专利名称：苯并吡喃酮化合物,其组合物以及用其进行治疗的方法
本申请要求2003年9月15日提交的美国临时申请号60/503,295的优先权，该申请被全文纳入本文作为参考。
1.发明领域本发明涉及苯并吡喃酮化合物，含有有效量的苯并吡喃酮化合物的组合物，以及治疗或预防骨再吸收疾病、肿瘤性疾病、关节炎、在雌激素存在时恶化的疾病或在雌激素存在时改善的疾病的方法，该方法包括给予有此需要的患者有效量的苯并吡喃酮化合物；还涉及激活骨细胞中雌激素受体(″ER″)的功能，抑制癌细胞内ER的功能，抑制细胞内白细胞介素-6(″IL-6″)的表达，以及抑制肿瘤细胞生长的方法，该方法包括使细胞接触有效量的苯并吡喃酮化合物。
2.发明背景雌激素对于女性和男性的组织有许多作用。这些生物作用多数是正面的，包括维持骨密度、心血管保护、中央神经系统(″CNS″)功能以及保护器官系统不受老龄化影响。然而，除了其正面作用，雌激素还是乳腺和子宫内膜的潜在生长因子，这使患癌症的风险增加。
直到最近，人们都认为雌激素结合细胞内的单一ER。如下所述，当克隆出了第二种ER(ER-β)(原来的那种ER被称为ER-α)并且发现了调节ER应答的辅助因子时，这种简单的观点被完全改变了。配体可结合两种不同的ER，在存在组织特异性共激活物和/或共阻遏物时，这两种不同的ER结合基因调节区的雌激素应答元件或结合其它转录因子。由于ER信号的复杂性以及ER-α和ER-β和它们的辅因子组织特异性表达，所以现在知道了ER配体可作为雌激素激动剂和拮抗剂，其以组织特异性方式模拟雌激素的正面作用或阻抑负面作用。这使得我们发现了一类全新的称为选择性雌激素受体调节剂(Selective Estrogen Receptor Modulator)或SERM的药物。这些药物具有显著的预防和/或治疗癌症和骨质疏松，以及心血管疾病和阿耳茨海默病等神经变性疾病的潜能。
骨再吸收疾病，如骨质疏松，是影响许多人群的衰老症状，且其治疗方法有限。例如，在美国，50岁以上的人中约有50％的女性和约10％的男性患有骨质疏松。在患骨质疏松的个体中，骨物质流失增加使骨骼脆弱，其结果是骨折风险增加。其它骨再吸收疾病，诸如佩吉特病和转移性骨癌，也有类似症状。
骨骼是一种含有多种不同类型细胞的活组织。在健康个体中，成骨细胞制造的骨骼的量与破骨细胞排除或再吸收的骨骼的量平衡。在患有骨再吸收疾病的个体中，这两种类型细胞的功能不平衡。这种不平衡可能的最常见的例子是绝经后妇女的骨再吸收迅速增加。这种加速的骨骼流失是与绝经有关的雌激素缺乏造成的。然而，雌激素的流失如何导致骨再吸收增加的机制一直在争论之中。
最近，研究人员认为，白细胞介素-1(″IL-1″)和肿瘤坏死因子(″TNF″)等骨再吸收细胞因子的增加可能是绝经后骨流失的原因(Kimble等，J.Biol.Chem.27128890-28897，1996)，且这些细胞因子的抑制剂可部分减少啮齿类动物卵巢切除术后的骨流失(Pacific J.Bone Miner Res.111043-1051，1996)。此外，曾报道停止产生雌激素会使鼠科动物的骨髓和骨细胞分泌IL-6增加(Girasole等，J.Clin.Invest.89883-891，1992；Jilka等，Science25788-91，1992；Kimble等，Endocrinology 1363054-3061，1995；Passseri等，Endocrinology 133822-828，1993)，IL-6的抗体可抑制雌激素衰竭小鼠破骨细胞前体的增加(Girasole等，同上)，且在缺乏IL-6的转基因小鼠中不会发生卵巢切除术后的骨流失(Poli等，EMBO J.131189-1196，1994)。
已有的减缓骨流失的治疗通常包括施用雌激素、二磷酸盐、降钙素和雷洛昔芬之类的化合物。但是，这些化合物通常用于长期治疗，并有不良副作用。此外，这种治疗通常会导致成熟的破骨细胞活化而不是减少它们的形成。例如，雌激素诱导破骨细胞凋亡而降钙素使破骨细胞缩小并从骨表面分离(Hughes等，Nat.Med.21132-1136，1996；Jilka等，Exp.Hemato.23500-506，1995)。同样，二磷酸盐降低破骨细胞活性，改变其形态并增加破骨细胞的凋亡(Parfitt等，J.Bone MinerRes.11150-159，1996；Suzuki等，Endocrinology 1374685-4690，1996)。
还认为细胞因子也在各种癌症中扮演重要角色。例如，研究人员显示，IL-6在前列腺癌中是自分泌/旁分泌生长因子(Seigall等，Cancer Res.507786，1999)，可提高肿瘤的存活率(Okamoto等，Cancer Res.57141-146，1997)，而且中和IL-6抗体会减少细胞增殖(Okamoto等，Endocrinology1385071-5073，1997；Borsellino等，Proc.Annu.Meet.Am.Assoc.Cancer Res.37A2801，1996)。据报道，IL-6对于多发性骨髓瘤(Martinez-Maza等，Res.Immunol.143764-769，1992；Kawano等，Blood 73517-526，1989；Zhang等，Blood 7411-13，1989；Garrett等，Bone 20515-520，1997；和Klein等，Blood 781198-12-4，1991)，肾细胞癌(Koo等，Cancer Immunol.3597-105，1992；Tsukamoto等，J.Urol.1481778-1782，1992；和Weissglas等，Endocrinology 1381879-1885，1997)以及宫颈癌(Estuce等，Gynecol.Oncol.5015-19，1993；Tartour等，Cancer Res.546243-6248，1994；和Iglesias等，Am.J.Pathology 146944-952，1995)也产生类似的效果。
此外，还认为IL-6与关节炎有关，尤其是佐剂、胶原和抗原诱发性关节炎(Alonzi等，J.Exp.Med.187146-148，1998；Ohshima等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 958222-8226，1998；和Leisten等，Clin.Immunol.Immunopathol56108-115，1990)，有报道用抗-IL-6抗体来治疗关节炎(Wendling等，J.Rheumatol.20259-262，1993)。此外，已显示雌激素在小鼠中可诱导抑制试验性自身免疫脑脊髓炎和胶原诱发性关节炎(Jansson等，Neuroimmunol.53203-207，1994)。
还显示细胞因子IL-6是一种重要的诱导破骨细胞形成的因子(Girasole等，同上；Jilka等(1992)，同上；Jilka等(1995)，同上；Kimble等(1995)，同上；Pacifici等，同上；和Passeri等，同上)。其它研究人员显示，施用中和抗体、反义寡聚物或IL-6的Sant 5拮抗物减少了卵巢切除小鼠脊柱骨中破骨细胞的数目(Devlin等，J.Bone Miner 13393-399，1998；Girasole等，同上；Jilka等(1992)，同上；和Schiller等，Endocrinology1384567-4571，1997)，人巨细胞吸收牙质的能力(Ohsaki等，Endocrinology1312229-2234，1993；和Reddy等，J.Bone Min.Res.9753-757，1994)，以及正常人骨髓培养物中破骨细胞的形成。还发现雌激素通过雌激素受体和转录因子NF-κB和C/EBPβ间的相互作用而下调了IL-6启动子的活性(Stein等，Mol.Cell Biol 154971-4979，1995)。
已认为粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(″GM-CSF″)在破骨前体细胞的增殖中发挥作用。在人或小鼠骨髓细胞或外周血细胞的长期培养物中，GM-CSF促进破骨细胞形成(Kurihara等，Blood 741295-1302，1989；Lorenzo等，J.Clin.Invest.80160-164，1987；MacDonald等，J.Bone Miner 1227-233，1986；和Shinar等，Endocrinology 1261728-1735，1990)。从绝经后妇女或停止雌激素治疗的妇女中分离的骨髓细胞与从绝经前妇女中分离的细胞相比，表达较高水平的GM-CSF(Bismar等，J.Clin.Endocrinol.Metab.803351-3355，1995)。已显示在整形外科植入物糜烂的患者中，GM-CSF的表达与骨再吸收性破骨细胞的分布有关(Al-Saffar等，Anatomic Pathology105628-693，1996)。
如上所述，以前一直认为雌激素结合细胞内的单一ER，造成构象改变而从热激蛋白释放，并使二聚体受体与各种基因启动子区域内的所谓雌激素应答元件结合。而且，药理学家通常认为非甾类小分子配体与ER竞争结合雌激素，在表达雌激素受体的各种组织内作为拮抗剂或激动剂。因此，通常仅将这种配体分为拮抗剂或激动剂。现在认为这是不不正确的。
现在认为，雌激素通过基因表达调节细胞药理学，而雌激素的作用由雌激素受体介导。如上所述，现在有两种雌激素受体，ER-α和ER-β。雌激素受体对基因调节的作用可通过以下两种途径来介导使ER直接结合雌激素雌激素应答元件(ERE)—″经典途径″(Jeltsch等，Nucleic Acids Res.151401-1414，1987；Bodine等，Endocrinology 1392048-2057，1998)，使ER结合NF-κB、C/EBP-β或AP-1等其它转录因子—″非经典途径″(Stein等，Mol.Cell Biol.154971-4979，1995；Paech等，Science 2771508-1510，1997；Duan等，Endocrinology 1391981-1990，1998)，并可经过可能包括质膜ER的核外雌激素受体信号转导而通过非基因组效应来介导(Nadal，A.等，Trends in Pharmacological Sciences 22597-599，2001；Wyckoff，M.H.等，J.Biol.Chem.27627071-27076，2001；Chung，Y-L.等，Int.J.of Cancer97306-312，2002；Kelly，M.J.等，Trends Endocrinol.Metab.10369-374，1999；Levin，E.R.等，Trends Endocrinol.Metab.10374-377，1999)。
最近几年的研究进展显示，ER与共激活物(例如SRC-I、CBP和SRA)和共阻遏物(例如SMRT和N-CoR)有关联，它们也以组织特异性和配体特异性方式调节ER的转录活性。在这种情况下，ER与调节这些基因的关键转录因子相互作用。已知可由ER调节活性的转录因子包括，例如AP-1、NF-κB、C/EBP和Sp-1。此外，已鉴定出了孤核受体，如雌激素受体相关受体a、b、g(ERR-a、ERR-b、ERR-g)。尽管雌二醇显示不是ERR的配体，但一些SERM和其它传统ER配体已显示出以高亲和力结合这些受体(Coward，P.等，Proc.Natl Acad.Sci.988880-8884，2001；Lu，D.等，CancerRes.616755-6761，2001；Tremablay，G.B.等，Endocrinology 1424572-4575，2001；Chen，S.等，J.Biol.Chem.27628465-28470，2001)。
此外，由于缺乏好的ER-β抗体，因此主要是通过RT-PCR或原位杂交进行分析，分析显示ER-α和ER-β既有重叠又有不同的组织分布。然而，由于用来测量ER的方法、所分析的物种(大鼠、小鼠、人类)和/或分离的原代细胞的分化状态，其中一些结果是有争议的。通常组织既表达ER-α，也表达ER-β，但是这些受体定位在不同的细胞型中。此外，一些组织(如肾脏)仅含有ER-α，而其它组织(如子宫、垂体和副睾(epidymis))中ER-α占很大优势(Couse等，Endocrinology 138，4613-4621，1997；Kuiper等，Endocrinology138，863-870，1997)。相反，表达高水平ER-β的组织包括前列腺、睾丸、卵巢和大脑的某些区域(Brandenberger等，J.Clin.Endocrinol.Metab.83，1025-8，1998；Enmark等，J.Clinic.Endocrinol.Metabol.82，4258-4265，1997；Laflamme等，J.Neurobiol.36，357-78，1998；Sar和Welsch，Endocrinology 140，963-71，1999；Shughrue等，Endocrinology 138，5649-52，1997a；Shughrue等，J.Comp.Neurol.388，507-25，1997b)。
ER-α(Korach，Science 266，1524-1527，1994)和ER-β(Krege等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 95，15677-82，1998)敲除小鼠的建立还证实了ER-β在不同组织中有不同的功能。例如，ER-α敲除小鼠(雄性和雌性)是不育的，雌性不显示性感受性而雄性不具有典型的雄性侵略性行为(Cooke等，Biol.Reprod.59，470-5，1998；Das等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 94，12786-12791，1997；Korach，1994；Ogawa等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 94，1476-81，1997；Rissman等，Endocrinology 138，507-10，1997a；Rissman等，Horm.Behav.31，232-243，1997b)。此外，这些动物的大脑仍以与野生型动物类似的模式对雌激素进行应答(Shughrue等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 94，11008-12，1997c)，而雌激素仍抑制由于机械伤害造成的血管损伤(Iafrati等，Nature Med.3，545-8，1997)。相反，缺乏ER-β的小鼠发育正常，能生育并且显示正常的性行为，但相比野生型小鼠每窝产仔较少且较小(Krege等，1998)，乳腺发育正常且泌乳正常。生育力降低被认为是卵巢功效降低的结果，而ER-β是卵巢中主要的ER形式，它位于成熟滤泡的粒层细胞中。
总之，早就知道作为雌激素拮抗剂或激动剂的化合物在治疗多种雌激素相关症状中的医药用途，所述症状包括与脑、骨、心血管系统、皮肤、毛囊、免疫系统、膀胱和前列腺有关的症状(Barkhem等，Mol.Pharmacol.54，105-12，1998；Farhat等，FASEB J.10，615-624，1996；Gustafsson，Chem.Biol.2，508-11，1998；Sun等，1999；Tremblay等，Endocrinology 139，111-118，1998；Turner等，Endocrinology 139，3712-20，1998)。此外，已描述了多种乳腺和非乳腺癌细胞表达ER，并且作为具体雌激素拮抗剂的靶组织(Brandenberger等，1998；Clinton和Hua，Crit.Rev.Oncol.Hematol.25，1-9，1997；Hata等，Oncology 55增刊1，35-44，1998；Rohlff等，Prostate 37，51-9，1998；Simpson等，J Steroid Biochem Mol Biol 64，137-45，1998；Yamashita等，Oncology 55学刊1，17-22，1998)。
近年来已经开发了许多与ER相互作用的甾类和非甾类化合物。例如，他莫昔芬最初是作为抗雌激素药并用来治疗乳腺癌，但最近发现它在子宫、骨和心血管系统内可作为部分雌激素激动剂。雷洛昔芬是另一种曾建议作为SERM的化合物，但已证实可用来治疗骨质疏松。
他莫昔芬雷洛昔芬还报道了雷洛昔芬的类似物(Grese等，J.Med.Chem.40146-167，1997)。
至于香豆素基化合物，已经提到了许多结构，包括以下这些美国专利号6,291,456、6,331,562和6,593,322；Roa等，Synthesis 887-888，1981；Buu-Hoi等，J.Org.Chem.191548-1552，1954；Gupta等，Indian J.Exp.Biol.23638-640，1985；公开的PCT申请号WO 96/31206；Verma等，Indian J.Chem.32B239-243，1993；Lednicer等，J.Med.Chem.8725-726，1965；Micheli等，Steroids 5321-335，1962；Brandt等，Int.J.QuantumChemistryQuantum Biol.Symposia 13155-165，1986；Wani等，J.Med.Chem.18982-985，1975；Pollard等，Steroids 11897-907，1968。
因此，本领域需要改进的化合物用来治疗或预防骨再吸收疾病、肿瘤性疾病、关节炎、在雌激素存在时恶化的疾病或在雌激素存在时改善的疾病；用来激活骨细胞中ER的功能，抑制癌细胞内ER的功能，抑制细胞内IL-6的表达，和抑制肿瘤细胞生长。
本申请第2部分引用和提到的任何参考资料不能认为是本申请的现有技术。
3.发明概述本发明涉及具有以下结构式(I)的化合物及其药学上可接受的盐 式中X和Y独立地为氢、卤素或(卤代)(C1-6烷基)；n是1、2或3；和以下情况之一(a)R1是氢，R2是卤素、羟基、-(C1-6烷基)、乙烯基、-(C2-6炔基)、-C(O)O(C1-6烷基)、-(羟基)(C1-6烷基)、-(氨基)(C1-6烷基)、-(CH2)m-O-(C1-6烷基)、-C(O)(C1-6烷基)、-(CH2)m-苯基、-(3到7元单环杂环)、-COOH、-C(O)H或-CN；
(b)R2是氢，R1是卤素、羟基、-(C1-6烷基)、-(C2-6烯基)-(C2-6炔基)、-C(O)O(C1-6烷基)、-(羟基)(C1-6烷基)、-(氨基)(C1-6烷基)、-(CH2)m-O-(C1-6烷基)、-C(O)(C1-6烷基)、-(CH2)m-苯基、-(3到7元单环杂环)、-COOH、-C(O)H或-CN；或(c)R1和R2是-CH3。
式(I)的化合物或该化合物的药学上可接受的盐(都是″苯并吡喃酮化合物″)被用来治疗或预防骨再吸收疾病、肿瘤性疾病、关节炎、在雌激素存在时恶化的疾病或在雌激素存在时改善的疾病；激活骨细胞中ER的功能；抑制癌细胞内ER的功能；抑制细胞内IL-6的表达；和抑制肿瘤细胞生长。
本发明还涉及含有有效量的苯并吡喃酮化合物以及药学上可接受的载体或运载体的组合物。所述组合物被用于治疗或预防骨再吸收疾病、肿瘤性疾病、关节炎、在雌激素存在时恶化的疾病或在雌激素存在时改善的疾病；激活骨细胞中ER的功能；抑制癌细胞内ER的功能；抑制细胞内IL-6的表达；和抑制肿瘤细胞生长。
本发明还涉及制备苯并吡喃酮化合物的方法，所述方法包括使具有结构式(II)的化合物或其药学上可接受的盐去甲基化 式中，R1、R2、X、Y和n如上文对苯并吡喃酮化合物的定义。
本发明还涉及治疗或预防骨再吸收疾病的方法，该方法包括给予需要这种治疗或预防的患者有效量的苯并吡喃酮化合物。
本发明还涉及治疗或预防肿瘤性疾病的方法，该方法包括给予需要这种治疗或预防的患者有效量的苯并吡喃酮化合物。
本发明还涉及治疗或预防关节炎的方法，该方法包括给予需要这种治疗或预防的患者有效量的苯并吡喃酮化合物。
本发明还涉及治疗或预防在雌激素存在时恶化的疾病的方法，该方法包括给予需要这种治疗或预防的患者有效量的苯并吡喃酮化合物。
本发明还涉及治疗或预防在雌激素存在时改善的疾病的方法，该方法包括给予需要这种治疗或预防的患者有效量的苯并吡喃酮化合物。
本发明还涉及激活骨细胞中ER的功能的方法，该方法包括使该骨细胞接触有效量的苯并吡喃酮化合物。
本发明还涉及抑制癌细胞内ER的功能的方法，该方法包括使该细胞接触有效量的苯并吡喃酮化合物。
本发明还涉及抑制细胞内IL-6的表达的方法，该方法包括使能够表达ER和IL-6的细胞接触有效量的苯并吡喃酮化合物。
本发明还涉及抑制肿瘤细胞生长的方法，该方法包括使能够表达ER的肿瘤细胞接触有效量的苯并吡喃酮化合物。
本发明还涉及治疗或预防子宫内膜异位症、心血管疾病、高胆固醇血症、前列腺肥大、前列腺癌、肥胖、潮红、皮肤效应、情绪波动、失忆、绝经期综合征、脱发(秃发)、II型糖尿病、阿耳茨海默病、尿失禁、胃肠道疾病、损伤后血管保护、CNS效应、痤疮、白内障、多毛症、多发性骨髓瘤或淋巴瘤的方法，该方法包括给予需要这种治疗或预防的患者有效量的如权利要求1所述的化合物或该化合物的药学上可接受的盐。
本发明还涉及预防精子发生或与暴露于环境化学或天然激素失调有关的不良生殖影响的方法，该方法包括给予需要这种预防的患者有效量的苯并吡喃酮化合物。
通过参考发明详述和实施例可更全面地理解本发明，实施例是本发明非限制性实施方案的举例说明。
4.发明详述4.1定义″-(C1-6烷基)″是含有1-6个碳原子的饱和直链或支链非环状烃。代表性的-(C1-6烷基)包括-甲基、-乙基、-正丙基、-正丁基、-正苯基和-正己基；而饱和的支链烷基包括-异丙基、-仲丁基、-异丁基、-叔丁基、-异苯基、2-甲基丁基、3-甲基丁基、2-甲基苯基、3-甲基苯基、4-甲基苯基、2，3-二甲基丁基等。
″-(C2-6烯基)″是含有2-6个碳原子并含有至少一个碳碳双键的直链或支链非环状烃。代表性的-(C2-6烯基)包括-乙烯基、-烯丙基、-1-丁烯基、-2-丁烯基、-异丁烯基、-1-戊烯基、-2-戊烯基、-3-甲基-1-丁烯基、-2-甲基-2-丁烯基、-2，3-二甲基-2-丁烯基、-1-己烯基、-2-己烯基、-3-己烯基等。烯基的双键可与其它不饱和基团不共轭或共轭。
″乙烯基″是-CH＝CH2。
″-(C2-6炔基)″是含有2-6个碳原子并含有至少一个碳碳三键的直链或支链非环状烃。代表性的-(C2-6炔基)包括-乙炔基、-丙炔基、-1-丁炔基、-2-丁炔基、-1-戊炔基、-2-戊炔基、-3-甲基-1-丁炔基、-4-戊炔基、-1-己炔基、-2-己炔基、-5-己炔基等。炔基的三键可与其它不饱和基团不共轭或共轭。
″-C(O)O(C1-6烷基)″，其中的-(C1-6烷基)如上文定义，的例子包括但不限于-C(O)OCH3、-C(O)OCH2CH3、-C(O)O(CH2)2CH3、-C(O)OCH(CH3)CH3等。
″-(CH2)m-O-(C1-6烷基)″，其中的-(C1-6烷基)和m如上文定义，的例子包括但不限于-O-CH3、-CH2-O-CH3、-CH2-O-CH2CH3、-CH2-O-(CH2)2CH3、-(CH2)2-O-CH3、-(CH2)2-O-CH2CH3等。
″-C(O)(C1-6烷基)″，其中的-(C1-6烷基)如上文定义，的例子包括但不限于-C(O)CH3、-C(O)-CH2CH3、-C(O)-(CH2)2CH3、-C(O)-(CH2)3CH3、-C(O)-(CH2)4CH3、-C(O)-(CH2)5CH3等。
″-(CH2)m-苯基″，其中的m如上文定义，的例子包括但不限于-苯基、-CH2-苯基、-(CH2)2-苯基、-(CH2)3-苯基、-(CH2)4-苯基、-(CH2)5-苯基等。
″3到7元单环杂环″是含有至少一个选自O、N或S的原子并含有2-6个碳原子的单环基团，它可以是饱和、不饱和/或芳香的，包括(但不限于)吡咯烷基、吡咯基、吡唑基、氧杂环丁烷基、吡唑啉基、咪唑基、咪唑啉基、咪唑烷基、噁唑基、噁唑烷基、异噁唑啉基、异噁唑基、噻唑基、噻二唑基、噻唑烷基、异噻唑基、异噻唑烷基、呋喃基、四氢呋喃基、噻吩基、噁二唑基、哌啶基、哌嗪基、2-氧代哌嗪基、2-氧代哌啶基、2-氧代吡咯烷基、2-氧代氮杂基(2-oxazepinyl)、氮杂基、4-哌啶酮基、吡啶基、N-氧代-吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、哒嗪基、四氢吡喃基、四氢硫代吡喃基、四氢硫代吡喃基砜、吗啉基、硫代吗啉基、硫代吗啉基亚砜、硫代吗啉基砜、1，3-二氧戊环和四氢-1，1-二氧代噻吩基、二噁烷基、异噻唑烷基、thietanyl、硫杂丙环基、三嗪基和三唑基。
″-(氨基)(C1-6烷基)″是被1或2个氨基取代的上文定义的C1-6烷基。其例子包括但不限于-CH2-NH2、-CH2CH2NH2、-(CH2)3NH2、-(CH2)4NH2、-(CH2)5NH2、-CH2-(NH2)(CH2)5CH3、-CH-(NH2)(CH3)2、-CH-(NH2)(CH2CH3)2、-C-(NH2)((CH2)2CH3)2等。
″-(羟基)(C1-6烷基)″是被1或2个羟基取代的上文定义的C1-6烷基。其例子包括但不限于-CH2OH、-(CH2)2OH、-(CH2)3OH、-(CH2)4OH、-(CH2)5OH、-CH(OH)CH3、-CH(OH)CH2CH3、-CH2CH(OH)CH3等。
″卤素″是氟、氯、溴或碘。
″-(卤代)(C1-6烷基)″是被一个或多个卤素取代的上文定义的C1-6烷基。其例子包括但不限于-CF3、-CHF2、-CH2F、-CCl3、-CHCl2、-CBr3、-CHBR2、-CH2CF3、-CH2CHF2、-CH2CH2F等。
所述苯并吡喃酮化合物可具有手性中心并可作为外消旋物、单独的对映异构体或非对映异构体、以及它们的混合物出现。所有这些同分异构形式都包括在本发明之内，并包括它们的混合物。此外，一些苯并吡喃酮化合物可作为多晶型物存在，这也包括在本发明之内。此外，一些苯并吡喃酮化合物也可与水或其它有机溶剂形成溶剂化物。这种溶剂化物同样也在本发明的范围之内。
雌激素″激动剂″是一种在一种或多种细胞或组织内结合ER并激活ER的功能的化合物，而雌激素″拮抗剂″在一种或多种细胞或组织内结合ER并抑制ER的功能。ER包括ER-α、ER-β、ER-α或ER-β的同种型或突变体以及与ER有至少95％同源性的蛋白质。
术语″有效量″与苯并吡喃酮化合物联用表示能够实现以下效果的量治疗骨再吸收疾病、肿瘤性疾病、关节炎、在雌激素存在时恶化的疾病或在雌激素存在时改善的疾病；激活骨细胞中ER的功能；抑制癌细胞内ER的功能；抑制细胞内IL-6的表达；或抑制肿瘤细胞生长。
术语″有效量″与其它治疗剂联用表示能够实现以下效果的量治疗或预防骨再吸收疾病、肿瘤性疾病、关节炎、在雌激素存在时恶化的疾病或在雌激素存在时改善的疾病；激活骨细胞中ER的功能；抑制癌细胞内ER的功能；抑制细胞内IL-6的表达；或抑制肿瘤细胞生长，同时所述苯并吡喃酮化合物发挥其治疗或预防作用。
″患者″是动物，包括但不限于牛、猴、马、羊、猪、鸡、火鸡、鹌鹑、猫、狗、小鼠、大鼠、兔和豚鼠等动物，在一实施方案中是哺乳动物，在在另一实施方案中是人。
4.2苯并吡喃酮化合物本发明涉及具有以下结构式(I)的苯并吡喃酮化合物 式中，R1、R2、X、Y和n如上文定义。
在一实施方案中，所述苯并吡喃酮化合物的R1是氢。
在另一实施方案中，所述苯并吡喃酮化合物的R2是氢。
在另一实施方案中，所述苯并吡喃酮化合物的R1和R2都是-CH3。
在另一实施方案中，所述苯并吡喃酮化合物的R1和R2中的一个是-C(O)-(C1-6烷基)，而另一个是氢。
在另一实施方案中，所述苯并吡喃酮化合物的R1和R2中的一个是-C(O)H，而另一个是氢。
在另一实施方案中，所述苯并吡喃酮化合物的R1和R2中的一个是甲基，而另一个是氢。
在另一实施方案中，所述苯并吡喃酮化合物的R1是甲基，而R2是氢。
在另一实施方案中，所述苯并吡喃酮化合物的R2是甲基，而R1是氢。
在另一实施方案中，所述苯并吡喃酮化合物的R1和R2中的一个是CN，而另一个是氢。
在另一实施方案中，所述苯并吡喃酮化合物的R1和R2中的一个是-(羟基)(C1-6烷基)，而另一个是氢。
在另一实施方案中，所述苯并吡喃酮化合物的R1和R2中的一个是卤素，而另一个是氢。
在另一实施方案中，所述苯并吡喃酮化合物的R1是-(C2-6烯基)，而R2是氢。
在另一实施方案中，所述苯并吡喃酮化合物的R2是乙烯基，而R1是氢。
在另一实施方案中，所述苯并吡喃酮化合物的X和Y都是卤素。
在另一实施方案中，所述苯并吡喃酮化合物的X和Y都是氯。
在另一实施方案中，所述苯并吡喃酮化合物的X和Y都是三氟甲基。
在另一实施方案中，所述苯并吡喃酮化合物的X是氢，而Y是三氟甲基。
在另一实施方案中，所述苯并吡喃酮化合物的X是三氟甲基，而Y是氯。
在另一实施方案中，所述苯并吡喃酮化合物的X是氯，而Y是三氟甲基。
在另一实施方案中，所述苯并吡喃酮化合物的X是氢，而Y是卤素。
在另一实施方案中，所述苯并吡喃酮化合物的R1和R2中的一个是-C(O)-(C1-6烷基)，而另一个是氢，且X和Y都是卤素，如氯。
在另一实施方案中，所述苯并吡喃酮化合物的R1和R2中的一个是甲基，而另一个是氢，X和Y都是卤素，如氯。
在另一实施方案中，所述苯并吡喃酮化合物的R1和R2中的一个是甲基，而另一个是氢，X和Y中的一个是三氟甲基，另一个是氢。
在另一实施方案中，所述苯并吡喃酮化合物的R1和R2中的一个是-C(O)-(C1-6烷基)，而另一个是氢，X和Y中的一个是三氟甲基，另一个是氢。
在另一实施方案中，所述苯并吡喃酮化合物的R1和R2中的一个是CN，而另一个是氢，X和Y中的一个是三氟甲基，另一个是氢。
在另一实施方案中，所述苯并吡喃酮化合物的R1和R2中的一个是-CH(OH)-CH3，而另一个是氢，X和Y中的一个是三氟甲基，另一个是氢。
在另一实施方案中，所述苯并吡喃酮化合物的R1和R2中的一个是卤素，如溴，而另一个是氢，X和Y中的一个是三氟甲基，另一个是氢。
在另一实施方案中，所述苯并吡喃酮化合物的R1和R2中的一个是卤素，如碘，而另一个是氢，X和Y中的一个是卤素，如氯，另一个是氢。
在另一实施方案中，所述苯并吡喃酮化合物的R1是-CH2-CH＝CH2，R2是氢，X和Y中的一个是三氟甲基，另一个是氢。
在另一实施方案中，所述苯并吡喃酮化合物的R2是乙烯基，R1是氢，X和Y中的一个是三氟甲基，另一个是氢。
在另一实施方案中，所述苯并吡喃酮化合物的R1和R2中的一个是-CH2-NH2，而另一个是氢，X和Y中的一个是卤素，如氯，另一个是氢。
在另一实施方案中，所述苯并吡喃酮化合物的n是1。
4.3制备苯并吡喃酮化合物的方法所述苯并吡喃酮化合物可按照下面的方案1-23以及实施例1-9中的常规反应来制备。
方案1 上面的方案1步骤A-H的说明性实例见下文的实施例1。
方案2 上面的方案2步骤A-G的说明性实例见下文的实施例3。上面的方案2步骤H和I的说明性实例见下文的实施例4。
方案3 方案3的原料可按照下文实施例9中的描述来制备。
方案4 方案4的原料可按照上文方案2中的描述来制备。
方案5 方案5的原料可按照下文实施例9中的描述来制备。
方案6 方案6的原料可按照上文方案2中的描述来制备。
方案7 方案7的原料可按照上文方案2中的描述来制备。
方案8 方案8的原料可按照下文实施例9中的描述来制备。
方案9 方案9的原料可按照上文方案2中的描述来制备。
方案10 方案10的原料可按照下文实施例9中的描述来制备。
方案11
方案11的原料可按照上文方案9中的描述来制备。
方案12 方案12的原料可按照上文方案10中的描述来制备。
方案13 方案13的原料可按照上文方案2中的描述来制备。
方案14 方案14的原料可按照下文实施例9中的描述来制备。
方案15 方案15的原料可按照上文方案2中的描述来制备。
方案16 方案16的原料可用按下文实施例9的描述获得的物质通过执行上述方案2的步骤H获得。在0℃下用NaBH4处理相应的6-乙酰基-7-羟基色烯-2-酮的THF/MeOH溶液。反应完成之后对粗制的反应混合物进行纯化分离出所需产物。
方案17 方案17的原料可按照下文实施例9中的描述来制备。
方案18 方案18的原料可按照上述方案15来制备。在0℃下用NaBH4处理相应的8-乙酰基-7-羟基色烯-2-酮的THF/MeOH溶液。反应完成之后对粗制的反应混合物进行纯化分离出所需产物。
方案19 方案19的原料可按照上文方案2中的描述来制备。
方案20 方案20的原料可按照下文实施例9中的描述来制备。
方案21 方案21的原料可按照上文方案1中的描述来制备。
方案22 方案22的原料可按照上文方案5中的描述来制备。
方案23 方案23的原料可按照上文方案6中的描述来制备。
在一实施方案中，本发明涉及制备苯并吡喃酮化合物的方法，包括将结构式(II)的化合物或其药学上可接受的盐去甲基化
式中，R1、R2、X、Y和n如上文对苯并吡喃酮化合物的定义。
式(II)的化合物的去甲基化可用本领域已知的用来使酚甲基酯去甲基化的任何方法实现。这种方法的例子可在Greene，T.W.，Protective Groups inOrganic Synthesis，88-92(1981)中找到，该文献全文纳入本文作为参考。在一实施方案中，去甲基化是用以下方法进行的，该方法包括使式(II)的化合物接触约1.0-50.0摩尔当量的去甲基化试剂，如碘代三甲基硅烷、盐酸吡啶、氢溴酸(″HBr″)、盐酸、氢碘酸、BBr3、格氏试剂(例如RMgX、其中R是CH3、C2H5、C6H5等烃基团；X是氯、溴或碘等卤原子)、路易斯酸(如AlBt3、BF3、BCl3、B(CH)3、Zn(OH)2、AgCl等)或乙硫醇等亲核试剂。在一实施方案中，所述去甲基化试剂是HBr水溶液，它可在存在乙酸时使用。在另一实施方案中，去甲基化是通过在存在去甲基化试剂并任选地存在溶剂(包括羧酸)的情况下，在约室温至约200℃的温度下加热式(II)的化合物或其药学上可接受的盐实现的，在一实施方案中，是在约100℃至约160℃的温度下加热15分钟至约24小时。在一实施方案中，去甲基化反应容器是密封的，例如是密封管，以防止溶剂蒸发，尤其是当溶剂的沸点低于去甲基化反应温度时。从去甲基化反应物中直接分离盐可获得苯并吡喃酮化合物的酸式盐，其中的去甲基化试剂是，例如氢溴酸、盐酸或氢碘酸。用氢氧化钠之类的合适碱洗涤该酸式盐并分离游离碱化合物可得到游离碱形式。
所述苯并吡喃酮化合物可以以药学上可接受的盐的形式存在。可用酸处理苯并吡喃酮化合物的游离碱形式形成药学上可接受的酸式盐。合适的有机酸包括马来酸、延胡索酸、苯甲酸、抗坏血酸、琥珀酸、甲烷磺酸、苯磺酸、甲苯磺酸、乙酸、草酸、三氟乙酸、丙酸、酒石酸、水杨酸、柠檬酸、葡糖酸、乳酸、扁桃酸、肉桂酸、天冬氨酸、硬脂酸、棕榈酸、甲酸、乙醇酸、谷氨酸和苯磺酸。合适的无机酸包括盐酸、氢溴酸、硫酸、磷酸和硝酸。加成盐包括氯化物、溴化物、碘化物、硫酸氢盐、酸式磷酸盐、异烟酸盐、乳酸盐、酸式柠檬酸盐、油酸盐、鞣酸盐、泛酸盐、酸式酒石酸盐、龙胆酸盐、葡糖酸盐、葡糖二酸盐、碳酸盐、乙烷磺酸盐、对甲苯磺酸盐和双羟萘酸盐(即1，1′-亚甲基-双-(2-羟基-3-萘甲酸盐))。术语″药学上可接受的盐″包括任何及所有可接受的盐形式。
药学上可接受的盐可用常规的已知技术形成，例如使苯并吡喃酮化合物与上述合适的酸反应。这种盐通常是在温和温度下高产率形成的，且通常仅需在最终的合成步骤中从合适的酸性洗液中分离化合物即可制备。可以将形成盐的酸溶于合适的有机溶剂或水性有机溶剂，如烷醇、酮或酯中。另一方面，如果需要得到游离碱形式的苯并吡喃酮化合物，可以按照已知技术从碱性最终洗涤步骤中将其分离。例如，一种制备盐酸盐的典型技术是将游离碱溶于合适的溶剂，并充分干燥溶液(如通过分子筛)，然后在其中鼓入氯化氢气体。
4.4应用方法在一实施方案中，本发明涉及治疗或预防骨再吸收疾病的方法，包括给予需要这种治疗或预防的患者有效量的苯并吡喃酮化合物。尽管不希望受以下理论限制，尤其是在骨再吸收疾病部分，我们认为所述苯并吡喃酮化合物通过阻抑细胞因子产生和/或抑制破骨细胞形成来发挥其功能。可用所述苯并吡喃酮化合物来治疗或预防的具体骨再吸收疾病包括但不限于骨质疏松、转移性骨癌、高钙血症、整形外科植入物造成的溶骨性病变、佩吉特病以及与甲状旁腺功能亢进有关的骨流失。
在另一实施方案中，本发明涉及治疗或预防肿瘤性疾病的方法，包括给予需要这种治疗或预防的患者有效量的苯并吡喃酮化合物。在一实施方案中，所述肿瘤性疾病是癌。在一具体实施方案中，所述癌是头和颈、眼、皮肤、嘴、喉、食道、胸、骨、血、肺、结肠、乙状结肠、直肠、胃、前列腺、乳腺、卵巢、子宫、肾、肝、胰腺、脑、肠、心脏或肾上腺的癌症。在另一实施方案中，所述癌症是子宫内膜癌、多发性骨髓瘤、肾细胞癌或宫颈癌。所述苯并吡喃酮化合物尤其可用于治疗乳腺癌、子宫癌和卵巢癌。
所述苯并吡喃酮化合物可用于治疗或预防的其它癌症包括但不限于实体瘤、肉瘤、癌、纤维肉瘤、粘液肉瘤、脂肪肉瘤、软骨肉瘤、骨肉瘤、脊索瘤、血管肉瘤、内皮肉瘤、淋巴管肉瘤、淋巴管内皮肉瘤、滑膜瘤、间皮瘤、尤因瘤、平滑肌肉瘤、横纹肌肉瘤、结肠癌、胰腺癌、前列腺癌、鳞状细胞癌、基底细胞癌、腺癌、汗腺癌、皮脂腺癌、乳头状癌、乳头腺癌、囊腺癌、髓样癌、支气管癌、肾细胞癌、肝癌、胆管癌、绒毛膜癌、精原细胞瘤、胚胎性癌、肾母细胞瘤、宫颈癌、睾丸肿瘤、肺癌、小细胞肺癌、膀胱癌、上皮癌、胶质瘤、星形细胞瘤、髓母细胞瘤、颅咽管瘤、室管膜瘤、卡波西肉瘤、松果体瘤、成血管细胞瘤、听神经瘤、少突神经胶质瘤、menangioma、黑色素瘤、神经母细胞瘤、视网膜母细胞瘤、血液肿瘤、急性淋巴细胞白血病、急性淋巴细胞B细胞白血病、急性淋巴细胞T细胞白血病、急性粒细胞白血病、急性早幼粒细胞白血病、急性单核细胞白血病、急性红细胞白血病、急性成巨核细胞白血病、急性髓性单核细胞白血病、急性非淋巴细胞白血病、急性未分化性白血病、慢性粒细胞性白血病、慢性淋巴细胞性白血病、多毛细胞白血病或多发性骨髓瘤。
在另一实施方案中，本发明涉及治疗或预防关节炎的方法，包括给予需要这种治疗或预防的患者有效量的苯并吡喃酮化合物。在一实施方案中，所述关节炎是佐剂、胶原、细菌或抗原诱发性关节炎。在另一实施方案中，所述关节炎是风湿性关节炎。
在另一实施方案中，本发明涉及治疗或预防在雌激素存在时恶化的疾病的方法，包括给予需要这种治疗或预防的患者有效量的苯并吡喃酮化合物。在一实施方案中，所述在雌激素存在时恶化的疾病是乳腺癌、卵巢癌或子宫癌。在一实施方案中，所述雌激素是内源的。在另一实施方案中，所述雌激素是外源的。
在另一实施方案中，本发明涉及治疗或预防在雌激素存在时改善的疾病的方法，包括给予需要这种治疗或预防的患者有效量的苯并吡喃酮化合物。在一实施方案中，所述患者的在雌激素存在时改善的疾病是骨再吸收疾病。在一实施方案中，所述患者的在雌激素存在时改善的疾病是骨质疏松、转移性骨癌、高钙血症、整形外科植入物造成的溶骨性病变、佩吉特病以及与甲状旁腺功能亢进有关的骨流失。在一实施方案中，所述雌激素是内源的。在另一实施方案中，所述雌激素是外源的。
在另一实施方案中，本发明涉及治疗或预防子宫内膜异位症、高胆固醇血症、前列腺肥大、前列腺癌、肥胖、潮红、皮肤效应(如皮肤干燥、产生皱纹、变薄或失去弹性)、情绪波动、失忆、绝经期综合征、脱发(秃发)、II型糖尿病、阿耳茨海默病、尿失禁、胃肠道疾病(如克罗恩病或过敏性肠综合征)、损伤后血管保护、CNS效应(如潮红或失忆)、痤疮或白内障的方法，包括给予需要这种治疗或预防的患者有效量的苯并吡喃酮化合物。不局限于任何具体理论，申请人认为上述症状在雌激素存在时得到改善。
在另一实施方案中，本发明涉及治疗或预防心血管疾病、多毛症、多发性骨髓瘤或淋巴瘤的方法，包括给予需要这种治疗或预防的患者有效量的苯并吡喃酮化合物。不局限于任何具体理论，申请人认为上述症状在雌激素存在时恶化。
在另一实施方案中，本发明涉及预防精子发生的方法，包括给予需要这种预防的患者有效量的苯并吡喃酮化合物。
在另一实施方案中，本发明涉及预防与暴露于环境化学或天然激素失调有关的不良生殖影响(如出生缺陷、流产或自然流产)的方法，包括给予需要这种预防的患者有效量的苯并吡喃酮化合物。
在另一实施方案中，所述苯并吡喃酮化合物被用于口服避孕；防止先兆性流产或习惯性流产；减轻痛经；减轻功能障碍性子宫出血；减轻子宫内膜异位症；帮助卵巢发育；减少妇女体毛过度生长(多毛症)；预防或治疗动脉粥样硬化；以及抑制产后泌乳。所述苯并吡喃酮化合物还对血浆脂质水平具有有益作用，因此可用于治疗和预防高胆固醇血症。
在另一实施方案中，本发明涉及激活骨细胞中ER的功能的方法，包括使能够表达ER的骨细胞接触有效量的苯并吡喃酮化合物。激活骨细胞中ER的功能可用来治疗或预防骨质疏松。
在另一实施方案中，本发明涉及抑制癌细胞内ER的功能的方法，包括使能够表达ER的癌细胞接触有效量的苯并吡喃酮化合物。在一实施方案中，所述癌细胞是乳腺癌细胞、卵巢癌细胞、子宫内膜癌细胞、子宫癌细胞、前列腺癌细胞或下丘脑癌细胞。抑制癌细胞内ER的功能可用来抑制细胞生长，因此可用于治疗或预防癌症。在一实施方案中，所述乳腺癌细胞是MCF-7。在一实施方案中，所述卵巢癌细胞是BG-1。
在另一实施方案中，本发明涉及抑制细胞内IL-6的表达的方法，包括使能够表达ER和IL-6的细胞接触有效量的苯并吡喃酮化合物。在一实施方案中，所述表达ER和I1-6的细胞是骨细胞。在另一实施方案中，所述表达ER和I1-6的细胞是用人ER-β稳定转染的人U-2OS骨肉瘤细胞。在体内抑制细胞内IL-6的表达可用来治疗骨流失疾病或骨癌。在一实施方案中，所述骨流失疾病是骨质疏松。在体外抑制细胞内IL-6的表达可用于生物活性筛选试验(例如作为标准)以筛选抑制IL-6表达的苯并吡喃酮化合物。
在另一实施方案中，本发明涉及抑制肿瘤细胞生长的方法，包括使能够表达ER的肿瘤细胞接触有效量的苯并吡喃酮化合物。在一实施方案中，所述表达ER的肿瘤细胞是癌细胞。能够表达ER的癌细胞或肿瘤细胞的例子包括但不限于乳腺细胞、卵巢细胞、子宫内膜细胞、子宫细胞、前列腺细胞和下丘脑细胞。在体内抑制所述癌细胞或肿瘤细胞增殖可用来治疗或预防癌症。在体外抑制所述癌细胞或肿瘤细胞增殖可用于用来筛选抗癌药或抗肿瘤药的生物活性筛选试验(例如作为标准)或用于诊断测定。
4.5其它治疗剂某些实施方案中，本发明的方法还包括给予有效量的其它其它治疗剂。其它治疗剂的例子包括但不限于用于以下用途的制剂治疗或预防骨再吸收疾病、肿瘤性疾病、关节炎、在雌激素存在时恶化的疾病或在雌激素存在时改善的疾病；激活骨细胞中ER的功能；抑制癌细胞内ER的功能；抑制细胞内IL-6的表达；和抑制肿瘤细胞生长。所述其它治疗剂可在苯并吡喃酮化合物之前、之后或与同时施用。一些实施方案中，苯并吡喃酮化合物对患者发挥疗效的时间与其它治疗剂对患者发挥疗效的时间重叠。
在其它实施方案中，所述其它治疗剂被用来治疗或预防在雌激素存在时改善的疾病。用来治疗或预防在雌激素存在时改善的疾病的其它治疗剂包括但不限于他莫昔芬、雷洛昔芬、甲羟孕酮、夫纳捷(danizol)和孕三烯酮。
在一实施方案中，所述其它治疗剂被用来治疗或预防骨流失疾病(例如骨质疏松)。用来治疗或预防骨流失疾病的其它治疗剂包括但不限于组织蛋白酶K抑制剂(例如组织蛋白酶K的前肽)、二磷酸盐(例如艾托膦酸盐(eitodronate)、帕米膦酸盐、阿伦膦酸盐、利塞膦酸盐、唑仑膦酸盐(zolendronate)、伊班膦酸盐、氯膦酸盐或替鲁膦酸盐)、甲状旁腺素(parathryoid hormone)(″PTH″)或其片段、释放内源PTH的化合物(例如PTH释放素)以及降钙素或其片段。
在另一实施方案中，所述其它治疗剂被用来治疗或预防肿瘤性疾病。在一实施方案中，所述其它治疗剂被用来治疗或预防癌症(例如乳腺、卵巢、子宫、前列腺或下丘脑的癌症)。用来治疗或预防癌症或肿瘤性疾病的其它治疗剂包括但不限于烷基化剂(例如亚硝基脲)、抗代谢物(例如甲氨蝶呤或羟基脲)、依托泊苷、campathecins、博来霉素、多柔比星、柔红霉素、秋水仙碱、伊立替康、喜树碱、环磷酰胺、5-氟尿嘧啶、顺铂、卡铂、甲氨蝶呤、三甲曲沙、尔必得舒(Erbitux)、沙利度胺、紫杉酚、长春花生物碱(例如长春碱或长春新碱)或微管稳定剂(例如埃博霉素)。
用来治疗或预防癌症的治疗剂的其它说明性实例包括但不限于阿西维辛、阿柔比星、盐酸阿考达唑、阿克罗宁、阿多来新、阿地白介素、六甲蜜胺、安波霉素、醋酸阿美蒽醌、氨鲁米特、安吖啶、阿那曲唑、安曲霉素、门冬酰胺酶、曲林菌素、阿扎胞苷、阿扎替派、阿佐霉素、巴马司他、苯佐替派、比卡鲁胺、盐酸比卡鲁胺、甲磺酸双奈法德、比折来新、硫酸博来霉素、布喹那钠、溴匹立明、白消安、放线菌素C、卡普睾酮、卡醋胺、卡贝替姆、卡铂、卡莫司汀、盐酸卡柔比星、卡折来新、西地芬戈、苯丁酸氮芥、西罗霉素、顺铂、克拉屈滨、甲磺酸克立那托、环磷酰胺、阿糖胞苷、达卡巴嗪、放线菌素D、盐酸柔红霉素、地西他滨、右奥马铂、地扎胍宁、甲磺酸地扎胍宁、地吖醌、多西他赛、阿霉素、盐酸阿霉素、屈洛昔芬、柠檬酸屈洛昔芬、丙酸屈他雄酮、达佐霉素、依达曲沙、盐酸依氟鸟氨酸、依沙芦星、恩洛铂、恩普氨酯、依匹哌啶、盐酸表柔比星、厄布洛唑、盐酸依索比星、雌莫司汀、雌莫司汀磷酸钠、依他硝唑、依托泊苷、磷酸依托泊苷、艾托卜宁、盐酸法倔唑、法扎拉滨、芬维A胺、氮尿苷、磷酸氟达拉滨、氟尿嘧啶、氟西他滨、磷喹酮、福司曲星钠、吉西他滨、盐酸吉西他滨、羟基脲、盐酸伊达比星、异环磷酰胺、伊莫福新、ImiDs、白细胞介素II(包括重组白细胞介素II，或rIL2)、干扰素-2a、干扰素α-2b、干扰素a-nl、干扰素a-n3、干扰素β-Ia、干扰素γ-Ib、异丙铂、盐酸伊立替康、醋酸兰瑞肽、来曲唑、醋酸亮丙瑞林、盐酸利阿唑、洛美曲索钠、洛莫司汀、盐酸洛索蒽醌、马索罗酚、美登素、盐酸氮芥、醋酸甲地孕酮、醋酸美仑孕酮、美法仑、美诺立尔、巯嘌呤、甲氨蝶呤、甲氨蝶呤钠、氯苯氨啶、美妥替哌、米丁度胺、米特卡辛、丝裂红素、米托洁林、米托马星、丝裂霉素、米托司培、米托坦、盐酸米托蒽醌、麦考酚酸、诺考达唑、诺拉霉素、奥马铂、奥昔舒仑、紫杉醇、培门冬酶、培利霉素、奈莫司汀、硫酸培洛霉素、培磷酰胺、哌泊溴烷、哌泊舒凡、盐酸吡罗蒽醌、普卡霉素、普洛美坦、卟吩姆钠、泊非霉素、泼尼莫司汀、盐酸丙卡巴肼、嘌罗霉素、盐酸嘌罗霉素、吡唑呋喃菌素、利波腺苷、罗谷亚胺、沙芬戈、盐酸沙芬戈、SelCid、司莫司汀、辛曲秦、斯帕磷酸钠、司帕霉素、盐酸锗螺胺、螺莫司汀、螺铂、链黑霉素、链佐星、磺氯苯脲、他利霉素、替可加兰钠、替加氟、盐酸替洛蒽醌、替莫泊芬、替尼泊苷、替罗昔隆、睾内酪、硫唑鸟嘌呤、硫鸟嘌呤、替莫唑胺、temodar、塞替派、磺唑符啉、替拉扎明、柠檬酸托瑞米芬、醋酸曲托龙、磷酸曲西立滨、三甲曲沙、葡糖醛酸三甲曲沙、曲普瑞林、盐酸妥布氯唑、乌拉莫司汀、乌瑞替派、伐普肽、维替泊芬、硫酸长春碱、硫酸长春新碱、长春地辛、硫酸长春地辛、硫酸长春匹定、硫酸长春甘酯、硫酸长春罗新、酒石酸长春瑞滨、硫酸长春罗定、硫酸长春利定、伏氯唑、折尼铂、净司他丁、盐酸佐柔比星。
用来治疗或预防癌症的其它治疗剂包括但不限于20-表-1，25-二羟基维生素D3、5-乙炔基尿嘧啶、阿比特龙、阿柔比星、酰基富烯、adecypenol、阿多来新、阿地白介素、ALL-TK拮抗剂、六甲蜜胺、氨莫司汀、amidox、氨磷汀、氨基-γ-酮戊酸、氨柔比星、安吖啶、阿那格雷、阿那曲唑、穿心莲内酯、血管发生抑制剂、拮抗剂D、拮抗剂G、安雷利克斯、抗-背侧化形态发生蛋白-1、抗雄激素药、前列腺鳞癌、抗雌激素药、抗肿瘤药、阿非迪霉素甘氨酸酯、凋亡基因调节剂、凋亡调节物、脱嘌呤核酸、ara-CDP-DL-PTBA、精氨酸脱氨基酶、asulacrine、阿他美坦、阿莫司汀、axinastatin 1、axinastatin 2、axinastatin 3、阿扎司琼、重氮毒素、氮杂酪氨酸、浆果赤霉素III衍生物、balanol、巴马司他、BCR/ABL拮抗剂、苯并二氢卟酚、苯甲酰星形孢菌素、β内酰胺衍生物、β-alethine、betaclamycin B、桦木酸、bFGF抑制剂、比卡鲁胺、比生群(bisantrene)、bisaziridinylspermine、双奈法德、bistratene A、比折来新、breflate、溴匹立明、布度钛、丁硫氨酸亚矾胺、卡泊三醇、抑激酶素C、喜树碱衍生物、金丝雀痘IL-2、卡培他滨、氨甲酰-氨基-三唑、羧基氨基三唑、CaRestM3、CARN 700、软骨衍生的抑制剂、卡折来新、酪蛋白激酶抑制剂(ICOS)、细胞周期抑制剂(例如，黄酮吡醇A、tryprostatin B、pl9ink4D)、细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂(例如，roscovitine，olomucine和嘌呤类似物)、MAP激酶抑制剂(CNI-1493)、粟精胺、杀菌肽B、西曲瑞克、chlorlns、氯代喹喔啉磺酰胺(chloroquinoxalinesulfonamide)、西卡前列素、顺式卟啉、克拉屈滨、氯米芬类似物、克霉唑、collismycin A、collismycin B、考布他汀A4、考布他汀类似物、conagenin、crambescidin 816、克立那托、cryptophycin 8、cryptophycin A衍生物、curacinA、环戊蒽醌、cycloplatam、cypemycin、阿糖胞嘧啶、细胞溶解因子、cytostatin、达昔单抗、地西他滨、脱氢代代宁B、地洛瑞林、地塞米松、右异环磷酰胺(dexifosfamide)、右雷佐生、右维拉帕米、地吖醌、代代宁B、didox、二乙基去甲精胺、二氢-5-氮胞苷、二氢紫杉酚，9-、二噁霉素、二苯基螺莫司汀、多西他赛、二十二醇、多拉司琼、去氧氟尿苷、屈洛昔芬、屈大麻酚、duocarmycin SA、依布硒、依考莫司汀、依地福新、依决洛单抗、依氟鸟氨酸、榄烯、乙嘧替氟、表柔比星、依立雄胺、雌莫司汀类似物、雌激素激动剂、雌激素拮抗剂、依他硝唑、磷酸依托泊苷、依西美坦、法倔唑、法扎拉滨、芬维A胺、非格司亭、非那雄胺、黄酮吡醇、氟噻司汀、氟甾酮、氟达拉滨、fluorodaunorunicin hydrochloride、福酚美克、福美坦、福司曲星、福莫司汀、钆德卟啉(gadolinium texaphyrin)、硝酸镓、加洛他滨、加尼瑞克、明胶酶抑制剂、吉西他滨、谷胱甘肽抑制剂、hepsulfam、调蛋白、六甲撑二乙酰胺、金丝桃素、伊班膦酸、伊达比星、艾多昔芬、伊决孟酮、伊莫福新、伊洛马司他、咪唑吖啶酮、咪喹莫特、免疫增强肽、胰岛素样生长因子-1受体抑制剂、干扰素激动剂、干扰素、白细胞介素、碘苄胍、碘阿霉素、药薯，4-、伊罗普拉、伊索拉定、isobengazole、isohomohalicondrin B、伊他司琼、jasplakinolide、kahalalide F、片螺素-N三醋酸酯、兰瑞肽、leinamycin、来格司亭、硫酸蘑菇多糖、leptolstatin、来曲唑、白血病抑制因子、白血病α干扰素、亮丙瑞林+雌激素+黄体酮、亮丙瑞林、左旋咪唑、利阿唑、线形聚胺类似物、亲脂性二糖肽、亲脂性铂化合物、lissoclinamide7、洛铂、蚯蚓磷脂、洛美曲索、氯尼达明、洛索蒽醌、洛伐他汀、洛索立宾、勒托替康、镥德卟啉、lysofylline、细胞溶解肽、美坦新、甘露糖抑制素A、马立马司他、马索罗酚、脉丝平、竹桃溶素抑制剂、基质金属蛋白酶抑制剂、美诺立尔、美巴龙(merbarone)、美替瑞林、蛋氨酶(Methioninase)、甲氧氯普胺、MIF抑制剂、米非司酮、米替福新、米立司亭、错配的双链RNA、米托胍腙、二溴卫矛醇、丝裂霉素类似物、米托萘胺、丝裂霉素成纤维细胞生长因子-皂草素、米托蒽醌、莫法罗汀、莫拉司亭、单克隆抗体、人绒促性素、单磷酰脂A+分枝杆菌细胞壁sk、莫哌达醇、多种药物耐药基因抑制剂、基于多种肿瘤抑制物1的治疗、芥末抗癌药、印度洋海绵(mycaperoxide)B、分枝杆菌细胞壁提取物、myriaporone、N-乙酰地那林、N-取代的苯酰胺类、那法瑞林、nagrestip、纳洛酮+喷他佐辛、napavin、naphterpin、那托司亭、奈达铂、奈莫柔比星、奈立膦酸、中性内肽酶、尼鲁米特、尼沙霉素、氧化氮调节剂、硝基氧抗氧化剂、nitrullyn、O6-苄基鸟嘌呤、奥曲肽、okicenone、寡核苷酸、奥那司酮、昂丹司琼、昂丹司琼、oracin、口服细胞因子诱导剂、奥马铂、奥沙特隆、奥沙利铂、oxaunomycin、紫杉醇、紫杉醇类似物、紫杉醇衍生物、派劳胺、palmitoylrhizoxin、帕米磷酸、人参三醇、帕诺米芬、parabactin、帕折普汀、培门冬酶、培得星、木聚硫钠、喷司他丁、pentrozole、全氟溴烷、培磷酰胺、芥子醇(perillylalcohol)、吩嗪霉素、乙酸苯酯、磷酸酶抑制剂、溶链菌、盐酸毛果芸香碱、吡柔比星、吡曲克辛、placetin A、placetin B、纤溶酶原活化剂抑制剂、铂复合物、铂化合物、铂-三胺复合物、卟吩姆钠、泊非霉素、泼尼松、丙基二-吖啶酮、前列腺素J2、蛋白酶体抑制剂、基于A蛋白的免疫调节剂、蛋白激酶C抑制剂、蛋白激酶C抑制剂、微藻、酪氨酸磷酸酶抑制剂、嘌呤核苷磷酸酶抑制剂、红紫素、吡唑啉吖啶、吡哆化的血红蛋白聚氧乙烯共轭物、raf拮抗剂、雷替曲塞、雷莫司琼、视黄酸(例如9-顺式RA)、组蛋白脱乙酰酶抑制剂(例如丁酸钠、软木脂苯胺氧肟酸(suberoylanilide hydroxamicacid))、TRAIL、ras法尼基蛋白转移酶抑制剂、ras抑制剂、ras-GAP抑制剂、脱甲基化的瑞替普汀、铼Re 186依替膦酸钠、根霉素、核酶、RII视黄酰胺、罗谷亚胺、rohitukine、罗莫肽、罗喹美克、rubiginone B1、ruboxyl、沙芬戈、saintopin、SarCNU、sarcophytol A、沙格司亭、Sdi1模拟物、司莫司汀、老年化衍生的抑制剂1、感官寡核苷酸、信号转导抑制剂、信号转导调节剂、单链抗原结合蛋白、西佐喃、索布佐生、硼卡钠、苯乙酸钠、solverol、生长调节素结合蛋白、索纳明、膦门冬酸、spicamycin D、螺莫司汀、斯奈潘定、海绵素(spongistatin)1、鲨胺、干细胞抑制剂、干细胞分化抑制剂、stipiamide、溶基质素抑制剂、sulfinosine、超活性舒血管肠肽拮抗剂、suradista、苏拉明、豌豆素、合成的氨基葡聚糖、他莫司汀、甲碘酸他莫昔芬、牛磺莫司汀、他扎罗汀、替可加兰钠、替加氟、tellurapyrylium、端粒末端转移酶抑制剂、替莫泊芬、替莫唑胺、替尼泊苷、tetrachlorodecaoxide、tetrazomine、thaliblastine、噻可拉林、血栓形成素、血栓形成素模拟物、胸腺法新、胸腺生成素受体激动剂、胸腺曲南、甲状腺激素、乙烷基初卟啉锡(tin ethyl etiopurpurin)、替拉扎明、二氯环戊二烯钛、topsentin、托瑞米芬、全能干细胞因子、翻译抑制剂、维A酸、triacetyluridine、曲西立滨、三甲曲沙、曲普瑞林、托烷司琼、妥罗雄脲、酪氨酸激酶抑制剂、酪氨酸磷酸化抑制剂(tyrphostins)、UBC抑制剂、乌苯美司、泌尿生殖窦衍生生长抑制因子、尿激酶受体拮抗剂、伐普肽、variolinB、载体系统，红细胞基因治疗、维拉雷琐、藜芦胺、verdins、维替泊芬、长春瑞滨、vinxaltine、vitaxin、伏氯唑、扎诺特隆、折尼铂、亚苄维C和净司他丁斯酯。优选的其它抗癌药是5-氟尿嘧啶和甲酰四氢叶酸。
4.6药物组合物和给药途径所述苯并吡喃酮化合物可以常规的制剂形式通过口服或肠胃外给予患者，所述制剂形式例如胶囊、微胶囊、片剂、颗粒、粉末、锭剂、药丸、栓剂、注射剂、悬浮剂或糖浆剂。可用常规的有机或无机添加剂通过常用方法来制备合适的剂型，该添加剂如赋形剂(例如蔗糖、淀粉、甘露醇、山梨醇、乳糖、葡萄糖、纤维素、滑石、磷酸钙或碳酸钙)，粘合剂(例如纤维素、甲基纤维素、羟基甲基纤维素、聚丙基吡咯烷酮、聚乙烯基吡咯烷酮、明胶、阿拉伯胶、聚乙二醇、蔗糖或淀粉)，崩解剂(例如淀粉、羧甲基纤维素、羟丙基淀粉、低取代的羟丙基纤维素、碳酸氢钠、磷酸钙或柠檬酸钙)，润滑剂(例如硬脂酸镁、轻质无水硅酸、滑石或十二烷基硫酸钠)，调味剂(例如柠檬酸、薄荷醇、甘氨酸或桔子粉)，防腐剂(例如苯甲酸钠、亚硫酸氢钠、对羟基苯甲酸甲酯或对羟基苯甲酸丙酯)，稳定剂(例如柠檬酸、柠檬酸钠或乙酸)，悬浮剂(例如甲基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮或硬脂酸铝)，分散剂(例如羟丙基甲基纤维素)，稀释剂(例如水)，和基蜡(例如可可脂、白凡士林或聚乙二醇)。所述药物组合物中苯并吡喃酮化合物的有效量可以为会产生所需效果的水平，例如，在供口服和肠胃外给药的单位剂量中可为约0.005-10毫克/千克患者体重。
上述苯并吡喃酮化合物通常可以以约0.005-10毫克/千克患者体重的单位剂量每天给药1-4次，但是上述剂量可根据患者的年龄、体重和医疗状况以及给药方式进行适当改变。在一实施方案中，该剂量为约0.01-5毫克/千克患者体重，约0.05-1毫克/千克患者体重，约0.1-0.75毫克/千克患者体重，或约0.25-0.5毫克/千克患者体重。在一实施方案中，每天给予一种剂量。
给予患者的苯并吡喃酮化合物的剂量可以有很大的变化，这取决于健康护理医师的判断。苯并吡喃酮化合物的有效给药比例的范围通常为约0.01-5毫克/千克患者体重，约0.05-1毫克/千克患者体重，约0.1-0.75毫克/千克患者体重，或约0.25-0.5毫克/千克患者体重。当然，在实践中通常将苯并吡喃酮化合物的日剂量在一天中的不同时刻分次给予。然而，在任何特定情况下，苯并吡喃酮化合物的给药量将取决于诸如活性化合物的稳定性、所用的剂型以及给药途径等因素。
出于方便考虑，苯并吡喃酮化合物可通过口服给药。然而，通过真皮内、肌肉内、腹膜内、透皮、静脉内、皮下、鼻内、硬膜外、舌下、脑内、阴道内、经皮、直肠、吸入，或局部给予耳、鼻、眼或皮肤给予该苯并吡喃酮化合物也同样有效。优选的给药模式取决于健康护理医师的判断，且部分取决于医疗状况。
本发明还涉及含有有效量的苯并吡喃酮化合物及药学上可接受的载体或运载体的组合物，其中所述药学上可接受的载体或运载体可包括赋形剂、稀释剂或其混合。在一实施方案中，所述组合物是药物组合物。
所述组合物的形式可以是片剂、可咀爵的片剂、胶囊、溶液、注射溶液、锭剂、栓剂和悬浮剂等。组合物可被制成剂量单位为日剂量或日剂量的一部分的形式，所述剂量单位可以是一片药片或一颗胶囊或是适当体积的液体。在一实施方案中，溶液是从盐酸盐等水溶性盐制备的。通常，所有组合物都是用药物化学领域已知的方法制备的。可将苯并吡喃酮化合物与合适的载体或稀释剂混合，然后将适量的混合物填装到胶囊中来制备胶囊剂。常用的载体和稀释剂包括但不限于惰性粉末物质，如各种不同的淀粉；粉碎的纤维素，尤其是晶体或微晶纤维素；糖类，如果糖、甘露醇和蔗糖；谷物粉末以及类似的可食用粉末。
可通过湿法造粒或干法造粒直接压制片剂。它们的配方中通常含有稀释剂、粘合剂、润滑剂和崩解剂以及化合物。典型的稀释剂包括，例如各种类型的淀粉、乳糖、甘露醇、高岭土、磷酸钙或硫酸钙、氯化钠等无机盐以及粉碎的糖类。也可用粉碎的纤维素衍生物。典型的片剂粘合剂有诸如淀粉、明胶和乳糖、果糖、葡萄糖等糖类等的物质。也常用天然及合成的树胶，其中包括阿拉伯胶、藻酸盐、甲基纤维素、聚乙烯基吡咯烷等。聚乙二醇、乙基纤维素和蜡也可作为粘合剂。
在片剂中可能需要润滑剂以防止药片和冲头粘在模具上。润滑剂可选自滑石、硬脂酸镁和硬脂酸钙、硬脂酸以及氢化的植物油等光滑固体。片剂崩解剂是在润湿时膨胀而使片剂破裂并释放化合物的物质。它们包括淀粉、粘土、纤维素、藻胶和树胶。更具体地，可使用例如玉米和马铃薯淀粉、甲基纤维素、琼脂、膨润土、木质纤维素、粉碎的天然海绵、阳离子交换树脂、藻酸、瓜耳胶、柑桔果浆和羧甲基纤维素，以及十二烷基硫酸钠。片剂可用糖作为调味剂及密封剂进行包衣，或用成膜保护剂包衣以修饰该片剂的溶解特性。该组合物还可以制成咀嚼片，例如在制剂中使用甘露醇之类的物质。
当需要以栓剂给予苯并吡喃酮化合物时可使用常用的基料。可可脂是通常使用的栓剂基料，可加入蜡对其进行修饰以稍微提高其融点。广泛使用水混溶性栓剂基料，尤其是各种分子量的聚乙二醇。
通过合适的配方可延迟或延长所述苯并吡喃酮化合物的功效。例如，可制备苯并吡喃酮化合物的缓溶药丸并将其掺入到片剂或胶囊中，或作为缓释可植入装置。该技术还包括制备不同溶出度的药丸并用该药丸的混合物填充胶囊。片剂或胶囊可用在预定时间内不溶解的膜包衣。甚至肠胃外制剂也可制成长效形式，方法是将所述苯并吡喃酮化合物溶解于或悬浮于能使其在血清中缓慢分散的油性或乳化运载体中。
5.实施例以下实施例用于说明的目的，不产生任何限制。
5.1实施例1合成7-羟基-6-甲基-4-(4-(2-吡咯烷-1-基-乙氧基)-苄基)-3-(4-三氟甲基苯基)-色烯-2-酮A.1-(2-羟基-4-甲氧基苯基)-2-(4-羟基苯基)-乙酮
用氮气净化3-甲氧基苯酚(44.69kg，360mol)和4-羟基苯基乙酸(68.5kg，450mol)在144L氯苯中的悬浮液。在20-25℃下加入三氟化硼二乙基醚合物(177L，1440mol)。将所述悬浮液加热至80℃，并搅拌4-5小时，然后冷却至5-10℃，并搅拌过夜。
在氮气压力下过滤掉沉淀的红/橙色固体(不需要的异构体)，并且将滤液倒入到冰/水中使其迅速冷却。所得滤饼用CH2Cl2洗涤，并缓慢加入80％Na2CO3(水溶液)，直到水溶液的pH达到6-7，从而使溶液中的三氟化硼醚合物迅速冷却。观察气体变化，所需产物从溶液中沉积出来，形成橙色的悬浮液。将所述橙色的悬浮液在20℃下搅拌过夜，随后过滤。所得滤饼用水和甲基叔丁基醚(″MTBE″)洗涤，并干燥过夜，由此得到所需产物(38kg，42％产率，HPLC纯度95.1％ a/a)。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)12.30(s，1H)，9.31(s，1H)，7.99(d，1H，J＝9.1Hz)，7.08(d，2H，J＝8.4Hz)，6.70，(d，2H，J＝8.4Hz)，6.53(dd，1H，J＝2.5，9.1Hz)，6.47(d，1H，J＝2.5Hz)，4.18(s，2H)，3.81(s，3H)。MS(ESI)m/z259(M+H)+。
B.4-(4-羟基苄基)-7-甲氧基-3-(4-三氟甲基-苯基)-色烯-2-酮 在5分钟内用碳酰二咪唑(″CDI″)(13.2g，82mmol)分几部分处理25℃下的4-三氟甲基苯基乙酸(15.2g，74.45mmol)在120mL DMF中的溶液。将所述反应混合物升温至40℃，保持10分钟，然后冷却至室温。加入1-(2-羟基-4-甲氧基苯基)-2-(4-羟基苯基)乙基-1-酮(9.81g，38mmol)、K2CO3(15.7g，114mmol)和DMAP(0.93g，7.6mmol)，并将所述反应混合物升温至80℃，保持2小时。
将所得悬浮液冷却至室温，并加入200mL的水。用CH2Cl2提取所述水层，并干燥所述有机层(MgSO4)，然后在真空下浓缩。所得固体使用快速色谱法纯化(CH2Cl2∶EtOAc)，从而得到所需产物(10.2g，63％)。
1H NMR(300MHz，DMSO-d6)9.29(s，1H)，7.79(d，2H，J＝8.7Hz)，7.57(d，2H，J＝8.7Hz)，7.53(d，1H，J＝8.5Hz)，7.04(d，1H，J＝2.3Hz)，6.93(d，2H，J＝8.9Hz)，6.87(dd，1H，J＝8.5，2.3Hz)，6.61(d，2H，J＝8.9Hz)，3.90(s，2H)，3.84(s，3H)。
MS(ESI)m/z 427(M+H)+。
C.4-(7-甲氧基-2-氧-3-(4-三氟甲基-苯基)-2H-色烯-4-基-甲基)-苯基2，2-二甲基-丙酸酯 将4-(4-羟基苄基)-7-甲氧基-3-(4-三氟甲基-苯基)-色烯-2-酮(800mg，1.88mmol)、新戊酰氯(577μL，4.69mmol)、咪唑(268mg，3.94mmol)和DMAP(344mg，2.81mmol)在DMF(10mL)中的混合物在室温下搅拌18小时。再加入部分的咪唑(268mg，3.94mmol)、DMAP(344mg，2.81mmol)和新戊酰氯(577μL，4.69mmol)，再继续搅拌20小时，总反应时间为38小时。在真空中除去所述溶剂，将所得残留物溶解在AcOEt中，并用H2O洗涤有机层。用AcOEt(2x)提取所述水层，并用盐水洗涤混合的有机层，干燥(MgSO4)并在真空下除去溶剂。所得残留物使用快速色谱法(硅胶，5∶1己烷∶AcOEt)纯化，从而制得白色固体的标题化合物(820mg，86％)。1HNMR(300MHz，CDCl3)δ7.64(d，J＝8.0Hz，2H)，7.43-7.37(m，3H)，7.08-7.02(m，2H)，7.00-6.93(m，2H)，6.88(d，J＝2.5Hz，1H)，6.77(dd，J＝2.5，8.8Hz，1H)，4.04(s，2H)，3.87(s，3H)，1.34(s，9H)；MS(ESI)m/z 511.0(M+H)+；HPLC tR7.58分钟。
D.4-(6-溴-7-甲氧基-2-氧-3-(4-三氟甲基-苯基)-2H-色烯-4-基-甲基)-苯基2，2-二甲基-丙酸酯 在室温下搅拌来自步骤C的4-(7-甲氧基-2-氧-3-(4-三氟甲基-苯基)-2H-色烯-4-基-甲基)-苯基2，2-二甲基-丙酸酯(820mg，1.61mmol)和Br2(83μL，1.61mmol)在AcOH(15mL)中的混合物16小时。加入另外一部分的Br2(80μL，1.55mmol)，并继续搅拌6小时。将所述混合物倒入水中，并用CH2Cl2(2x)提取水层。用盐水洗涤所述混合的有机层，干燥(MgSO4)并在真空下浓缩。从CH2Cl2/己烷结晶所述残留的橙色固体，从而制得所需的化合物，为白色固体(710mg，75％)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.67(s，1H)，7.65(d，J＝8.5Hz，2H)，7.38(d，J＝8.5Hz，2H)，7.07-6.94(m，4H)，6.89(s，1H)，4.01(s，2H)，3.98(s，3H)，1.35(s，9H)；MS(ESI)m/z 588.8(M+H)+；HPLCtR7.78分钟。
E.4-(7-甲氧基-6-甲基-2-氧-3-(4-三氟甲基-苯基)-2H-色烯-4-基甲基)-苯基2，2-二甲基-丙酸酯
在回流温度下搅拌4-(6-溴-7-甲氧基-2-氧-3-(4-三氟甲基-苯基)-2H-色烯-4-基-甲基)-苯基2，2-二甲基-丙酸酯(100mg，0.17mmol)、K2CO3(70mg，0.51mmol)、三甲基硼氧酯(24μL，0.17mmol)和Pd(Ph3P)4(20mg，0.017mmol)在无水二噁烷(2mL)中的混合物2小时。在冷却至温度之后，将所得悬浮液在硅藻土上过滤，并在真空条件下除去溶剂。从CH2Cl2/己烷结晶残留物，从而制得所需化合物，为米色固体(72mg，82％).1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.62(d，J＝8.0Hz，2H)，7.36(d，J＝8.0Hz，2H)，7.22(d，J＝0.9Hz，1H)，7.04(d，J＝8.8Hz，2H)，6.96(d，J＝8.8Hz，2H)，6.83(s，1H)，4.02(s，2H)，3.91(s，3H)，2.16(s，3H)，1.35(s，9H)；MS(ESI)m/z 524.9(M+H)+，HPLC tR 7.81分钟。
F.4-(4-羟基苄基)-7-甲氧基-6-甲基-3-(4-三氟甲基-苯基)-色烯-2-酮 在30℃下搅拌4-(7-甲氧基-6-甲基-2-氧-3-(4-三氟甲基-苯基)-2H-色烯-4-基-甲基)-苯基2，2-二甲基-丙酸酯(72mg，0.14mmol)和LiOH-H2O(23mg，0.55mmol)在8∶1的THF∶H2O混合物(4.5mL)中的混合物4小时。在真空下除去THF，并加入AcOEt。加入1N的盐酸水溶液将水层的pH降低到5。分离各层，并用AcOEt(2x)提取水相。用盐水洗涤所述混合的有机层，干燥(MgSO4)并在真空下浓缩。使用快速色谱法(99∶1CH2Cl2∶MeOH)纯化所述残留物，从而制得所需化合物，为米色固体(40mg，67％)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.62(d，J＝8.0Hz，2H)，7.38(d，J＝8.0Hz，2H)，7.25(d，J＝1.0Hz，1H)，6.92-6.86(m，2H)，6.82(s，1H)，6.75-6.69(m，2H)，3.95(s，2H)，3.90(s，3H)，2.16(s，3H)；MS(ESI)m/z 440.9(M+H)+；HPLC tR6.50分钟。
G.7-甲氧基-6-甲基-4-(4-(2-吡咯烷-1-基-乙氧基)-苄基)-3-(4-三氟甲基-苯基)-色烯-2-酮 在55℃下搅拌4-(4-羟基苄基)-7-甲氧基-6-甲基-3-(4-三氟甲基-苯基)-色烯-2-酮(50mg，0.113mmol)、K2CO3(48mg，0.35mmol)和1-(2-氯乙基)吡咯烷·盐酸(24mg，0.14mmol)在含水(100μL)的EtOH(1mL)中的混合物5小时。将所述混合物冷却至室温，并将其倒入到CH2Cl2-H2O中。分离各层，并用CH2Cl2(3x)提取水相。干燥(MgSO4)所述混合的有机层，并在真空中除去溶剂。使用快速色谱法(硅胶，40∶1CH2Cl2∶MeOH)纯化所述残留物，从而制得标题化合物，为米色固体(37mg，61％)。MS(ESI)m/z 537.9(M+H)+；HPLC tR 5.22分钟。
H.7-羟基-6-甲基-4-(4-(2-吡咯烷-1-基-乙氧基)-苄基)-3-(4-三氟甲基-苯基)-色烯-2-酮
在130℃下加热7-甲氧基-6-甲基-4-(4-(2-吡咯烷-1-基-乙氧基)-苄基)-3-(4-三氟甲基-苯基)-色烯-2-酮(50mg，0.093mmol)在1∶1的48％HBr∶AcOH(3mL)中的溶液7小时。将所述混合物冷却至室温，并将其倒入到AcOEt/1MNaOH中。分离各层，并用H2O(2x)和盐水洗涤有机相，并干燥(MgSO4)。在真空下除去溶剂。使用反相HPLC纯化所述残留物，之后用AcOEt/NaHCO3提取，从而制得所需的化合物，为黄色固体(25mg，52％)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.60(d，J＝8.0Hz，2H)，7.32(d，J＝8.0Hz，2H)，7.21(d，J＝0.75Hz，1H)，6.86(d，J＝8.8Hz，2H)，6.72(s，1H)，6.62(d，J＝8.8Hz，2H)，4.14(t，J＝5.5Hz，2H)，3.92(s，2H)，3.13(t，J＝5.5Hz，2H)，2.97-2.85(br s，4H)，2.13(s，3H)，2.00-1.89(m，4H)；MS(ESI)m/z 523.9(M)+；HPLC tR5.07分钟。
5.2实施例2合成3-(2，4-二氯苯基)-7-羟基-6-甲基-4-(4-(2-吡咯烷-1-基-乙氧基)-苄基)-色烯-2-酮除了用2，4-二氯苯基乙酸代替步骤B中的4-(三氟甲基)苯基乙酸以外，根据实施例1的方案进行上述标题化合物的合成。
1H NMR(300MHz，DMSO)δ10.8-10-4(br s，1H)，7.70(d，J＝2.0Hz，1H)，7.46(dd，J＝2.0，8.0Hz，1H)，7.42(s，1H)，7.38(d，J＝8.5Hz，1H)，6.98(d，J＝8.8Hz，2H)，6.78(s，1H)，6.76(d，J＝8.8Hz，2H)，4.02(d，J＝15.5Hz，1H)，3.97(t，J＝6.0Hz，2H)，3.70(d，J＝15.5Hz，1H)，2.78(t，J＝6.0Hz，2H)，2.58-2.46(m，4H)，2.07(s，3H)，1.72-1.61(m，4H)；MS(ESI)m/z523.8(M+H)+；HPLC tR5.14分钟。
5.3实施例3合成3-(2，4-二氯苯基)-7-羟基-8-甲基-4-(4-(2-吡咯烷-1-基-乙氧基)-苄基)-色烯-2-酮A.1-(2-羟基-4-甲氧基苯基)-2-(4-羟基苯基)-乙酮 用氮气净化3-甲氧基苯酚(44.69kg，360mol)和4-羟基苯基乙酸(68.5kg，450mol)在144L氯苯中的悬浮液。在20-25℃下加入三氟化硼二乙基醚合物(177L，1440mol)。将所得悬浮液加热至80℃，搅拌4-5小时，冷却至5-10℃并搅拌过夜。
在氮气压力下过滤所得红/橙色固体(不需要的异构体)沉积物，并且通过将滤液倒入到冰/水中使其迅速冷却。用CH2Cl2洗涤含有含不需要的异构体的滤饼，并缓慢加入80％Na2CO3(水溶液)，直到水溶液的pH达到6-7，从而使溶液中的三氟化硼醚合物迅速冷却。观察气体变化，将所需产物从溶液沉积出来，形成橙色的悬浮液。将所述橙色的悬浮液在20℃下搅拌过夜，然后过滤。所得滤饼用水和MTBE洗涤，并干燥过夜，从而得到所需产物(38kg，42％产率，HPLC纯度95.1％ a/a)。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)12.30(s，1H)，9.31(s，1H)，7.99(d，1H，J＝9.1Hz)，7.08(d，2H，J＝8.4Hz)，6.70，(d，2H，J＝8.4Hz)，6.53(dd，1H，J＝2.5，9.1Hz)，6.47(d，1H，J＝2.5Hz)，4.18(s，2H)，3.81(s，3H)。MS(ESI)m/z 259(M+H)+。
B.3-(2，4-二氯苯基)-4-(4-羟基苄基)-7-甲氧基-色烯-2-酮 除了使用2，4-二氯苯基乙酸代替4-三氟甲基苯基乙酸以外，如实施例1B所述的方法制备上述标题化合物。20g酮(77.5mmol)和31.6g酸(155mmol)，产生27.52g产品(83％)。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)9.26(s，1H)，7.58(d，1H，J＝8.8Hz)，7.50(dd，1H，J＝1.9，8.2Hz)，7.45(d，1H，J＝8.2Hz)，7.06(d，1H，J＝2.2Hz)，6.90(d，3H，J＝8.2Hz)，6.59(d，2H，J＝8.2Hz)，3.98(d，1H，J＝15.4Hz)，3.85(s，3H)，3.69(d，1H，J＝15.4Hz)。MS(ESI)m/z428(M+H)+。
C.4-(4-(2-溴乙氧基)-苄基)-3-(2，4-二氯苯基)-7-甲氧基-色烯-2-酮 在回流温度下搅拌3-(2，4-二氯苯基)-4-(4-羟基苄基)-7-甲氧基-色烯-2-酮(6.4g，15.0mmol)、1，2-二溴乙烷(12.9mL，149.8mmol)和K2CO3(4.14g，30mmol)在丙酮(65mL)中的混合物20.5小时。在该时间内加入另一部分的K2CO3(241.6mg，1.75mmol)和1，2-二溴乙烷(3.2mL，37.5mmol)，之后再搅拌7.5小时。再继续加热20小时，总反应时间为48小时。将所得混合物冷却至室温，并倒入到CH2Cl2/H2O中。分离各层，并用CH2Cl2(2x)提取水相。用盐水(2x)洗涤混合的有机相，并干燥(MgSO4)，并在真空下除去溶剂。所得残留物使用快速色谱法(300g硅胶，4.5∶1∶1→4∶1∶1→3∶1∶1己烷∶CH2Cl2∶AcOEt)进行纯化，从而制得标题化合物，为白色固体(4.851g，61％)，以及回收的原料(2.054g，32％)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.50(d，J＝2.0Hz，1H)，7.44(d，J＝9.0Hz，1H)，7.26(dd，J＝2.0，8.0Hz，1H)，7.12(d，J＝8.0Hz，1H)，6.98-6.91(m，2H)，6.88(d，J＝2.0Hz，1H)，6.79-6.74(m，3H)，4.23(t，J＝6.5Hz，2H)，4.04(d，J＝15.5Hz，1H)，3.87(s，3H)，3.78(d，J＝15.5Hz，1H)，3.61(t，J＝6.5Hz，2H)；MS(ESI)m/z 532.7(M+H)+；HPLCtR8.38分钟。
D.4-(4-(2-溴乙氧基)-苄基)-3-(2，4-二氯苯基)-7-羟基-色烯-2-酮 在室温下搅拌4-(4-(2-溴乙氧基)-苄基)-3-(2，4-二氯苯基)-7-甲氧基-色烯-2-酮(4.0g，7.49mmol)、AlCl3(5.89g，44.2mmol)和EtSH(2.77mL，37.4mmol)在CH2Cl2(200mL)中的混合物2.5小时。将所述混合物缓慢倒入CH2Cl2/饱和NaHCO3水溶液中。分离各层，再用CH2Cl2(3x)提取水相。用2MNaOH水溶液使水层的pH升至10，并用AcOEt(3x)提取。用盐水洗涤各有机层，并干燥(MgSO4)，在真空条件下浓缩所述混合的有机相。所得残留物使用快速色谱法进行纯化(250g硅胶，95∶5→9∶1CH2Cl2∶AcOEt)，从而制得标题化合物，分离得到乳白色固体(3.454g，89％)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.50(d，J＝2.0Hz，1H)，7.42(d，J＝8.8Hz，1H)，7.25(dd，J＝2.0，8.0Hz，1H)，7.12(d，J＝8.0Hz，1H)，6.99(d，J＝2.0Hz，1H)，6.94(d，J＝8.5Hz，2H)，6.78(d，J＝8.5Hz，2H)，6.73(dd，J＝2.0，8.8Hz，1H)，6.61-6.49(宽信号峰，1H)，4.23(t，J＝6.0Hz，2H)，4.04(d，J＝15.5Hz，1H)，3.78(d，J＝15.5Hz，1H)，3.61(t，J＝6.0Hz，2H)；MS(ESI)m/z 516.9(M-M)-；HPLCtR7.41分钟。
E.4-(4-(2-溴乙氧基)-苄基)-3-(2，4-二氯苯基)-7-羟基-8-碘代-色烯-2-酮 往4-(4-(2-溴乙氧基)-苄基)-3-(2，4-二氯苯基)-7-羟基-色烯-2-酮(2.734g，5.26mmol)在NH4OH(22mL)、MeOH(55mL)和CH2Cl2(33mL)的溶液中加入I2(1.334g，5.26mmol)，并在室温下搅拌得到的混合物30分钟。然后加入4MHCl水溶液，将水层的pH降低至5。分离各层，并用AcOEt(3x)提取水相。用盐水(2x)洗涤混合的有机层，干燥(MgSO4)并在真空中浓缩。所得米色固体(3.25g，96％)直接用于下一步，无需进一步纯化。1H NMR(300MHz，DMSO)δ11.43(s，1H)，7.74(d，J＝2.0Hz，1H)，7.51-7.42(m，3H)，7.02(d，J＝8.5Hz，2H)，6.82(d，J＝8.8Hz，1H)，6.78(d，J＝8.5Hz，2H)，4.21(t，J＝5.0Hz，2H)，4.04(d，J＝15.5Hz，1H)，3.73(t，J＝5.0Hz，2H)，3.70(d，J＝15.5Hz，1H)；MS(ESI)m/z 642.7(M-H)-；HPLC tR7.27分钟。
F.3-(2，4-二氯苯基)-7-羟基-8-碘代-4-(4-(2-吡咯烷-1-基-乙氧基)-苄基)-色烯-2-酮 往4-(4-(2-溴乙氧基)-苄基)-3-(2，4-二氯苯基)-7-羟基-8-碘代-色烯-2-酮(1.90g，2.94mmol)在无水THF(20mL)中的搅拌过的悬浮液中加入吡咯烷(1.46mL，17.6mmol)，将所得黄色溶液加热至85℃，保持1.5小时。将所得混合物冷却至室温，并在真空条件下除去溶剂。将所得残留物溶于CH2Cl2中，并用H2O和盐水洗涤，干燥(MgSO4)。在真空中浓缩所述有机相。所得残留物用快速色谱法(200g硅胶，12∶1→9∶1→85∶15CH2Cl2∶MeOH)纯化，从而制得标题化合物，为黄色固体(1.87g，100％)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.50(d，J＝2.0Hz，1H)，7.32(d，J＝8.8Hz，1H)，7.26(dd，J＝2.0，8.0Hz，1H)，7.12(d，J＝8.0Hz，1H)，6.95-6.86(m，3H)，6.77-6.70(m，2H)，4.30(t，J＝5.0Hz，2H)，4.00(d，J＝15.5Hz，1H)，3.76(d，J＝15.5Hz，1H)，3.25(t，J＝5.0Hz，2H)，3.19-3.04(m，4H)，2.04-1.91(m，4H)；MS(ESI)m/z 635.6(M)+；HPLC tR5.85分钟。
G.3-(2，4-二氯苯基)-7-羟基-8-甲基-4-(4-(2-吡咯烷-1-基-乙氧基)-苄基)-色烯-2-酮
在回流温度下搅拌3-(2，4-二氯苯基)-7-羟基-8-碘代-4-(4-(2-吡咯烷-1-基-乙氧基)-苄基)-色烯-2-酮(1.85g，2.91mmol)、K2CO3(1.21g，8.75mmol)、三甲基硼氧酯(427μL，3.05mmol)和Pd(Ph3P)4(336mg，0.29mmol)在无水二噁烷(22mL)中的混合物2.5小时。在将所得绿色悬浮液冷却至室温之后，在真空条件下除去溶剂。将所得残留物溶解在CH2Cl2中，并用水和盐水洗涤有机层，干燥(MgSO4)，并在真空中浓缩。所得残留物使用快速色谱法(125g硅胶，8∶0.5∶0.5→7∶0.5∶0.5CH2Cl2∶MeOH∶AcOEt→9∶1CH2Cl2∶MeOH)纯化，从而得到黄色固体，所述固体用反相HPLC(之后用CH2Cl2/NaHCO3提取)进一步纯化。分离得到标题化合物，为黄色固体(220.4mg，14％)。1HNMR(300MHz，CDCl3)δ7.48(d，J＝2.0Hz，1H)，7.24(dd，J＝2.0，8.0Hz，1H)，7.18(d，J＝8.8Hz，1H)，7.12(d，J＝8.0Hz，1H)，6.90(d，J＝8.8Hz，2H)，6.84(d，J＝8.8Hz，1H)，6.72(d，J＝8.8Hz，2H)，4.23(t，J＝5.0Hz，2H)，4.00(d，J＝15.5Hz，1H)，3.74(d，J＝15.5Hz，1H)，3.24(t，J＝5.0Hz，2H)，3.15-3.04(m，4H)，2.20(s，3H)，2.05-1.93(m，4H)；MS(ESI)m/z 523.8(M)+；HPLC tR4.74分钟。
5.4实施例4合成8-乙酰基-3-(2，4-二氯苯基)-7-羟基-4-(4-(2-吡咯烷-1-基-乙氧基)-苄基)-色烯-2-酮 如上文实施例3所述进行步骤A-F，而步骤G用以下步骤H替换。
H.
在回流温度下搅拌3-(2，4-二氯苯基)-7-羟基-8-碘代-4-(4-(2-吡咯烷-1-基-乙氧基)-苄基)-色烯-2-酮(187mg，0.294mmol)、三丁基(1-乙氧基乙烯基)锡(119μL，0.353mmol)和Pd(Ph3P)4(34mg，0.0294mmol)在无水二噁烷(6mL)中的混合物2小时。在冷却至室温之后，加入1M HCl水溶液，并将所得到的混合物搅拌20分钟。加入CH2Cl2，并分离各层。再用CH2Cl2(2x)提取水层。干燥(MgSO4)混合的有机层并在真空中浓缩。所得残留物使用快速色谱法(硅胶，19∶1→9∶1CH2Cl2∶MeOH)进行纯化，从而得到淡褐色固体(48mg，HPLC纯度84％)，用AcOEt/己烷对该固体进行重结晶而制得标题化合物，为黄色固体(22mg，14％)。
I.
将步骤H的产物溶解在2-丙醇/浓缩HCI的混合物中。在室温下搅拌20分钟之后，蒸发溶剂。将所得固体在Et2O中捣碎，并过滤而制得12mg标题化合物，呈其盐酸盐的形式。1H NMR(300MHz，DMSO)δ11.57(s，1H)，10.05-9.91(宽信号峰，1H)，7.72(d，J＝2.0Hz，1H)，7.56(d，J＝8.8Hz，1H)，7.48(dd，J＝2.0，8.0Hz，1H)，7.44(d，J＝8.0Hz，1H)，7.04(d，J＝8.5Hz，2H)，6.86-6.78(m，3H)，4.20(t，J＝4.5Hz，2H)，4.02(d，J＝15.5Hz，1H)，3.73(d，J＝15.5Hz，1H)，3.60-3.45(m，4H)，3.25-2.97(m，2H)，2.58(s，3H)，2.05-1.75(m，4H)；MS(ESI)m/z 552.0(M+H)+；HPLC tR5.33分钟。
5.5实施例5合成3-(4-氯苯基)-7-羟基-8-碘代-4-{(4-(2-哌啶基乙氧基)苯基)甲基}2H-色烯-2-酮
往3-(4-氯苯基)-7-羟基-4-{(4-(2-哌啶基乙氧基)苯基)甲基}-2H-色烯-2-酮(0.500g)的甲醇(10mL)溶液中加入氢氧化铵(3mL)和单价碘(0.259g)。将该反应混合物在室温下搅拌10分钟。在减压条件下除去溶剂。用二氯甲烷(3X)和水提取所得到的固体。将有机层混合，并用硫酸镁干燥。过滤掉硫酸镁，并在减压条件下除去溶剂，制得黄色固体。通过预备HPLC(20-50％乙腈/水，20mL/分钟)纯化所述固体，从而得到标题化合物(0.290g，46％产率)。1H-NMR(CDCl3)δ7.34(dd，3H)，7.20(d，2H)，6.92(d，2H)，6.84(d，1H)，6.75(d，2H)，4.13(t，2H)，3.97(s，2H)，2.84(t，2H)，2.61(bs，3H)，1.643(m，4H)，1.46(m，2H)，1.24(m，1H)。MS(m/z)616(M+1)+。
5.6实施例6合成3-(4-氯苯基)-7-羟基-2-氧-4-{(4-(2-哌啶基乙氧基)苯基)-2H-色烯-8-腈-2-酮 往3-(4-氯苯基)-7-羟基-8-碘代-4-{(4-(2-哌啶基乙氧基)苯基)甲基}-2H-色烯-2-酮(如上文实施例5所述制得)(1.50g)在二甲基甲酰胺(30mL)的溶液中加入氰化铜(1.05g)。所述溶液在120℃下在螺纹口烧瓶中加热18小时。在冷却至室温之后，将所述溶剂在减压条件下除去。所得到的油用二氯甲烷和水提取。混合有机层并用硫酸镁干燥。过滤掉该硫酸镁，并在减压条件下除去溶剂。所述粗固体通过预备HPLC(30-65％乙腈/水，20mL/分钟，30分钟)纯化，从而得到标题化合物(0.125g，10％产率)。MS(m/z)515(M+1)+。
5.7实施例7合成7-羟基-8-丙-2-烯基-4-{(4-(2-吡咯烷基乙氧基)苯基)甲基}-3-(4-(三氟甲基)苯基)-2H-色烯-2-酮 A.7-丙-2-烯氧基-4-{(4-(2-吡咯烷基乙氧基)苯基)甲基}-3-(4-(三氟甲基苯基)-2H-色烯-2-酮往7-羟基-4-{(4-(2-吡咯烷基乙氧基)苯基)甲基}-3-(4-(三氟甲基)苯基)-2H-色烯-2-酮(0.550g)在四氢呋喃(6mL)和二氯甲烷(6mL)中的溶液中加入烯丙基醇(0.226mL)和三苯基膦(0.641g)。然后，将二异丙基偶氮二羧酸盐(0.437mL)滴加到该溶液中。所得混合物搅拌约1小时(或直到原材料消耗完)。在减压条件下浓缩所述溶液，并用二氯甲烷(3X)和水提取。所述有机层用硫酸镁进行干燥，过滤掉该硫酸镁，并在减压条件下浓缩所述溶剂，从而得到橙色油。所述油通过硅胶色谱法(6-10％甲醇/二氯甲烷)进行纯化，从而制得7-丙-2-烯氧基-4-{(4-(2-吡咯烷基乙氧基)苯基)甲基}-3-(4-(三氟甲基)苯基)-2H-色烯-2-酮(0.245g，40％产率)。MS(m/z)550(M+1)+。
B.7-羟基-8-丙-2-烯基-4-{(4-(2-吡咯烷基乙氧基)苯基)甲基}-3-(4-(三氟甲基)苯基-2H-色烯-2-酮将7-丙-2-烯氧基-4-{(4-(2-吡咯烷基乙氧基)苯基)甲基}-3-(4-(三氟甲基)苯基)-2H-色烯-2-酮(0.150g)溶解在二乙基苯胺(4mL)中，并在190℃下搅拌2小时。所得溶液用二氯甲烷(3X)和1M盐酸提取。所得有机层用硫酸钠干燥，并过滤，所述溶剂在减压条件下除去，从而制得粗制褐色固体。所述固体用预备HPLC(40-100％乙腈/水，20mL/分钟)纯化，得到标题化合物(0.027g，18％产率)。1H-NMR(CDCl3)δ7.63(d，2H)，7.38(d，2H)，7.25(d，1H)，6.92(d，2H)，6.75(d，2H)，6.70(d，1H)，6.0(m，1H)，5.13(dd，2H)，4.12(t，2H)，3.94(s，2H)，3.66(d，2H)，3.05(bs，2H)，2.8(bs，4H)，1.25(s，2H)。MS(m/z)550(M+1)+。
5.8实施例8合成8-((二甲基氨基)甲基)-3-(4-氯苯基)7-羟基-4-{(-(2-哌啶基乙氧基)苯基)甲基}-2H-色烯-2-酮 往37％甲醛的水(0.414mL)溶液中加入2.0M二甲基苯胺(2.5mL)。在室温下搅拌该溶液15分钟，并将其加入到溶解在甲醇(5mL)和二氯甲烷(2mL)中的7-羟基-4-{(4-(2-吡咯烷基乙氧基)苯基)甲基}-3-(4-(三氟甲基)苯基)-2H-色烯-2-酮(0.250g)中。将所得到的混合物加热至70℃，保持约3小时(或直到通过薄层色谱法不能检测到可检测量的原料为止)。所述溶剂在减压条件下除去，所得油用二氯甲烷(3X)和碳酸氢钠溶液提取。将所述有机层混合并用硫酸镁干燥，过滤掉该硫酸镁，并在减压条件下除去溶剂。所得油通过预备HPLC(20-50％乙腈/水，20mL/分钟，30分钟)纯化，从而制得标题化合物(0.130g.，46％产率)。1H-NMR(CDCl3)δ7.33(dd，3H)，7.18(d，2H)，6.93(d，2H)，6.78(d，2H)，6.75(d，1H)，4.05(t，3H)，3.94(s，2H)，2.74(t，2H)，2.48(bs，3H)，2.42(s，6H)，1.59(m，4H)，1.44(m，2H)，1.25(m，1H)。MS(m/z)547(M+1)+。
5.9实施例96-溴-7-羟基-4-(4-(2-吡咯烷-1-基-乙氧基)-苄基)-3-(4-三氟甲基-苯基)-色烯-2-酮 A.1-(5-溴-2-羟基-4-甲氧基-苯基)-2-(4-羟基-苯基)-乙酮 将溴(3.6mL，75.6mmol)的乙酸(50mL)溶液搅拌滴加到1-(2-羟基-4-甲氧基-苯基)-2-(4-羟基-苯基)-乙酮(20g，77.4mmol)的乙酸(500mL)溶液中，将该反应混合物搅拌8小时。然后，在减压条件下除去乙酸，将所得到的固体并从甲醇/水中重结晶，而制得8.9g粗产物。使用反相预备HPLC(30-100％乙腈+0.1％ TFA水溶液+0.1％ TFA，进行18分钟，然后100％乙腈进行15分钟)进一步纯化，制得级份，将该级份用碳酸氢钠中和，并用乙酸乙酯提取。将得到的有机级份混合，并通过硫酸镁干燥和过滤，减压条件下除去溶剂，从而制得标题化合物(4.8g，18％)。MS(ESI)m/z337.3(M+1)+，339.3(M+1+2)+。
B.6-溴-4-(4-羟基-苄基)-7-甲氧基-3-(4-三氟甲基-苯基)-色烯-2-酮 在80℃的油浴中加热1-(5-溴-2-羟基-4-甲氧基-苯基)-2-(4-羟基-苯基)-乙酮(0.64g，1.9mmol)、4-三氟甲基苯基乙酸(0.78g，3.8mmol)、碳酰二咪唑(0.62g，3.8mmol)、N，N-二甲基氨基吡啶(0.12g，1.0mmol)和碳酸钾(0.52g，3.8mmol)在DMF(15mL)中的混合物过夜。将冷却后的该反应混合物倒入到水中，并用EtOAc提取。将有机提取物混合，并用水和饱和氯化钠相续洗涤，用硫酸镁干燥，过滤并在减压条件下浓缩。所得到的材料用硅胶快速柱色谱法(1∶2EtOAc∶己烷)进行纯化，从而制得标题化合物(0.82g，85％)。MS(ESI)m/z 505.0(M+1)+，507.0(M+1+2)+。
C.6-溴-7-甲氧基-4-(4-(2-吡咯烷-1-基-乙氧基)-苄基)-3-(4-三氟甲基-苯基)-色烯-2-酮
向6-溴-4-(4-羟基-苄基)-7-甲氧基-3-(4-三氟甲基-苯基)-色烯-2-酮(0.70g，1.4mmol)和三苯基膦(0.73g，2.8mmol)在THF(40mL)中的溶液中依次加入1-(2-羟基乙基)吡咯烷(0.65mL，5.6mmol)和二异丙基偶氮二羧酸(0.55mL，2.8mmol)。在室温下搅拌该反应混合物过夜。将该反应混合物倒入水中，并用EtOAc提取。将有机提取物混合并用水和饱和氯化钠相续洗涤，用硫酸镁干燥，过滤并在减压条件下浓缩。使用硅胶快速柱色谱法(10％甲醇，在CH2Cl2中)纯化，制得固体标题化合物(0.44g，53％)。MS(ESI)m/z602.3(M+1)+，604.3(M+1+2)+。
D.6-溴-7-羟基-4-(4-(2-吡咯烷-1-基-乙氧基)-苄基)-3-(4-三氟甲基-苯基)-色烯-2-酮 将6-溴-7-甲氧基-4-(4-(2-吡咯烷-1-基-乙氧基)-苄基)-3-(4-三氟甲基-苯基)-色烯-2-酮(0.20g，0.3mmol)和溴化氢在乙酸(10mL)中的溶液加热到回流过夜。在冷却之后，减压下除去过量的乙酸。将所得的残留物溶于乙酸乙酯，并用饱和的碳酸氢钠、水和饱和氯化钠相续洗涤；用硫酸镁干燥，过滤并在减压条件下浓缩，从而制得粗产物。使用反相预备HPLC(20-80％乙腈+0.1％ TFA水溶液+0.1％ TFA，进行30分钟)进行纯化，制得级份，将该级份随后用碳酸氢钠中和，并用乙酸乙酯提取。将有机部分混合并用硫酸镁干燥，过滤并在减压下浓缩，从而制得标题化合物(＞98％纯度，45.0mg，23％)。1H NMR(300MHz，d6-DMSO)δ7.78(m，2H)，7.69(s，1H)，7.55(m，2H)，7.08(m，2H)，6.88(s，1H)，6.83(m，2H)，4.04(t，2H)，3.94(s，2H)，2.92(t，2H)，2.67(bm，4H)，1.72(bm，4H)。MS(ESI)m/z 588.3(M+1)+，590.3(M+1+2)+。
实施例10其它代表性的苯并吡喃酮化合物下表1公开了代表性的苯并吡喃酮化合物。这些苯并吡喃酮化合物可以使用本文所述的方法制得。
表1代表性的苯并吡喃酮化合物 及其药学上可接受的盐，式中
实施例11抑制IL-6的释放测试了例举性苯并吡喃酮化合物抑制人U-2OS骨肉瘤细胞释放IL-6的能力，该骨肉瘤细胞用人ER-α或ER-β稳定转染(Stein，B.；Yang，M.X.Mol.Cell.Biol 154971-4979，1995；Poli，V.等，EMBO J.131189-1196，1994)。测定不表达可检测水平的ER-α或ER-β的亲代未转染U-2OS细胞系的IL-6释放作为对照。IC50＜100nM的苯并吡喃酮化合物是特别有用的体内骨再吸收抑制剂。因此，该苯并吡喃酮化合物尤其可用于治疗骨质疏松、佩吉特病和转移性骨癌。这些苯并吡喃酮化合物还可用作抗癌制剂，因为IL-6水平升高是某些癌症，如多发性骨髓瘤、前列腺癌、卵巢癌、直肠癌和宫颈癌的致病因。
采用标准分子生物学技术，用人全长ER-α或ER-β的表达载体稳定转染人U-2OS骨肉瘤细胞(ATCC)。得到表达高水平ER-α或ER-βmRNA的稳定亚克隆。用RNA酶保护分析验证ER-α或ER-β的表达。亲代U-2OS细胞不表达任何可检测量的ER-α或ER-β。
将细胞以每孔80,000个细胞的密度加入到96孔板中的无酚红培养基中，该培养含有经活性碳吸附的胎牛血清。24小时后用运载体(0.2％ DMSO)或苯并吡喃酮化合物(0.01-1000nm，用0.2％ DMSO配制)处理细胞。30分钟后用2.5ng/ml TNFα和1ng/ml IL-1β刺激细胞。24小时后用市售的ELISA试剂盒按照制造商的说明分析培养基上清中的细胞因子(IL-6)的产量。存在运载体(0.2％ DMSO)时的细胞因子产量设为100％。
结果(表2)用IC50(nM)值表示，该值表示相对于运载体存在时产生的IL-6的量足以抑制50％ IL-6产生的苯并吡喃酮化合物的浓度。结果显示，例举性的苯并吡喃酮化合物抑制了IL-6的释放，因此可用于治疗或预防骨再吸收疾病。
实施例12抑制MCF-7乳腺癌细胞增殖该实施例显示了例举性的苯并吡喃酮化合物在体外抑制MCF-7乳腺癌细胞17β-雌二醇依赖性生长的能力，并比较了它们和参考SERM的活性。MCF-7细胞是研究化合物对雌激素依赖性乳腺癌生长的作用的极好的体外系统。(May，F.E.B.；Westley，B.R.J.Biol.Chem.26215894-15899，1987)。IC50＜100nM的苯并吡喃酮化合物是特别有效的体内抗-乳腺癌剂。
将MCF-7乳腺癌细胞以每孔5×103个细胞的密度加入到24孔板中无酚红DMEM∶F-12(1∶1)培养基中，该培养基含有1％抗生素、0.05％巯基乙醇、0.01％乙醇胺、0.42ng/mL亚硒酸钠和5％经活性碳吸附的FCS。
在培养的MCF-7乳腺癌细胞中加入例举性苯并吡喃酮化合物(0.1-1000nM，用0.2％ DMSO配制)和0.1nM 17β-雌二醇，维持72小时。然后加入3H-标记的胸腺嘧啶并在温育4小时后测量它在细胞中的掺入量。结果(表2)用IC50(nM)值表示，该值表示相对于对照足以抑制50％ MCF-7乳腺癌细胞生长的苯并吡喃酮化合物的浓度。结果显示，例举性的苯并吡喃酮化合物抑制了MCF-7乳腺癌细胞增殖，因此可用于治疗或预防患者的乳腺癌。
表2体外数据
因此，如上表2所示，实施例11和12的体外结果显示了所述苯并吡喃酮化合物可用于治疗或预防骨再吸收疾病和癌症。
实施例13抑制BG-1卵巢癌细胞增殖该测定用来证实例举性的苯并吡喃酮化合物在体外抑制BG-1卵巢癌细胞17β-雌二醇依赖性生长的能力，并比较了它们和参考SERM的活性。BG-1细胞是评价抗雌激素化合物对卵巢肿瘤生长的作用的有效体外模型(Greenberger，L.M.等，Clin.Cancer Res.73166-3177，2001)。
将BG-1卵巢癌细胞以每孔5×103个细胞的密度加入到24孔板中的无酚红DMEM∶F-12(1∶1)培养基中，该培养基含有1％抗生素、0.05％巯基乙醇、0.01％乙醇胺、0.42ng/mL亚硒酸钠和5％经活性碳吸附的FCS。向培养的BG-1卵巢癌细胞中加入例举性苯并吡喃酮化合物(0.1-1000nM，用0.2％DMSO配制)和0.1nM 17β-雌二醇并培育72小时。之后加入3H-标记的胸腺嘧啶并在温育4小时后测量它在细胞中的掺入量。结果用IC50(nM)值表示，该值表示相对于对照足以抑制50％ BG-1卵巢癌细胞生长的苯并吡喃酮化合物的浓度。例举性的苯并吡喃酮化合物抑制了BG-1卵巢癌细胞的生长，因此可用于治疗或预防患者的卵巢癌。
实施例14大鼠药代动力学(PK)分析大鼠PK盒式标准测定通过经口的管饲法给予大鼠剂量水平为5毫克/千克体重的例举性苯并吡喃酮化合物和内标物雷洛昔芬。在给药后15分钟至24小时的时间期间内取血样。将血样通过乙腈沉淀、离心，并在真空离心机内蒸发上清。将干燥的残余物溶于含有1％甲酸的甲醇/水(60∶40v/v)中并在UPTISPHERETM C18反相HPLC柱(粒径3μm；柱规格2×50mm)上通过HPLC进行分析。洗脱液A是含有0.1％甲酸的10％乙腈水溶液(pH 2.1)，洗脱液B是含有10％水和0.1％甲酸的90％乙腈(pH 2.1)。用5-100％B线性洗脱7分钟，然后在100％B保持3分钟，柱温为50℃恒温。流速恒定为0.4mL/min。加样体积为10μL。将HPLC系统的流出液直接导入到Agilent 1100系列MS检测器(单四极质谱仪)的离子源中并对其进行大气压电雾化电离(正模式)。所有化合物作为质子化的准分子离子(M+H)+检测。雷洛昔芬用作分析内标物。基于采用空白大鼠血样的7-水平校准曲线(一式三份)来量化化合物的血液水平，该空白大鼠血样中加入了外标和内标贮液。
大鼠PK盒式验证将雷洛昔芬(3毫克/千克)单独分别经口(p.o.)给予4只雌性大鼠。按上文所述收集血样和进行分析。将该验证研究产生的药代动力学数据与在盒式剂量试验中获得的雷洛昔芬的数据进行比较以检测可能的药代动力学反应。超出典型生物差异范围的偏差(约为各个参数最大值的±50％)被强烈认为是盒内化合物之间发生药代动力学反应的指示，将各个这种数据抛弃。
实施例15静脉内和口服给药之后例举性苯并吡喃酮化合物在短尾猴中的药代动力学特征以0.5毫克/千克的剂量静脉内给予和1.0毫克/千克的剂量口服给予苯并吡喃酮化合物。对静脉内给药而言，将10mg化合物溶于0.4mL 1-甲基-2-吡咯烷酮中并用PEG 200调至2mL，所得浓度为5mg/mL。
将苯并吡喃酮化合物作为悬浮液口服给予。该悬浮液是通过将20mg化合物溶于约18mL溶液中而制得的，该溶液是溶于1.0％羟丙基纤维素(HPC，w/v)的2.5％(w/v)苹果酸。之后，用1N NaOH将pH调至4.5并将体积调至20mL。得到测试化合物的最终浓度为1.0mg/mL。
将苯并吡喃酮化合物静脉注射到隐静脉(注射体积为0.1mL/kg，注射时间约为30秒)。口服给药通过经口的管饲法进行(给药体积为1mL/kg，用10ml水冲洗)。对于每种给药模式苯并吡喃酮化合物被给予2只动物(对静脉内和口服，n＝2)。
通过静脉刺穿从头静脉或隐静脉收集血样(每个时间点约0.5ml)，置于涂布有EDTA的试管中，将试管立即置于冰上并在-20℃冷冻储藏。
按照以下时间方案进行试验(a)未处理动物的血样(时间0，基线)；
(b)给予测试化合物；和(c)给药后第5、15、30、60、120、180、240、420分钟、24和48小时的血样(静脉内和口服给药)。
表3研究动物和药物治疗
本发明不限于实施例中所揭示的具体实施方案的范围，这些实施方案只是为了说明本发明的一些方面，任何在功能上相同的实施方案都在本发明范围之内。实际上，除了上文显示和描述的那些，本发明的各种修饰对于精通本领域的技术人员而言是显而易见的并在所附权利要求的范围之内。
引用了许多参考资料，其完整内容被全文纳入本文作为参考。
权利要求
1.一种具有以下结构的化合物或其药学上可接受的盐 式中X和Y独立地为氢、卤素或(卤代)(C1-6烷基)；n是1、2或3；和以下情况之一(a)R1是氢，R2是卤素、羟基、-(C1-6烷基)、乙烯基、-(C2-6炔基)、-C(O)O(C1-6烷基)、-(羟基)(C1-6烷基)、-(氨基)(C1-6烷基)、-(CH2)m-O-(C1-6烷基)、-C(O)(C1-6烷基)、-(CH2)m-苯基、-(3到7元单环杂环)、-COOH、-C(O)H或-CN；(b)R2是氢，R1是卤素、羟基、-(C1-6烷基)、-(C2-6烯基)-(C2-6炔基)、-C(O)O(C1-6烷基)、-(羟基)(C1-6烷基)、-(氨基)(C1-6烷基)、-(CH2)m-O-(C1-6烷基)、-C(O)(C1-6烷基)、-(CH2)m-苯基、-(3到7元单环杂环)、-COOH、-C(O)H或-CN；或(c)R1和R2是-CH3。
2.如权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中该化合物具有以下结构
3.一种制备具有以下结构的化合物或其药学上可接受的盐的方法 该方法包括使具有以下结构的化合物或其药学上可接受的盐去甲基化的步骤 式中X和Y独立地为氢、卤素或(卤代)(C1-6烷基)；n是1、2或3；和以下情况之一(a)R1是氢，R2是卤素、羟基、-(C1-6烷基)、乙烯基、-(C2-6炔基)、-C(O)O(C1-6烷基)、-(羟基)(C1-6烷基)、-(氨基)(C1-6烷基)、-(CH2)m-O-(C1-6烷基)、-C(O)(C1-6烷基)、-(CH2)m-苯基、-(3到7元单环杂环)、-COOH、-C(O)H或-CN；(b)R2是氢，R1是卤素、羟基、-(C1-6烷基)、-(C2-6烯基)-(C2-6炔基)、-C(O)O(C1-6烷基)、-(羟基)(C1-6烷基)、-(氨基)(C1-6烷基)、-(CH2)m-O-(C1-6烷基)、-C(O)(C1-6烷基)、-(CH2)m-苯基、-(3到7元单环杂环)、-COOH、-C(O)H或-CN；或(c)R1和R2是-CH3。
4.一种治疗或预防骨再吸收疾病的方法，该方法包括给予需要这种治疗或预防的患者有效量的如权利要求1所述的化合物或该化合物的药学上可接受的盐。
5.如权利要求4所述的方法，其中所述的骨再吸收疾病是骨质疏松、转移性骨癌、高钙血症、整形外科植入物造成的溶骨性病变、佩吉特病或与甲状旁腺功能亢进有关的骨流失。
6.一种治疗或预防肿瘤性疾病的方法，该方法包括给予需要这种治疗或预防的患者有效量的如权利要求1所述的化合物或该化合物的药学上可接受的盐。
7.如权利要求6所述的方法，其中所述的肿瘤性疾病是癌。
8.如权利要求7所述的方法，其中所述的癌是头和颈、眼、皮肤、嘴、喉、食道、胸、骨、血、肺、结肠、乙状结肠、直肠、胃、前列腺、乳腺、卵巢、子宫、肾、肝、胰腺、脑、肠、心脏或肾上腺的癌。
9.如权利要求7所述的方法，其中所述的癌是子宫、卵巢或乳腺的癌。
10.一种激活骨细胞中ER的功能的方法，该方法包括给予需要这种治疗或预防的患者有效量的如权利要求1所述的化合物或该化合物的药学上可接受的盐。
11.如权利要求10所述的方法，其中所述的细胞是骨肉瘤细胞。
12.一种抑制乳腺癌细胞、卵巢癌细胞、子宫内膜癌细胞、子宫癌细胞、前列腺癌细胞或下丘脑癌细胞中ER的功能的方法，该方法包括使所述细胞接触有效量的如权利要求1所述的化合物或该化合物的药学上可接受的盐。
13.一种抑制IL-6表达的方法，该方法包括使能够表达ER和IL-6的细胞接触有效量的如权利要求1所述的化合物或该化合物的药学上可接受的盐。
14.如权利要求13所述的方法，其中所述的细胞是骨细胞。
15.一种抑制表达ER的肿瘤细胞生长的方法，该方法包括使能够表达ER的肿瘤细胞接触有效量的如权利要求1所述的化合物或该化合物的药学上可接受的盐。
16.如权利要求15所述的方法，其中所述的细胞是癌细胞。
17.一种治疗或预防在雌激素存在时恶化的疾病的方法，该方法包括给予需要这种治疗或预防的患者有效量的如权利要求1所述的化合物或该化合物的药学上可接受的盐。
18.如权利要求17所述的方法，其中所述的疾病是癌。
19.一种治疗或预防在雌激素存在时改善的疾病的方法，该方法包括给予需要这种治疗或预防的患者有效量的如权利要求1所述的化合物或该化合物的药学上可接受的盐。
20.如权利要求19所述的方法，其中所述的疾病是骨再吸收疾病。
21.一种治疗或预防子宫内膜异位症、高胆固醇血症、前列腺肥大、前列腺癌、肥胖、潮红、皮肤效应、情绪波动、失忆、绝经期综合征、脱发(秃发)、II型糖尿病、阿耳茨海默病、尿失禁、胃肠道疾病、损伤后血管保护、CNS效应、痤疮或白内障的方法，该方法包括给予需要这种治疗或预防的患者有效量的如权利要求1所述的化合物或该化合物的药学上可接受的盐。
22.一种治疗或预防心血管疾病、多毛症、多发性骨髓瘤或淋巴瘤的方法，该方法包括给予需要这种治疗或预防的患者有效量的如权利要求1所述的化合物或该化合物的药学上可接受的盐。
23.一种预防精子发生的方法，该方法包括给予需要这种预防的患者有效量的如权利要求1所述的化合物或该化合物的药学上可接受的盐。
24.一种预防与暴露于环境化学或天然激素失调有关的不良生殖影响的方法，该方法包括给予需要这种预防的患者有效量的如权利要求1所述的化合物或该化合物的药学上可接受的盐。
25.一种含有有效量的如权利要求1所述的化合物或该化合物的药学上可接受的盐以及药学上可接受的载体或运载体的组合物。
全文摘要
公开了具有以下结构的苯并吡喃酮化合物其中R
文档编号A61K31/4025GK1890235SQ200480033121
公开日2007年1月3日 申请日期2004年9月13日 优先权日2003年9月15日
发明者杰弗里·A·麦金, 施拉佩得·S·巴格瓦, 约翰尼·贝纳乌德, 马丁·米斯拜克 申请人:西格诺药品有限公司, 瑞士诺华公司