ser Glu Arg100 105 110Lys Ala Leu Gln Thr Glu Met Ala Arg Ile Lys Lys Trp Leu Thr Phe115 120 125Ser Leu Gly Lys Gln Val Gly Asn Lys Phe Phe Leu Thr Asn Gly Glu130 135 140Ile Met Thr Phe Glu Lys Val Lys Ala Leu Cys Val Lys Phe Gln Ala145 150 155 160
Ser Val Ala Thr Pro Arg Asn Ala Ala Glu Asn Gly Ala Ile Gln Asn165 170 175Leu Ile Lys Glu Glu Ala Phe Leu Gly Ile Thr Asp Glu Lys Thr Glu180 185 190Gly Gln Phe Val Asp Leu Thr Gly Asn Arg Leu Thr Tyr Thr Asn Trp195 200 205Asn Glu Gly Glu Pro Asn Asn Ala Gly Ser Asp Glu Asp Cys Val Leu210 215 220Leu Leu Lys Asn Gly G1n Trp Asn Asp Val Pro Cys Ser Thr Ser His225 230 235 240Leu Ala Val Cys Glu Phe Pro Ile245<210>2<211>699<212>PRT<213>人<400>2Met Arg Trp Leu Leu Leu Tyr Tyr Ala Leu Cys Phe Ser Leu Ser Lys1 5 10 15Ala Ser Ala His Thr Val Glu Leu Asn Asn Met Phe Gly Gln Ile Gln20 25 30Ser Pro Gly Tyr Pro Asp Ser Tyr Pro Ser Asp Ser Glu Val Thr Trp35 40 45Asn Ile Thr Val Pro Asp Gly Phe Arg Ile Lys Leu Tyr Phe Met His50 55 60Phe Asn Leu Glu Ser Ser Tyr Leu Cys Glu Tyr Asp Tyr Val Lys Val65 70 75 80Glu Thr Glu Asp Gln Val Leu Ala Thr Phe Cys Gly Arg Glu Thr Thr85 90 95Asp Thr Glu Gln Thr Pro Gly Gln Glu Val Val Leu Ser Pro Gly Ser100 105 110
Phe Met Ser Ile Thr Phe Arg Ser Asp Phe Ser Asn Glu Glu Arg Phe115 120 125Thr Gly Phe Asp Aia His Tyr Met Ala Val Asp Val Asp Glu Cys Lys130 135 140Glu Arg Glu Asp Glu Glu Leu Ser Cys Asp His Tyr Cys His Asn Tyr145 150 155 160Ile Gly Gly Tyr Tyr Cys Ser Cys Arg Phe Gly Tyr Ile Leu His Thr165 170 175Asp Asn Arg Thr Cys Arg Val Glu Cys Ser Asp Asn Leu Phe Thr Gln180 185 190Arg Thr Gly Val Ile Thr Ser Pro Asp Phe Pro Asn Pro Tyr Pro Lys195 200 205Ser Ser Glu Cys Leu Tyr Thr Ile Glu Leu Glu Glu Gly Phe Met Val210 215 220Asn Leu Gln Phe Glu Asp Ile Phe Asp Ile Glu Asp His Pro Glu Val225 230 235 240Pro Cys Pro Tyr Asp Tyr Ile Lys Ile Lys Val Gly Pro Lys Val Leu245 250 255Gly Pro Phe Cys Gly Glu Lys Ala Pro Glu Pro Ile Ser Thr Gln Ser260 265 270His Ser Val Leu Ile Leu Phe His Ser Asp Asn Ser Gly Glu Asn Arg275 280 285Gly Trp Arg Leu Ser Tyr Arg Ala Ala Gly Asn Glu Cys Pro Glu Leu290 295 300Gln Pro Pro Val His Gly Lys Ile Glu Pro Ser Gln Ala Lys Tyr Phe305 310 315 320Phe Lys Asp Gln Val Leu Val Ser Cys Asp Thr Gly Tyr Lys Val Leu325 330 335Lys Asp Asn Val Glu Met Asp Thr Phe Gln Ile Glu Cys Leu Lys Asp340 345 350
Gly Thr Trp Ser Asn Lys Ile Pro Thr Cys Lys Ile Val Asp Cys Arg355 360 365Ala Pro Gly Glu Leu Glu His Gly Leu Ile Thr Phe Ser Thr Arg Asn370 375 380Asn Leu Thr Thr Tyr Lys Ser Glu Ile Lys Tyr Ser Cys Gln Glu Pro385 390 395 400Tyr Tyr Lys Met Leu Asn Asn Asn Thr Gly Ile Tyr Thr Cys Ser Ala405 410 415Gln Gly Val Trp Met Asn Lys Val Leu Gly Arg Ser Leu Pro Thr Cys420 425 430Leu Pro Val Cys Gly Leu Pro Lys Phe Ser Arg Lys Leu Met Ala Arg435 440 445Ile Phe Asn Gly Arg Pro Ala Gln Lys Gly Thr Thr Pro Trp Ile Ala450 455 460Met Leu Ser His Leu Asn Gly Gln pro Phe Cys Gly Gly Ser Leu Leu465 470 475 480Gly Ser Ser Trp Ile Val Thr Ala Ala His Cys Leu His Gln Ser Leu485 490 495Asp Pro Lys Asp Pro Thr Leu Arg Asp Ser Asp Leu Leu Ser Pro Ser500 505 510Asp Phe Lys Ile Ile Leu Gly Lys His Trp Arg Leu Arg Ser Asp Glu515 520 525Asn Glu Gln His Leu Gly Val Lys His Thr Thr Leu His Pro Lys Tyr530 535 540Asp Pro Asn Thr Phe Glu Asn Asp Val Ala Leu Val Glu Leu Leu Glu545 550 555 560Ser Pro Val Leu Asn Ala Phe Val Met Pro Ile Cys Leu Pro Glu Gly565 570 575Pro Gln Gln Glu Gly Ala Met Val Ile Val Ser Gly Trp Gly Lys Gln580 585 590
Phe Leu Gln Arg Phe Pro Glu Thr Leu Met Glu Ile Glu Ile Pro Ile595 600 605Val Asp His Ser Thr Cys Gln Lys Ala Tyr Ala Pro Leu Lys Lys Lys610 615 620Val Thr Arg Asp Met Ile Cys Ala Gly Glu Lys Glu Gly Gly Lys Asp625 630 635 640Ala Cys Ser Gly Asp Ser Gly Gly Pro Met Val Thr Leu Asn Arg Glu645 650 655Arg Gly Gln Trp Tyr Leu Val Gly Thr Val Ser Trp Gly Asp Asp Cys660 665 670Gly Lys Lys Asp Arg Tyr Gly Val Tyr Ser Tyr Ile His His Asn Lys675 680 685Asp Trp Ile Gln Arg Val Thr Gly Val Arg Asn690 695<210>3<211>686<212>PRT<213>人<400>3Met Arg Leu Leu Thr Leu Leu Gly Leu Leu Cys Gly Ser Val Ala Thr1 5 10 15Pro Leu Gly Pro Lys Trp Pro Glu Pro Val Phe Gly Arg Leu Ala Ser20 25 30Pro Gly Phe Pro Gly Glu Tyr Ala Asn Asp Gln Glu Arg Arg Trp Thr35 40 45Leu Thr Ala Pro Pro Gly Tyr Arg Leu Arg Leu Tyr Phe Thr His Phe50 55 60Asp Leu Glu Leu Ser His Leu Cys Glu Tyr Asp Phe Val Lys Leu Ser65 70 75 80Ser Gly Ala Lys Val Leu Ala Thr Leu Cys Gly Gln Glu Ser Thr Asp85 90 95
Thr Glu Arg Ala Pro Gly Lys Asp Thr Phe Tyr Ser Leu Gly Ser Ser100 105 110Leu Asp Ile Thr Phe Arg Ser Asp Tyr Ser Asn Glu Lys Pro Phe Thr115 120 125Gly Phe Glu Ala Phe Tyr Ala Ala Glu Asp Ile Asp Glu Cys Gln Val130 135 140Ala Pro Gly Glu Ala Pro Thr Cys Asp His His Cys His Asn His Leu145 150 155 160Gly Gly Phe Tyr Cys Ser Cys Arg Ala Gly Tyr Val Leu His Arg Asn165 170 175Lys Arg Thr Cys Ser Ala Leu Cys Ser Gly Gln Val Phe Thr Gln Arg180 185 190Ser Gly Glu Leu Ser Ser Pro Glu Tyr Pro Arg Pro Tyr Pro Lys Leu195 200 205Ser Ser Cys Thr Tyr Ser Ile Ser Leu Glu Glu Gly Phe Ser Val Ile210 215 220Leu Asp Phe Val Glu Ser Phe Asp Val Glu Thr His Pro Glu Thr Leu225 230 235 240Cys Pro Tyr Asp Phe Leu Lys Ile Gln Thr Asp Arg Glu Glu His Gly245 250 255Pro Phe Cys Gly Lys Thr Leu Pro His Arg Ile Glu Thr Lys Ser Asn260 265 270Thr Val Thr Ile Thr Phe Val Thr Asp Glu Ser Gly Asp His Thr Gly275 280 285Trp Lys Ile His Tyr Thr Ser Thr Ala His Ala Cys Pro Tyr Pro Met290 295 300Ala Pro Pro Asn Gly His Val Ser Pro Val Gln Ala Lys Tyr Ile Leu305 310 315 320Lys Asp Ser Phe Ser Ile Phe Cys Glu Thr Gly Tyr Glu Leu Leu Gln
325 330 335Gly His Leu Pro Leu Lys Ser Phe Thr Ala Val Cys Gln Lys Asp Gly340 345 350Ser Trp Asp Arg Pro Met Pro Ala Cys Ser Ile Val Asp Cys Gly Pro355 360 365Pro Asp Asp Leu Pro Ser Gly Arg Val Glu Tyr Ile Thr Gly Pro Gly370 375 380Val Thr Thr Tyr Lys Ala Val Ile Gln Tyr Ser Cys Glu Glu Thr Phe385 390 395 400Tyr Thr Met Lys Val Asn Asp Gly Lys Tyr Val Cys Glu Ala Asp Gly405 410 415Phe Trp Thr Ser Ser Lys Gly Glu Lys Ser Leu Pro Val Cys Glu Pro420 425 430Val Cys Gly Leu Ser Ala Arg Thr Thr Gly Gly Arg Ile Tyr Gly Gly435 440 445Gln Lys Ala Lys Pro Gly Asp Phe Pro Trp Gln Val Leu Ile 5eu Gly450 455 460Gly Thr Thr Ala Ala Gly Ala Leu Leu Tyr Asp Asn Trp Val Leu Thr465 470 475 480Ala Ala His Ala Val Tyr Glu Gln Lys His Asp Ala Ser Ala Leu Asp485 490 495Ile Arg Met Gly Thr Leu Lys Arg Leu Ser Pro His Tyr Thr Gln Ala500 505 510Trp Ser Glu Ala Val Phe Ile His Glu Gly Tyr Thr His Asp Ala Gly515 520 525Phe Asp Asn Asp Ile Ala Leu Ile Lys Leu Asn Asn Lys Val Val Ile530 535 540Asn Ser Asn Ile Thr Pro Ile Cys Leu Pro Arg Lys Glu Ala Glu Ser545 550 555 560
Phe Met Arg Thr Asp Asp Ile Gly Thr Ala Ser Gly Trp Gly Leu Thr565 570 575Gln Arg Gly Phe Leu Ala Arg Asn Leu Met Tyr Val Asp Ile Pro Ile580 585 590Val Asp His Gln Lys Cys Thr Ala Ala Tyr Glu Lys Pro Pro Tyr Pro595 600 605Arg Gly Ser Val Thr Ala Asn Met Leu Cys Ala Gly Leu Glu Ser Gly610 615 620Gly Lys Asp Ser Cys Arg Gly Asp Ser Gly Gly Ala Leu Val Phe Leu625 630 635 640Asp Ser Glu Thr Glu Arg Trp Phe Val Gly Gly Ile Val Ser Trp Gly645 650 655Ser Met Asn Cys Gly Glu Ala Gly Gln Tyr Gly Val Tyr Thr Lys Val660 665 670Ile Asn Tyr Ile Pro Trp Ile Glu Asn Ile Ile Ser Asp Phe675 680 685<210>4<211>728<212>PRT<213>人<400>4Met Arg Trp Leu Leu Leu Tyr Tyr Ala Leu Cys Phe Ser Leu Ser Lys1 5 10 15Ala Ser Ala His Thr Val Glu Leu Asn Asn Met Phe Gly Gln Ile Gln20 25 30Ser Pro Gly Tyr Pro Asp Ser Tyr Pro Ser Asp Ser Glu Val Thr Trp35 40 45Asn Ile Thr Val Pro Asp Gly Phe Arg Ile Lys Leu Tyr Phe Met His50 55 60Phe Asn Leu Glu Ser Ser Tyr Leu Cys Glu Tyr Asp Tyr Val Lys Val65 70 75 80
Glu Thr Glu Asp Gln Val Leu Ala Thr Phe Cys Gly Arg Glu Thr Thr85 90 95Asp Thr Glu Gln Thr Pro Gly Gln Glu Val Val Leu Ser Pro Gly Ser100 105 110Phe Met Ser Ile Thr Phe Arg Ser Asp Phe Ser Asn Glu Glu Arg Phe115 120 125Thr Gly Phe Asp Ala His Tyr Met Ala Val Asp Val Asp Glu Cys Lys130 135 140Glu Arg Glu Asp Glu Glu Leu Ser Cys Asp His Tyr Cys His Asn Tyr145 150 155 160Ile Gly Gly Tyr Tyr Cys Ser Cys Arg Phe Gly Tyr Ile Leu His Thr165 170 175Asp Asn Arg Thr Cys Arg Val Glu Cys Ser Asp Asn Leu Phe Thr Gln180 185 190Arg Thr Gly Val Ile Thr Ser Pro Asp Phe Pro Asn Pro Tyr Pro Lys195 200 205Ser Ser Glu Cys Leu Tyr Thr Ile Glu Leu Glu Glu Gly Phe Met Val210 215 220Asn Leu Gln Phe Glu Asp Ile Phe Asp Ile Glu Asp His Pro Glu Val225 230 235 240Pro Cys Pro Tyr Asp Tyr Ile Lys Ile Lys Val Gly Pro Lys Val Leu245 250 255Gly Pro Phe Cys Gly Glu Lys Ala Pro Glu Pro Ile Ser Thr Gln Ser260 265 270His Ser Val Leu Ile Leu Phe His Ser Asp Asn Ser Gly Glu Asn Arg275 280 285Gly Trp Arg Leu Sar Tyr Arg Ala Ala Gly Asn Glu Cys Pro Glu Leu290 295 300Gln Pro Pro Val His Gly Lys Ile Glu Pro Ser Gln Ala Lys Tyr Phe305 310 315 320
Phe Lys Asp Gln Val Leu Val Ser Cys Asp Thr Gly Tyr Lys Val Leu325 330 335Lys Asp Asn Val Glu Met Asp Thr Phe Gln Ile Glu Cys Leu Lys Asp340 345 350Gly Thr Trp Ser Asn Lys Ile Pro Thr Cys Lys Ile Val Asp Cys Arg355 360 365Ala Pro Gly Glu Leu Glu His Gly Leu Ile Thr Phe Ser Thr Arg Asn370 375 380Asn Leu Thr Thr Tyr Lys Ser Glu Ile Lys Tyr Ser Cys Gln Glu Pro385 390 395 400Tyr Tyr Lys Met Leu Asn Asn Asn Thr Gly Ile Tyr Thr Cys Ser Ala405 410 415Gln Gly Val Trp Met Asn Lys Val Leu Gly Arg Ser Leu Pro Thr Cys420 425 430Leu Pro Glu Cys Gly Gln Pro Ser Arg Ser Leu Pro Ser Leu Val Lys435 440 445Arg Ile Ile Gly Gly Arg Asn Ala Glu Pro Gly Leu Phe Pro Trp Gln450 455 460Ala Leu Ile Val Val Glu Asp Thr Ser Arg Val Pro Asn Asp Lys Trp465 470 475 480Phe Gly Ser Gly Ala Leu Leu Ser Ala Ser Trp Ile Leu Thr Ala Ala485 490 495His Val Leu Arg Ser Gln Arg Arg Asp Thr Thr Val Ile Pro Val Ser500 505 510Lys Glu His Val Thr Val Tyr Leu Gly Leu His Asp Val Arg Asp Lys515 520 525Ser Gly Ala Val Asn Ser Ser Ala Ala Arg Val Val Leu His Pro Asp530 535 540Phe Asn Ile Gln Asn Tyr Asn His Asp Ile Ala Leu Val Gln Leu Gln545 550 555 560
Glu Pro Val Pro Leu Gly Pro His Val Met Pro Val Cys Leu Pro Arg565 570 575Leu Glu Pro Glu Gly Pro Ala Pro His Met Leu Gly Leu Val Ala Gly580 585 590Trp Gly Ile Ser Asn Pro Asn Val Thr Val Asp Glu Ile Ile Ser Ser595 600 605Gly Thr Arg Thr Leu Ser Asp Val Leu Gln Tyr Val Lys Leu Pro Val610 615 620Val Pro His Ala Glu Cys Lys Thr Ser Tyr Glu Ser Arg Ser Gly Asn625 630 635 640Tyr Ser Val Thr Glu Asn Met Phe Cys Ala Gly Tyr Tyr Glu Gly Gly645 650 655Lys Asp Thr Cys Leu Gly Asp Ser Gly Gly Ala Phe Val Ile Phe Asp660 665 670Asp Leu Ser Gln Arg Trp Val Val Gln Gly Leu Val Ser Trp Gly Gly675 680 685Pro Glu Glu Cys Gly Ser Lys Gln Val Tyr Gly Val Tyr Thr Lys Val690 695 700Ser Asn Tyr Val Asp Trp Val Trp Glu Gln Met Gly Leu Pro Gln Ser705 710 715 720Val Val Glu Pro Gln Val Glu Arg72权利要求
1.一种药用组合物包含药学上可接受的添加剂以及至少200mg/ml的含蛋白物的物质，其中甘露糖结合凝集素(MBL)和/或其变异体占总体蛋白的至少35％(w/w)；或者至少400mg/ml的甘露糖结合凝集素(MBL)和/或其变异体。
2.根据权利要求1的组合物，其中组合物是蛋白溶液。
3.根据权利要求1的组合物，其中组合物是蛋白悬浮液。
4.根据权利要求2、3任意一项的组合物，其中溶液或悬浮液是冷冻的。
5.根据权利要求1的组合物，其中组合物是包含冷冻干燥蛋白的干组合物。
6.根据权利要求5的组合物，其中所述的干组合物能够重新构成溶液。
7.根据权利要求1.a)，3和6中任意一项的组合物，其中所述的溶液或悬浮液适合用于注射或输注给药。
8.根据权利要求1.a)，3和6中任意一项的组合物，其中所述的溶液或悬浮液适合用于大药丸注射给药。
9.根据权利要求1.a)，3和6中任意一项的组合物，其中所述的溶液或悬浮液适合用于静脉注射或输注给药。
10.根据权利要求1.a)，3和6中任意一项的组合物，其中所述的溶液或悬浮液适合用于皮下注射给药。
11.根据权利要求1.a)，3和6中任意一项的组合物，其中所述的溶液或悬浮液适合用于肌肉内注射给药。
12.根据权利要求1的组合物，其中组合物包括至少750μg/ml的含蛋白质的物质或它们的盐。
13.根据权利要求1的组合物，其中组合物包括至少750μg/ml的MBL或MBL盐。
14.根据权利要求1的组合物，其中组合物包括200-3000μg/ml的MBL和/或MBL的变异体。
15.根据权利要求1的组合物，其中MBL或MBL盐占总体蛋白的至少50％(w/w)。
16.根据权利要求1的组合物，其中总体蛋白进一步包括一种或多种MBL相关丝氨酸蛋白酶(MASP)或它们的片段。
17.根据权利要求16的组合物，其中MASP选自SEQ ID NO2所示的MASP-1，SEQ ID NO3所示的MASP-2，SEQ ID NO4所示的MASP-3，它们的片段或它们的功能等同物。
18.根据任一前述权利要求的组合物，其中MBL选自SEQ ID NO1所示的MBL，它的片段或它的功能等同物。
19.根据权利要求18的组合物，其中MBL纯化自天然人血清MBL。
20.根据权利要求18的组合物，其中MBL是重组得到的。
21.根据权利要求20的组合物，其中在用非还原SDS-PAGE测定时50％以上的MBL大于200kDa。
22.根据权利要求1的组合物，其中至少一种药学上可接受的添加剂是等渗剂。
23.根据权利要求1的组合物，其中至少一种药学上可接受的添加剂是缓冲液。
24.根据权利要求1的组合物，其中至少一种药学上可接受的添加剂是稳定剂。
25.根据权利要求1的组合物，其中组合物进一步包括二价阳离子。
26.根据权利要求25的组合物，其中二价阳离子是Ca2+。
27.根据权利要求7的组合物，其中药学上可接受的添加剂包括一种或多种等渗盐，高渗盐，缓冲液或稳定剂。
28.根据权利要求5的组合物，其中药学上可接受的添加剂包括一种或多种等渗剂，缓冲液，稳定剂或低温防护剂。
29.根据权利要求5的组合物，其中药学上可接受的添加剂包括单水合葡萄糖，甘氨酸，NaCl或聚乙二醇3350。
30.根据权利要求23，25和28中任意一项的组合物，其中缓冲液能缓冲溶液至pH6-8。
31.根据权利要求23，25和28中任意一项的组合物，其中缓冲液选自TRIS，磷酸盐，柠檬酸盐，碳酸盐，甘氨酸盐，组氨酸，甘氨酸，琥珀酸盐，或三乙醇胺缓冲液。
32.根据权利要求22的组合物，其中组合物是等渗的，低渗的，或高渗的。
33.根据权利要求22，25和28中任意一项的组合物，其中等渗剂选自NaCl，CaCl2，KCl，MgCl2，甘露糖或甘油。
34.根据权利要求24-28中任意一项的组合物，其中稳定剂选自泊洛沙姆，Tween-20，Tween-40，Tween-60，Tween-80，金属离子，氨基酸，聚乙二醇，Triton，EDTA，或抗坏血酸。
35.根据权利要求28的组合物，其中所述的低温防护剂选自葡聚糖，聚乙二醇，蔗糖，海藻糖，或甘露醇。
36.根据权利要求7的组合物，其中组合物是无菌的。
37.根据权利要求7的组合物，其中组合物进行了除去病毒的步骤。
38.根据权利要求1的组合物，其中组合物不包括含蛋白的稳定剂。
39.根据权利要求1的组合物，其中组合物不包括去污剂。
40.根据权利要求1的组合物，其中组合物不包括稳定剂。
41.一种药物组合物，其包含药学上可接受的添加剂，甘露糖结合凝集素(MBL)和/或其变异体，以及至少一种二价阳离子。
42.根据权利要求41的组合物，其中二价阳离子是Ca2+。
43.根据权利要求41的组合物，其中甘露糖结合凝集素(MBL)和/或其变异体的浓度至少是1mg/ml。
44.权利要求1-43中任意一项的药用组合物的制备方法，包括如下步骤获得甘露糖结合凝集素(MBL)和/或其变异体；将所述的MBL和/或其变异体与药学上可接受的添加剂混合，以及可选择地再混入二价阳离子；由此获得权利要求1-43任意一项的药用组合物。
45.一种对需要药物治疗的个体的临床病症治疗的方法，包括给予权利要求1-43中任意一项的药用组合物。
46.根据权利要求45的方法，其中所述治疗是指治愈，缓解或预防治疗。
47.根据权利要求45的方法，其中给药是通过注射或输注给药。
48.根据权利要求45的方法，其中给药是通过大药丸注射给药。
49.根据权利要求45的方法，其中给药是通过静脉注射或输注给药。
50.根据权利要求45的方法，其中给药是通过皮下注射给药。
51.根据权利要求45的方法，其中给药是通过肌肉内注射给药。
52.根据权利要求45的方法，其中临床病症是感染。
53.根据权利要求45的方法，其中个体是人。
54.根据权利要求45的方法，其中个体是有患感染高风险的人。
55.根据权利要求45的方法，其中个体是有低血清MBL水平的人。
56.权利要求1-43中任意一项的组合物在制备治疗需要药物治疗个体的临床疾病的药物中的应用。
57.根据权利要求56的应用，其中临床疾病是感染。
58.根据权利要求56的应用，其中个体是人。
59.根据权利要求56的应用，其中个体是有患感染高风险的人。
60.根据权利要求56的应用，其中个体是有低血清MBL水平的人。
61.一种用于治疗需要药物治疗个体的临床病症的药物，其包含权利要求1-43中任意一项的组合物。
62.根据权利要求61的药物，其中临床病症是感染。
全文摘要
本发明涉及一种药物组合物，其包含MBL和/或MBL变异体。本发明尤其涉及包含至少200mg/ml的含蛋白的物质的组合物，其中甘露糖结合凝集素(MBL)和/或其变异体占总体蛋白的至少35％(w/w)；或者包含至少400mg/ml的甘露糖结合凝集素(MBL)和/或MBL变异体的组合物。另外，本发明还涉及包含MBL和/或MBL变异体以及二价阳离子的组合物。本发明还描述了制备所述组合物的方法。根据本发明的组合物可以例如用于治疗包括感染在内的多种临床病症。所述组合物用于制备治疗临床病症的药物中的应用也包括在本发明中。
文档编号A61K47/24GK1652813SQ03810580
公开日2005年8月10日 申请日期2003年3月14日 优先权日2002年3月15日
发明者杰斯珀·L·拉森, 利夫·康格斯利夫 申请人:纳蒂芒公司