具有预防和治疗退行性疾病和炎性疾病作用的1,2,3,4-四氢异喹啉衍生物的制作方法

专利名称：具有预防和治疗退行性疾病和炎性疾病作用的1,2,3,4-四氢异喹啉衍生物的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种具有预防和治疗退行性疾病和炎性疾病作用的7-羟 基-6-甲氧基-l,2,3,4-四氢异喹啉衍生物。
背景技术：
近期的研究显示炎症反应成为导致神经退行性疾病的一个关键机 制。中枢神经系统存在的小胶质细胞、免疫细胞可能被外源性或内源性 物质激活，从而生成和释放如炎性细胞因子、TNF-a或IL-1卩 一氧化氮 (NO)、前列腺素、过氧化物等物质。虽然它们在短时间内诱发免疫反应， 但是该物质连续不断地生成以至于过量，因此导致邻近神经元损失并最 终导致神经退行性疾病。此外，垂死神经元释放的物质诱发小胶质细胞 的再激活，因而神经退行性疾病变得更为严重。据报道，小胶质细胞的 激活关联到各种神经退行性疾病，例如，阿尔茨海默氏病(Alzheimer's disease)、巾白金森病(Parkinson's disease)、亨丁顿舞蹈病(Huntington's disease )、卢伽雷病(Lou Gehrig's disease )、古兹菲德-雅各氏病 (Creutzfelt-Jakob's disease, CJD)等。因此，有人认为抑制激活的小胶质 细胞所释放的各种炎性物质的生成会对预防和/或治疗神经退行性疾病 非常有效。这是全世界研究的热点。
目前，帕金森病的治疗集中在通过给予多巴胺前体物L-DOPA减轻 运动障碍。不幸的是，给予L-DOPA可能不会使帕金森病患者过上正常 生活，并且它还会引起身体和精神的各种慢性副作用。此外，还有证据 表明L-DOPA本身有毒害神经的作用。现在仍几乎不知道如何治疗和预 防帕金森病导致的退化。目前治疗阿尔茨海默氏病的药物方法是基于乙 酰胆碱酯酶抑制剂，或者与此同时，或基于N-甲基-D-天冬氨酸通道阻断 剂。虽然已经试图研发各种物质如分泌酶抑制剂，但是还没对研发的这 类物质进行临床试验。此外，还没有研究出治疗其它神经退行性疾病如 卢伽雷病、古兹菲德-雅各氏病和亨丁顿舞蹈病的有效方法。因此，迫切 要求根据它们的病因研究治疗这类疾病更有效的方法。

发明内容
本发明涉及一种新化合物，该化合物诱导激活的小胶质细胞内各种 炎性细胞因子和有毒物质生成的下调。
本发明还涉及一种新化合物，该化合物预防氧化应激导致的神经元 损伤。
本发明还涉及一种用于合成有效预防和/或治疗各种神经退行性和 炎性疾病的新化合物的方法。
在一个方面，提供用于预防和治疗神经退行性疾病的7-羟基-6-甲氧 基-l,2，3，4-四氢异喹啉衍生物(式l)。
此处，Ri选自由H、 CH3、 CH2CH3、 CH2CH2CH3、 CH(CH3)2、 CH2CH(CH3)2、 Ph、 CH2Ph、环丁基、环丙基和环己基组成的组，R2选 自由CH3、 CH2CH3、 CH2CH2CH3、 CH2CH2CH2CH3 、 CH2Ph、 CH2CH2Ph、 COCH3(Ac) 、COCH2CH3 、COCH2CH2CH3 、COCH(CH3)2 、 COCH2CH(CH3)2、环己基甲基和环己羰基组成的组。
在另一方面，提供用于预防和治疗炎性疾病的7-羟基-6-甲氧基 -1，2,3,4-四氢异喹啉衍生物(式l)。
此处，R!选自由H、 CH3、 CH2CH3、 CH2CH2CH3、 CH(CH3)2、 CH2CH(CH3)2、 Ph、 CH2Ph、环丁基、环丙基和环己基组成的组，R2选 自由CH3、 CH2CH3、 CH2CH2CH3、 CH2CH2CH2CH3、 CH2Ph、 CH2CH2Ph、 COCH3(Ac)、 COCH2CH3、 COCH2CH2CH3、 COCH(CH3)2、 OCH2CH(CH3)2、
环己基甲基和环己羰基组成的组。在另一方面，提供有效保护神经元的7-羟基-6-甲氧基-l，2,3，4-四氢 异喹啉衍生物(式1)。
此处，R!选自由H、 CH3、 CH2CH3、 CH2CH2CH3、 CH(CH3)2、 CH2CH(CH3)2、 Ph、 CH2Ph、环丁基、环丙基和环己基组成的组，R2选 自由CH3、 CH2CH3、 CH2CH2CH3、 CH2CH2CH2CH3 、 CH2Ph、 CH2CH2Ph、 C0CH3(Ac)、 COCH2CH3、 COCH2CH2CH3、 COCH(CH3)2、 OCH2CH(CH3)2、
环己基甲基和环己羰基组成的组。
以下是配基Ri和R2的具体应用实例。
表1
化学式序号R!R2
2HAc
CH3Ac
CH2CH3Ac
9aCH2CH2CH3Ac
9cCH(CH3)2Ac
9eCH2CH(CH3)2Ac
5bPhAc
9dCH2PhAc
9f环丙基Ac
9g环丁基Ac
9h环己基Ac
11aHCOCH2CH3
libHCOCH2CH2CH3
lidHCOCH(CH3)2
lieHCOCH2CH(CH3)2
11cH环己羰基
12dHCH2CH3
12aHCH2CH2CH3
12bHCH2CH2CH2CH3
12cH环己基甲基
12eHCH2Ph
12fHCH2CH2Ph
本文所用的化合物可以是反式或顺式构型。
8通过以下方法可合成7-羟基-6-甲氧基-l,2,3,4-四氢异喹啉(HMTIQ) 衍生物(式1)。
用醛和苯基乙酰胺通过皮克特-斯宾格勒(Pictet-Spengler)环化在 Cl位引入几种烷基衍生物(化学方程式1)。 S卩，将式3化合物与乙醛在 酸性介质中环化，可容易地得到1-甲基化合物(式4a)，但是因为苯甲 醛在含水溶剂中的溶解性，可能得不到1-苯基化合物(式4b)。因此， 通过可选择的方法，在甲醇中环化生成亚胺后，加入三氟乙酸(TFA) 与亚胺环化，由此获得式4b化合物。
式4a和4b化合物与乙酸酐发生乙酰化来合成式5a和5b化合物。
<formula>formula see original document page 9</formula>化学方程式l中，式4a化合物的合成条件乙醛、1MHC1、 100°C、
24小时；
化学方程式1中，式4b化合物的合成条件i.苯甲醛、MgS04、 TEA、 MeOH、回流、3小时；ii. TFA、 80。C、 1小时40分钟；以及
化学方程式l中，式5a和5b化合物的合成条件(b)Ac20、 Et3N、 CH2C12、室温(RT)、 1小时。
4a' R = Mg (55%) 4b> R = Ph (74%)
Sa, R = Me (83%) 5b, R = Ph (89%》
7a (90%), 8a (18%), 9a (58%). R CH CH3 7b (94%), 8b (77%), 3b (45%〉,R = CH^CHjCHj
7c (96%), 8c (70%). 9c (67%). R = CH(CH3)2 7d (63%). 8d (63%), M (94%),R = CH2Ph
7e (93%), 8e (67%), 9e (73%), R = CHjCH(CH3)2
7f (88°/。),' 8f (58%),' M (72%), R =环禹i 7g (79%), 8g (81%), Sg (80%). R =环丁基 7 i (85%). 8h (72%). 9h (80%>.R =环己基化学方程式2中，式6化合物的合成条件(a) (Boc)20、Et3N、CHCl3、 RT、 24小时；(b)苄基溴、K2C03、丙酮、回流、12小时；(c) TFA、 CH2C12、 0。C、 40分钟；
化学方程式2中，式7a-7h化合物的合成条件酰氯、TEA、 CH2C12、 RT、 30分钟-1小时；
化学方程式2中，式8a-8h化合物的合成条件(e)POCb、 CH3CN、 回流、2-5小时；(f) NaBH4、 0。C-RT、 24小时；(g) Pd/C、 H2、 HC1、 MeOH、 RT、 12小时；以及
化学方程式2中，式9a-9h化合物的合成条件(h)Ac20、 CH2C12、 0。C-RT、 2小时。
通过毕世勒-纳批拉尔斯基(Bischler-Napieralski)反应可在Cl位进 行四氢异喹啉衍生物的其它合成。分别用叔丁氧羰基酐和苄基溴保护伯 胺和酚，然后使叔丁氧羰基基团脱离可合成式6化合物。用几种酰氯如 丙酰氯、丁酰氯、异丁酰氯、a-苯基乙酰氯、4-甲基丁酰氯、环丙甲酰氯、 环丁甲酰氯和环己甲酰氯来酰化式6化合物可合成胺衍生物(式7a-7h)。
可用磷酰氯(phosphorus oxychloride)处理这些酰化的化合物(式 7a-7h)以得到环二氢异喹啉，然后可将其用氰基硼氢化钠还原以合成7-苄氧基四氢异喹啉衍生物。通过钯催化的脱苄基作用，获得几种烷基引 入C1位的、作为盐酸盐的四氢异喹啉衍生物(式8a-8h)。
所得的化合物与乙酸酐反应，生成式9a-9h的目标化合物。所有C1 位取代的四氢异喹啉衍生物(式5a-5b， 9a-9h)均作为外消旋混合物得 到分离。
10[化学方程式3]
10
MeO.
11a. R = CH2CH3(31%)— "b, R = CH2CH2CHS (75%) 1化.R-环己基(57%) -"d,R豕CH(CH3)2 (71%〉 He. R = CHjCH{CH3)2 (60。/o)
-12a. R s CH2CH3 (92%)
12b: R= CH2CH2CH-, (70%) -12c, R=环己基(90%)
〗3, R= Ph(52%) 12f， R- CH2Ph (56%〉
化学方程式3中，式lla-lle化合物的合成条件为(a)丙酸酑、丁 酰氯、环己甲酰氯、异丁酰氯或3-甲基丁酰氯、TEA、 CH2Cl2、 RT、 1 小时；(b)K2C03、 MeOH、回流、2小时；
化学方程式3中，式12d-12f化合物的合成条件为(c)i.乙醛、苯 甲醛或苯乙醛、Ti(OiPr)4、 EtOH、 RT、 1小时；ii.NaCNBH3、 THF、 RT、 20小时；
化学方程式3中，式12a-12c化合物的合成条件为(d)LAH、 THF、 回流、3-5小时。
合成了 N2-酰基衍生物(式lla-lle)和它们的羰基还原的衍生物(式 12a-12f)。
通过本领域熟知的方法制备7-羟基-6-甲氧基-l,2,3,4-四氢异喹啉(式 10) [Seo, J. W.; Srisook， E.; Son, H. J.; Hwang， O.; Cha, Y. N.; Chi, D. Y" C7^m.丄e". 2005， 15, 3369]。使酰氯(丁酰氯、环己甲酰氯、 异丁酰氯或3-甲基丁酰氯)或其酐(丙酸酐)与溶于二氯甲垸溶剂中的 三乙胺在室温下反应，对混合物进行萃取，并且在甲醇溶剂中用碳酸钾 对混合物进行回流，以此来合成几种N2-羰基烷基四氢异喹啉(式 lla-lle)。通过两种不同的方法来合成N2-烷基衍生物(式12a-12f)。用氢化 铝锂还原酰胺(式lla-llc)来形成N2-乙基、N2-丙基和N2-环己基四氢 异喹啉(式12a-12c)，使乙醛、苯甲醛或苯乙醛与异丙氧基钛(IV)反 应形成亚胺，然后加入氰基硼氢化钠可合成其它叔胺衍生物(式 12d-12f)。
上述的7-羟基-6-甲氧基-l，2，3,4-四氢异喹啉(HMTIQ)衍生物具有 下调激活的小胶质细胞内各种炎性细胞因子和炎性诱发物质的作用，保 护神经元免受氧化性和炎性伤害，以及预防和/或治疗神经退行性疾病。
因此，HMTIQ衍生物或它们的药学上可用的盐被用于预防和治疗神 经退行性和炎性疾病。
此外，本发明可以提供一种用于预防和治疗神经退行性和炎性疾病 药物组合物，其包括HMTIQ衍生物或其药学上可用的盐、以及药学上可 用的稀释剂或载体。
根据本发明，7-羟基-6-甲氧基-l,2,3,4-四氢异喹啉衍生物显著抑制激 活的微生物细胞内一氧化氮(NO)和过氧化物的增加，显著抑制TNF-a、 IL-1(3诱导性NO合成酶和环氧化酶-2基因的表达，以及显著抑制NF-kB 转移到细胞核，减少ROS的生成、抑制GTP环水解酶I基因的表达和四 氢生物蝶呤(BH4)的过量生成，显著保护多巴胺能神经元免受激活的小 胶质细胞引起的伤害。


图1是显示N-乙基羰基-7-羟基-6-甲氧基-l，2,3,4-四氢异喹啉 (EHMTIQ)对激活的小胶质细胞内NO生成的抑制作用的图。
图2是显示EHMTIQ对激活的小胶质细胞内过氧化物生成的抑制作 用的图。
图3显示EHMTIQ对激活的小胶质细胞内TNF-a mRNA定量增加 的抑制作用A)是RT-PCR产物的琼脂糖凝胶电泳照片；和B)是光密度 计(densitometer)测量的TNF-a条带强度图。
12图4显示EHMTIQ对激活的小胶质细胞内IL-l)3mRNA定量增加的 抑制作用A)是RT-PCR产物的琼脂糖凝胶电泳照片，和B)是光密度计 测量的IL-ip条带强度图。
图5显示EHMTIQ对激活的小胶质细胞内COX-2 mRNA定量增加 的抑制作用A)是RT-PCR产物的琼脂糖凝胶电泳照片；和B)是光密度 计测量的COX-2条带强度图。
图6显示EHMTIQ对激活的小胶质细胞内iNOS mRNA定量增加的 抑制作用A)是RT-PCR产物的琼脂糖凝胶电泳照片；和B)是光密度计 测量的iNOS条带强度图。
图7显示EHMTIQ对激活的小胶质细胞内GTPCHmRNA定量增加 的抑制作用A)是RT-PCR产物的琼脂糖凝胶电泳照片；和B)是光密度 计测量的GTPCH条带强度图。
图8是显示EHMTIQ对激活的小胶质细胞内NF-kBp65转移到细胞
核的抑制作用的图。
图9是显示EHMTIQ对激活的小胶质细胞内氧化性物质聚集的抑制 作用的图。
图10是显示EHMTIQ对由激活的小胶质细胞释放的物质导致的多 巴胺能神经元损伤的抑制作用的图。
图11是显示EHMTIQ对微粒体酶诱发的降解稳定性的图。
图12是显示7-羟基-6-甲氧基-l,2,3,4-四氢异喹啉(HMTIQ)对激活 的小胶质细胞内BH4生成的抑制作用的图。
图13显示小胶质标记物Iba-l免疫染色的小胶质细胞，显示了 EHMTIQ对MPTP诱发的帕金森病小鼠模型黑质内小胶质细胞激活的抑 制作用。
图14显示多巴胺能神经元标记物酪氨酸羟化酶(TH)免疫染色的 多巴胺能神经元，显示了 EHMTIQ对MPTP诱发的帕金森病小鼠模型黑 质内多巴胺能神经元的保护作用(比例尺-200iam)。此处，右边的两个框图是用fluro JadeC和TH双标记的多巴胺能神 经元照片，显示了 EHMTIQ对黑质内多巴胺能神经元退化的抑制作用(比 例尺20pm)。
图15显示TH免疫染色的多巴胺能神经元，显示了 EHMTIQ对 MTPT诱发的帕金森病小鼠模型纹状体内多巴胺神经末梢的保护作用 (比例尺-50nm)。
图16显示EHMTIQ对小鼠肝细胞不具有毒性(比例尺=100^1!1)。
具体实施例方式
在下文中，将描述合成中间体的方法和具有前述作用的终产物(5a、 5b、 9a-9h、 lla-lle和12a-12f)的结构分析。
实施例1:在Cl位用甲基或苯基取代的2-乙酰基-7-羟基-6-甲氧基 -1,2,3,4-四氢异喹啉(AHMTIO)衍生物的合成和它们的结构分析
Me0.^^ a 隨 y、b 、 Me0m
AHMTIO (5a)的制备和分析
在100。C下，使乙醛(15.7mmo1， 692mg)与溶于1MHC1溶液(10ml) 的3-0-甲基多巴胺盐酸盐(1.96mmo1， 400mg)于压力管内反应24小时。 使反应管冷却，用碳酸氢钠中和混合物。减压除去水和剩余溶剂，真空 干燥所得物。将甲醇加到过滤器的残留沉淀中，通过短柱色谱法提取粗 化合物4a。粗化合物4a结晶获得白色粉末状盐酸盐(250mg， 55%) 。H NMR (DMSO-a, 400 MHz) 59.93 (br s, 1H)， 9.40 (br s， 1H)， 9.06 (s, 1H)， 6.72 (s, 1H), 6.67 (s， 1H), 4.32-4.30 (m， 1H), 3.47 (s, 3H)， 3.28-3.36 (m, 1H): 3.21-3.22 (m， 1H)， 2.29-2.00 (m， 1H) 1.52(d, J = 6.8 Hz, 3H); 13C NMR (DMSO-d6， 100 MHz) S147,l， 145.4, 126.0, 122.1, 112.7, 111.9， 55.6， 49.7, 38.6， 24.6， 19.1; MS (CI) 194 (M++l， 100)， 178, 164]。
4a, R = Me (55%) 4b, R = Ph (74%)
Sa. R = (83%) 5b,R = Ph(89%)
14在室温(RT)下，将中间体4a(0.435mmo1， 100mg)加入二氯甲烷溶剂 (5ml)中，向其加入乙酸酐(0.435mmo，45mg)和三乙胺(l.Ommol)。搅拌 所得的混合物1小时后，减压除去剩余溶剂。将饱和碳酸氢钠溶液倒入， 用二氯甲烷溶剂萃取混合物。重结晶获得白色化合物5a(91mg， 83%) 。H NMR (CDCb, 400 MHz) S6.96 (s， C5-H的一种构象异构体)，6.66 (s, C5-H 的一种构象异构体)，6.59 (s, C8-H的一种构象异构体)，6.57 (s, C8-H的一 种构象异构体)，5.83 (s, O-H的一种构象异构体)，5.78 (s, O-H的一种构象 异构体)，5.53 (q， 《/= 6.6 Hz, Cl-H的一种构象异构体)，4.83 (q， 《/= 6.6 Hz, Cl-H的一种构象异构体)，4.70-4.65 (m， C3-H的一种构象异构体)， 3.82-3.76 (m, C3-H的一种构象异构体)，3.52-3.44 (m， C3-H的一种构象异 构体)，3.02-2.95 (m， C3-H的一种构象异构体)，2.90-2.79(m, 1H), 2.75-2.70 (m， L4"ti tfj一rrT厶j豕开忏J'Kl0, /.oy-z.ou (m， L4-n tf、j一rrT厶J豕并不勾体)， 2.18 (s, C1-CH3的一种构象异构体)，2.15 (s, C1-CH3的一种构象异构体)， 1.49 (d, / = 6.4 Hz, COC-H3的一种构象异构体)，1.40 (d, J = 6,8 Hz， COC-H3的一种构象异构体)；13C NMR (CDC13, 100 MHz) 5168.8， 168.7, 145.5, 145.3， 144.3, 144.1, 131,3, 130.0, 125,6, 124.4, 112.8, 112.3, 110.8, 110.4, 55.9， 52.3, 47.9, 40.4, 34.8, 29,0, 28.2， 22,5, 21.9, 21.5, 21.4; MS (EI): 471， 264, 236 (M++ 100)， 220]。
AHMTIQ (5b)的制备和分析
将化合物3 (l.Ommol， 204mg)、硫酸镁(2.49mmo1， 300mg)、苯甲醛 (l.Ommol， 106mg)和三乙胺(2.0mmo1， 202mg)加入无水甲醇中(15ml)， 回流3小时。反应容器冷却后，用C盐(Celite)过滤混合物。减压除去 溶剂，用乙酸乙酯过滤混合物除去白色沉淀。对过滤后的溶液进行再过 滤，并在减压下真空干燥。将三氟乙酸加入干燥的所得物，回流1小时， 减压除去溶剂。用碳酸氢钠中和所得产物，然后用二氯甲烷萃取。
用硫酸钠干燥有机层并减压除去溶剂。通过柱色谱法(5%甲醇，95% 二氯甲烷)获得中间体4b (188mg， 74%) 。H NMR(DMSO-d6, 400 MHz) S8.57 (br s, lH),7.22-7,32 (m， 5H), 6.63 (s, 1H)， 6.04 (s， 1H), 3.72 (s， 3H), 3.01-3.10 (m, 1H)， 2.76-2.89 (m, 2H), 2.55-2.65 (m, 1H); 13C NMR (DMSO-4 100 MHz) S146.0, 145.6， 144.1, 130.7, 128.9, 128.0, 126.8,125.7， 114.4, 112.2, 60.8， 55.5, 42.0, 28.8; MS (CI): 284, 256 (M++1, 100)， 178]。
将中间体4b (0.223mmol， 57mg)加入氯仿(5ml)中，并且在RT下向 其进一步加入乙酸酐(0.223mmo1， 23mg)。将混合物搅拌1小时后，减压 除去溶剂，加入饱和碳酸氢钠。接下来，用二氯甲烷萃取，除去溶剂， 通过重结晶获得白色固体5b (59mg， 89%) 。H NMR (CDC13, 400 MHz) 57.32-7.18 (m, 5H), 6.86-6.58 (m, C5-H和C8-H的几种构象异构体峰，H3)， 5.84-5.30 (m, O-H的几种构象异构体峰，1H), 4.33-4.27 (m， Cl-H的一种 构象异构体)，3.89 (s, 3H) 3.72-3.66 (m， Cl-H的一种构象异构体), 3,46-3.38 (m, C3-H的一种构象异构体)，3.27-3,21 (m, C3-H的一种构象异 构体)，2.96-2.82 (m, C4-H的一种构象异构体)，2.76-2.60 (m, C4-H的一 种构象异构体)2.74 (s, COC-H3的一种构象异构体)，2.15 (s, COC-H3的一 种构象异构体)；13C NMR (CDC13, 100 MHz) S169.7, 168.9， 145.8， 144.2, 143.9， 142.4, 141.4, 128.6, 129.5， 128.1, 127.8, 127.7, 127.5, 127.2， 126.8, 125.7， 114.5， 113.8, 110.8, 110.4, 60,2, 55.9, 54.4， 40.4， 37.6， 28.6, 27.4, 22.1， 21.7 MS (EI); 297 (M+), 254, 239， 220, 178 (100)， 163]。
实施例2:在C1位用几种烷基取代的AHMTI0衍生物(6、 7a-h、 8a-h和 9a-g)的合成方法和它们的结构分析
7a ~7h
HO
广Y
R 0
7a (恥M)'8a(腦), 7b (9，，助(77%〉. 7c(96%),8c(70%>. (63%). 8(3(63%),
7h(85%),ah (72%),
9a (58%). R -Sb(45%),R: 9c (67%), R = M (94%), R' 9e (73%), R : 射(72%), R ， Sg (SO%).RB Sh (80%),
CH2Ph
环呙基 环丁基 环己基
①N-(2-(4-羟基-3-0-甲基苯基)乙基)-叔丁基碳酸盐(6)的合成方法和分 近方法a)将叔丁氧羰基酐(7.63mmo1， 1.67g)和三乙胺(19.5mmo1， 1.93g) 与化合物3 (6.35mmo1， L30g)加入氯仿(20ml)中。在RT下搅拌混合物24 小时，向其加入氯化铝溶液。用二氯甲垸溶剂萃取混合物，然后用水洗 涤有机层两次。通过柱色谱法和重结晶获得白色结晶化合物(1.32g， 59%) 卩H NMR (CDC13, 200 MHz) S6.83 (d， J= 8.4 Hz， 1H)， 6.63-6.67 (m, 2H)， 5.83 (s， 1H), 6,45 (br s, 1H), 3.84 (s, 3H), 3.35 (q, /= 6.6 Hz, 2H), 2.70 (t， / =7,0 Hz, 2H)， 1.43 (s， 9H); 13C NMR (CDC13， 50 MHz) S155.9, 146.5， 144.1, 130.6, 121.2, 114.4， 111.2, 79.1, 55.7, 41.9, 35.7, 28.3; MS (CI) 318， 267 (M++1), 212, 168， 151 (100)， 138]。
将碳酸钾和苄基溴加入含有溶解的白色结晶化合物的丙酮中，然后 使混合物回流12小时。减压除去溶剂后，用水和乙酸乙酯萃取混合物。 用硫酸钠干燥有机层，除去硫酸钠和溶剂。通过柱色谱法获得白色固体 (1.57g， 95%) 。H NMR (CDC13, 200 MHz) 57.27-7.46 (m， 5H), 6,82 (d, / = 8.0Hz， 1H), 6.73 (d, /= 1.8 Hz, 1H), 6.65 (dd, /= 8.0, 1.8 Hz， 1H), 5.13 (s, 2H), 4.55 (br s， IH)， 3.88 (s， 3H), 3.44 Cq, J= 6.6 Hz, 2H), 2.72 (t, J= 7.2 Hz， 2H), 1.44 (s， 9H); 13C丽R (CDC13, 50 MHz) 5155.9， 149.9, 147.0, 137.4, 132.4, 128.5, 127.7, 127.3, 120.8， 114,8, 112.9, 79.2, 71.4, 56.1, 42.0， 35.9, 28.4; LC/MS (ESP) 615, 559, 379, 358 (M++1), 301 (100), 241, 224]。
在0。C下，将三氟乙酸(20ml)缓慢加入含有白色固体(16.8mmol，6.0g) 的二氯甲烷溶剂(20ml)中。将混合物搅拌40分钟后，将混合物溶液缓慢 放入带冰的碳酸氢钠溶液中。用乙醚溶剂萃取混合物，然后除去乙醚溶 剂，使其溶于氯仿，用饱和碳酸氢钠溶液中和，除去溶剂。用乙醚(20ml) 中的1M HC1处理所得物质得到白色盐酸盐中间体6 (1.32g， 64%) 。H 画R (CDC13, 200 MHz) S8.24 (br s, 2H), 7.28-7.45 (m, 5H), 6.96 (d, / = 8.0Hz， 1H), 6.90 (d， J= 1.8 Hz, 1H)， 6.73 (dd, /= 8.0, 1.8 Hz, 1H)， 5.04 (s, 1H)， 3.77 (s, 3H)， 2.96-3.03 (m, 2H), 2.80-2.88 (m, 2H); 13C丽R (CDC13, 50 MHz) 5149.3， 146.6, 137.2, 130.3， 128.2, 127.6, 127.5, 120.5, 114.1, 113.0, 70.1, 55.6, 32.4; MS (CI): 258 (M+)， 241 (100)， 228, 91]。
②N-f2-(4-苄氧基-3-甲氧基苯基)乙基l烷基酰胺(7a-h)的一般合成方法
及分析在0。C下，将烷基氯(丙酰氯、丁酰氯、异丁酰氯、苯乙酰氯、4-甲基丁酰氯、环丙甲酰氯、环丁甲酰氯和环己甲酰氯)加入含有溶解的化
合物6的二氯甲垸溶剂中，然后向其缓慢加入三乙胺。将混合物搅拌30 分钟至1小时。减压除去溶剂，加入水。用乙酸乙酯萃取所得物质的有 机物质。用水洗涤有机层，用硫酸钠干燥，然后过滤。减压除去过滤后 的溶液中的溶剂，通过重结晶或柱色谱法获得化合物7a-h。
N-[2-[(4-苄氧基-3-甲氧基苯基)乙基]丙酰胺(7a)
用化合物6 (3.5Ommo1， 900mg)、丙酰氯(4.55mmo1， 421mg)、三乙 胺(10.5mmo1， 1.06g)获得7a (984mg， 90%): & NMR (CDC13， 200 MHz) S7.26-7.46 (m， 5H), 6.81 ((!， /= 8.0 Hz， 1H), 6.73 (d， /= 2.2 Hz, 1H), 6.64 (dd， /= 8.2, 1.9 Hz, 1H), 5.65 (br s, 1H)， 5.12 (s, 2H), 3.86 (s, 3H), 3.46 (q， 《/ =6.6 Hz， 2H), 2.73 (t, J= 7.0 Hz, 2H)， 2.14 (q， /= 7.5 Hz， 2H), 1.11 (t, J = 7.7 Hz， 3H); 13C丽R (CDC13, 50 MHz) S173.7, 149.6, 146.7, 137,1, 132,1， 128.4， 127.7， 127.2， 120.5， 114.2， 112.4， 71.0, 55.8, 40.5, 35.2, 29.6, 9.8; MS (EI): 313 (M+)， 240, 149, 137, 91 (100), 65, 57, 30。
N-[2-[(4-苄氧基-3-甲氧基苯基)乙基]丁酰胺(7b)
用化合物6 (3.50mmol，卯Omg)、 丁酰氯(4.20mmo1， 448mg)、三乙 胺(10.5mmo1， 1.06g)获得7b (L08g， 94%): !H NMR (CDC13， 200 MHz) 57.46-7.26 (m, 5H)， 6.81 (d, J= 8.0Hz， IH)， 6.73 ((!, /= 1.8 Hz, IH)， 6.64 (dd, J= 8.0， 1,8, 1H), 5.56 (s， 1H), 5.12 (s， 2H), 3.86 (s, 3H), 3.47 (q, /= 6.6 Hz， 2H)， 2.74 (t, J= 7.0 Hz, 2H)， 2.09 (t, J= 7.6 Hz, 2H)， 1.61 (六重峰， / = 7.4 Hz， 2H), 0.91 (t， J= 7.3 Hz, 3H); 13C NMR (CDC13， 50 MHz) S172.9, 149.7, 146.7, 137.2, 132.0, 128.4, 127,7, 127.2, 120.5， 114.2, 112.4， 71.1, 55.9, 40,5， 38.6.35.3, 19.1， 13.7; MS (EI): 327 (M+)， 240, 149， 137， 91 (100)， 43。
N-[2[(4-苄氧基-3-甲氧基苯基)乙基]异丁酰胺(7c)
用化合物6 (3.50mmol， 900mg)、异丁酰氯(4.20mmo1， 448mg)、三 乙胺(10.5mmo1， L06g)获得7c (1.10g， 96%): !H NMR (CDC13, 200 MHz) 57.46-7.26 (m, 5H), 6.82 ((!， /= 8.2Hz, 1H), 6.73 (d, /= 1.8 Hz, IH)， 6.64 (dd, /= 8.0， 1.4, 1H), 5.56 (br s, IH)， 5.13 (s, 2H)， 3.87 (s， 3H), 3.47 (q, / =6.6 Hz, 2H), 2.74 (t, /= 6.9 Hz, 2H)， 2.28 (五重峰，《/= 7.1 Hz, 1H), 1.11 (d， J= 7.0 Hz， 2H); 13C NMR (CDC13, 50 MHz): S176.8, 149.7, 146.7， 137.1,
132.1, 128,4, 127.7, 127.2, 120.6, 114.2， 112.4, 71.1, 55.9, 40.4, 35.5, 35.2, 19.5; MS (EI): 327 (M+), 240, 149, 137， 91(100), 43。
iv) N-[2-[(4-苄氧基-3-甲氧基苯基)乙基]-2-苯乙酰胺(7d)
用化合物6(3.42mmol， l,Og)、三乙胺(10.3mmo1， 1.04g)、苯乙酰氯 (3.76mmol， 518mg)获得7d(802mg, 63%): !H NMR (CDC13, 200 MHz) S7.71-7.47 (m, IOH)， 6.65 (d, J= 8.2 Hz, 1H), 6.62 (d, 7=1.8Hz, 1H), 6.44 (dd, /= 8.2, 2.2 Hz, 1H), 5.39 (br s, IH)， 5.12 (s， 2H)， 3.82 (s, 3H), 3.51 (s, 2H), 3.42 (q, /=6.4 Hz， 2H)， 2.65 (t, /= 6.7 Hz, 2H); 13C NMR (CDC13, 100 MHz) 5170.8, 149.6, 146.7, 137.2, 134.7, 131.7， 129.4, 128,9, 128.5， 127.8,
127.2, 127.1, 120.5, 114.1， 112.2， 71.0, 55.9, 43.8, 40.6, 35.0; MS (EI): 375 (M+), 240， 149， 137， 91(100)， 65。
v) N-[2-[(4-苄氧基-3-甲氧基苯基)乙基]-3-甲基丁酰胺(7e)
用化合物6(3.50mmol， 900mg)、异戊酰氯(4.20mmo1， 506g)、三乙 胺(10.5mmo1， 1.06g)获得7e(l.llg， 93%): & NMR (CDC13,200 MHz) 57.46-7.25 (m， 5H), 6.82 (d, ■/= 8.0 Hz, IH)， 6,73 (d, /= 1.8 Hz, 1H), 6.63 (dd, J= 8.2， 2.0， 1H), 5.51(br s, IH)， 5.13 (s, 2H), 3.87 (s, 3H), 3.49 (q， 《/ =
6.7 Hz, 2H), 2.74 (t, /= 6.9 Hz， 2H), 2.15-1.95 (m, 3H), 0.90 (d, /= 6.6 Hz, 6H); 13C NMR (CDC13， 50 MHz) S172.4, 149.7, 146.7, 137.1， 132.0， 128,5, 127.7, 127.2， 120.5, 114.2, 112.4， 71.1, 55.9, 46.1, 40.4， 35.3, 22.4; MS (EI): 341 (M+), 240, 149, 137, 91 (100)， 65, 57, 30。
vi) N-[2-[(4-苄氧基-3-甲氧基苯基)乙基]-2-环丙基乙酰胺(7f)
用化合物6 (3.89mmol， l.Og)、环丙甲酰氯(5.45mmo1， 589 mg)、三 乙胺(11.7mmo1， 1.18g)获得7f(1.12g， 88%): & NMR (CDC13, 200 MHz) S7.45-7.26 (m, 5H)， 6.82 ((!， /= 8.0Hz, IH)， 6.74 (d， 《/= 1.8 Hz, 1H), 6.58 (dd， J= 8.0, 1.8 Hz, 1H), 5.77 (br s, 1H), 5.13 (s, 2H), 3.87 (s, 3H)， 3.48(q, / =6.6 Hz, 2H), 2.74 (t， /= 7.0 Hz, 2H), 1.85-1.19 (m, 1H), 0.95 (五重峰， / =
3.8 Hz， 2H), 0.74-0.64 (m, 2H); 13C NMR (CDC13, 50 MHz) S173.4, 149.6,146.7, 137.2, 132.1, 128.4, 127.7， 127.2, 120.5, 114.2, 112.4， 71.1, 55.9, 40.8， 35.3, 14.6， 7.0; MS (EI): 325 (M+)， 240, 149, 137, 91 (100), 69, 41。
vii) N-[2-[(4-苄氧基-3-甲氧基苯基)乙基]-2-环丁基乙酰胺(7g)
用化合物6 (3.50mmol， 900mg)、环丁甲酰氯(4.55mmo1， 539mg)、 三乙胺(10.5mmo1,1.06g)获得7g (737mg，79%): !H NMR (CDC13, 200 MHz) S7.46-7.25 (m, 5H), 6.81 ((!， /= 8.0 Hz， IH), 6.73 ((!, /= 1,8 Hz, IH), 6.64 (dd, ■/= 8.2, 2.2 Hz, IH), 5.49 (br s, IH), 5.13 (s, 2H), 3.87 (s, 3H), 3.47 (q， / =6.6 Hz, 2H), 2.92 (五重峰， / = 8.5 Hz， IH), 2.73 (t, / = 7.0 Hz, 2H), 2.37-1.98 (m, 4H)， 1.94-1.78 (m, 2H); 13C NMR (CDC13， 50 MHz) 3174.9， 149.7, 146.7, 137.2， 132.1, 128.4， 127.7， 127.2, 120.6， 114.2, 112.4, 71.1， 55.9, 40.4, 39.9， 35.2, 25.3, 18.1; MS (EI): 339 (M+), 240， 149， 137, 91 (100), 55。
viii) N-[2-[(4-苄氧基-3-甲氧基苯基)乙基]-2-环己基乙酰胺(7h)
用化合物6 (3.50mmol，卯Omg)、环己甲酰氯(4.55mmo1， 667mg)、 三乙胺(10.5mmo1， 1.06g)获得7h (1.09g， 85%): & NMR (CDC13， 400 MHz) S7.41-7.23 (m， 5H), 6.79 8.0 Hz， IH), 6.67 (d， /= 2.0 Hz， IH)， 6.61
(dd， 《/= 8.0， 2.0 Hz IH), 5.48 (br s, IH)， 5.09 (s, 2H), 3.83 (s， 3H), 3.43 (q， / =6.5 Hz, 2H)， 2.70 (t, /= 6.8 Hz, 2H)， 2.00-1.93 (m， IH), 1.78-1.71 (m， 4H), 1.63-1.59 Cm， IH)， 1.40-1.30 (m, 2H)， 1.25-1.12 (m, 3H); 13C NMR (CDC13, 100 MHz) S176.0, 149.7, 146.7， 137.2, 132.1， 128.4， 127.7, 127.2， 120.6， 114.3, 112.5， 71.1, 55.9, 45.4, 40.3， 35.2， 29.6, 25.6; MS (EI): 367 (M+), 240, 149, 137, 91 (100)， 83, 55。
③l-烷基-7-羟基-6-甲氧基-l,2.3,4-四氢异喹啉(8a-h)的制备和分析
将磷酰氯(POCl3)加入含有化合物7a-h的无水乙腈中，回流2-5小时。 减压除去溶剂，真空干燥所得物。将干燥的化合物溶于甲醇，在0。C下 向其缓慢加入硼氢化钠(NaBH4)。在RT下，将混合物搅拌24小时后，用 硅胶过滤混合物，用硫酸钠干燥。将饱和碳酸氢钠倒入，并用二氯甲垸 溶剂萃取有机物质，用硫酸钠干燥，减压除去溶剂。使真空干燥的有机 物质溶于甲醇，向其加入HC1溶液和10%Pd/C，在RT、氢气下搅拌混合物12小时。用C盐过滤所得的溶液，减压除去溶剂。通过柱色谱法或
重结晶获得作为盐酸盐的化合物8a-h。
l-乙基-7-羟基-6-甲氧基-l，2，3，4-四氢异喹啉(8a)
用化合物7a (3.0mmo1， 940mg)、 P0C13 (9.0mmol， 1.38g)、 NaBH4 (15mmol， 587mg)、 10。/。披钯木炭(100mg)获得8a (128mg， 18°/。) 'HNMR (DMSO-^,400 MHz) 59.69 (br s, 1H), 9.07 (br s， 1H), 9.02 (s, 1H), 6.73 (s， 1H), 6,66 (s， 1H), 4.23 (br s, 1H)， 3.74 (s, 3H), 3.16 (br s, 1H), 3.01-2.93 (m, 1H)， 2.86-2.80 (m, 1H)， 1.97-1.87 (m, 2H)， 1.01 (t, /= 3.7 Hz, 3H); 13C NMR (画S0-c 6， 100 MHz) 5147.1, 145.2, 124.5, 122.5, 113.0, 112.0， 55.6, 55.0, 54.6, 26.2, 24.5, 9.8; LC MS: 208.2 (M++1, 100)。
7-羟基-6-甲氧基-l-丙基-l,2,3，4-四氢异喹啉(8b)
用化合物7b(2.99mmo1， 980mg)、 P0C13 (8.98 mmol， 1.38g)、 NaBH4 (23.9mmol， 905mg)、 10。/。披钯木炭(100mg)获得8b (590mg， 77%): NMR (DMSO-A, 400 MHz) S9.80-9.20 (br s, 1H)， 9.04 (br s, 1H)， 6.72 (s, 1H),6.66 (s, IH), 4.26 (t， /= 3.2 Hz, IH)， 3.74 (s， 3H)， 3.36-3.30 (m, IH), 3.00-2.93 (m， IH), 2.85-2.78 (m， IH)， 1.88-1.81 (m, 2H), 1.52-1.42 (m. 2H)， 0.92 (t， /= 7.2 Hz, 3H); 13C NMR (DMSO-^， 100 MHz) 5147.1， 145.2， 124.9， 122.5, 123.0， 112.0, 55.6， 53.5, 35.6, 24.5， 18.2, 13.7; LC MS: 479.2, 222.2 (M++1, 100)。
7-羟基-l-异丙基-6-甲氧基-l,2，3,4-四氢异喹啉(8c)
用化合物7c(2.99mmo1， 980mg)、 P0C13 (8.98mmol， 1.38g)、 NaBH4 (23.9mmol， 905mg)、 10。/。披钯木炭(100mg)获得8c (536mg， 70%): 'HNMR (DMSO-A, 400 MHz) S9.81 (br s， IH), 9.04 (br s， IH), 8.66 (br s, IH)， 6.69 (s， IH), 4.26 (br t, /= 3.4， IH), 3.75 (s, 3H), 3.37 (br s, IH), 3,10-3.08 (m, 2H), 2.78-2.73 (m, IH), 2.37-2.29 (m, IH), 1.08 (d， /= 7.2 Hz, 3H)， 0.84 (d, /= 7.2 Hz, 3H); 13C NMR (画SO誦^， 100 MHz) S146.9, 145.3， 123.7, 123A 113.0, 111.9, 58.9， 55.5, 43,3， 30.8， 24.6, 19.2， 16.2; LC MS: 479.2， 222.2 (M++1, 100)。
l-苄基-7-羟基-6-甲氧基-l,2,3，4-四氢异喹啉(8d)用化合物7d (0.51mmol， 135mg)获得8d (101mg， 74%): & NMR (CDC13， 400 MHz) 57.22-7.36 (m， 5H)， 6.62 (s， 1H)， 6.57 (s, 1H), 4.04-4.10 (m, 1H)， 3.82 (s, 3H), 3.13-3.22 (m, 2H), 2,70-2.卯(m， 3H)， 2.62-2.70 (m， 1H); 13CNMR(CDC13， 100 MHz) 5145.1, 143.6, 139.1, 131.2, 129.3, 128.6， 126.6, 126.4, 112.0， 111.1, 56,8， 55.9, 42.4， 40.9, 29.5; MS (CI): 270 (M++1), 178 (100)。
7-羟基-l-异丁基-6-甲氧基-l,2，3，4-四氢异喹啉(8e)
用化合物7e(3.13mmo1， 1.07mg)、 P0C13 (9.40mmol， 1.44g)、 NaBH4 (25.0mmol， 947mg)、 10。/。披钯木炭(100mg)获得8e (567mg， 67%): & NMR (DMSO-A, 400 MHz) 59.75 (br s, 1H), 9.36 (br s, 1H), 9.06 (s, IH)， 6.72 (s, 1H)，6.64 (s, 1H), 4.27 (br d， /= 3.6 Hz, 1H), 3.74 (s, 3H)， 3.37-3.11 (m, 1H), 3.20-3,08 (m， IH)， 3.02-2.90 (m， 1H), 2.卯-2.78 (m， 1H), 2.00-1.89 (m, 1H), 1.88-1.77 (m， IH)， 1.65-1.55 (m, IH)， 0.98 (d, J= 6.4 Hz， 3H), 0.95 (d, / = 6.8 Hz， 3H); 13C NMR (DMSO-d6, 100 MHz) S147.0, 145.2, 125.4， 122.5, 113.0, 112.0, 55.6， 51.8, 43,3, 38.7, 24.4， 23.8, 23.0. 21.6; LC MS: 236.2 (M++1, 100)。
l-环丙基-7-羟基-6-甲氧基-l,2,3，4-四氢异喹啉(8f)
用化合物7f (3.07mmol, l.Og)、 P0C13 (9.22mmol， 1.4g)、 NaBH4 (24.6mmol， 929mg)、 10。/。披钯木炭(100mg)获得8f (458mg， 58%): 'HNMR (DMSO-c/6, 400 MHz) 59.64 (br s, 2H)， 9.09 (s， 1H), 6.97 (s, 1H), 6.73 (s, IH)， 3.74 (s, 3H), 3.55 (d， 《/= 9.6 Hz, 1H), 3.41-3.36 (m， IH)， 3.14-2.97 (m, 2H), 2.86-2.77 (m, 1H), 1.18-1.09 (m, 1H), 0.88-0.81 (m， 1H), 0.81-0.72 (m, 1H), 0.72-0.64 (m, 1H), 0.60-0,52 (m, 1H); 13C NMR (DMSO-^， 100 MHz) J 147.3， 145.2， 125.1， 122.4, 113.1， 111.9, 58.9, 55.6， 39.8, 24.5, 14.6, 5.8, 2.8; LC MS: 220.2 (M++l， 100). 203.2。
vii)l-环丁基-7-羟基-6-甲氧基-l，2，3,4-四氢异喹啉(8g)
用化合物7g (2,95mmol， l.Og)、 P0C13 (8.8mmol， 1.36g)、 NaBH4 (23.6mmol， 893mg)、 10。/。披钯木炭(100mg)获得8g (645mg， 81%): & NMR (DMSO-A, 400 MHz) 59.90-9.00 (br s， 2H), 9.07 (s， 1H), 6.73 (s, 1H), 6.62 (s, IH)， 4.20 (d, /= 9.2, Cl-H的一种构象异构体)，4.14 (br d, >/= 4.8, Cl-H的一种构象异构体)，3.73 (s, 3H), 3.31-3,25 (m， 1H)， 3.16 (d， ■/= 4.0 Hz， 1H), 3.13-3.07 (m， 1H)， 2.98-2.91 (m， 1H)， 2.85-2.76 (m, 1H), 2.78-2.67 (m, 1H), 2,17-2.02 (m， 3H)， 2.02-1.92 (m， 1H), 1.89-1.70 (m， 2H); 13C NMR (DMS(W6， 100 MHz) S147.1, 145.1, 124.1, 122.4， 112.9， 112.1， 57.5， 55.5, 48.6, 38.3, 26.8, 25.2, 24.5， 17.6; LC MS: 234.2 (M++1, 100)。
l-环己基-7-羟基-6-甲氧基-l,2，3,4-四氢异喹啉(8h)
用化合物7h(2.53mmo1， 930mg)、 P0C13 (7.59mmol， 1.16g)、 NaBH4 (20.2mmol, 757mg)、 10。/。披钯木炭(100mg)获得8h (541mg， 72%): & NMR (DMSO-A, 400 MHz) S9.85 (br s， IH)， 9.03 (s， IH)， 8.67 (br s, 1H), 6.73 (s, IH)， 6.67 (s, IH)， 4.22 (br s, 1H), 3.74 (s, 3H), 3.53 (br s, 1H), 3.04 (br s, 1H), 2.98-2.90 (m， 1H), 2.80-2.74 (m， 1H), 1,91 (br s， 1H), 1.80-1.58 (m, 4H), 1.50-1.00 (m, 6H); 13C NMR (DMSO誦^, 100 MHz) 5147.0, 145.1, 123.4, 123.3， 113.3, 112.0, 58.4, 55.5， 40.7， 29.3, 26.2， 25.9, 25.7, 25.6, 24.5; LC MS: 262.2 (M++1, 100)。
④2-乙酰基-l-烷基-7-羟基-6-甲氧基-l,2,3,4-四氢异喹啉(9a-h)的合成方
法和分析
将二氯甲垸溶剂加入装有化合物8a-h反应容器，在RT下，顺序加 入乙酸酐和三乙胺。将混合物搅拌约2小时后，减压除去溶剂，通过柱 色谱法获得粗化合物9a-h。然后，重结晶获得纯化合物9a-h。
i) 2-乙酰基-l-乙基-7-羟基-6-甲氧基-l，2，3,4-四氢异喹啉(9a)
用化合物8a(85mg， 0.36mmo1)、乙酸酐(36mg， 0.35mmo1)、三乙胺 (177mg， 1.75mmol)获得9a (51mg， 58%): & NMR (CDC13, 400 MHz) S6.70 (s, C6-H或C8-H的一种构象异构体)，6.65 (s, C6-H或C8-H的一种构象异 构体)，6.58 (s， C6-H或C8-H的一种构象异构体)，6.56 (s, C6-H或C8-H的 一种构象异构体)，5.46-5.40 (dd, 8.8, 6.0 Hz, Cl-H的一种构象异构体)， 4.66-4.59 (m, C3-H的一种构象异构体)，4.59-4.53 (t, J= 7.2 Hz, Cl-H的一 种构象异构体)，3.859 (s， OCH3的一种构象异构体)，3.850 (s, OCH3的一种 构象异构体)，3.78-3.73 (m, C3-H的一种构象异构体)，3.55-3.42 (m, C3-H 的一种构象异构体)，3.06- 2.97 (m, C3-H的一种构象异构体)，2.94-2.79 (m: C4-H的一种构象异构体，1H), 2.79-2.70 (m, C4-H的一种构象异构体),2.65-2.57 (m, C4-H的一种构象异构体)，2.17 (s， -NCOCH3的一种构象异 构体)，2.16 (s， -NCOCH3的一种构象异构体)，1.88-1.70 (m, 2H), 0.96 (td, J =7.2, 29,2 Hz, 3H)。 ^jf(C14H19N03)计算的C, 67.45; H， 7.68; N， 5,62; 发现C, 67.32; H， 7.84; N, 5.67。
2-乙酰基-7-羟基-6-甲氧基-l-丙基-l，2，3,4-四氢异喹啉(9b)
用化合物8b (200mg， 0.78mmo1)、乙酸酐(79mg， 0.78mmo1)、三乙 胺(236mg， 2.34mmol)获得9b (92mg， 45%): & NMR (CDC13, 400 MHz) S6.69 (s， C6-H或C8-H的一种构象异构体)，6.64 (s, C6-H或C8-H的一种 构象异构体)，6.58 (s, C6-H或C8-H的一种构象异构体)，6.56 (s， C6-H或 C8-H的一种构象异构体)，5.54-5.48 (m, Cl-H的一种构象异构体)， 4.70-4.56 (m， Cl-H的一种构象异构体和C3-H)， 3.854 (s， OCH3的一种构 象异构体)，3.845 (s, OCH3的一种构象异构体)，3.79-3.71 (m， C3-H的一种 构象异构体)，3.57-3.47 (m, C3-H的一种构象异构体)，3.10-3.00 (m， C3-H 的一种构象异构体)，2.95-2.58 (m， C4-H的一种构象异构体，2H), 2.164 (s， -NCOCH3的一种构象异构体)，2.157 (s， -NCOCH3的一种构象异构体)， 1.88-1.60 (m， 2H)， 1.50-1.24 (m, 2H)， 1,12-0.84 (m, 3H); 13C NMR (CDC13, 100 MHz) S169.4, 145.5, 144.1， 143.8， 130.8， 129.9, 125.5, 124.4, 113.3, 112.5， 110.9， 110.4， 57.1, 55.9, 51.9, 40.7， 29.4， 38.7， 35.4, 28.7， 27.6， 21.8， 21.7, 19.9, 19.6, 14.0。分析((:151121^
HO.11a, r-oh2ch3(31%) 一 11b. R = CH2CH2CH3 (75%) 11c. R-环己基(57%) — "d'R ■ CH(CH3)2 (71%〉 11e. R = CH2CH<CH3)2 (60%)12a, R- CH2CHs (92%) 12b: R= CHsCHjCH-, (70%) 12c. r =环己基細") 12d, r ch3 (50%)R = ph (52%) 12f' R=CH2Ph'(56%)CD在N2位用酰胺取代的HMTIO衍生物nia-e)的制备和分析制备a)和b):使化合物10 (l.Ommol或2.0mmol)溶于二氯甲垸溶剂 (10-15ml)中，向其缓慢加入烷基酰氯(丙酸酐、丁酰氯、环己甲酰氯、异 丁酰氯或3-甲基丁酰氯)。将三乙胺(3.0mmol或6.0mmo1)缓慢加入，在 RT下将混合物搅拌约1小时。用水终止反应，并用水洗涤有机层。减压 除去溶剂。使所得化合物溶于甲醇(10-20ml)，并向其加入碳酸钙(3.0mmo1 或6.0mmo1)，然后使混合物回流约2-3小时。过滤回流溶液，然后用足 量的二氯甲垸溶剂萃取，用l.OMHCl溶液和水洗涤有机层。减压除去溶 剂，并且通过柱色谱法获得在N2位用酰胺取代的HMTIQ衍生物(lla-e)。2-乙基羰基-7-羟基-6-甲氧基-l,2,3,4-四氢异喹啉(EHMTIQ， lla)用化合物10(420mg， 2.0mmo1)、丙酸酐(410mg， 3.Ommo1)、三乙胺 (1.0ml)、碳酸钙(370mg)获得lla (146mg， 31%): & NMR (CDC13， 200 MHz) 56.71 (s， C5-H或C8-H的一种构象异构体)，6.66 (s, C5-H或C8-H的一种 构象异构体)，6.62 (s, C5-H或C8-H的一种构象异构体)，6.60 (s， C5-H或 C8-H的一种构象异构体)，6.10 (s， O-H的一种构象异构体)，5.96 (s, O-H 的一种构象异构体)，4.62 (s, Cl-H的一种构象异构体)，4.50 (s, Cl-H的一 种构象异构体)，3.86 (s, 0-CH3, 3H), 3,95-3.49 (m， C4-H, 2H), 2.85-2.70 (m, C3-H, 2H)， 2.46 (q, /= 7.4 Hz, 2H), 1.15-1.05 (m, 3H); 13C NMR (CDC13， 50 MHz) S172.8, 145.5, 144.6， 144.3， 126.12， 126.11， 112.5， 111.8, 111.0，110.6, 56.0, 46.8， 43.8, 43.2, 39.8, 29.1， 28.1, 26.9， 26.7, 9.4; MS厠235 (M+， 100), 220， 178, 163, 150, 135。7-羟基-6-甲氧基-2-丙基羰基-l,2，3，4-四氢异喹啉(llb)用化合物10 (215mg， l.Ommol)、 丁酰氯(93mg， l.Ommol)、三乙胺 (0.45ml)、碳酸^(100mg)获得lib (187mg， 75%): & NMR (CDC13， 100 MHz) 86,71 (s， C5-H或C8-H的一种构象异构体)，6.66 (s， C5-H或C8-H 的一种构象异构体)，6.61 (s， C5-H或C8-H的一种构象异构体)，6.60 (s， C5-H或C8-H的一种构象异构体)，6.21 (s, O-H的一种构象异构体)，6.03 (s, O-H的一种构象异构体)，4.62 (s， Cl-H的一种构象异构体)，4.50 (s, Cl-H的一种构象异构体)，3.85 (s, 0-CH3, 3H), 3.95-3.60 (m， C4-H, 2H)， 2.卯-2.70 (m， C3-H, 2H), 2.46 (t, >/ = 7.4 Hz, 2H), 1.80-1.60 (m, 2H), 1.05-0,90 (m, 3H); 13C NMR (CDC13， 50 MHz) 5172.1, 145.8, 144,7, 144.5， 126.2, 125.2， 112.7, 111.9， 111.2, 110.8， 56.1, 47.1， 43.9, 43,5， 39.9, 35.8， 35.7， 29.3, 28.2, 18.7, 14.1; MS (EI) 249 (M+, 100), 220, 178, 163, 150。2-环己羰基-7-羟基-6-甲氧基-l,2,3,4-四氢异喹啉(llc)用化合物10 (430mg， 2.0mmol)、环己甲酰氯(5卯mg， 4.0mmol)、三 乙胺(0.90ml)、碳酸钙(320mg)获得11c (302mg， 57%): !H丽R (CDC13， 200 MHz) 56.72 (s， C5-H或C8-H的一种构象异构体),6.68 (s, C5-H或 C8-H的一种构象异构体)，6.60 (s， C5-H或C8-H的一种构象异构体)，5.95 (s， O-H的一种构象异构体)，5.76 (s, O-H的一种构象异构体)，4.61 (s, Cl-H的一种构象异构体)，4.54 (s， Cl-H的一种构象异构体)，3.86 (s， 0-CH3, 3H), 3.72 (m, C4-H, 2H), 3.82-3.62 (m, 2H), 2.85-2.64 (m, C3-H, 2H)， 2.62-2.45 (m, IH)， 1.90-1.20 (m, 10H); MS (EI) 289 (M+， 100), 274, 178, 163， 150。7-羟基-6-甲氧基-2-异丙基羰基-l,2,3，4-四氢异喹啉(lld)用化合物10 (215mg， l.Ommol)、异丁酰氯(0.21ml， 2.0mmol)、三乙 胺(0.5ml)、碳酸钙(160mg)获得11d(178mg， 71%): 'H NMR (CDC13， 200 MHz) 56.76 (s， C5-H或C8-H的一种构象异构体)，6.67 (s, C5-H或C8-H 的一种构象异构体)，6.61 (s, C5-H或C8-H的一种构象异构体)，6.20 (s， O-H的一种构象异构体)，6.00 (s， O-H的一种构象异构体)，4.61 (s, Cl-H的一种构象异构体)，4.55 (s, Cl-H的一种构象异构体)，3.86 (s, 0-CH3， 3H), 3.95-3.60 (m, C4-H, 2H), 3.00-2.65 (m， 3H), 1.45 (t, /= 6.6 Hz, 6H); 13C NMR (CDCb， 50MHz)S175.8, 145.5, 144.4, 126.3, 125.0, 112.6, 111.7, 111,0， 110.7, 56.0, 46.8, 44,0, 43.1, 40.1， 30.4， 29.4， 28.0, 19.3; MS (EI) 249 (M+, 100)， 234, 206, 178， 163, 150。7-羟基-6-甲氧基-2-异丁基羰基^，2,3,4-四氢异喹啉(He)用化合物10(215mg, l.Ommol)、异戊酰氯(0.25ml， 2.Ommo1)、三乙 胺(0,5ml)、碳酸钙(160mg)获得11e(158mg， 60%): & NMR (CDC13, 200 MHz) S6.71 (s， C5-H或C8-H的一种构象异构体)，6.66 (s, C5-H或C8-H 的一种构象异构体)，6.61 (s, C5-H或C8-H的一种构象异构体)，6.60 (s， C5-H或C8-H的一种构象异构体)，6.21 (s, O-H的一种构象异构体)，6.04 (s， O-H的一种构象异构体)，4.63 (s， Cl-H的一种构象异构体)，4.51 (s， Cl-H的一种构象异构体)，3.85 (s, 0-CH3, 3H), 3.95-3.60 (m， C4-H, 2H), 2.85-2.67 (m, 2H), 2.38-2,05 (m, 3H), 1.10-0.95 (m， 6H); 13C NMR (CDC13, 50 MHz) 5171.4, 145.7, 145.5, 144.6， 144.3, 126.2, 126.1， 125.0， 112.5， 111.7， 111.0, 110.6, 55,9, 47.2, 43.8, 43.6, 42.5, 42,3, 39.8, 29.2， 28.1, 25.6， 22.7; MS (EI) 263 (M+) 220 (100), 206, 178, 163, 150。②在N2位用烷基取代的HMTIO衍生物(12a-f)的制备和它们的结构分 近制备d):将1M氢化铝锂(四氢呋喃)溶液加入溶解有化合物lla-c 的经蒸馏的四氢呋喃溶液(10-20ml)中，将混合物回流4-5小时。使反应 终止，然后将约5当量重量的乙酸乙酯、l.OM氢氧化钾溶液和水加入上 述混合物。用二氯甲烷溶剂萃取所得溶液，然后通过柱色谱法获得化合 物12a-c。制备c):将化合物10与醛(乙醛、苯乙醛或苯甲醛)和异丙氧基钛 混合并搅拌约1小时。将混合物溶于乙醇，并与氰基硼氢化钠在RT下搅 拌约20小时，用水终止反应。将所得溶液过滤，减压除去溶剂。通过柱 色谱法纯化所得化合物，然后溶于甲醇。加入35n/。HCl溶液得到盐酸盐， 在乙醚中重结晶获得化合物12d-f。7-羟基-6-甲氧基-2-丙基-l,2,3,4-四氢异喹啉，盐酸盐(12a)根据制备d):用化合物11a(160mg， 0.68mmol)、 1M氢化铝锂(四氢呋喃)(0.6ml， 0.6mmol)获得12a(138mg， 92%): & NMR (DMS0-4, 400MHz) 59.14 (bs, OH, 1H)， 6.74(s， 1H)， 6.59 (s， 1H)， 4.27 (d, 7 = 12.6 Hz,IH)， 4.06 (dd, J= 16.0, 8.0 Hz, 1H), 3,75 (s, 3H), 3,37 (bs, IH)， 3.25-3.00(m, 4H)， 2.95-2.卯(bm， 1H), 1.85-1.75 (m, 2H), O.卯(t, /= 7.2 Hz, 3H); 13CNMR (DMS(W6， 100 MHz) S147.3, 145.4, 121.6, 120.1, 112.9, 111.8, 56.4,55.6, 51.0, 48.7, 24.3， 16.8, 11,0; MS (EI) 221 (M+) 192 (100), 150。
2-丁基-7-羟基-6-甲氧基-l,2,3,4-四氢异喹啉，盐酸盐(12b)
根据方法d):化合物11b(140mg， 0.56mmol)、 1M氢化铝锂(四氢呋喃)(0.6ml， 0.6mmol)获得12b (92mg， 70%): & NMR (DMSO-d6， 200 MHz)S6.77(s， 1H), 6,60 (s， 1H), 4.34 (d, /= 13.6 Hz, IH)， 4.06 (dd, /= 15.2， 8.0Hz, IH)， 3.75 (s, 3H), 3.37 (bs, IH)， 3.25-3.00 (m， 4H), 2.95-2.90 (bm, 1H),1.85-1.75 (m， 2H), 1.50-1.25 (m， 2H), 0.93 (t, /= 7.0 Hz， 3H); 13C NMR(DMSCW6, 50 MHz) S147.3, 145.4， 121.6, 120.1, 112.9， 111.8, 55.6, 54.6,51.0， 48.7， 25,1, 24.3， 19.5, 13.5; MS (EI) 235 (M+) 192 (100), 150。
2-(环己基甲基)-7-羟基-6-甲氧基-l,2,3,4-四氢异喹啉，盐酸盐(12c)
根据制备d):化合物11c (175mg， 0.6mmol)、 IM氢化铝锂(四氢呋喃)(0.4ml， 0.4mmol)获得12c (149mg，卯％): &画R (DMSO-^, 200 MHz)S6.76(s， IH)， 6.61 (s， 1H), 4.34 (d, J= 13.2 Hz， IH)， 4.11 (dd， J= 15.2， 7.2Hz, IH)， 3.74 (s, 3H)， 3.65-2.65 (m, 6H), 2.00-1.65 (m, 6H)， 1,40-1.80 (m,5H); 13C NMR (DMSO-4 50 MHz) 5147.3， 145.4, 121.5, 119.9, 113.1，111.8, 60.6, 55.9, 55.6， 32.1, 30.7, 25.4， 25.0, 23.9, 18.5; MS (EI) 275 (M+)192 (100), 150。
2-乙基-7-羟基-6-甲氧基-l,2，3,4-四氢异喹啉，盐酸盐(12d)
用化合物10(215mg， l.Ommol)、乙醛(0.12ml， 2.0mmol)、异丙氧基钛(370mg， 1.3mmol)、 l.OM氰基硼氢化钠溶液(四氢呋喃)(0.6ml， 0.6mmol)获得12d (103mg， 50%): ^丽R (DMSCW6， 200 MHz) S6.76(s， IH)， 6.59(s， IH)， 4.40-4.20 (bm， IH)， 4.20-3.95 (bm, 1H), 3.74 (s， 3H), 3.60-2.65 (m，6H), 1.31 (t力7.6Hz, 3H)。
2-苄基-7-羟基-6-甲氧基-i,2,3,4-四氢异喹啉，盐酸盐(12e)， l.Ommol)、苯甲醛(0.1ml， l.Ommol)、异丙氧基钛(370mg， 1.3mmol)、 1.0M氰基硼氢化钠溶液(四氢呋喃)(0.6ml，0.6mmol)获得12e (140mg， 52%)。
7-羟基-6-甲氧基-2-(2-苯乙基)H3,4-四氢异喹啉，盐酸盐(12f)
用化合物10 (215mg， l.Ommol)、苯甲醛(1.2ml， l.Ommol)、异丙氧基钛(370mg， 1.3mmo1)、 1M氰基硼氢化钠溶液(四氢呋喃)(0.6ml， 0.6mmo1)获得12f (158mg， 56%): NMR (DMS0-4 200 MHz) S7.42-7.20 (m, 5H),6.76(s， 1H)， 6.62 (s, 1H)， 4.41 (d, /= 14.8 Hz, 1H), 4.17 (dd， 《/= 14.8， 7.4Hz, 1H)， 3.74 (s, 3H), 3.67 (bs, 1H), 3.48-3.05 (m, 6H), 3.30-2.80 (m， 2H);13C丽R (画SO-c 6， 50 MHz)M47.4, 145.5， 137.2, 128.64, 128.61， 126.7,121.6， 120.1, 112.9， 111.9, 55.8, 55.6, 51.0, 48.9, 29.4， 24.4。
以用沸石简单蒸馏过的二氯甲垸、乙酸乙酯和己烷为溶剂，并且购买和使用纯度至少为99%的不知名溶剂。然后，在UV范围内或通过磷钼酸盐指示剂来观察TLC。在瓦里安核磁共振仪(Varian spectrometer)的200 MHz或400 MHz下记录&和13C NMR谱。用ppm来表示化学位移并参照内溶剂峰。使用仁荷大学(InhaUniversity)或韩国基础科学研究院(Korean Basic Science Institute (KRISS))提供的质谱仪记录质谱来测定未知化合物的结构。
细胞培养
在37。C下、5%<:02和95%空气的气氛中、在补充有10%牛血清、100IU/I青霉素和10pg/ml链霉素的达氏修正依氏培养基(Dulbecco'smodified Eagle's medium, DMEM)中培养BV-2小胶质细胞系、CATH.a神经元系和SK-N-BE(2)C神经元系。以下列密度将细胞种植在聚苯乙烯培养皿中BV-2 (2.5xl()5个细胞/24孔或2.6xl()6个细胞/60mm培养皿；SK-N-BE(2)C(1.5xl()5个细胞/24孔)；禾B CATH.a (2.4xl04个细胞/96孔)。
NO生成的测定
将一小部分(200iil)细胞培养基和100nl格里斯试剂(Griess reagent,2.5%H3P04、 1%磺胺和0.1%萘基乙二胺二盐酸盐)混合于96孔微量滴定板中，用微量滴定板读数器(多孔分光光度计)在540nm下读取样品吸光度。用亚硝酸钠的标准曲线来计算亚硝酸盐浓度。NF-kB r>65转移到细胞核的试验
用冷的磷酸盐缓冲的生理盐水(PBS)洗涤细胞，并缓慢悬浮于400pl含有10mMHEPES (pH7.9)、 10mMKCl、 O.lmMEDTA、 O.lmMEGTA、1MM DTT和0.5mM PMSF的缓冲溶液中。将细胞悬浮液放于冰上15分钟，并与25^d NP-40 (0.5%)反应10秒。离心30秒钟获得细胞核的粒状沉淀(nuclear pellet),然后将其重悬于含有20mM HEPES (pH 7.9)、400mMNaCl以及DTT、 EDTA、 EGTA和PMSF各为ImM的冷PBS中。将悬浮液涡旋15分钟。在ll，OOOxg下，将细胞核的提取物离心15分钟得到上清液，测量其蛋白含量。对等量的细胞提取物(5吗)在10% SDS-聚丙烯酰胺凝胶上进行电泳，然后转移到聚偏二氟乙烯-硝化纤维素膜上。在RT下，用含有8。/。脱脂乳的TBST封闭该膜1小时，用一抗(抗NF-kB p65抗体(l:500稀释))在4。C下过夜培养，并且进一步用结合有辣根过氧化物酶的二抗再培养一个小时。根据厂商说明，通过化学发光检测法检测蛋白条带。
GTPCH、 iNOS、 TNF-a、 IL-1B和C0X隱2的RT-PCR
对由BV-2细胞分离得到的总RNA样品各5ng进行反转录(RT)，然后在94。C下30秒、60。C下40秒和72。C下1分钟的条件下进行聚合酶链反应(PCR)30个循环。PCR中使用的引物如下
iNOS (正向引物，ATGTCCGAAGCAAACATCAC ;反向引物，TAATGTC CAGGAAGTAGGTG)、
TNF-a (正向引物，CAGACCCTCACACTCAGATCATCTT;反向引物，CAGAGCAATGACTCCAAAGTAGACCT)、
IL-ip (正向引物，ATGGCAACTGTTCCTGAACTCAACT;反向引物，CAGGACAGGTAT AGATTCTTTCCTTT )、
C0X-2(正向引物，CAGCAAATCCTTGCTGTTCC;反向引物，TGGGC AAAGAATGC AAAC ATC)、
GTPCH (正向引物，GGATACCAGGAGACCAT CTCA;反向引物，TAGCATGGTGCTAGTGACAGT )。
同时进行B2M的RT-PCR作为内对照(internal control)。对PCR产物在1.5%琼脂糖凝胶中进行电泳，由此证实存在所需尺寸的单条带。乳酸脱氢酶(XDH)活性的测定
将0.26mM NADH、 2.87mM丙酮酸钠和lOOmM磷酸钾缓冲溶液(pH7.4)加入细胞培养基(50pl)中，使总体积为200nl，然后在RT下培养。用微孔分光光度计(SPECTRAMAX340pc; Molecular Devices, Menlo Park,加州，美国)每隔2秒钟在340nm下测量所得的NAD+，测量持续5分钟。
从激活的小胶质细胞释放的物质对神经元死亡的保护作用的评价
将BV-2小胶质细胞以密度为2.5xl()S个细胞/ml种植于24孔培养皿中。过夜培养后，用lmg/ml脂多糖和EHMTIQ (lla)处理细胞，然后再培养12个小时。同时，将SK-N-BE(2)C细胞以0.5xl()5个细胞/ml种植于24孔培养皿中，培养24小时。除去SK-N-BE(2) C细胞所用的培养基，并向其加入BV-2所用的培养基。24小时后，用LDH测量SK-N-BE(2)C细胞的死亡率。
过氧化物生成的测定
将BV-2小胶质细胞以0.5xl()S个细胞/ml种植于96孔培养皿中。培养24小时后，用不含苯酚红的Hank氏平衡盐溶液(HBSS)洗涤细胞两次，并用EHMTIQ (lla)和WST-1来处理。然而，有些样品不用20^1超氧化物歧化酶(SOD; 800UI/ml)来处理。在37。C下，将所有样品培养10分钟。用Spectra Max Plus微孔分光光度计在450nm下读取样品吸光度。根据使用SOD和不使用SOD的样品之间吸光度的差值计算过氧化物的产率。
清除自由基活性的测定
基于清除2，2-二苯基-l-苦基偕腙肼(DPPH)游离基的活性来评价抗氧化剂活性。将DPPH溶于80%甲醇，使最终浓度为lOOpl。使溶于二甲亚砜的8pl EHMTIQ (lla)与232|il DPPH游离基溶液反应。在RT下，将反应混合物培养25分钟，然后用SPECTRA Max GEMINI XS荧光光度计(Molecular Devices, Sunnyvale,加州，美国)在517nm下测量DPPH吸光度。
药物稳定性评价
将ImM EHMTIQ (lla)加入lmg大白鼠肝微粒体样品中，并且在NADPH-再生体系(2.6mM卩-NADP+、 10mM葡萄糖-6-磷酸盐、4UI/ml葡萄糖-6-磷酸盐脱氢酶和10mM MgCl2)存在下，在37。C下，将样品培养O分钟、30分钟、120分钟和240分钟。将高氯酸加入样品使最终浓度为500mM，然后使反应停止。在16,000xg下，将反应混合物离心20分钟。以5-30%线性梯度的乙腈为流动相，用Waters HPLC系统[717 plus自动进样器、515泵和Symmetry C18柱(4.6mmxl50mm， 5mm)]来纯化上清液(120fi1)。用Waters 486 UV检测器在254nm下检测EHMTIQ (lla)，用EMPOWER软件(Millipore Corporation, Milford，马萨诸塞州，美国)进行分析。
数据分析
用重复试验得到的数据计算平均值iSEM。用方差分析(单因素方差分析，one-way ANOVA)进行数据计算，并通过事后杜纳多重比较检验(post Dunnett's multiple comparison test)，对至少3个对照的结果进行比较。用PRISM (GraphPad软件，圣地亚哥，加州)进行所有的统计学分析。p值O.05被认为是显著的。
试验例l: EHMTIO(lla)的作用分析
对NO生成的抑制作用
为测定EHMTIQ (lla)是否抑制在激活的微生物细胞内NO的生成，在该试验中使用小鼠小胶质细胞系。用不同浓度的EHMTIQ (lla)处理脂多糖(LPS)剌激的BV-2细胞样品，然后测量样品的NO水平。结果如图1所示。
由图1可看出，LPS引起BV-2细胞的NO水平显著增加(为3.5±0.1倍)。此处，当用EHMTIQ (lla)处理细胞时，NO的水平与EHMTIQ (11a)浓度成反比。即，与没有用EHMTIQ处理的对照相比较，低浓度(5nm)EHMTIQ (lla)可以将LPS诱导的NO生成降低到63±4%。此外，高浓度(100nm) EHMTIQ (lla)可将NO的生成抑制到对照水平。只用EHMTIQ(11a)治疗并没有显示出任何细胞毒性(没有显示出)。测得EHMTIQ (11a)的ICso值为2.81 pm。
对源自NADPH氧化酶的过氧化物生成的作用小胶质细胞的激活导致NADPH氧化酶的激活和过氧化物的生成。因此，进行试验以测定EHMTIQ (lla)是否影响源自NADPH氧化酶的过氧化物的生成。用不同浓度的EHMTIQ (lla)处理LPS刺激的BV-2细胞样品，然后测量所释放的过氧化物水平。结果如图2所示。
参照图2，与未被激活的细胞相比较，LPS引起过氧化物的生成增加为3.0士0.3倍。此处，过氧化物的生成与EHMTIQ (lla)的浓度成反比。5pm或10pm EHMTIQ (lla)可以使过氧化物的生成降低到62±3.1%或65±3.1%。
3) 对TNF-a基因表达的作用
进行试验以测定EHMTIQ(lla)是否影响激活的小胶质细胞内TNF-a的生成。用不同浓度的EHMTIQ处理LPS-刺激的BV-2细胞样品(lla)，并通过RT-PCR估计TNF-a基因的表达。结果如图3所示。
由图3可看出，LPS诱导的TNF-a的mRNA水平显著增加(26士1倍)，与EHMTIQ (lla)的浓度成反比。低浓度(2.5nm)的EHMTIQ (lla)将mRNA水平降到统计学上的显著水平，具体而言，与只用LPS处理的对照相比较，5pm和100pm EHMTIQ (lla)分别使TNF-a的mRNA水平降低到74±1%和36±1%。
4) 对IL-IB基因表达的作用
进行试验以考察EHMTIQ (lla)是否影响激活的小胶质细胞内IL-1|3的生成。用不同浓度的EHMTIQ (11a)处理LPS-刺激的BV-2细胞样品，并通过RT-PCR估计IL-lp基因的表达。结果如图4所示。
由图4可看出，LPS引起IL-lp的mRNA水平显著增加(26±1倍)，与EHMTIQ (lla)浓度成反比。低浓度(2.5nm) EHMTIQ (lla)使mRNA水平降到74±0.7%，这在统计学上是显著的，而lOOum EHMTIQ (lla)使LPS的作用显著降低(pX).05，与未用EHMTIQ处理的对照相比较)。
5) 对C0X-2基因表达的作用
剌激前列腺素合成而导致对神经元的氧化应激的环氧合酶-2(COX-2)基因的表达由于小胶质细胞的激活而提高。用不同浓度的EHMTIQ (11a)处理LPS-剌激的BV-2细胞样品，并通过RT-PCR估计COX-2基因的表达。结果如图5所示。
由图5可看出，LPS弓I起COX-2的mRNA水平显著增加，与EHMTIQ(lla)浓度成反比。经证实，2.5pm、 5pm和10jim的EHMTIQ (lla)分别使COX-2的表达降低了 62±3%、 75±3%和83±2%。
6) 对iNOS基因表达的作用
进行试验以测定EHMTIQ(lla)是否影响iNOS基因的表达。用不同浓度的EHMTIQ (lla)处理LPS刺激的BV-2细胞样品，并通过RT-PCR估计iNOS基因的表达。结果如图6所示。
由图6可看出，与对照相比较，LPS引起iNOS基因的表达显著增加8.5倍。与只用LPS处理的对照相比较，用5pm和lOOpm EHMTIQ (lla)处理可分别将该增加抑制到82±1%和24±1%。
7) 对GTPCH基因表达的作用
GTP环化水解酶I (GTPCH)在四氢生物蝶呤(BH4)的合成中是限速酶，所述BH4对iNOS催化很重要。因此，GTPCH的下调可以降低NO的生成。进行试验以测定EHMTIQ(lla)是否影响LPS引起的GTPCH基因的表达。用不同浓度的EHMTIQ (lla)处理LPS刺激的BV-2细胞样品，并通过RT-PCR估计GTPCH基因的表达。结果如图7所示。
由图7可看出，GRPCH的mRNA水平通过LPS增加36.2倍，但是与EHMTIQ (lla)浓度成反比。低浓度(2.5nm) EHMTIQ (lla)可以将GTPCH的基因表达降低17±1%，而100pm EHMTIQ (lla)可将其降低75±1%。 EHMTIQ (lla)本身与GTPCH的催化不直接相关(没显示出)。
8) 对NF-kB转移到细胞核的作用
转录因子NF-kB转移到细胞核中以调节几种炎性基因的表达。因此，进行试验以测定EHMTIQ (lla)是否抑制NF-kB转移到细胞核中。只用LPS处理、或用LPS和不同浓度的EHMTIQ(lla)处理细胞样品，对各细胞核组分进行电泳和Western印迹以分析NF-kB p65。结果如图8所示。由图8可看出，虽然在对照中未检测出，但是在LPS处理的样品中NF-kB的表达增加，然而，在10pm EHMTIQ (lla)存在下，却被完全抑制。
9) 清除自由基的活性
激活的小胶质细胞产生的自由基引起氧化应激和蛋白、核酸和神经元脂质的结构变化，从而导致细胞损伤。因此，进行试验以测定EHMTIQ(lla)是否具有清除自由基的活性。由图9可看出，清除DPPH游离基的活性与EHMTIQ (lla)的浓度成正比。
10) 保护神经元免受免疫伤害导致其死亡的作用
进行试验以测定EHMTIQ (lla)是否保护多巴胺能细胞免受激活的小胶质细胞释放的炎性物质引起的伤害。将SK-N-BE(2)C细胞转移到含有LPS刺激的BV-2细胞所释放的物质的培养基中，通过培养基含有的LDH活性来测量细胞死亡率，并与用EHMTIQ (lla)处理的BV-2培养基中的细胞死亡率相比较。
由图IO可看出，在含有LPS刺激的BV-2细胞所释放物质的培养基中，49±10%的SK-N-BE(2)C细胞受到伤害。然而，当用5pm EHMTIQ(lla)+LPS处理的BV-2细胞得到的培养基处理SK-N-BE(2)C细胞时，细胞损伤率被减少(p〉0.05，与未用EHMRIQ处理的对照相比较)。
11) 药物稳定性
因为几乎所有的微小分子均被肝内的酶降解，所以药物对这些酶的稳定性非常重要。为体内评价EHMTIQ (lla)的生物利用度，在与肝微粒体接触后，测量肝微粒体酶对EHMTIQ (lla)的降解率，并与剩余的EHMTIQ平衡。
由图11可看出，接触30分钟后仍有几乎95%的EHMTIQ (lla)剩余，显示出该化合物对肝酶具有相当大的稳定性。接触2小时后，约12.52%的EHMTIQ被降解，显示出如果时间充裕，在体内它可被肝酶完全降解。计算得到EHMTIQ的降解率为1.115±0.203 nmole (EHMTIQ)/分钟/mg (肝内微粒体蛋白)。
实施例4: TI0衍生物对N0和BH4生成的抑制作用根据所述方法合成20种四氢异喹啉(TIQ)衍生物，并且进行如下的NO和BH4的生成以及细胞毒性对BV-2激活的小胶质细胞的作用的试验。
工业实用性
结果，本发明化合物作为治疗炎性和神经退行性疾病的药物是有效的。
尽管参照某些实施例对本发明进行了说明和描述，但是本领域技术人员可以理解，在不脱离所附权利要求书限定的本发明的精神和范围内，可以对本发明的形式和细节进行各种改变。
权利要求
1.一种用于预防和治疗退行性疾病的式1所示的7-羟基-6-甲氧基-1，2，3，4-四氢异喹啉衍生物，[式1]其中，R1选自由H、CH3、CH2CH3、CH2CH2CH3、CH(CH3)2、CH2CH(CH3)2、Ph、CH2Ph、环丁基、环丙基和环己基组成的组，R2选自由CH3、CH2CH3、CH2CH2CH3、CH2CH2CH2CH3、CH2Ph、CH2CH2Ph、COCH3(Ac)、COCH2CH3、COCH2CH2CH3、COCH(CH3)2、COCH2CH(CH3)2、环己基甲基和环己羰基组成的组。
2. —种用于预防和治疗炎性疾病的式1所示的7-羟基-6-甲氧基 -1，2,3,4-四氢异喹啉衍生物，[式1]<formula>formula see original document page 2</formula>其中，选自由H、 CH3、 CH2CH3、 CH2CH2CH3、 CH(CH3)2、 CH2CH(CH3)2、 Ph、CH2Ph、环丁基、环丙基和环己基组成的组，R2选自由CH3、CH2CH3、 CH2CH2CH3 、 CH2CH2CH2CH3 、 CH2Ph 、 CH2CH2Ph 、 COCH3(Ac)、 COCH2CH3、 COCH2CH2CH3、 COCH(CH3)2、 COCH2CH(CH3)2、环己基 甲基和环己羰基组成的组。
3. —种具有保护神经元作用的式1所示的7-羟基-6-甲氧基 -1,2,3，4-四氢异喹啉衍生物，[式1]<formula>formula see original document page 3</formula>其中，R！选自由H、 CH3、 CH2CH3、 CH2CH2CH3、 CH(CH3)2、 CH2CH(CH3)2、 Ph、 CH2Ph、环丁基、环丙基和环己基组成的组，112选自由CH3、 CH2CH3、 CH2CH2CH3 、 CH2CH2CH2CH3 、 CH2Ph 、 CH2CH2Ph 、 COCH3(Ac)、 COCH2CH3、 COCH2CH2CH3、 COCH(CH3)2、 COCH2CH(CH3)2、环己基甲基和环己羰基组成的组。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的衍生物，其中，P^是H， R2 是Ac。
5. 根据权利要求1-3中任一项所述的衍生物，其中，Rt是CH3， R2是Ac。
6. 根据权利要求1-3中任一项所述的衍生物，其中，P^是CH2CH3， R2是Ac。
7. 根据权利要求1-3中任一项所述的衍生物，其中，Ri是 CH2CH2CH3， R:s是Ac。
8. 根据权利要求1-3中任一项所述的衍生物，其中，&是 CH(CH3)2， R2是Ac。
9. 根据权利要求1-3中任一项所述的衍生物，其中，R！是 CH2CH(CH3)2， Rz是Ac。
10. 根据权利要求1-3中任一项所述的衍生物，其中，Ri是Ph， R2 是Ac。
11. 根据权利要求1-3中任一项所述的衍生物，其中，R^是CH2Ph， R2是Ac。
12. 根据权利要求1-3中任一项所述的衍生物，其中，！^是环丙基， R2是Ac。
13. 根据权利要求1-3中任一项所述的衍生物，其中，R!是环丁基， R2是Ac。
14. 根据权利要求1-3中任一项所述的衍生物，其中，Ri是环己基， R2是Ac。
15. 根据权利要求1-3中任一项所述的衍生物，其中，R,是H， R2 是COCH2CH3。
16. 根据权利要求1-3中任一项所述的衍生物，其中，R4是H， R2 是COCH2CH2CH3。
17. 根据权利要求1-3中任一项所述的衍生物，其中，R是H， R2 是COCH(CH3)2。
18. 根据权利要求1-3中任一项所述的衍生物，其中，R^是H， R2 是COCH2CH(CH3)2。
19. 根据权利要求1-3中任一项所述的衍生物，其中，Ri是H， R2 是环己羰基。
20. 根据权利要求1-3中任一项所述的衍生物，其中，R^是H， R2是CH2CH3 o
21. 根据权利要求1-3中任一项所述的衍生物，其中，Ri是H， R2 是CH2CH2CH3。
22. 根据权利要求1-3中任一项所述的衍生物，其中，F4是H， R2 是CH2CH2CH2CH3。
23. 根据权利要求1-3中任一项所述的衍生物，其中，R,是H， R2 是环己基甲基。
24. 根据权利要求1-3中任一项所述的衍生物，其中，Ri是H， R2 是CH2Ph。
25. 根据权利要求1-3中任一项所述的衍生物，其中，Ri是H， R2 是CH2CH2Ph。
26. 根据权利要求1所述的衍生物，其中，所述退行性疾病包括神 经退行性疾病和关节炎。
全文摘要
本发明提供7-羟基-6-甲氧基-1，2，3，4-四氢异喹啉衍生物及其合成方法。所述化合物显著抑制激活的小胶质细胞内一氧化氮(NO)和过氧化物的生成，并且抑制TNF-α、IL-1β诱导性NO合成酶和环氧合酶-2基因的表达。这些衍生物还防止NF-kB转移到细胞核，减少活性氧(ROS)、抑制GTP环化水解酶I基因的表达和四氢生物蝶呤(BH₄)的过量生成，以及保护多巴胺能神经元免受激活的小胶质细胞引起的伤害。因此，所述化合物对治疗炎性和神经退行性疾病有效。
文档编号A61K31/472GK101553229SQ200780045274
公开日2009年10月7日 申请日期2007年12月10日 优先权日2006年12月8日
发明者孙孝真, 徐载雄, 池大润, 黄温裕 申请人:蔚山大学校产学协力团