专利名称：用细胞对退变的椎间盘进行自体治疗的制作方法
相关申请本发明是提交于2003年11月14日的美国专利申请No.10/714,594的继续申请，美国专利申请No.10/714,594是提交于2003年11月13日的美国专利申请No.10/714,559的部分继续申请。上述申请的全部教导通过引用被并入本文。
背景技术：
天然椎间盘含有胶质状的髓核(nucleus pulposus)，其周围环绕着纤维状的纤维环(annulus fibrosus)。在轴向负荷下，髓核被压缩，并将该负荷放射性地转移到纤维环上。纤维环的叠层状本质赋予了其高度的拉伸强度，并且因此使其能够应答于转移来的负荷呈放射状扩张。
在健康的椎间盘中，髓核中的细胞按体积计仅占椎间盘组织的大约百分之一。这些细胞产生细胞外基质(ECM)，其中含有高百分比的蛋白聚糖(proteoglycan)。这些蛋白聚糖含有用以保持水的硫酸化官能团，因此能向髓核提供减震的性能。髓核细胞还可分泌少量细胞因子以及基质金属蛋白酶(MMPs)。这些细胞因子和MMPs能协助调控髓核细胞的代谢。
在椎间盘退变性疾病(disc degeneration disease，DDD)的某些情况下，椎间盘的逐渐退变是由脊骨其它部分的机械不稳定性造成的。在这些情况下，对髓核增加的负荷和压力使得椎间盘中的细胞(或侵入的巨噬细胞)释放比正常量更大的上述细胞因子。在DDD的其它情况下，遗传因子或凋亡也能导致椎间盘细胞数量的降低和/或这些细胞因子及MMP达到毒性数量的释放。在一些情况下，椎间盘的泵作用可能出现故障(由于，例如，髓核内蛋白聚糖浓度的降低)，由此阻碍了营养物质流入椎间盘，以及废物流出椎间盘。向细胞提供营养物质以及清除废物的能力降低，可能导致细胞存活力和代谢降低，这会导致ECM的进一步退变，以及高水平的毒素积累，可能造成神经刺激和疼痛。
随着DDD的发展，髓核中存在的毒性水平的细胞因子和MMPs开始降解ECM。具体而言，MMPs(受细胞因子的调控)开始切割蛋白聚糖的用于保持水的部分，由此降低其水保持能力。这种降解导致髓核柔韧性降低，并且因此会改变椎间盘内负荷分布的情况，从而可能导致纤维环的分层。这些变化导致了更严重的机械不稳定性，由此使得细胞释放出甚至更多的细胞因子，典型地，因而对MMPs造成正调节。随着这种破坏性级联的继续以及DDD的进一步发展，椎间盘开始凸起(“突出的椎间盘(a herniated disc)”)，并最终破裂，导致髓核与脊髓接触，产生疼痛。
美国专利No.6,352,557(“Ferree”)教导了以下方法将治疗用物质，例如，髓核细胞加入到从供体获得的颗粒化的(morselized)细胞外基质中，并将该组合注射到椎间盘中。但是，最开始细胞需要被培养，再在植入患病的椎间盘之前加入到供体基质中。该方法会让病患经历两次单独的处理程序，还会延迟对病患的治疗。第一道程序是收获细胞，其然后需要被培养。培养之后，细胞再被植入到病患体内。
美国专利No.6,340,369(“Ferree II”)教导了如下方法从病患体内获得活的椎间盘细胞，培养这些细胞，再将它们移植到受影响的椎间盘中。Ferree II进一步教导，这些细胞可与II型胶原-粘多糖基质或I型胶原-粘多糖基质组合，这取决于细胞收获自髓核(NP)还是纤维环(AF)。Ferree II还提出，在移植之前，将一种或多种治疗用物质加入到细胞中。作为细胞的替代性来源，Ferree提出可以使用NP或AF细胞前体细胞、软骨细胞或其它活细胞，它们与NP或AF细胞功能类似或可分化为NP或AF细胞。总之，Ferree都教导在移植之前要对收获的细胞进行培养。
Alini，Eur.Spine J.，11(Supp.2)S215-220(2002)提出，注射嵌有细胞的生物基质将有可能恢复椎间盘的功能性。Alini的实验涉及从髓核中分离细胞，并对它们进行培养。Alini还提出了细胞的其它来源，包括来自异源供体的椎间盘细胞和自体干细胞。他的教导暗示，干细胞可能是理想的来源，但是目前还没有已知的方法能对干细胞进行培养，使得它们在植入之前能分化为髓核细胞。总之，Alini需要在植入之前对细胞进行培养。
Russell(Abstract 27 ISSLS 2003)报道了一项实验，用于确定间质(mesenchymal)干细胞(MSCs)是否能被引导为椎间盘软骨细胞的表型。Russell发现，当受到培养条件的调节，以及还加入TGF-B1的情况下，成年人MSCs能被诱导分化为软骨细胞表型。
Sakai(Abstract 24 ISSLS 2003)报道了对向椎间盘自体移植MSCs是否能防止椎间盘退变进行评估的实验。他使用兔子，从骨髓中分离MSCs，培养2周，然后进行移植。结果显示，对椎间盘具有显著的维持作用。
Sakai，Biomaterials，243531-3541(2003)描述了一种方法，其中使用的最终细胞密度为1×106细胞/ml，通过27级(27-gauge)胰岛素注射器将0.04ml溶液(其中嵌有自体培养的MSCs)注射到每个椎间盘。移植之后发现细胞成功增殖。
Sobajima(Abstract 43 ISSLS 2002)研究了针对DDD的干细胞疗法的可行性。从经历椎间盘手术的病患分离出人NP细胞，将其与来自经历髋手术的病患的MSCs或从小鼠获得的肌肉来源的干细胞进行共培养。数据显示，干细胞和髓核细胞之间有协同效应，这使得体内蛋白聚糖合成被正调节。
Ganey，Eur Spine J，11(Suppl.2)S206-S214(2002)报道了在德国进行的外科手术，其中，在椎间盘摘除术(discectomy)之后，从病患的椎间盘的部分收获细胞。然后对这些细胞进行培养，以后将其移植回到病患体内。
Sander等在美国专利申请公开文件2003/0069639中教导，使用从病患取得的组织活体作为来源，以获得用于植入到退变椎间盘中的细胞。
上面引用的文献中都教导要在植入前对细胞进行培养，这相应会导致对病患处于退变中的椎间盘的治疗有所延迟。
发明内容
本发明的发明人发展出了一种手术内(intra-operative)程序，用于有效治疗退变性椎间盘疾病，这是通过将自体未培养细胞(例如，间质肝细胞或软骨细胞或成纤维细胞)引入到病患的椎间盘中来实现的。该程序提供了对于病患来说直接的护理治疗方法。
根据本发明的一种实施方式，本发明的发明人发展出了一种用于治疗椎间盘的方法，其中，从病患的骨髓收获的细胞随后再被引入到退变的椎间盘中，以分化为存在于椎间盘中的髓核和/或纤维环细胞，由此提高椎间盘中存在的这些细胞的数量。在一些实施方式中，将细胞植入到椎间盘可以在收获细胞之后立即进行，使得病患可以避免如下情况先进行收获细胞的第一道程序，等待细胞被培养(可能需要数周)，然后再进行将经过培养的细胞植入到椎间盘中的第二道程序。
相信将细胞引入到目标椎间盘中有多种好处。这些细胞的基本功能是产生细胞外基质。如上所述，有多种因素会导致细胞死亡或功能障碍，其接着就会导致该基质的降解。重建或重新产生细胞外基质的一种策略就是增加能产生基质的活的功能性椎间盘细胞的数量。发明人相信，间质干细胞(MSCs)的可塑性(plasticity)现象使得它们成为在植入到目标椎间盘后能分化为椎间盘细胞的细胞类型的理想选择。这些细胞可以成为能在椎间盘内产生必要的细胞外基质的髓核(NP)和/或纤维环(AF)细胞。此外，在植入时，细胞可与其它治疗性试剂组合，例如，生长因子以帮助细胞在椎间盘内存活。
因此，在本发明的一个方面，提供了一种治疗椎间盘中退变性椎间盘疾病的方法，所述方法包括收获来自病患的MSCs，不对其进行培养，将活的MSCs引入到同一病患的退变的椎间盘中，其中，细胞将增殖并分化为髓核和/或纤维环细胞。
在一些实施方式中，细胞单独递送或通过载体递送。在其它实施方式中，细胞与额外的治疗性试剂或物质，例如生长因子，一起递送到椎间盘中。
发明详述因为DDD是连续的过程，向其中施予细胞的退变中的椎间盘可以是大量退变性状态中的任何一种。因此，退变中的椎间盘可以是完整的椎间盘。退变中的椎间盘可以是突出的椎间盘(即，其中，纤维环的一部分有凸起)。退变中的椎间盘可以是破裂的椎间盘(即，其中，纤维环已破裂，大量髓核渗出)。退变中的椎间盘可以是分层的(即，其中，纤维环的相邻的层已分开)。退变中的椎间盘可以具有裂缝(即，其中，纤维环具有细小裂隙或撕裂，来自髓核的选定的分子可以由此漏出)。在所有这些退变性状态中，AF或NP的细胞外基质也会降解。
本发明涉及在手术内向病患的退变椎间盘提供健康、存活的自体间质干细胞(MSC)。这些细胞可被递送到髓核或纤维环或两者中，用于修整和恢复每种各自的细胞外基质。
发明人相信，MSCs对于施予给退变中的椎间盘能提供特殊的好处，因为它们具有能帮助其更容易存活于退变中椎间盘里相对恶劣的环境中的能力。特别地，MSCs具有理想的可塑性水平，其使得它们具有增殖和分化为NP及AF细胞的能力。
在一种实施方式中，MSCs获得自病患自身的骨髓。在其它实施方式中，脂肪或肌肉组织可以是MSCs的来源。在一些实施方式中，将被施予给椎间盘的MSCs以浓缩形式提供。当以浓缩形式提供时，细胞可以是未培养的。未培养的、浓缩的MSCs可以容易地通过离心、过滤(选择性保留)或免疫吸收(immunoabsorption)来获得。当选用过滤时，美国专利6,049,026(“Muschler”)所公开的方法可以使用，该专利的内容通过引用被整体并入本文。例如，骨髓吸出物悬浮液可经过多孔的、生物兼容的、可植入的基底，以提供具有丰富含量的组织祖细胞(tissue progenitor cells)的复合骨移植体。在一些实施方式中，用于过滤和浓缩MSCs的基质作为治疗性试剂被共同施予髓核或纤维环。如果该基质具有合适的机械性能，其可被用于恢复退变期间所损失的椎间盘空间的高度。所述细胞可同时注射，或与基质共同被注射到椎间盘的目标区域。
用于收获MSCs的吸出的骨髓体积优选在大约5cc到大约100cc之间。然后在浓缩过程中使用该体积，以浓缩MSCs。
当选用离心的时候，Connolly et al.所公开的方法可被使用。Development of an Osteogenic bone Marrow Preparation，JBJS 71-A(No.5)(June 1989)通过引用被整体并入本文。在该兔子实验中，Connolly报道，对7-10ml骨髓进行离心，最终的细胞悬浮液中产生了每毫升平均3.6×106个有核的细胞。
当使用离心工艺来浓缩细胞时，它们可以以悬浮液中的沉淀形式被递送到椎间盘。在另一种实施方式中，使用载体来运送细胞。载体可以包含珠粒、微球、纳米球、水凝胶、凝胶、聚合物、陶瓷、胶原和血小板胶(platelet gel)，或者可选自由它们构成的组。
固体或流体形式的载体，可以以多种不同的方式携带细胞。细胞可被嵌入、胶囊化(encapsulate)、悬浮或粘附到载体的表面。在一种实施方式中，载体将细胞胶囊化，提供营养物质，并且当它们被递送至椎间盘内时对细胞提供保护。在椎间盘中一段时间后，载体降解，释放出细胞。下文中将会描述各种载体的特殊形式。
在一些实施方式中，间质干细胞被提供于缓释装置(即，持续递送(sustained delivery)装置)中。施予的配方可以包含缓释装置。缓释装置被改造为能在椎间盘内保持一段延长的时间，并缓慢地将其中含有的间质干细胞释放到周围环境中。这种给药模式使得间质干细胞得以在椎间盘内以治疗有效量保持一段延长的时间。还可以通过持续递送装置来运送一种或多种额外的治疗性试剂。
已设计出了合成的支架，例如基于反丁烯二酸的支架，并对其进行了调整，使其能够吸引某些细胞，并提供对这些细胞的指引，使它们得以在目标区域分化。细胞还可嵌于支架中，然后被注射到目标区域，而不会影响到细胞的增殖或存活性。在基于反丁烯二酸的支架植入后，其会随着时间降解，而不需要进一步的手术将支架移除。
载体还可以包含水凝胶。凝胶化之后，细胞可被胶囊化进水凝胶的聚合物链中。水凝胶可通过最小限度入侵的方式递送，例如向目标区域进行注射。水凝胶还可被身体再吸收。水凝胶的属性，例如，降解时间、细胞粘附行为以及细胞外基质的空间积累(spatialaccumulation)等，可通过化学及工艺修饰予以改良。
适合用于本发明的水凝胶包括含水凝胶，即，以在水中的不溶性和亲水性为特征的聚合物。见，例如，“Hydrogels”，ConciseEncyclopedia of Polymer Science and Engineering，Eds.Mark et al.，Wiley and Sons(1990)中的458-459页，其内容通过引用被整体并入本文。虽然其使用在本发明中是可选的，但是包含水凝胶是很有好处的，因为它们往往具有大量想要的性质。依靠其亲水性和含水的本质，水凝胶可以装纳活细胞，例如间质干细胞，并且能对椎间盘承担负荷的能力提供帮助。
在一种实施方式中，水凝胶是细的、粉末状的合成水凝胶。合适的水凝胶展示出最优的属性组合，例如，与选用的基质聚合物的兼容性以及生物兼容性。水凝胶可以包括下述物质中的一种或多种多糖、蛋白质、聚磷腈(polyphosphazene)、聚(氧乙烯)-聚(氧丙烯)嵌段聚合物、乙二胺的聚(氧乙烯)-聚(氧丙烯)嵌段聚合物、聚(丙烯酸)、聚(甲基丙烯酸)、丙烯酸和甲基丙烯酸的共聚物、聚(乙酸乙烯酯)和磺酸化聚合物。
通常，这些聚合物至少部分可溶于水性溶液，例如，水、或具有带电荷侧基的水性醇溶液、或其单价离子盐。有多种具有可与阳离子发生反应的酸性侧基的聚合物的例子，例如，聚(磷腈)、聚(丙烯酸)和聚(甲基丙烯酸)。酸性基团的例子包括羧酸基团、磺酸基团和卤化的(优选地，氟化的)醇基团。具有可与阴离子发生反应的碱性侧基的聚合物的例子是聚(乙烯胺)、聚(乙烯吡啶)和聚(乙烯咪唑)。
根据本发明，提供了一种治疗具有髓核的椎间盘中退变性椎间盘疾病的方法，所述方法包括将自体未培养的间质干细胞施予退变的椎间盘。
在一种实施方式中，在施予到椎间盘前收获自体间质干细胞。
根据本发明的一个方面，间质干细胞可与至少一种额外的治疗性试剂一起递送至椎间盘空间，例如，用于辅助细胞增殖和分化的试剂。可以有，例如，一种额外的治疗性试剂(即，第二种治疗性试剂)，或者可以有多种额外的治疗性试剂(例如，第二种和第三种治疗性试剂)。额外的治疗性试剂可与间质干细胞同时给药。在另一种实施方式中，额外的治疗性试剂在向椎间盘施予间质干细胞之后给药。在又一种实施方式中，额外的治疗性试剂先行施予，即，在向椎间盘施予间质干细胞之前施予。
还可以用同样的载体来运送细胞和额外的治疗性试剂。在一些实施方式中，细胞处于载体表面，而额外的治疗性试剂被置于载体内部。在其它实施方式中，细胞和额外的治疗性试剂可以用不同的载体来给药。
可以加入到椎间盘中的其它额外的治疗性试剂包括但不限于维生素和其它营养补充剂、激素、糖蛋白、纤连蛋白、肽和蛋白质、碳水化合物(简单和/或复杂的)、蛋白聚糖、寡核苷酸(正义和/或反义DNA和/或RNA)、骨形态形成蛋白(BMPs)、分化因子、抗体(例如，对于感染性因子、肿瘤、药物或激素的抗体)、基因疗法试剂和抗癌试剂。经过遗传改造的细胞和/或其它细胞也可被包括进本发明的基质。如果需要的话，止疼剂(即，止痛剂)和镇静剂也可与用于给药的载体混合，并释放到椎间盘空间。
在一些实施方式中，生长因子是额外的治疗性试剂。本文中使用的术语“生长因子”包括任何能对其它细胞，尤其是结缔组织祖细胞的生长或分化进行调节的细胞产物。可根据本发明使用的生长因子包括但不限于，成纤维细胞生长因子家族的成员，包括酸性和碱性成纤维细胞生长因子(FGF-1和FGF-2)以及FGF-4；血小板衍生生长因子(PDGF)家族的成员，包括PDGF-AB、PDGF-BB和PDGF-AA；EGFs，类胰岛素生长因子(IGF)家族的成员，包括IGF-I和IGF-II；TGF-β超级家族，包括TGF-β1、2和3(包括MP-52)、类骨质诱导因子(OIF)、血管生成素、内皮缩血管肽、肝细胞生长因子和角化细胞生长因子；骨形态形成蛋白(BMPs)的成员，BMP-1、BMP-3、BMP-2、OP-1、BMP-2A、BMP-2B、BMP-4、BMP-7和BMP-14；HBGF-1和HBGF-2；生长分化因子(GDFs)，刺猬蛋白质家族(hedgehogfamily)的成员，包括印度型(indian)、音速型(sonic)和沙漠型(desert)刺猬蛋白；ADMP-1；GDF-5；以及集落刺激因子(CSF)家族的成员，包括CSF-1、G-CSF和GM-CSF；及其同种型。生长因子可以是自体的，例如，在富含血小板的血浆中包括的，或者可以从商业途径获得。在一种实施方式中，生长因子以有效修复椎间盘组织的量施予。
在一些实施方式中，生长因子选自由TGF-β、bFGF和IGF-1组成的组。人们相信，这些生长因子能够促进髓核的再生，或能刺激软骨细胞的增殖和/或分化，以及细胞外基质的分泌。在一种实施方式中，生长因子是TGF-β。更优选地，TGF-β以大约10ng/ml至大约5000ng/ml之间的量施予，例如，大约50ng/ml至大约500ng/ml之间，例如，大约100ng/ml至大约300ng/ml之间。
在一种实施方式中，额外的治疗性试剂中的至少一种是TGF-β1。在一种实施方式中，另一种额外的治疗性试剂是FGF。
在一些实施方式中，血小板浓缩物作为额外的治疗性试剂被提供。在一种实施方式中，通过血小板释放的生长因子的存在量为取得血小板的血液中发现的量的至少两倍(例如，四倍)。在一些实施方式中，血小板浓缩物是自体的。在一些实施方式中，血小板浓缩物是富含血小板的血浆(PRP)。PRP是有好处的，因为其含有能再次剌激ECM生长的生长因子，并且，因为其纤维蛋白基质提供了适于新组织生长的支架。
因此，根据本发明，提供了一种治疗具有髓核的椎间盘中退变性椎间盘疾病的方法，所述方法包括a)将自体未培养间质干细胞施予退变中的椎间盘；以及b)将至少一种额外的治疗试剂通过穿过椎间盘的方式(transdiscally)施予退变中的椎间盘。
就本发明的目的而言，“穿过椎间盘施予(transdiscaladministration)”包括但不限于a)将制剂注射到退变中的椎间盘的髓核，例如，相对完整的退变中的椎间盘；b)将制剂注射到退变中的椎间盘的纤维环，例如，相对完整的退变中的椎间盘；c)在附着于纤维环外壁的贴片(patch)中提供制剂，d)在位于纤维环外壁之外但与其紧邻的位置处的贮库(depot)中提供制剂(“穿过环的施予(trans-annular administration)”)；以及e)在位于相邻的脊椎体终板外但与其紧邻的位置处的贮库中提供制剂(“穿过终板的施予(trans-annular administration)”)。
也是根据本发明，还提供了一种用于治疗退变性椎间盘疾病的制剂，所述制剂包括a)自体未培养的间质干细胞；以及b)至少一种额外的治疗性试剂，其中，所述制剂(formulation)存在的量适于施予到退变中的椎间盘中。
还根据本发明，提供了一种用于将用于治疗退变性椎间盘疾病的制剂给药至椎间盘的装置，所述装置包括a)含有所述制剂的腔，所述制剂包括自体未培养的间质干细胞和至少一种额外的治疗性试剂；以及b)给药口(delivery port)，其与所述的腔流体连通，并且适于将所述制剂给药至椎间盘。
在一些实施方式中，细胞可被引入(即施予)到髓核或纤维环中，这取决于何种细胞外基质需要重建。在其它实施方式中，细胞可被引入到椎间盘上的这两个区域。根据细胞将被给药至的椎间盘区域，可对特定的治疗性试剂加以选择。
在一些实施方式中，可通过针，例如细孔针将细胞单独施予(例如，注射)到椎间盘。或者，还可用同样的细孔针将制剂注射到椎间盘中。在一些实施方式中，针的孔为大约22级或更小，从而减少形成突起的可能性。例如，针的孔可以是大约24级或更小，从而使突起产生的可能性进一步减少。
如果直接注射细胞或制剂的体积足够高到会导致对髓核产生过高压力的情况发生，那么优选地，在施予(即，直接注射)间质干细胞之前，移除至少一部分髓核。在一些实施方式中，移除的髓核的体积基本上与有待注射的制剂的体积相似。例如，移除的髓核的体积可在将注射的制剂的体积的大约80-120％之间。此外，该过程还有额外的好处，即，至少部分去除了病患的一些退变的椎间盘。
当将间质干细胞注射进髓核时，给药的药物(即，悬浮于生长培养基或载体中的细胞的制剂)的体积在大约0.5ml至大约3.0ml之间是理想的，这包括悬浮于生长培养基或载体中的细胞。当以上述较小的量注射时，我们相信，增加的或替代的体积不会导致可被感知到的髓核中压力的增加。为确定给药药物体积要考虑的因素包括，椎间盘的大小、移除的椎间盘的量以及生长培养基或载体中间质干细胞的浓度。
虽然本发明已被详细显示，并引用优选的实施方式予以描述，但是，本领域技术人员应当理解，在不脱离由所附的权利要求所包括的本发明的范围的情况下，可在形式和细节上进行多种改变。
权利要求
1.一种用于治疗具有髓核的椎间盘中的退变性椎间盘疾病的方法，所述方法包括，将自体未培养的细胞施予退变的椎间盘中。
2.如权利要求1所述的方法，其中，在施予到所述椎间盘中之前，所述细胞被浓缩。
3.如权利要求2所述的方法，其中，所述细胞通过离心被浓缩。
4.如权利要求2所述的方法，其中，所述细胞通过过滤被浓缩。
5.如权利要求1所述的方法，其中，使用载体将所述细胞施予所述的椎间盘。
6.如权利要求5所述的方法，其中，所述载体选自由珠粒、微球、纳米球、水凝胶、凝胶、聚合物、陶瓷、胶原和血小板胶所构成的组。
7.如权利要求1所述的方法，其中，将额外的治疗性试剂施予到所述的椎间盘中。
8.如权利要求7所述的方法，其中，所述额外的治疗性试剂选自由生长因子、分化因子和营养补充剂所构成的组。
9.如权利要求8所述的方法，其中，所述额外的治疗性试剂是生长因子。
10.如权利要求7所述的方法，其中，使用载体将所述额外的治疗性试剂和所述细胞施予所述椎间盘中。
11.如权利要求10所述的方法，其中，所述载体选自由珠粒、微球、纳米球、水凝胶、凝胶、聚合物、陶瓷、胶原和血小板胶所构成的组。
12.如权利要求7所述的方法，其中，在向所述椎间盘施予所述细胞的同时，施予所述额外的治疗性试剂。
13.如权利要求7所述的方法，其中，在向所述椎间盘施予所述细胞之前，施予所述额外的治疗性试剂。
14.如权利要求7所述的方法，其中，在向所述椎间盘施予所述细胞之后，施予所述额外的治疗性试剂。
15.如权利要求1所述的方法，其中，将所述细胞于制剂中施予给所述椎间盘，所述制剂的体积在大约0.5ml至大约10ml之间。
16.如权利要求10所述的方法，其中，所述载体包含水凝胶。
17.如权利要求10所述的方法，其中，所述载体包含微球。
18.如权利要求1所述的方法，其中，所述额外的治疗性试剂是TGF-β。
19.如权利要求1所述的方法，其中，所述治疗性试剂是血小板浓缩物。
20.如权利要求1所述的方法，其中，所述细胞被施予至所述椎间盘的所述髓核中。
21.如权利要求1所述的方法，其中，所述细胞被施予至所述椎间盘的所述纤维环中。
22.如权利要求1所述的方法，其中，在将所述细胞施予到所述椎间盘之前，移除所述髓核的一部分。
23.如权利要求1所述的方法，其中，通过针来施予所述细胞。
24.如权利要求23所述的方法，其中，所述的针最大级别为大约24级。
25.如权利要求1所述的方法，其中，所述细胞选自由间质干细胞、软骨细胞和成纤维细胞所构成的组。
26.如权利要求1所述的方法，其中，所述细胞包含间质干细胞。
27.一种用于治疗退变性椎间盘疾病的制剂，所述制剂包含a)自体未培养的间质干细胞；以及b)额外的治疗性试剂，其中，所述制剂存在的量适于施予至退变中的椎间盘中。
28.如权利要求27所述的制剂，其中，所述间质干细胞以浓缩形式提供。
29.如权利要求27所述的制剂，其中，所述额外的治疗性试剂是生长因子。
30.一种装置，用于将权利要求27所述的制剂施予退变的椎间盘，所述装置包括a)含有所述制剂的腔；以及b)适于将所述制剂施予到所述椎间盘的给药口。
31.如权利要求1所述的方法，其中，所述制剂以小于大约1ml的量施予。
全文摘要
本发明涉及将自体未培养细胞施予疾病性椎间盘。
文档编号A61K35/36GK1893962SQ200480033323
公开日2007年1月10日 申请日期2004年11月11日 优先权日2003年11月13日
发明者M·阿塔维亚, H·塞尔翰, T·M·迪茂罗, M·格雷斯, D·乌尔巴恩斯 申请人:德普伊斯派尔公司