专利名称：一种圣地红景天注射液制剂及其制备方法
技术领域：
本发明涉及一种注射液制剂及其制备方法，特别是涉及一种以圣地红景天的有效成分提取物为主要原料的注射液制剂及其制备方法，属医药技术领域。
背景技术：
红景天(RHODIOLA)系景天科红景天属植物，藏语称“苏罗玛布”。是多年生草木或灌木植物，因其含红色素，根及根茎呈红色，浸液亦呈红色，又系景天科植物，故名红景天。分布在前苏联远东地区及中国东北、西北、西南等高寒地区，海拔1500-4000米左右。全世界90多种，我国红景天种类多，野生资料丰富，有72种。红景天气微香、味苦、涩、寒；清热解毒、燥湿，用于肺热、脉热、瘟病、四肢肿胀。藏医记载活血、止血、理气养血、扶正固本、健脑益智、滋补强身。民间医书记载性平、味涩，善润肺、补肾，有扶正固本、理气养气、益智健脑的功效。常用于老年性心衰，疲惫、阳痿、消渴病、肝脏疾患。经国内外医学专家理化分析及仪器分析，红景天含40余种化合物，主要有甙类(红景天甙、熊果甙、卢丁甙等)、黄酮类(槲皮素、山奈酚花色甙等)、香豆素类、红景天多糖类、具有生物活性的微量元素钙、镁、铁、铅、锌、银、钴、镉、钼、钛、镭等21种。还有人体所需要的十几种氨基酸，其中几种是人体必须的而体内不能合成的氨基酸，还含有丰富的维生素。现代医学研究发现红景天为环境适应性药物在军事医学、航天医学、运动医学上收到较好疗效。其重要功能有抗缺氧、抗疲劳、对中枢神经的双向调节、延缓衰老作用、抗毒作用、抗辐射作用和防癌作用、对内分泌系统的双向调节作用等。
红景天目前发现的主要有效成份是红景天甙、酪醇、红景天多糖等，尤其是甙类化合物，只含C、H、O三种元素，氧元素负电性中心有两个以上，这类化合物低毒、副作用小但用途广泛。通过现代药学研究现已基本明确所含化学成分的红景天有以下几种
1、薄叶红景天(Rhodiola heuryi)化学成份琥珀酸、没食子酸、小麦黄素、小麦黄素-7-氧-β-D-葡萄糖甙、胡萝卜甙等。
2、蔷薇红景天(Rhodiola rosca)化学成分红景天甙、酪醇、没食子酸、没食子酸甲脂、β-谷甾醇、酪萨维等。
3、唐古特红景天(Rhodiola algida)化学成分酪醇、红景天甙、没食子酸等。
4、高山红景天(Rhodiola sachalinensis)化学成分红景天甙、酪醇、多酚等。
5、圣地红景天(Rhodiola s era)化学成分红景天甙、咖啡酸、酪醇、没食子酸、没食子酸乙脂、β-谷甾醇、胡萝卜甾醇等。
6、大花红景天(Rhodiola crenulata)化学成分红景天甙、酪醇、焦梳酸、没食子酸、β-谷甾醇、大花红天素等。
7、狭叶红景天(Rhodiola kirilowii)化学成分红景天甙、酪醇、β-谷甾醇。
8、长鞭红景天(Rhodiola fassiglea S.H.Fu)化学成分β-谷甾醇、胡萝卜甙、没食子酸、没食子酸乙脂、酪醇、β-谷甾醇-3-β-D-半乳糖甙、草质素-8-阿拉伯糖甙等。
现据报道用于药品或保健品的多为大花红景天、库页红景天(高山红景天)、狭叶红景天、深红红景天等，如大株红景天被收入《中华人民共和国药典》1997年版一部，大花红景天被收入《藏药标准》。对红景天类药物的研究也主要是针对以上几种，而生长在海拔3500-5000米之间的圣地红景天却少有相关研究及报道。其实我国古代第一部医学典籍《神农本草经》，就早已把圣地红景天列为药中上品，“主养命以应天，无毒，多服久服不伤人。”有“轻身益气、不老延年”之功效。此外，在藏医名著《四部医典》和《月王药珍》以及《晶珠本草》中也有关于圣地红景天的记载。公元8世纪，藏医医圣宇妥·元丹贡布撰写的《四部医典》记载“性平、味涩、善润肺、能补肾、理气养血。主治周身乏力、胸闷、恶心、体虚等症。”；《晶珠本草》记载“红景天活血清肺、止咳退烧、止痛，用于治疗肺炎、气管炎、身体虚弱、全身乏力、胸闷、难于透气、嘴唇和手心发紫。”目前在临床上使用的以圣地红景天为主要原料的的产品剂型仅有片剂、硬胶囊剂、口服液、颗粒剂等，临床上用于治疗冠心病心绞痛所致的胸痹、胸闷、胸痛等症状。尚无稳定性好、作用直接、起效快、生物利用度高的注射剂型。现有口服剂型均为圣地红景天的粗提物制剂，含有赋形剂，在体内崩解所需的时间较长，起效缓慢，用药周期长，无法在短时间内有效控制症状，不能满足临床上短期内控制病情的需要起效缓慢，用药周期长，但是冠心病心绞痛通常发病急、症状严重，如无法在短时间内有效控制症状，就不利于临床抢救，因而极大的限制了圣地红景天在临床上的进一步应用。另一方面，现有的对红景天类药材有效成分的研究，均把红景天甙、酪醇等作为治疗心脑血管疾病的有效成分而重点研究，而忽视了红景天多糖类的药理作用，在制备工艺中常把红景天多糖类物质作为杂质除去。其实根据现代药学的研究表明红景天多糖类的药理活性是非常强的，尤其是在增强和调节机体免疫方面的药理活性是非常强的；红景天多糖还有一定的降糖、降脂的作用，有实验证明单味红景天水煎液就能够有效的降低餐后血糖和血脂；另外，还有研究表明红景天多糖通过某种机制作用于细胞膜，来阻止柯萨奇病毒颗粒的吸附而达到抗病毒的作用。
发明内容
本发明的第一个目的是提供一种圣地红景天有效成分提取物；本发明的第二个目的是提供一种圣地红景天有效成分提取物的制备方法；本发明的第三个目的是提供一种以圣地红景天的有效成分提取物为主要原料的注射制剂及其制备方法。
本发明提供的圣地红景天有效成分提取物是通过以下技术手段得到的。
工艺方案1A、圣地红景天粉碎成粗粉后，以水为溶液水煎煮3次提取，每次1～3小时，煎液过滤后合并，用减压回收罐浓缩为相对密度为1.20～1.30(20℃)的浓缩液。在该浓缩液中加入乙醇混匀，调整到含醇量为75％～85％，在4℃～8℃静置36～48小时，用400目滤布滤过，沉淀用75％～85％的乙醇洗涤，滤过，滤饼保留备用；合并滤液，用乙醇回收罐减压回收乙醇，得相对密度为20℃下1.10～1.25的浓缩液；
B、再加乙醇混匀，调整到含醇量为75％～95％，在4℃～8℃静置24～36小时，用400目滤布滤过，沉淀用75％～95％的乙醇洗涤，滤过，滤饼保留备用，合并滤液；用20％～30％的氢氧化钠溶液调整PH值到8.0，在4℃～8℃静置24～48小时，滤过，除去鞣质等杂质，减压回收乙醇，得20℃下相对密度为1.10～1.25的浓缩提取液；C、浓缩提取液过大孔树脂层析柱，首先用5～40倍的水洗脱，洗脱液浓缩保留备用；再以5～40倍的40％～85％的乙醇洗脱，收集洗脱液，减压回收乙醇，得到相对密度为1.10～1.25(20℃)的浓缩提取液a；D、步骤A、B中滤饼用5～10倍水溶解后滤过，加入2～4％活性炭煮沸15～30min，冷却过滤；滤液浓缩后另过大孔树脂层析柱，用5～40倍水洗脱，洗脱液浓缩后和步骤C中水洗脱浓缩液合并得到浓缩提取液b；E、合并浓缩提取液a、b，即得圣地红景天有效成分提取物浓缩液。
工艺方案2A、圣地红景天药材粉碎成粗粉，每次用6-15倍量10-95％的乙醇回流提取2～4次，每次2～4小时，合并提取液，滤过，药渣保留备用；滤液减压回收乙醇并浓缩至20℃下相对密度为1.20～1.30的浓缩液；B、浓缩液中加2-5倍量的水，搅拌均匀，冷藏12-72小时，滤过，滤液减压浓缩至相对密度为1.15～1.18，加乙醇使含醇量达80-85％，搅匀，加入20％～30％的氢氧化钠溶液调整PH值到8.0左右，在4℃～8℃静置12～48小时，滤过，滤液减压回收乙醇并浓缩为20℃下相对密度1.20～1.30的浓缩提取液；C、药渣加入4～8倍纯净水煎煮3次，每次1～3小时；合并3次煎液过滤，减压浓缩为20℃下相对密度1.20～1.30的浓缩提取液；D、将B中的浓缩液过大孔树脂层析柱，首先用5～40倍的水洗脱，水洗脱液浓缩备用；再以5～40倍的40％～85％的乙醇洗脱，收集洗脱液，减压回收乙醇，得到20℃下相对密度为1.10～1.25的浓缩液a；E、将步骤C中浓缩液过大孔树脂层析柱，用5～40倍的水洗脱，洗脱液浓缩后与步骤D中的水洗脱浓缩液合并得到浓缩液b；F、浓缩液a、b合并，即得圣地红景天有效成分提取物浓缩液。
上述制备方法中所提到的提取物a主要是红景天甙及咖啡酸、酪醇、没食子酸等黄酮类物质，提取物b主要是红景天多糖。
上述得到的圣地红景天有效成分提取物浓缩液，可制成临床可受的任何剂型，如片剂、胶囊剂、丸剂、颗粒剂、混悬剂、滴丸剂、口服液体制剂、注射剂等各种剂型。
本发明提供的一种圣地红景天注射制剂是以藏药圣地红景天的提取物为主要原料的注射制剂，含有红景天甙1～15％、酪醇0.1-5％、总黄酮10～35％，多糖25-45％等中的任意一种或几种有效成分混合物。是将上述得到的圣地红景天有效成分提取物浓缩液，调整PH值到6.5～7.5，静置、滤过；然后经微孔膜过滤或超滤，滤液浓缩后装入无菌西林瓶，冷冻干燥，压塞密封制成。
圣地红景天注射液的质量标准圣地红景天注射液的活性成分检测以红景天甙和总黄酮为主。红景天甙用高效液相法检测，总黄酮用分光光度法检测，含量以芦丁作为标准来计算。
现有圣地红景天注射剂提取工艺采用的是常见的水提法、醇提法或者水醇双提法，而在通常的醇水双提法、水提法、醇提法得到的提取物要么就是含有大量鞣质、淀粉、植物蛋白质等杂质的粗提物，要么就是丢弃了药材有效成分中的一部分，比如提取物a或者提取物b，这样必然会损失一部分有药理作用的有效成分；而且本发明采用大孔树脂层析柱对粗分的提取物a或者提取物b进行精制，最终得到较纯的提取物。
本发明在临床上可用于治疗心脑血管疾病、增强免疫力、降低血糖。由于冠心病心绞痛通常发病急、症状严重，而本发明作用直接，起效快，能够在短时间内有效控制症状，利于临床抢救，因而极大促进了圣地红景天在临床上的进一步应用。
下面实验例用于进一步说明本发明。
实验例1水提醇沉法提取工艺的研究(1)、采用正交试验分别考察不同的加水量，不同的煎煮时间，不同的煎煮次数等条件下圣地红景天浸膏的收膏率，得到最佳水提条件为加入8倍量水，煎煮3次，每次煎煮时间为3小时。
(2)、乙醇沉淀的条件考察同样采用了正交试验，分别考察了不同浓度的乙醇的沉淀物的物质组成以及沉淀次数对沉淀物组成的影响。结合工艺生产的实际情况综合考虑，得到最佳醇沉条件为80％的乙醇沉淀2次，每次在低温下沉淀36～48小时为宜。这种条件下滤出的沉淀物主要是淀粉，鞣质，植物蛋白质和红景天多糖等物质。
(3)、将醇沉后的滤液用碱性含醇液将大部分鞣质沉淀除去，滤液中残留的鞣质可以在过大孔树脂层析柱时基本除尽。滤液过大孔树脂层析柱，其中成分可以被大孔树脂所吸附，分别用不同的溶剂洗脱就可以达到分离纯化的目的。工艺设计先用水洗脱，得到没有完全被乙醇沉淀下来的多糖洗脱液，然后用乙醇来洗脱得到溶于乙醇的红景天甙和总黄酮类。
(4)、乙醇沉淀下来的滤饼中主要含有多糖类和一些鞣质、植物蛋白质等等，加水溶解后，用活性炭将较大的杂质吸附滤去，滤液过大孔树脂用水洗脱，即可得到较纯的红景天多糖。
(5)、将分别分离提纯得到的红景天甙、总黄酮、多糖合并，调整PH值，用微孔膜或者超滤柱滤过，装瓶冻干即得。
实验例2乙醇回流法+水提法提取工艺的研究(1)、用正交试验的方法来分别考察乙醇回流提取的用量、时间、次数等条件因素，根据不同条件下的收膏率高低，得到最佳的回流条件是乙醇回流提取3次，第一次加入10倍量75％的乙醇回流3小时，第2、3次加入8倍量80％的乙醇回流2小时。在此条件下得到的回流液基本上是以甙类和总黄酮类为主，含有少量的多糖类。回流液经水沉和碱性含醇液可以沉淀除去大部分鞣质等杂质。
(2)、回流提取留下的药渣中的多糖类成分残留较多，因为多糖类在较高浓度的乙醇中的溶解度不高。根据工艺方案1中考察的结果，将药渣加8倍水煎煮3次，每次2小时。得到水煎液。其中以多糖、植物蛋白质、淀粉、鞣质等为主。
(3)、将乙醇回流提取液浓缩后过大孔树脂层析柱，先用水洗脱未能完全沉淀的多糖类物质，保留含有多糖的水洗脱液备用。再用乙醇将甙类和总黄酮类洗脱。
(4)、药渣的水煎液与滤饼合并后用活性炭吸附去较大的杂质后过大孔树脂层析柱，收集水洗脱液合并，经浓缩喷干就得到较纯的红景天多糖。实验例3本发明注射液对大鼠缺血性心急梗死范围的影响取体重在220～260g的大鼠20只，雌雄各半，随机分为2组。对照组为生理盐水组。各组大鼠均以戊巴比妥钠40mg/kg(体重)进行腹腔麻醉。仰卧位固定，四肢插入针状电极。打开胸腔暴露心脏，结扎冠状动脉前降支后关闭胸腔。结扎冠脉后，各组立即从事先剥离好的股静脉给药。描记结扎前，结扎后，给药后的II导联心电图。分别记录结扎后1min，15min，30min的ST段变化，术后6h开胸剪取心脏，冰冻2h，去除左右心房，称量心室重量。再将心肌自心尖向基底部平行切成0.1cm厚的切片，放入0.5％的N-BT(由硝基四氮唑蓝液溶于PH为7.4的磷酸缓冲液中配成的新鲜备用液)，37℃恒温水浴染色15min，正常心肌呈暗兰色，梗死心肌不着色，计算梗死区占全心脏面积的百分比。结果见表1，结果表明本发明注射液具有明显改善大鼠心肌缺血及心肌梗死范围的作用。
表1 本发明注射液对大鼠缺血性心急梗死范围的影响(x±s)
注与生理盐水比较，**p＜0.01实验例4本发明注射液抑制血栓形成试验取体重在300g左右的SD种大鼠50只，随机分为5组，雌雄各半。空白对照为生理盐水，阳性对照为肝素钠，试验组为本发明注射剂。各组大鼠均剥离左侧股静脉注射给药后30min，以乌拉坦麻醉，剥离左颈总动脉15mm长，将测定仪的刺激电极和温度探头钩于动脉血管，用1.5mA直流电刺激5min，当动脉内因血栓形成堵塞血流时，血管远端，温度降低，从刺激开始至温度突降所需时间称为堵塞时间(OT)，以OT长短判断药效指标。
表2 本发明注射制剂对大鼠血栓形成的影响(x±S)
*与对照组相比P＜0.05**与对照组相比P＜0.01***与对照组相比P＜0.001结果表明本发明注射制剂有抑制血栓形成的作用。
实验例5本发明注射液对血液流变学的影响取体重300g左右的SD种大鼠50只，随机分为5组，雌雄各半。空白对照组和血液粘稠(血瘀证)模型对照组均给予生理盐水，试验组为大、中、小剂量的圣地红景天注射剂。方法为空白对照和血液粘稠组给予生理盐水静脉注射，试验组给予不同剂量的本发明注射制剂静脉注射，每日1次，连续7天；血液粘稠组和试验组的大鼠均于试验第7日皮下注射盐酸肾上腺素注射液0.08ml/100g(体重)，每间隔4h重复注射一次，第1次注射后2h，将造模动物浸入冰水中5min，然后各组动物均禁食。试验第8天，所有试验动物均从颈动脉放血，以肝素钠抗凝，取抗凝血，放入离心机中以2000r/min的速度离心10min后分离血浆待测。
观测指标全血粘度与血浆粘度用血液粘度仪在37℃分别测定不同切变率下的全血粘度以及血浆粘度。(全血粘度代表血液流变学的总体变化，血浆粘度反映了血中可溶性成分的流变特性，如粘度越大，血流越缓，则表明“血瘀”症状越重)血细胞比容即测量血液中红细胞的比容或压积(HCT)。取抗凝全血，用毛细管血细胞比容仪检测。(HCT增大，表明全血浓度变高，粘度变大)红细胞沉降率(ESR)取抗凝全血，用Wintrobe管法检测，反映红细胞聚集性。
红细胞电泳时间取抗凝全血，用细胞电泳仪测定，来反映红细胞的聚集性，如红细胞的电泳时间减慢，则说明血液聚集性增强。
表3 本发明注射制剂对血液流变学的影响(x±S)组别 给药剂量 全血粘度(mPa*s) 血浆粘度 血细胞比红细胞沉降 红细胞电泳(g/kg×d) (mPa*s) 容(％) 率(mm/h) 时间(s)3s-148s-1200s-1空白 18.85± 6.58±4.80±2.85± 41.50±9.50±16.63±对照 1.92 0.86 0.45 0.31 3.123.96 1.30血瘀模 23.77± 8.49±6.10±3.68± 42.98±10.38± 20.75±型对照 1.85 0.89 0.46 0.29 4.393.93 1.98大剂 20mg/kg×7 18.26± 6.49±4.83±2.97± 41.75±7.82±16.27±量组 iv 1.23**1.24** 0.47** 0.25**3.36** 3.26** 1.72**中剂 10mg/kg×7 19.82± 7.03±5.12±3.28± 42.46±8.58±18.62±量组 iv 1.51**0.79** 0.42** 0.25**3.52** 3.71** 1.56**小剂 20.39± 8.12±5.68±3.43± 42.83±9.45±19.97±量组 5mg/kg×7iv 1.14* 0.86* 0.45* 0.27* 3.17* 3.73*1.48**与血瘀模型对照组相比P＜0.05**与血瘀模型对照组相比P＜0.01结果表明使用本发明注射制剂的大鼠试验组的血流变学指标与空白对照及“血瘀”证对照组相比有明显的改善。
实验例6本发明注射液对麻醉犬心脏血流动力学及冠脉流量的影响取20kg左右的家犬，用戊巴比妥注射麻醉后固定于手术台上。气管切开接人工呼吸机；分离股动脉插管测量动脉血压；开胸暴露心脏分别放置电磁流量计探头测量心输出量和冠脉流量；左心室插管测量左心室内压；将针状电极插入犬四肢皮下记录第II导联心电图测量心率；左室内压电信号放大后描记曲线的基部测量左室终末舒张压；左室内压电信号输入电子微分器，测量左室内压变化率。上述各项指标同步记录于八导生理记录仪。
首先记录一段给药前上述指标的正常曲线，然后经静脉注射本发明注射剂，记录给药后各项指标的变化。(根据直接测量的数据按照下面的计算公式可推导血流动力学的二级参数体表面积(m2))＝[体重(kg)]2/3×0.11；
表4 本发明注射剂对犬血流动力学及冠脉流量的影响(x±S)给药后 给药后 给药后给药后测量项目 给药前(15min)(30min)(60min) (120min)心率 164± 157.2± 149.2± 159.8± 160.5±(次/min) 8.6 9.4* 8.4* 5.1* 8.5*收缩压18.3± 18.4± 18.4± 19.0± 18.1±(kPa) 2.5 1.2* 2.1* 1.4* 1.7*舒张压10.5± 9.4± 9.8± 9.5± 9.4±(kPa) 2.4 2.5* 2.1* 1.9* 2.3*平均动脉压13.7± 13.1± 13.5± 13.2± 13.5±(kPa) 2.4 3.2* 3.5* 3.1* 1.9*左室内压 18.6± 18.2± 18.1± 18.2± 18.7±(kPa) 2.9 2.4* 2.8* 2.1* 1.1*左室内压最大 339± 324.4± 331.8± 325.1± 331.5±上升率(kPa/s) 93.291.2* 89.5* 85.2* 88.1**心输出量 1.00± 0.99± 1.03±1.01± 0.99±(L/min) 0.1 0.2* 0.2* 0.3* 0.2*每搏输出量5.95± 6.12± 5.98±6.08± 6.10±(ml/次) 0.4 0.2* 0.1* 0.4* 0.2*心脏指数 2.43± 2.45± 2.41±2.43± 2.41±(L/min.M2) 0.2 0.3* 0.8* 0.2* 0.2*心搏指数 15.70±16.52± 16.14± 15.42± 15.43±(ml/次m2)1.2 2.3* 1.4* 1.5* 1.8*左室作功指数 0.432± 0.419± 0.421± 0.434± 0.425±(kg.M/min.M2)0.150.14* 0.21* 0.14* 0.28*总外周血管阻力1116.1± 1107.2± 1106.8±1114.2± 1112.8±(kPa.s/L) 327.1 306.4* 316.1* 322.4*312.4*冠脉流量 116.2±126.1± 128.7± 128.1± 127±(ml/min) 14.515.1** 21.1** 19.2**20.5***与给药前相比P＞0.05**与给药前相比P＜0.01结果表明本发明注射液注射后家犬的心率、收缩压、舒张压、平均动脉压、左室内压及最大上升速率、心输出量、总外周阻力等血流动力学指标均有所波动，但与给药前比较差异不显著；冠状动脉流量则有显著的变化。说明圣地红景天能够在不增加心肌收缩力和左室压力，增加心脏作功的情况下，有效的改善冠状动脉的血流量，从而改善心脏心肌细胞的供血情况。
实验例7本发明注射液对实验性高血糖的影响取体重300g左右的SD种大鼠30只，选择禁食(不禁水)3～8小时血清葡萄糖值在180mg/dl以上的动物，分组时各动物平均血糖值相差不应大于20mg/dl，分为3组，雌雄各半。用四氧嘧啶静脉给药，造成胰岛素低下型高血糖动物。空白对照组给予生理盐水，阳性对照组给予胰岛素，试验组给予本发明注射液皮下注射。
结果表明胰岛素和本发明注射液均可以使四氧嘧啶导致的高血糖大鼠模型血糖下降，表明本发明注射液有一定的降血糖作用。
实施例1圣地红景天有效成分提取物的制备(1)取圣地红景天药材1000g粉碎成粗粉后，加8倍水煎煮3次提取，每次3小时，煎液过滤后合并，用减压回收罐浓缩为相对密度为1.20～1.30(20℃)的浓缩液。在该浓缩液中加入乙醇混匀，调整到含醇量为75％，在4℃～8℃静置36小时，用400目滤布滤过，沉淀用75％的乙醇洗涤，滤过，滤饼保留备用。合并滤液，用乙醇回收罐减压回收乙醇，得相对密度为1.20(20℃)的浓缩液；(2)上述浓缩液中再加乙醇混匀，调整到含醇量为85％，在4℃～8℃静置36小时，用400目滤布滤过，沉淀用85％的乙醇洗涤，滤过，滤饼保留备用，合并滤液。用25％的氢氧化钠溶液调整PH值到8.0，在4℃～8℃静置36小时，滤过，减压回收乙醇，得相对密度为1.20(20℃)的浓缩提取液。
(3)将上述浓缩提取液过大孔树脂层析柱，首先用浓缩液重量40倍的水洗脱，洗脱液浓缩备用。再以浓缩液重量40倍的80％的乙醇洗脱，收集洗脱液，减压回收乙醇，得到相对密度为1.20(20℃)的浓缩提取液a。
(4)步骤(1)(2)中滤饼用10倍水溶解后滤过，加入3％活性炭煮沸15～30min，冷却过滤。滤液浓缩后另过大孔树脂层析柱，用40倍水洗脱，洗脱液浓缩后和步骤(3)中水洗脱浓缩液合并得到浓缩提取液b。
(5)合并浓缩提取液a、b，即得圣地红景天有效成分提取物浓缩液100ml。
实施例2圣地红景天有效成分提取物的制备(1)、提取圣地红景天药材1000g粉碎成粗粉，用10倍量85％的乙醇回流提取3次，第一次2小时，第二、三次1小时。合并提取液，滤过，药渣保留备用。滤液减压回收乙醇并浓缩至相对密度为1.20(20℃)的浓缩液；(2)、浓缩液中加5倍量的水，搅拌均匀，冷藏48小时，滤过，滤液减压浓缩至相对密度为1.18，再加入乙醇使含醇量达85％，搅匀，加入氢氧化钠溶液调整PH值到8.0左右，在4℃～8℃静置48小时，滤过，滤液减压回收乙醇并浓缩为相对密度1.20(20℃)的浓缩提取液；(3)、药渣加入8倍纯净水煎煮3次，每次2小时。合并3次煎液过滤，减压浓缩为相对密度1.20(20℃)的浓缩提取液；(4)、将(2)中的浓缩液过大孔树脂层析柱，首先用40倍的水洗脱，水洗脱液浓缩备用。再以40倍的85％的乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，减压回收乙醇，得到相对密度为1.20(20℃)的浓缩液a；(5)、另将步骤(3)中浓缩液过大孔树脂层析柱，用40倍的水洗脱，洗脱液浓缩后与步骤(4)中的水洗脱浓缩液合并得到浓缩液b；(6)浓缩液a、b合并，即得圣地红景天有效成分提取物的浓缩液100ml。
实施例3本发明片剂的制备按上述实施例1的方法，取圣地红景天有效成分提取物浓缩液100ml，按常规方法制得本发明片剂1000片。
实施例4本发明颗粒剂的制备按上述实施例2的方法，取圣地红景天有效成分提取物浓缩液100ml，按常规方法制得本发明颗粒剂250袋，4g/袋。
实施例5本发明注射液的制备按上述实施例1的方法，取圣地红景天有效成分提取物浓缩液100ml，调整PH值到6.5～7.5，静置、滤过。滤液经微孔膜过滤或经超滤柱超滤。滤液装入无菌西林瓶，冷冻干燥，压塞密封即得本发明冻干粉针剂200支。
实施例6本发明注射液的制备按上述实施例2的方法，取圣地红景天有效成分提取物浓缩液100ml，调整PH值到6.5～7.5，静置、经微孔膜过滤或超滤，滤液浓缩后装入无菌西林瓶，冷冻干燥，压塞密封，即得本发明冻干粉针剂200支。
权利要求
1.一种圣地红景天有效成分提取物，其特征在于是由如下方法制成A、圣地红景天粉碎成粗粉后，以水为溶液水煎煮3次提取，每次1～3小时，煎液过滤后合并，用减压回收罐浓缩为20℃下相对密度为1.20～1.30的浓缩液；在该浓缩液中加入乙醇混匀，调整到含醇量为75％～85％，在4℃～8℃静置36～48小时，用400目滤布滤过，沉淀用75％～85％的乙醇洗涤，滤过，滤饼保留备用；合并滤液，用乙醇回收罐减压回收乙醇，得20℃下相对密度为1.10～1.25的浓缩液；B、再加乙醇混匀，调整到含醇量为75％～95％，在4℃～8℃静置24～36小时，用400目滤布滤过，沉淀用75％～95％的乙醇洗涤，滤过，滤饼保留备用，合并滤液；用20％～30％的氢氧化钠溶液调整PH值到8.0，在4℃～8℃静置24～48小时，滤过，除去鞣质等杂质，减压回收乙醇，得20℃下相对密度为1.10～1.25的浓缩提取液；C、浓缩提取液过大孔树脂层析柱，首先用5～40倍的水洗脱，洗脱液浓缩保留备用；再以5～40倍的40％～85％的乙醇洗脱，收集洗脱液，减压回收乙醇，得到20℃下相对密度为1.10～1.25的浓缩提取液a；D、步骤A、B中滤饼用5～10倍水溶解后滤过，加入2～4％活性炭煮沸15～30min，冷却过滤；滤液浓缩后另过大孔树脂层析柱，用5～40倍水洗脱，洗脱液浓缩后和步骤C中水洗脱浓缩液合并得到浓缩提取液b；E、合并浓缩提取液a、b，即得圣地红景天有效成分提取物浓缩液。
2.如权利要求1所述的一种圣地红景天有效成分提取物，其特征在于是由如下方法制成A.圣地红景天粉碎成粗粉后，以水为溶液水煎煮3次提取，每次3小时，煎液过滤后合并，用减压回收罐浓缩为20℃下相对密度为1.20～1.30的浓缩液；在该浓缩液中加入乙醇混匀，调整到含醇量为75％，在4℃～8℃静置36小时，用400目滤布滤过，沉淀用75％的乙醇洗涤，滤过，滤饼保留备用；合并滤液，用乙醇回收罐减压回收乙醇，得相对密度为20℃下1.20的浓缩液；B、再加乙醇混匀，调整到含醇量为85％，在4℃～8℃静置36小时，用400目滤布滤过，沉淀用85％的乙醇洗涤，滤过，滤饼保留备用，合并滤液；用25％的氢氧化钠溶液调整PH值到8.0，在4℃～8℃静置36小时，滤过，除去鞣质等杂质，减压回收乙醇，得20℃下相对密度为1.20的浓缩提取液；C、浓缩提取液过大孔树脂层析柱，首先用40倍的水洗脱，洗脱液浓缩保留备用；再以40倍的80％的乙醇洗脱，收集洗脱液，减压回收乙醇，得到20℃下相对密度为1.20的浓缩提取液a；D、步骤A、B中滤饼用10倍水溶解后滤过，加入3％活性炭煮沸15～30min，冷却过滤；滤液浓缩后另过大孔树脂层析柱，用40倍水洗脱，洗脱液浓缩后和步骤C中水洗脱浓缩液合并得到浓缩提取液b；E、合并浓缩提取液a、b，即得圣地红景天有效成分提取物浓缩液。
3.一种圣地红景天有效成分提取物，其特征在于是由如下方法制备而成A、圣地红景天药材粉碎成粗粉，每次用6-15倍量10-95％的乙醇回流提取2～4次，每次2～4小时，合并提取液，滤过，药渣保留备用；滤液减压回收乙醇并浓缩至20℃下相对密度为1.20～1.30的浓缩液；B、浓缩液中加2-5倍量的水，搅拌均匀，冷藏12-72小时，滤过，滤液减压浓缩至相对密度为1.15～1.18，加乙醇使含醇量达80-85％，搅匀，加入20％～30％的氢氧化钠溶液调整PH值到8.0左右，在4℃～8℃静置12～48小时，滤过，滤液减压回收乙醇并浓缩为20℃下相对密度1.20～1.30的浓缩提取液；C、药渣加入4～8倍纯净水煎煮3次，每次1～3小时；合并3次煎液过滤，减压浓缩为20℃下相对密度1.20～1.30的浓缩提取液；D、将B中的浓缩液过大孔树脂层析柱，首先用5～40倍的水洗脱，水洗脱液浓缩备用；再以5～40倍的40％～85％的乙醇洗脱，收集洗脱液，减压回收乙醇，得到20℃下相对密度为1.10～1.25的浓缩液a；E、将步骤C中浓缩液过大孔树脂层析柱，用5～40倍的水洗脱，洗脱液浓缩后与步骤D中的水洗脱浓缩液合并得到浓缩液b；F、浓缩液a、b合并，即得圣地红景天有效成分提取物浓缩液。
4.如权利要求3所述的一种圣地红景天有效成分提取物，其特征在于是由如下方法制备而成A.圣地红景天药材粉碎成粗粉，每次用10倍量85％的乙醇回流提取3次，第一次2小时，第二、三次1小时，合并提取液，滤过，药渣保留备用；滤液减压回收乙醇并浓缩至20℃下相对密度为1.20的浓缩液；B.浓缩液中加5倍量的水，搅拌均匀，冷藏48小时，滤过，滤液减压浓缩至相对密度为1.18，加乙醇使含醇量达85％，搅匀，加入20％～30％的氢氧化钠溶液调整PH值到8.0，在4℃～8℃静置48小时，滤过，滤液减压回收乙醇并浓缩为20℃下相对密度1.20的浓缩提取液；C、药渣加入8倍纯净水煎煮3次，每次2小时；合并3次煎液过滤，减压浓缩为20℃下相对密度1.20的浓缩提取液；D、将B中的浓缩液过大孔树脂层析柱，首先用40倍的水洗脱，水洗脱液浓缩备用；再以40倍的85％的乙醇洗脱，收集洗脱液，减压回收乙醇，得到20℃下相对密度为1.20的浓缩液a；E、将步骤C中浓缩液过大孔树脂层析柱，用40倍的水洗脱，洗脱液浓缩后与步骤D中的水洗脱浓缩液合并得到浓缩液b；F、浓缩液a、b合并，即得圣地红景天有效成分提取物浓缩液。
5.如权利要求1、2、3、4所述的一种圣地红景天有效成分提取物，其特征在于可制成临床可接受的任何剂型，包括片剂、胶囊剂、丸剂、颗粒剂、混悬剂、滴丸剂、口服液体制剂、注射剂。
6.如一种圣地红景天注射液制剂，其特征在于该注射液制剂中圣地红景天的有效成分提取物含有红景天甙1～15％、酪醇0.1～5％、总黄酮10～35％，多糖25～45％。
7.如权利要求6所述的一种圣地红景天注射液制剂的制备方法，其特征在于该方法为A、圣地红景天粉碎成粗粉后，以水为溶液水煎煮3次提取，每次1～3小时，煎液过滤后合并，用减压回收罐浓缩为20℃下相对密度为1.20～1.30的浓缩液；在该浓缩液中加入乙醇混匀，调整到含醇量为75％～85％，在4℃～8℃静置36～48小时，用400目滤布滤过，沉淀用75％～85％的乙醇洗涤，滤过，滤饼保留备用；合并滤液，用乙醇回收罐减压回收乙醇，得20℃下相对密度为1.10～1.25的浓缩液；B、再加乙醇混匀，调整到含醇量为75％～95％，在4℃～8℃静置24～36小时，用400目滤布滤过，沉淀用75％～95％的乙醇洗涤，滤过，滤饼保留备用，合并滤液；用20％～30％的氢氧化钠溶液调整PH值到8.0，在4℃～8℃静置24～48小时，滤过，除去鞣质等杂质，减压回收乙醇，得20℃下相对密度为1.10～1.25的浓缩提取液；C、浓缩提取液过大孔树脂层析柱，首先用5～40倍的水洗脱，洗脱液浓缩保留备用；再以5～40倍的40％～85％的乙醇洗脱，收集洗脱液，减压回收乙醇，得到20℃下相对密度为1.10～1.25的浓缩提取液a；D、步骤A、B中滤饼用5～10倍水溶解后滤过，加入2～4％活性炭煮沸15～30min，冷却过滤；滤液浓缩后另过大孔树脂层析柱，用5～40倍水洗脱，洗脱液浓缩后和步骤C中水洗脱浓缩液合并得到浓缩提取液b；E、合并浓缩提取液a、b，调整PH值到6.5～7.5，静置、滤过；滤液经微孔膜过滤或经超滤柱超滤；滤液装入无菌西林瓶，冷冻干燥，压塞密封即得。
8.如权利要求7所述的一种圣地红景天注射液制剂的制备方法，其特征在于该方法为A.圣地红景天粉碎成粗粉后，以水为溶液水煎煮3次提取，每次3小时，煎液过滤后合并，用减压回收罐浓缩为20℃下相对密度为1.20～1.30的浓缩液；在该浓缩液中加入乙醇混匀，调整到含醇量为75％，在4℃～8℃静置36小时，用400目滤布滤过，沉淀用75％的乙醇洗涤，滤过，滤饼保留备用；合并滤液，用乙醇回收罐减压回收乙醇，得相对密度为20℃下1.20的浓缩液；B、再加乙醇混匀，调整到含醇量为85％，在4℃～8℃静置36小时，用400目滤布滤过，沉淀用85％的乙醇洗涤，滤过，滤饼保留备用，合并滤液；用25％的氢氧化钠溶液调整PH值到8.0，在4℃～8℃静置36小时，滤过，除去鞣质等杂质，减压回收乙醇，得20℃下相对密度为1.20的浓缩提取液；C、浓缩提取液过大孔树脂层析柱，首先用40倍的水洗脱，洗脱液浓缩保留备用；再以40倍的80％的乙醇洗脱，收集洗脱液，减压回收乙醇，得到20℃下相对密度为1.20的浓缩提取液a；D、步骤A、B中滤饼用10倍水溶解后滤过，加入3％活性炭煮沸15～30min，冷却过滤；滤液浓缩后另过大孔树脂层析柱，用40倍水洗脱，洗脱液浓缩后和步骤C中水洗脱浓缩液合并得到浓缩提取液b；E、合并浓缩提取液a、b，调整PH值到6.5～7.5，静置、滤过；滤液经微孔膜过滤或经超滤柱超滤；滤液装入无菌西林瓶，冷冻干燥，压塞密封即得。
9.如权利要求6所述的一种圣地红景天注射液制剂的制备方法，其特征在于该方法为A、圣地红景天药材粉碎成粗粉，每次用6-15倍量10-95％的乙醇回流提取2～4次，每次2～4小时，合并提取液，滤过，药渣保留备用；滤液减压回收乙醇并浓缩至20℃下相对密度为1.20～1.30的浓缩液；B、浓缩液中加2-5倍量的水，搅拌均匀，冷藏12-72小时，滤过，滤液减压浓缩至相对密度为1.15～1.18，加乙醇使含醇量达80-85％，搅匀，加入20％～30％的氢氧化钠溶液调整PH值到8.0左右，在4℃～8℃静置12～48小时，滤过，滤液减压回收乙醇并浓缩为20℃下相对密度1.20～1.30的浓缩提取液；C、药渣加入4～8倍纯净水煎煮3次，每次1～3小时；合并3次煎液过滤，减压浓缩为20℃下相对密度1.20～1.30的浓缩提取液；D、将B中的浓缩液过大孔树脂层析柱，首先用5～40倍的水洗脱，水洗脱液浓缩备用；再以5～40倍的40％～85％的乙醇洗脱，收集洗脱液，减压回收乙醇，得到20℃下相对密度为1.10～1.25的浓缩液a；E、将步骤C中浓缩液过大孔树脂层析柱，用5～40倍的水洗脱，洗脱液浓缩后与步骤D中的水洗脱浓缩液合并得到浓缩液b；F、浓缩液a、b合并，调整PH值到6.5～7.5，静置、滤过；然后经微孔膜过滤或超滤，滤液浓缩后装入无菌西林瓶，冷冻干燥，压塞密封，即得。
10.如权利要求9所述的一种圣地红景天注射液制剂的制备方法，其特征在于该方法为A.圣地红景天药材粉碎成粗粉，每次用10倍量85％的乙醇回流提取3次，第一次2小时，第二、三次1小时，合并提取液，滤过，药渣保留备用；滤液减压回收乙醇并浓缩至20℃下相对密度为1.20的浓缩液；B.浓缩液中加5倍量的水，搅拌均匀，冷藏48小时，滤过，滤液减压浓缩至相对密度为1.18，加乙醇使含醇量达85％，搅匀，加入20％～30％的氢氧化钠溶液调整PH值到8.0，在4℃～8℃静置48小时，滤过，滤液减压回收乙醇并浓缩为20℃下相对密度1.20的浓缩提取液；C、药渣加入8倍纯净水煎煮3次，每次2小时；合并3次煎液过滤，减压浓缩为20℃下相对密度1.20的浓缩提取液；D、将B中的浓缩液过大孔树脂层析柱，首先用40倍的水洗脱，水洗脱液浓缩备用；再以40倍的85％的乙醇洗脱，收集洗脱液，减压回收乙醇，得到20℃下相对密度为1.20的浓缩液a；E、将步骤C中浓缩液过大孔树脂层析柱，用40倍的水洗脱，洗脱液浓缩后与步骤D中的水洗脱浓缩液合并得到浓缩液b；F、浓缩液a、b合并，调整PH值到6.5～7.5，静置、滤过；然后经微孔膜过滤或超滤，滤液浓缩后装入无菌西林瓶，冷冻干燥，压塞密封，即得。
11.如权利要求7、8、9、10所述的一种圣地红景天注射液制剂的制备方法，其特征在于浓缩液a中含有红景天甙、咖啡酸、酪醇、没食子酸。
12.如权利要求7、8、9、10所述的一种圣地红景天注射液制剂的制备方法，其特征在于浓缩液b中含有红景天多糖。
全文摘要
本发明公开了一种圣地红景天的有效成分提取物及其制备方法，有效成分提取物主要含有红景天甙、酪醇、总黄酮、多糖；本发明还公开了一种以圣地红景天有效成分提取物为主要原料的注射液制剂及其制备方法。将圣地红景天经水提醇沉法或乙醇回流法与水提法提取，得到含有效部位提取物的浓缩液；再将浓缩液调整pH值，静置、滤过；然后经过滤或超滤，滤液浓缩后装入无菌西林瓶，冷冻干燥，压塞密封，即得注射液制剂。与现有的剂型相比，本发明注射剂具有作用直接，起效快，能够在短时间内有效控制症状，利于临床抢救的优点。
文档编号A61P39/00GK1569196SQ200410037408
公开日2005年1月26日 申请日期2004年4月30日 优先权日2004年4月30日
发明者阙文彬 申请人:成都优他制药有限责任公司