专利名称：一种适用于难溶性药物的药用乳剂及其制备方法
技术领域：
本发明属于药物制剂技术领域，具体涉及一种适用于水难溶性药物成分的乳剂、其制备方法及使用方法。
背景技术：
非肠胃道给药，特别是静脉给药是药物进入体内的重要途径之一。水难溶药物(包括脂溶性的生物大分子)的非肠胃道给药一直是药剂学家所面临的具有挑战性的课题之一。水难溶性药物如紫杉醇、环孢素、可的松、灰黄菌素、布洛芬、安定、白介素-2、依托泊苷等其直接注射有很大的副作用，可能导致溶血、静脉炎、高致敏、器官衰竭乃至死亡。制成乳剂可以消除或减轻这些副作用，并可以明显增加水难溶性药物和脂溶性药物的溶解度，提高其生物利用度，增强不稳定药物的稳定性，并有可能控制药物的释放。
传统乳剂粒径范围在0.25-25μm，从结构上分为水包油型和油包水型两种。近年来，亚微乳和微乳作为一种药物载体的应用，尤其是水难溶性药物在非肠胃道给药，特别是静脉给药方面的应用越来越引起人们的重视。亚微乳剂介于传统乳剂和微乳剂之间，其粒径范围在100nm-300nm之间，和传统乳剂一样为热力学不稳定系统，但与传统乳剂相比，粒径更均匀，系统更稳定，药物的分散度更高。微乳结构于1943年由英国化学家Sculman及其合作者发现，而作为一种给药系统最早由Attwood于1974年提出。微乳作为一种特殊的乳剂，由水相、油相、表面活性剂组成，结构上可分为O/W型、W/O型和双连续相。但是微乳与传统乳剂有很大不同。微乳是热力学稳定体系，且自发形成，粒径均匀一般在10-100nm之间，而传统乳剂则为热力学不稳定体系，粒径不均匀且大于100nm。
我国进入90年代后，乳剂作为一种药物载体的应用，尤其是亲脂、水难溶性药物在非肠胃道给药，特别是静脉给药方面的应用有了很大的进展。
具有数千年悠久历史的中医中药是祖国的文化瑰宝。中药的疗效明确，药效温和，毒副作用小。但是由于中药中的许多活性成分为水难溶性物质，传统的口服、外敷方式给药，很难提高其生物利用度，造成了中药服用量大，见效慢等缺点。阻碍了中医药的进一步发展。中药注射剂的出现大大拓展了中药的使用范围。
中药注射剂在临床急危重症治疗中发挥的重要作用为中医治疗急症提供了新的手段，为提高中医整体医疗水平起到了重要作用。中药注射剂既继承了中药疗效全面、毒副作用低的优势，又具备了西药作用迅速、疗效确切的优点；同时，也克服了中药中某些有效成分用其他方式给药难以被吸收的问题，其优势是显而易见的。
回顾我国中药注射液的发展历程，从最早的柴胡注射液开始至今已有60多年的历史。建国以后，中医药进入了一个新的发展时期，中药注射液的研制生产无论在量还是在质的方面均得到了长足的进步。六十年代研制出了以银黄注射液为代表的20多个品种。七十年代的“大搞中草药运动”使中药注射剂进入了一个急速发展时期，有关资料报道总数达700～1400多种，但由于盲目性大而多数产品技术不太过关、副作用大，文革后渐受冷落，给医生、患者留下了不太好的印象，现在已所剩很少。近二十年来，广大中药科技工作者在中医药理论指导下，应用现代科学技术，研制出一批中药注射液。尤其是《中药注射剂研究技术指导原则》出台以后，中药注射剂又陆续被批准生产。
到目前为止，2000年版《中国药典》收载中药注射剂品种2个，《国家药品标准总目录》(甘肃省药品检验所，2002年)收载122个，这样目前具有生产批准文号的中药注射剂超过120个。
一般来说，中药中活性成分中都含有水溶性的和水难溶性的活性成分。而我国传统中药注射剂多是以水为溶剂的溶液剂，少部分为粉针剂。对于其中的脂溶性、水难溶性活性成分，传统的中药注射剂一般通过添加助溶剂(如吐温等)或通过对有效成分进行化学修饰来增加其溶解度。添加助溶剂(如吐温)时，会有大量的助溶剂注入体内，对人体有一定的毒副作用。化学修饰会改变有效成分的理化性质，降低其稳定性和疗效。此外，传统中药注射剂常出现注射部位疼痛、静脉炎、溶血现象等副作用。如果制成乳剂特别是微乳和亚微乳则可以改善和消除这些副作用，并提高中药中水难溶性成分的溶解度，增强不稳定成分的稳定性。
专利“一种抗肿瘤的中药乳剂及制备方法”(专利号97118433.9)和专利申请“一种含有薏苡仁油及鸦胆子油复合纳米乳剂的制备工艺及配方”(申请号03111312.5)分别公开了一种含薏苡仁油及鸦胆子油复合物、豆磷脂、甘油、注射用水的注射用乳液制剂及制备方法，而且后者在乳剂中还可添加泊洛沙姆和山梨醇制成微乳制剂。
专利申请“姜黄提取物注射剂及其制备方法和用途”(申请号02117217.X)、专利申请“温郁金提取物注射剂及其制备方法和用途”(申请号02117218.8)、专利申请“榄香烯注射剂及其制备方法和用途”(申请号02117219.6)和专利申请“倍半萜烯类注射剂及其制备方法和用途”(申请号02117086.X)分别公开了姜黄提取物、温郁金提取物、榄香烯和倍半萜烯类化合物的新注射剂型，包括乳剂、微乳剂。乳剂、微乳剂由活性成分、表面活性剂、来自于动植物的油脂和注射用水组成。
专利“番荔枝内酯抗癌有效部位药及其制备方法”(专利号01107594.1)公开了由番荔枝内酯抗癌有效部位药、大豆油、卵磷脂和注射用水组成的乳剂制备方法。
专利申请“从植物果仁中提取的果仁油，其提取方法、药物组合物及应用”(申请号02108864.0)公开了由从酸枣仁、花椒、核桃仁中提取的果仁油、磷脂、大豆(或蛋黄)卵磷脂、甘油组成的乳剂的制备。
中国专利申请“一种抗肿瘤药物毛兰素脂肪乳剂及制备方法”(申请号03117069.2)公开了一种含毛兰素、大豆油、大豆磷脂、甘油和注射用水的脂肪乳剂及其制备方法。
专利申请“一支黄花注射用脂肪乳及制备方法”(申请号02136369.2)公开了含一种黄花有效部位的由活性成分、豆油、注射用磷脂和注射用水组成的注射用脂肪乳。
专利申请“含油脂的联苯双酯液体药物组合物”(申请号03146030.5)，公开了一种含油脂的联苯双酯液体药物组合物，可以被制成乳剂、油剂，其中乳剂由联苯双酯、油脂、乳化剂组成，大大提高了亲脂性、水难溶性联苯双酯在体内的生物利用度。
专利申请“一种抗癌药物新制剂-紫杉醇微乳”(申请号02153674.0)公开了一种含紫杉醇、聚乙二醇-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺、蛋黄磷脂酰胆碱的微乳制剂。
专利申请“含有蛋白质药物或抗原的亲脂性微粒以及包含该微粒的制剂”(专利号00800043.3)公开了一种含蛋白质或肽类药物或抗原活性成分的乳剂方法。
纵观我国现有的静脉注射乳剂，品种较少，或仅适用于单活性成分(如联苯双酯和紫杉醇)，或多为单方中药且活性成分或为油如专利97118433.9和专利03111312.5中的薏苡仁油及鸦胆子油；专利02117217.X、02117218.8、02117219.6和02117086.X中的倍半萜烯类挥发油；专利02108864.0中的果仁油；专利02136369.2中的一支黄花油；或酯如专利01107594.1中的番荔枝内酯；或仅溶于有机溶剂的脂溶性物质如专利03117069.2中的毛兰素。而对于复方中药，由于其活性成分很复杂，故其乳剂品种极少。此外，大多数现有乳剂粒径较大，均匀度亦较差，因此副作用较大而且疗效尚难以令人满意。
如前所述，中药中的许多活性成分为亲脂的水难溶性物质，因此，本领域迫切需要开发适用于难溶性活性成分(尤其是复方中药提取物)的、副作用小的药用乳剂。
发明内容
本发明的目的是提供一种适用于水难溶药物(尤其是中药提取物)的、副作用小的药用乳剂及其制备方法。
在本发明的第一方面，提供了一种水包油型药用乳剂，该乳剂含有以下成分(a)0.5-50重量份的活性药物，所述的活性药物含有水难溶性的物质，所述的水难溶性物质在25℃的溶解度为0.001-10000mg/升水；(b)5-300重量份的乳化剂，所述的乳化剂选自下组(b1)选自下组的化合物维生素E琥珀酸聚乙二醇酯、聚乙二醇、聚乙二醇单月桂酸酯、聚氧乙烯聚氧丙烯醚嵌段聚合物泊洛沙姆、单油酸甘油酯、醋酸甘油酯；(b2)磷脂质；(b3)由(b1)和(b2)中至少两种乳化剂构成的混合物；(c)0.5-200重量份的油脂，所述的油脂选自下组(c1)C1-C7短链油脂(如一乙酸甘油酯、三乙酸甘油酯)；(c2)C8-C10的中链脂肪酸甘油酯(如椰子油)；
(c3)C11-C20长链脂肪酸甘油酯(如大豆油、橄榄油、红花油、玉米油、鱼油)；(c4)来自(a)活性药物的油脂；(c5)α-生育酚、α-生育酚醋酸酯；(c6)由上述(c1)、(c2)、(c3)、(c4)和(c5)中至少两种油脂构成的混合物；(d)500-1500重量份的水；并且，乳剂中乳粒的平均粒径在10～1000nm之间。
在另一优选例中，所述的活性药物选自下组(i)单一的水难溶性的化合物，选自紫杉醇、环孢素、可的松、灰黄菌素、布洛芬、安定、白介素-2、或依托泊苷；(ii)含有水溶性的化合物或/和水难溶性的化合物的中药提取物，选自脉络宁提取物、丹参提取物、复方丹参提取物、生脉提取物、参麦提取物、柴胡提取物、鱼腥草提取物、山腊梅提取物或醒脑净提取物。
在另一优选例中，所述的乳化剂是维生素E琥珀酸聚乙二醇酯、聚乙二醇400、聚乙二醇单月桂酸酯、Pluronic F-127、单油酸甘油酯、卵磷脂或其组合。
在另一优选例中，所述的活性药物是中药提取物，如脉络宁提取物。
在另一优选例中，所述的乳化剂是维生素E琥珀酸聚乙二醇酯、卵磷脂或其组合。
在另一优选例中，所述的油脂是C8-C10的中链脂肪酸甘油酯(如椰子油)。
在另一优选例中，该乳剂还含有1-200重量份的选自下组的添加剂等渗调节剂、pH调节剂、助溶剂。
在另一优选例中，所述的等渗调节剂选自下组甘油、丙二醇、葡萄糖、麦芽糖、麦芽糊精或其组合；所述的pH调节剂选自下组氢氧化钠、氢氧化钾、盐酸、甘氨酸、赖氨酸；所述的助溶剂是α-生育酚或/和α-生育酚醋酸酯。
在另一优选例中，其中活性药物的数量是2.5-25重量份；乳化剂的数量是30-130重量份；油脂的数量是10-100重量份。
在另一优选例中，乳剂中油相的平均粒径在10～350nm之间。
在另一优选例中，所述的乳剂是注射剂。
在本发明的第二方面，提供了一种制备本发明上述的药用乳剂的制备方法，包括步骤i)在氮气保护下，将5-300重量份的乳化剂加热到40-80℃，所述的乳化剂选自下组(b1)选自下组的化合物维生素E琥珀酸聚乙二醇酯、聚乙二醇、聚乙二醇单月桂酸酯、聚氧乙烯聚氧丙烯醚嵌段聚合物泊洛沙姆、单油酸甘油酯、醋酸甘油酯；(b2)磷脂质；(b3)由(b1)和(b2)中至少两种乳化剂构成的混合物；(ii)加入0.5-200重量份的油脂，混匀，加热至40-80℃，其中所述的所述的油脂选自下组(c1)C1-C7短链油脂(如一乙酸甘油酯、三乙酸甘油酯)；(c2)C8-C10的中链脂肪酸甘油酯(如椰子油)；(c3)C11-C20长链脂肪酸甘油酯(如大豆油、橄榄油、红花油、玉米油、鱼油)；(c4)来自水难溶性药物的油脂；(c5)α-生育酚、α-生育酚醋酸酯；(C5)由上述(c1)、(c2)、(c3)、(c4)和(c5)中至少两种油脂构成的混合物；(iii)加入0.5-50重量份的水难溶性药物，混匀；iv)加入乳化剂，搅拌均匀即得油相，其中步骤i)和iv)中加入的乳化剂总量为5-300重量份；v)在惰性气体气氛和剪切搅拌下，将油相缓慢加至500-1500重量份的温度为40-80℃的水中，得初乳；vi)对初乳进行匀化，获得乳剂。
在另一优选例中，在所述方法中，在步骤(i)中的加热温度范围是50-55℃，在步骤(v)中注射用水的温度范围是60-70℃。
在另一优选例中，在所述方法中，在步骤(ii)还可同时添加10-100重量份的等渗剂和/或10-100重量份的助溶剂；在另一优选例中，在所述方法中，在步骤(v)和(vi)之间，还包括步骤用pH调节剂调节pH至pH值为4-10；
在另一优选例中，在所述方法中，在步骤(vi)中的匀化条件如下使用两步高压匀化机，第一步匀化压力480kg/cm2-680kg/cm2，第二步匀化压力80kg/cm2-140kg/cm2，将初乳反复匀化，得到均匀的乳剂。或者，直接在搅拌下向初乳中缓慢加入等渗剂(按需要)，置于超声波水浴30±20分钟，得到均一、透明的乳剂；在另一优选例中，在所述方法中，还包括步骤(vii)对所得乳剂进行过滤和灭菌，得到无菌药用乳剂。
图1显示了本发明一个乳剂实例中油相的粒径分别情况。横坐标为粒径，单位是(nm)，纵坐标为体积百分比。
图2显示了本发明另一个乳剂实例中油相的粒径分别情况。横坐标为粒径，单位是(nm)，纵坐标为体积百分比。
具体实施例方式
本发明人经过广泛而深入的研究，发现本领域常用的吐温等助溶剂有较强的溶血副作用，因此经过大量实验，通过对乳化剂、油脂的合理选择，制备了适用于水难溶性药物的乳剂，并且在乳剂配方中大幅减少吐温的用量，甚至根本不使用吐温。本发明的药用乳剂是一种粒径分布均匀、稳定的水包油型的药用乳剂，适合中药注射剂的质量提高和剂型改进，增加中药中水难溶性活性成分的溶解度及稳定性。也可以作为水难溶性药物的注射给药系统。
本发明适用于水难溶药物的乳剂，它的组成主要包括(a)水难溶性活性药物；(b)乳化剂；(c)油脂；和(d)水。
水难溶性活性药物用于本发明的活性药物含有水难溶性的物质，或者本身是水难溶性的物质。所述的水难溶性物质在25℃的溶解度为0.00-10000mg/升水，较佳地在25℃的溶解度为0.0-1000mg/升水，更佳地为0.01-500mg/升水，最佳地在25℃的溶解度为0.01-200mg/升水。
本发明的活性药物可以是单一的水难溶性化合物，如紫杉醇、环孢素、可的松、灰黄菌素、布洛芬、安定、白介素-2、或依托泊苷等；也可以是含有水溶性化合物或不含有水溶性化合物的多组分的混合物，特别是中药提取物，如脉络宁提取物、丹参提取物、复方丹参提取物、生脉提取物、参麦提取物、柴胡提取物、醒脑净提取物、鱼腥草提取物、山腊梅提取物等。
活性药物的用量为0.5-50重量份，更佳地为2.5-25重量份。在最终的乳剂中，活性药物的浓度通常是0.5mg/ml-50mg/ml，其中优选范围2.5mg/ml-25mg/ml。
乳化剂在本发明中起乳化作用。乳化剂同时具有亲水亲油基团，可以包围在经分散的油相的周围，以防止油相的重新集结。乳化剂可以是一种或多种的1.以纯合成方式得到的化合物，如维生素E琥珀酸聚乙二醇酯、聚乙二醇、聚乙二醇单月桂酸酯、聚氧乙烯聚氧丙烯醚嵌段聚合物泊洛沙姆、单油酸甘油酯、醋酸甘油酯等；2.磷脂质，包括源自于蛋黄、大豆、牛、猪等组织的磷脂质，如卵磷脂、大豆磷脂等；还包括以纯合成方式得到的磷脂质，如磷脂。
其中，优选的是维生素E琥珀酸聚乙二醇酯、聚乙二醇400、聚乙二醇单月桂酸酯、Pluronic F-127(一种商品化的泊洛沙姆产品)、卵磷脂、单油酸甘油酯。其中最优选的乳化剂是维生素E琥珀酸聚乙二醇酯或/和卵磷脂。
乳化剂的用量通常为5-300重量份，更佳地为30-130重量份。在最终的乳剂中，乳化剂的浓度通常是5mg/ml-300mg/ml，其中优选范围30mg/ml-130mg/ml。
油脂用于本发明的医用乳剂的油脂没有特别限制，可以是医用乳剂领域常用的油脂。代表性的例子包括(但并不限于)短链(C1-C7)油脂，如一乙酸甘油酯、三乙酸甘油酯；或/和中链(C8-C10)脂肪酸甘油酯，如椰子油；或/和长链脂肪酸甘油酯如大豆油、橄榄油、红花油、玉米油、鱼油；α-生育酚或/和α-生育酚醋酸酯；或其组合。其中，优选的是中链(C8-C10)脂肪酸甘油酯。
如果，活性药物中含有油脂类化合物，或本身就是油脂类化合物，则其它油脂的用量可以减少，甚至不用。因此，在本发明中油脂成分还可包括来源于活性药物的油脂。
油脂的用量通常为0.5-200重量份，较佳地为1-150重量份，更佳地为10-100重量份。在最终的乳剂中，油脂的浓度通常是0.5mg/ml-200mg/ml，其中优选范围是10mg/ml-100mg/ml。
水水是本发明的溶剂，在乳剂中形成连续的水相。可用于本发明的水没有特别限制，可以是纯水、无菌水、或蒸馏水，也可以是生理盐水。
任选的添加剂本发明的乳剂组方还可以添加本领域常用的各种添加剂，如等渗调节剂、pH调节剂、助溶剂、抗氧化剂、防腐剂、香味剂等。
pH调节剂调节产品的pH值，以使得产品的pH值尽量与人体体液的pH值相近。可以是氢氧化钠、氢氧化钾等碱；也可以是盐酸、甘氨酸、赖氨酸等酸。
等渗调节剂调节产品的渗透压，以使得产品的渗透压与人体血液的渗透压相等。可以是甘油、丙二醇、葡萄糖、麦芽糖、麦芽糊精等。其中，优选的是甘油、麦芽糖。
助溶剂虽然对助溶剂没有特别限制，但本发明中特别优选的助溶剂是α-生育酚或/和α-生育酚醋酸酯。此外，在本发明的乳剂中不用吐温作为助溶剂。
制备方法本发明的另一方面，提供了这种乳剂的制备方法(两步法)第一步制备初乳在氮气保护下，将适量乳化剂加热到40-80℃(优选50-55℃)熔化，按需要加入油脂(还同时、或先后加入任选的等渗剂或/和助溶剂)混匀，加热至40-80℃(优选50-55℃)，搅拌下加入适量的水难溶性药物，混匀后可按需要加入适量的乳化剂，搅拌均匀即得油相。在另一容器内加入适量40-80℃(优选60-70℃)新鲜注射用水，充氮保护，在剪切式搅拌机高速搅拌下，将油相以线状缓慢加入水相，继续充分搅拌，得初乳。
根据需要，可用任选的适量pH调节剂调节乳剂pH值至所需要的pH值范围，如pH4-10，较佳地5-9，更佳地为6-8。
第二步制备乳剂制备乳剂可用常规方法制备。优选的制备乳剂的条件如下(a)使用两步高压匀化机，第一步匀化压力480kg/cm2-680kg/cm2，第二步匀化压力80kg/cm2-140kg/cm2，将初乳反复匀化，得到均匀的乳剂。
或者(b)直接在搅拌下向初乳中缓慢加入等渗剂(按需要)，置于超声波水浴30±20分钟左右，得到均一、透明的乳剂。
所得乳剂经过过滤、灌装、灭菌等步骤就可得到乳剂成品。
剂型和给药方式本发明乳剂可以用常规方法制备成本领域常用的各种乳剂剂型，尤其是注射剂，这是因为本发明适用于水难溶性药物的药用乳剂中乳粒的平均粒径通常在10～350nm之间。
本发明的药用乳剂宜以非肠胃道方式给药，如静脉、皮下、肌肉注射等给药方式。
与现有技术相比的有益效果1.本发明为含有水难溶性化合物的药物(包括复方中药提取物和纯化合物如紫杉醇)提供了一种新型的给药载体。
2.本发明不仅适用于单组分的水难溶性化合物，而且适用于多组分的混合物(其中可以有水溶性组分或/和水难溶性组分)，特别适用于单、复方中药提取物。
3.本发明提供了稳定、粒径均匀的乳剂，其渗透压与血液相似，对静脉壁无刺激，可经周围静脉输入。
4.本发明中由于药物主要被包裹在油相中，不影响水相的pH或渗透压，所以对组织损伤小。
5.本发明中由于药物主要被包裹在油相中，药物不与血浆蛋白密切接触，因而药物的蛋白结合率下降，且受体内环境的影响减少，稳定性增加。
6.本发明不使用吐温、一元醇或其他有临床副作用的辅料，增加了临床用药的安全性。
7.本发明的产品根据实际情况可以不使用磷脂，避免了因使用磷脂而可能导致的溶血作用。
8.本发明的产品起效快、疗效好、剂量可减低。
9.本发明所得到的产品较之中药水溶液注射剂质量更为稳定。
10.本发明产品与水溶液注射剂相比较，乳剂微球可以使活性成分更易于进入细胞膜，更易于穿透血脑屏障。
11.本发明提供了可用于工业化的药用乳剂制备技术。
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件。
实施例1脉络宁组方药材提取物的制备取忍冬金银花500克、黄草石斛500克、浙玄参500克和怀牛膝500克，按中国发明专利92107848.X的工艺方法充分混合后放置于反应釜内加水煎煮二次，趁热过滤。合并二次上清液，置R501B星海旋转蒸发器(无锡市星海王生化设备有限公司)，于70～80℃减压浓缩至半固体状。加乙醇沉析，静置过夜，倾倒法取出乙醇，仍用R501B星海旋转蒸发器于45～55℃减压回收乙醇。余醇驱尽后，以乙酸乙酯萃取7～10次，合并萃取液，水浴回收并除尽乙酸乙酯，得药材提取物。
实施例2乳剂1的制备
在氮气保护下将5克维生素E琥珀酸聚乙二醇酯加热到50-55℃熔化，加入5克Miglyol 812N(购自德国Sasol公司)和2.5克甘油混匀，加热至50-55℃，搅拌下加入1克实施例1提取得到的脉络宁提取物，混匀后再加入0.6克注射用卵磷脂，搅拌2分钟即得油相。在另一容器内加入约100ml60-70℃新鲜注射用水，充氮保护，在剪切式搅拌机高速搅拌(每分钟22,000转，IKA T18 UltraTberrax)下，将油相以线状缓慢加入水相，继续搅拌10分钟，得棕色乳液。
使用光散射粒径测定仪(Mastersizer S，Malvern Instruments Ltd.，Malvern，UK)测定得到该初乳的平均粒径为1.84μm。
用适量的氢氧化钠调节初乳的pH至8.8-9.2。
使用两步高压匀化机(APV-1000，APV Homegeniser Group，Germany)，第一步调节匀化压力至600kg/cm2，第二步再调节匀化压力至100kg/cm2，将初乳反复匀化，得到均匀的乳剂。
使用光散射粒径测定仪(Mastersizer S，Malvern Instruments Ltd.，Malvern，UK)测定得到该乳剂的平均粒径为265nm。
实施例3乳剂2的制备
在氮气保护下将3克维生素E琥珀酸聚乙二醇酯加热到50-60℃熔化与1克Miglyol 812N(购自德国Sasol公司)和2.5克甘油混匀，加热至50-60℃，搅拌下加入1克实施例1提取得到的脉络宁提取物，搅拌2分钟即得油相。在另一容器内加入约100ml60-70℃新鲜注射用水，充氮保护，在剪切式搅拌机高速搅拌(每分钟22,000转，IKA T18 Ultra Tberrax)下，将油相以线状缓慢加入水相，继续搅拌10分钟，得棕色乳液。
使用光散射粒径测定仪(Mastersizer S，Malvern Instruments Ltd.，Malvern，UK)测定得到该初乳的平均粒径为0.67μm。
用适量的氢氧化钠调节初乳的pH至8.8-9.2。
使用两步高压匀化机(APV-1000，APV Homegeniser Group，Germany)，第一步调节匀化压力至600kg/cm2，第二步再调节匀化压力至100kg/cm2，将初乳反复匀化，得到均匀的乳剂。
使用光散射粒径测定仪(Mastersizer S，Malvern Instruments Ltd.，Malvern，UK)测定得到该乳剂的平均粒径为245nm。
实施例4乳剂3的制备
在氮气保护下将5克维生素E琥珀酸聚乙二醇酯加热到50-60℃熔化，与3克α-生育酚、5克Miglyol 812N(购自德国Sasol公司)和2.5克甘油混匀，加热至50-60℃，搅拌下加入1克实施例1提取得到的脉络宁提取物，混匀后再加入1.2克注射用卵磷脂，搅拌2分钟即得油相。在另一容器内加入约100ml60-70℃新鲜注射用水，充氮保护，在剪切式搅拌机高速搅拌(每分钟22,000转，IKA T18Ultra Tberrax)下，将油相以线状缓慢加入水相，继续搅拌10分钟，得棕色乳液。
使用光散射粒径测定仪(Mastersizer S，Malvern Instruments Ltd.，Malvern，UK)测定得到该初乳的平均粒径为0.3μm。
用适量的氢氧化钠调节初乳的pH至8.8-9.2。
使用两步高压匀化机(APV-1000，APV Homegeniser Group，Germany)，第一步调节匀化压力至600kg/cm2，第二步再调节匀化压力至100kg/cm2，将初乳反复匀化，得到均匀的乳剂。
使用光散射粒径测定仪(Mastersizer S，Malvern Instruments Ltd.，Malvern，UK)测定得到该乳剂的平均粒径为226nm。
所得乳剂经过滤器过滤在氮气保护下灌入经灭菌的输液袋(瓶)中，密封。
灌装后的产品置于旋转式灭菌釜内，湿热灭菌，灭菌结束时以水快速冷却，得到产品。
实施例5乳剂4的制备
在氮气保护下将3克维生素E琥珀酸聚乙二醇酯加热到50-60℃熔化，与5克Miglyol 810N(购自德国Sasol公司)和2.5克甘油混匀，加热至50-60℃，搅拌下加入1克实施例1提取得到的脉络宁提取物，混匀后再加入0.6克注射用卵磷脂，搅拌2分钟即得油相。在另一容器内加入100ml60-70℃新鲜注射用水，充氮保护，在剪切式搅拌机高速搅拌(每分钟22,000转，IKA T18 Ultra Tberrax)下，将油相以线状缓慢加入水相，继续搅拌10分钟，得棕色乳液。
使用光散射粒径测定仪(Mastersizer S，Malvern Instruments Ltd.，Malvern，UK)测定得到该初乳的平均粒径为0.3μm。
用适量的氢氧化钠调节初乳的pH至8.8-9.2。
使用两步高压匀化机(APV-1000，APV Homegeniser Group，Germany)，第一步调节匀化压力至600kg/cm2，第二步再调节匀化压力至100kg/cm2，将初乳反复匀化，得到均匀的乳剂。
使用光散射粒径测定仪(Mastersizer S，Malvern Instruments Ltd.，Malvern，UK)测定得到该乳剂的平均粒径为231nm。
所得乳剂经过滤器过滤在氮气保护下灌入经灭菌的输液袋(瓶)中，密封。
灌装后的产品置于旋转式灭菌釜内，湿热灭菌，灭菌结束时以水快速冷却，得到产品。
实施例6乳剂5的制备
在氮气保护下将5克维生素E琥珀酸聚乙二醇酯加热到50-60℃熔化，与5克α-生育酚、5克Miglyol 810N(购自德国Sasol公司)和2.5克甘油混匀，加热至50-60℃，搅拌下加入1克实施例1提取得到的脉络宁提取物，混匀后再加入1.2克注射用卵磷脂，搅拌2分钟即得油相。在另一容器内加入约100ml60-70℃新鲜注射用水，充氮保护，在剪切式搅拌机高速搅拌(每分钟22,000转，IKA T18Ultra Tberrax)下，将油相以线状缓慢加入水相，继续搅拌10分钟，得棕色乳液。
用适量的氢氧化钠调节初乳的pH至8.8-9.2。
使用两步高压匀化机(APV-1000，APV Homegeniser Group，Germany)，第一步调节匀化压力至600kg/cm2，第二步再调节匀化压力至140kg/cm2，将初乳反复匀化，得到均匀的乳剂。
使用光散射粒径测定仪(Mastersizer S，Malvern Instruments Ltd.，Malvern，UK)测定得到该乳剂的平均粒径为293nm。
所得乳剂经过滤器过滤在氮气保护下灌入经灭菌的输液袋(瓶)中，密封。
灌装后的产品置于旋转式灭菌釜内，湿热灭菌，灭菌结束时以水快速冷却，得到产品。
实施例7乳剂6的制备
在氮气保护下将5克维生素E琥珀酸聚乙二醇酯加热到50-60℃熔化，与3克α-生育酚、7克聚乙二醇400和1克Pluronic F-127(购自德国BASF公司)混匀，加热至50-60℃，搅拌下加入1克实施例1提取得到的脉络宁提取物，搅拌2分钟即得油相。在另一容器内加入约100ml60-70℃新鲜注射用水，充氮保护，在剪切式搅拌机高速搅拌(每分钟22,000转，IKA T18 Ultra Tberrax)下，将油相以线状缓慢加入水相，继续搅拌10分钟，得棕色乳液。
使用光散射粒径测定仪(Mastersizer S，Malvern Instruments Ltd.，Malvern，UK)测定得到该初乳的平均粒径为2.57μm。
用适量的氢氧化钠调节初乳的pH至8.8-9.2。
使用两步高压匀化机(APV-1000，APV Homegeniser Group，Germany)，第一步调节匀化压力至620kg/cm2，第二步再调节匀化压力140kg/cm2，将初乳反复匀化，得到均匀的乳剂。
使用光散射粒径测定仪(Mastersizer S，Malvern Instruments Ltd.，Malvern，UK)测定得到该乳剂的平均粒径为296nm。
所得乳剂经过滤器过滤在氮气保护下灌入经灭菌的输液袋(瓶)中，密封。
实施例8乳剂7的制备
在氮气保护下将5克维生素E琥珀酸聚乙二醇酯加热到50-60℃熔化，与1克α-生育酚和5克单油酸甘油酯混匀，加热至50-60℃，搅拌下加入1克实施例1提取得到的脉络宁提取物，搅拌2分钟即得油相。在另一容器内加入约100ml60-70℃新鲜注射用水，加5克葡萄糖使全溶，充氮保护，在剪切式搅拌机高速搅拌(每分钟22,000转，IKA T18 Ultra Tberrax)下，将油相以线状缓慢加入水相，继续搅拌10分钟，得棕色乳液。
用适量的氢氧化钠调节初乳的pH至8.8-9.2。
使用两步高压匀化机(APV-1000，APV Homegeniser Group，Germany)，第一步调节匀化压力至540kg/cm2，第二步再调节匀化压力至80kg/cm2，将初乳反复匀化，得到均匀的乳剂。
使用光散射粒径测定仪(Mastersizer S，Malvern Instruments Ltd.，Malvern，UK)测定得到该乳剂的平均粒径为240nm。
所得乳剂经过滤器过滤在氮气保护下灌入经灭菌的输液袋(瓶)中，密封。
实施例9乳剂8的制备
在氮气保护下将5克维生素E琥珀酸聚乙二醇酯加热到50-60℃熔化，与1克α-生育酚和5克聚乙二醇单月桂酸酯混匀，加热搅拌下加入1克实施例1提取得到的脉络宁提取物，搅拌2分钟即得油相。在另一容器内加入约100ml60-70℃新鲜注射用水，加5克葡萄糖使全溶，充氮保护，在剪切式搅拌机高速搅拌(每分钟22,000转，IKA T18 Ultra Tberrax)下，将油相以线状缓慢加入水相，继续搅拌10分钟，得棕色乳液。
使用两步高压匀化机(APV-1000，APV Homegeniser Group，Germany)，第一步调节匀化压力至480kg/cm2，第二步再调节匀化压力至100kg/cm2，将初乳反复匀化，得到均匀乳剂。
使用光散射粒径测定仪(Mastersizer S，Malvern Instruments Ltd.，Malvern，UK)测定得到该乳剂的平均粒径为323nm。
所得乳剂经过滤器过滤在氮气保护下灌入经灭菌的输液瓶中，密封。
实施例10乳剂9的制备
在氮气保护下将5克维生素E琥珀酸聚乙二醇酯加热到50-60℃熔化，与3克Miglyol 812N(购自德国Sasol公司)混匀，加热到50-60℃熔化，搅拌下加入1克实施例1提取得到的脉络宁提取物，混匀后再加入0.6克卵磷脂，搅拌2分钟即得油相。在另一容器内加入约100ml60-70℃新鲜注射用水，充氮保护，在剪切式搅拌机高速搅拌(每分钟22,000转，IKA T18 Ultra Tberrax)下，将油相以线状缓慢加入水相，继续搅拌10分钟，得棕色乳液。
搅拌下向上述乳液缓慢加入6克甘氨酸和10克麦芽糖，置于超声波水浴超声30分钟，得到均一、透明乳液。
使用光散射粒径测定仪(Mastersizer S，Malvern Instruments Ltd.，UK)测得该微乳液平均粒径为27.86nm。
实施例11乳剂10的制备
在氮气保护下将5克维生素E琥珀酸聚乙二醇酯加热到50-60℃熔化，与3克Miglyol 812N(购自德国Sasol公司)和2.5克甘油混匀，加热到50-60℃熔化，搅拌下加入1克实施例1提取得到的脉络宁提取物，混匀后再加入0.6克卵磷脂，搅拌2分钟即得油相。在另一容器内加入约100ml60-70℃新鲜注射用水，充氮保护，在剪切式搅拌机高速搅拌(每分钟22,000转，IKA T18 Ultra Tberrax)下，将油相以线状缓慢加入水相，继续搅拌10分钟，得棕色乳液。
置于超声波水浴超声30分钟，得到均一、透明浅棕色乳液。
结果用光散射粒径测定仪(Mastersizer S，Malvern Instruments Ltd.，Malvern，UK)测定粒径，测定结果如图1所示，表明平均粒径为27.34nm。
稳定性60℃放置10天，色泽略微加深。平均粒径为27.49nm。
实施例12乳剂11的制备
在氮气保护下将3.0克维生素E琥珀酸聚乙二醇酯加热到50-60℃熔化，与1.0克α-生育酚、3.0克Miglyol 812N(购自德国Sasol公司)和2.5克甘油混匀，加热到50-60℃熔化，搅拌下加入1.0克实施例1提取得到的脉络宁提取物，混匀后再加入0.6克卵磷脂，搅拌2分钟即得油相。在另一容器内加入约100ml60-70℃新鲜得注射用水，充氮保护，在剪切式搅拌机高速搅拌(每分钟22,000转，IKA T18 Ultra Tberrax)下，将油相以线状缓慢加入水相，继续搅拌10分钟，得棕色乳液。
置于超声波水浴超声30分钟，得到均一、透明深灰乳液。
结果用光散射粒径测定仪(Mastersizer S，Malvern Instruments Ltd.，Malvern，UK)测定粒径，测定结果如图2所示，表明平均粒径为66.02nm。
稳定性60℃放置10天，色泽不变。平均粒径为62.07nm。
实施例13乳剂12的制备
取醋酸甘油酯5克溶于10ml注射用水，加入2.5克甘油、1.2克卵磷脂，搅拌均匀后加入脉络宁提取物1克，搅拌5分钟，待均匀分散后加入大豆油10克，搅拌均匀，即得油相。
在另一容器内加入约90ml新鲜注射用水，充氮保护，在剪切式搅拌机高速搅拌(每分钟22,000转，IKA T18 Ultra Tberrax)下，将油相以线状缓慢加入水相，继续搅拌10分钟，得乳白色均一乳液。
使用两步高压匀质机(APV-1000，APV Homegeniser Group，Germany)，第一步调节匀化压力至620kg/cm2，第二步再调节匀化压力140kg/cm2，将初乳反复匀化，得到均匀的乳剂。
使用光散射粒径测定仪(Mastersizer S，Malvern Instruments Ltd.，UK)测得该微乳平均粒径为270nm。
实施例14兔耳血管灌流试验对照脉络宁注射液的制备取实施例1提取得到的脉络宁提取物(相当于500克原药材)加200ml新鲜蒸馏水，加热搅拌，冷却，过滤。加入4ml吐温-80，搅拌，用20％NaOH溶液调节pH值至8.8-9.2，加新鲜蒸馏水至500ml得到对照脉络宁注射液。
试验方法取健康家兔(新西兰白兔)，静脉注射冬眠灵(15mg/kg)麻醉，侧卧固定，取血管钳夹紧兔耳根部阻断血流。由兔耳正中部动脉滴入乐式液，切开外缘静脉，冲净血管内血液。给乐式液。记录每分钟流出的乐式液滴数5分钟。再分别给予试验样品，记录每分钟流出滴数15分钟，观察用药前后每分钟平均流出滴数的变化。每只兔耳作一次试验，液面高度50厘米，试验温度为室温。
结果分别取实施例10制得的乳剂9(脉络宁微乳)、实施例6制得的乳剂5(脉络宁亚微乳)、对照脉络宁注射液，用乐式液稀释成25％溶液，依法作兔耳血管灌流试验。结果见表一。
表一脉络宁微乳、亚微乳、和对照注射液的兔耳血管灌流试验结果
讨论结果表明，本发明的乳剂可以更为有效使难溶性药物溶于水包油型乳剂中，从而更好地发挥药效。与对照脉络宁注射液相比较，本发明药用乳剂因为难溶性药物(脉络宁提取物)溶解量大，因此药效更明显，从而更有效地扩张试验家兔的兔耳血管，其中实施例6所制得的亚微乳剂给药后平均每分钟流出滴数与给药前相比从10.7％提高至16.3％，相对增幅达52％，而实施例10所制的微乳剂更从10.7％提高至18.5％，相对增幅达72％。
实施例15乳剂13的制备
在氮气保护下，将0.3克紫杉醇以20毫升无水乙醇溶解，向溶液中加入3.0克维生素E琥珀酸聚乙二醇酯、1.0克α-生育酚、3.0克Miglyol 810N(购自德国Sasol公司)、0.6克卵磷脂和2.5克甘油，所得溶液置旋转蒸发仪于40℃减压回收乙醇。在另一容器内加入约100ml新鲜注射用水，充氮保护，在剪切式搅拌机高速搅拌(每分钟22,000转，IKA T18 Ultra Tberrax)下，将除去乙醇后的油相以线状缓慢加入水相，继续搅拌10分钟，得均一类白色初乳。
使用两步高压匀化机(APV-1000，APV Homegeniser Group，Germany)，第一步调节匀化压力至680kg/cm2，第二步再调节匀化压力至140kg/cm2，将初乳反复匀化，得到均匀的乳剂。
使用光散射粒径测定仪(Mastersizer S，Malvern Instruments Ltd.，UK)测得该微乳平均粒径为330nm。
实施例16乳剂14的制备
在氮气保护下，将0.75克紫杉醇以30毫升无水乙醇溶解，向溶液中加入7.5克维生素E琥珀酸聚乙二醇酯、4.5克Miglyol 812N(购自德国Sasol公司)、1.8克卵磷脂和3.75克甘油，所得溶液置旋转蒸发仪于40℃减压回收乙醇。在另一容器内加入约150ml新鲜注射用水，充氮保护，在剪切式搅拌机高速搅拌(每分钟22,000转，IKA T18 Ultra Tberrax)下，将除去乙醇后的油相以线状缓慢加入水相，继续搅拌10分钟，得乳白色乳液。
使用微流态化仪(M-110E，Microfluidics，Newton，MA 02464，USA)在1700Bar操作压力下通过微流态化器混合室，经40-50冲程的微流态化处理，使乳剂粒径逐渐减小。
使用光散射粒径测定仪(Mastersizer S，Malvern Instruments Ltd.，UK)测得该微乳平均粒径为220nm。
所得乳剂室温放置30天仍稳定。
实施例17-24乳剂15-22的制备按照实施例10相同的方法制备乳剂15、16、17、18、19、20、21、22，不同点仅在于用1克丹参提取物、复方丹参提取物、生脉提取物、参麦提取物、柴胡提取物、鱼腥草提取物、山腊梅提取物或醒脑净提取物分别替换1克脉络宁提取物。
用相同方法测定粒径，测定结果平均粒径为20-60nm之间。经60℃放置10天后，平均粒径的变化幅度小于10％。
在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本发明的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。
权利要求
1.一种水包油型药用乳剂，其特征在于，该乳剂含有以下成分(a)0.5-50重量份的活性药物，所述的活性药物含有水难溶性的物质，所述的水难溶性物质在25℃的溶解度为0.001-10000mg/升水；(b)5-300重量份的乳化剂，所述的乳化剂选自下组(b1)选自下组的化合物维生素E琥珀酸聚乙二醇酯、聚乙二醇、聚乙二醇单月桂酸酯、聚氧乙烯聚氧丙烯醚嵌段聚合物泊洛沙姆、单油酸甘油酯、醋酸甘油酯；(b2)磷脂质；(b3)由(b1)和(b2)中至少两种乳化剂构成的混合物；(c)0.5-200重量份的油脂，所述的油脂选自下组(c1)C1-C7短链油脂；(c2)C8-C10的中链脂肪酸甘油酯；(c3)C11-C20长链脂肪酸甘油酯；(c4)来自(a)活性药物的油脂；(c5)α-生育酚、α-生育酚醋酸酯；(c6)由上述(c1)、(c2)、(c3)、(c4)和(c5)中至少两种油脂构成的混合物；(d)500-1500重量份的水；并且，乳剂中乳粒的平均粒径在10～1000nm之间。
2.如权利要求1所述的乳剂，其特征在于，所述的活性药物选自下组(i)单一的水难溶性的化合物，选自紫杉醇、环孢素、可的松、灰黄菌素、布洛芬、安定、白介素-2、或依托泊苷；(ii)含有水溶性的化合物或/和水难溶性的化合物的中药提取物，选自脉络宁提取物、丹参提取物、复方丹参提取物、生脉提取物、参麦提取物、柴胡提取物、鱼腥草提取物、山腊梅提取物或醒脑净提取物。
3.如权利要求1所述的乳剂，其特征在于，所述的乳化剂是维生素E琥珀酸聚乙二醇酯、聚乙二醇400、聚乙二醇单月桂酸酯、Pluronic F-127、单油酸甘油酯、卵磷脂或其组合。
4.如权利要求1所述的乳剂，其特征在于，还具有以下特征(a)所述的活性药物是中药提取物；(b)所述的乳化剂是维生素E琥珀酸聚乙二醇酯、卵磷脂或其组合；或(c)所述的油脂是C8-C10的中链脂肪酸甘油酯。
5.如权利要求1所述的乳剂，其特征在于，该乳剂还含有1-200重量份的选自下组的添加剂等渗调节剂、pH调节剂、助溶剂。
6.如权利要求5所述的乳剂，其特征在于，所述的等渗调节剂选自下组甘油、丙二醇、葡萄糖、麦芽糖、麦芽糊精或其组合；所述的pH调节剂选自下组氢氧化钠、氢氧化钾、盐酸、甘氨酸、赖氨酸；所述的助溶剂是α-生育酚或/和α-生育酚醋酸酯。
7.如权利要求1所述的乳剂，其特征在于，其中活性药物的数量是2.5-25重量份；乳化剂的数量是30-130重量份；油脂的数量是10-100重量份。
8.如权利要求1所述的乳剂，其特征在于，乳剂中油相的平均粒径在10～350nm之间。
9.一种制备权利要求1所述的药用乳剂的制备方法，其特征在于，包括步骤i)在氮气保护下，将5-300重量份的乳化剂加热到40-80℃，所述的乳化剂选自下组(b1)选自下组的化合物维生素E琥珀酸聚乙二醇酯、聚乙二醇、聚乙二醇单月桂酸酯、聚氧乙烯聚氧丙烯醚嵌段聚合物泊洛沙姆、单油酸甘油酯、醋酸甘油酯；(b2)磷脂质；(b3)由(b1)和(b2)中至少两种乳化剂构成的混合物；ii)加入0.5-200重量份的油脂，混匀，加热至40-80℃，其中所述的所述的油脂选自下组(c1)C1-C7短链油脂；(c2)C8-C10的中链脂肪酸甘油酯；(c3)C11-C20长链脂肪酸甘油酯；(c4)来自(a)活性药物的油脂；(c5)α-生育酚或/和α-生育酚醋酸酯；(c6)由上述(c1)、(c2)、(c3)、(c4)和(c5)中至少两种油脂构成的混合物；iii)加入0.5-50重量份的水难溶性药物，混匀；iv)加入乳化剂，搅拌均匀即得油相，其中步骤i)和iv)中加入的乳化剂总量为5-300重量份；v)在惰性气体气氛和剪切搅拌下，将油相缓慢加至500-1500重量份的温度为40-80℃的水中，得初乳；vi)对初乳进行匀化，获得乳剂。
10.如权利要求9所述的制备方法，其特征在于，该方法还具有以下特征(a)在步骤(i)中的加热温度范围是50-55℃，在步骤(v)中注射用水的温度范围是60-70℃；(b)在步骤(ii)还可同时添加10-100重量份的等渗剂和/或10-100重量份的助溶剂；(c)在步骤(v)和(vi)之间，还包括步骤用pH调节剂调节pH至pH值为4-10；(d)在步骤(vi)中的匀化条件如下使用两步高压匀化机，第一步匀化压力480kg/cm2-680kg/cm2，第二步匀化压力80kg/cm2-140kg/cm2，将初乳反复匀化，得到均匀的乳剂；或者，直接在搅拌下向初乳中缓慢加入等渗剂，置于超声波水浴30±20分钟，得到均一、透明的乳剂；或(e)还包括步骤(vii)对所得乳剂进行过滤和灭菌，得到无菌药用乳剂。
全文摘要
本发明公开了一种适用于水难溶性药物的水包油型药用乳剂，该乳剂含有(a)0.5－50重量份的活性药物，所述的活性药物含有水难溶性的物质，所述的水难溶性物质在25℃的溶解度为0.001－10000mg/升水；(b)5－300重量份的乳化剂，(c)0.5－200重量份的油脂和(d)500－1500重量份的水。本发明的药用乳剂不仅副作用小，而且特别适用于中药提取物。
文档编号A61K9/107GK1720900SQ20041005281
公开日2006年1月18日 申请日期2004年7月14日 优先权日2004年7月14日
发明者程景才, 袁生良 申请人:无锡杰西医药科技有限公司