专利名称：一种紫杉烷脂质体冻干组合物及其制备方法
技术领域：
本发明涉及药物制剂技术，尤其涉及一种紫杉烷脂质体冻干组合物及其制备方法。
背景技术：
紫杉醇于1992年上市，初期用于乳腺癌与子宫癌的二线治疗，于1998年开始与顺氯氨铂合用作为非小细胞型肺癌与子宫癌的一线治疗。市售产品的剂型采用酒精和Cremophore EL(聚氧乙烯蓖麻油甘油醚)给药系统，毒性大、尤其是过敏反应，其说明书中指出“为防止出现严重过敏反应，所有接受该药病人应预先给予皮质类固醇(如地塞米松)、苯海拉明和H2受体拮抗剂(如西米替丁、雷尼替丁)”。
在对紫杉醇结构改造过程中，又新合成了紫杉醇衍生物------多烯紫杉醇(Docetaxel)，其生物利用度和抗癌活性均优于紫杉醇、而毒副作用小。1998年经美国FDA批准，用于治疗乳腺癌和非小细胞肺癌。同时多烯紫杉醇还表现出抗卵巢癌、卡波西肉瘤、白血病、结肠癌、黑色素瘤的活性。多烯紫杉醇最早是由法国AVENTIS公司以TAXOTERE(泰素帝)注射剂形式上市，制剂中含有大量的Tween80(聚山梨酯80，非离子型表面活性剂)，过敏反应严重，其用药前三天需给予地塞米松以预防过敏反应的发生。
因紫杉烷类药物难溶于水，脂质体剂型的紫杉烷药物研究已成为热门研究课题。然而，电中性的脂质体有聚集趋势，而疏水性的紫杉烷所具有的膜活性作用又促进了脂质体聚集，因此普通紫杉烷脂质体制剂的脂质体形态很不稳定，如包封率降低、因聚集而形成的大颗粒和紫杉烷晶体的析出，使得该种制剂远达不到人体静脉注射用药的安全性要求。
曾有一些专利公开了加入某种磷脂组份，可提高脂质体的稳定性的报道，如美国专利US 5415869(1995)揭示当加入荷负电性的磷脂，如磷脂酰甘油酯(PG)与磷脂酰胆碱(PC)组合成脂质体膜材，紫杉醇约占磷脂的3mol％左右时，其储存稳定性约为一周，而载药达4mol％时，则只能稳定2天。
美国专利US 5670536(1997)公开了一种多烯紫杉醇及其衍生物的脂质体制剂，该专利指出以不饱和磷脂和少量荷负电性磷脂为组合膜材，药物/磷脂质量比为3-20％时，可得到于20℃储存维持8周澄清的脂质体制剂，其稳定性评价指标为药物无结晶析出或不产生沉淀，但没有粒径和包封率稳定性数据；另外，负电性磷脂PG在卵磷脂中含量极少，不易得到，国外也只有试剂规格，价格昂贵。
美国专利US 5424073(1995)和US5648090(1997)公开了一种紫杉醇脂质体配方，在主成份PC外添加一种特别的磷脂-------心磷脂(cardiolipid)，这种磷脂较为特殊，其分子结构具有一个较大的亲水基与4个脂肪碳链所组成，可使包封的紫杉醇占总磷脂比例提升至9mol％，但在4℃以下储存，其稳定性也仅一个月左右，且心磷脂同样不易得到，目前也仅有试剂规格，价格昂贵。
由于这些用于提高稳定性的磷脂组份价格昂贵，它们都在一定程度上限制了紫杉烷类脂质体药物的市场化实施。
中国专利CN1291474A揭示了一种紫杉醇脂质体冻干组合物及其制备方法，组合物配方组成为紫杉醇、磷脂、胆固醇、甘露醇或葡萄糖，特别添加了氨基酸(如赖氨酸、苏氨酸或蛋氨酸)作为稳定剂，所述脂质体冻干组合物为类白色疏松块状物，其稳定性表现为在低温储存(摄氏2-10度)0-12个月后复溶解，其溶液中无结晶析出、不聚集，但没有报道脂质体组合物在溶液中的粒径和包封率变化的数据。
然而，对于抗肿瘤药物脂质体组合物来讲，如果由于脂质体的聚集、融合使其在溶液中的粒径大于200nm以上，则其在体内的被清除速度会大大加快，药物在未到达肿瘤部位时即被清除，达不到较好的抗肿瘤效果。
因此，低成本地提高紫杉烷类脂质体药物组合物、尤其是复溶稀释后组合物脂质体性状的稳定性，是本领域技术人员长期以来一直希望予以克服的技术难题。
发明内容
本发明所要解决的技术问题在于设计一种具有低成本性的、复溶后脂质体性状仍然稳定的紫杉烷药物脂质体冻干组合物。
本发明为了解决上述技术问题，本发明的方案是在紫杉烷脂质体冻干组合物配方中加入环糊精成份，该项技术未见有相关报道，同时也是无法根据传统见解来加以预测的。
本发明提供了一种紫杉烷药物脂质体冻干组合物，它包括一种或多种磷脂酰胆碱(PC)、胆甾醇或其衍生物、环糊精、紫杉烷和冻干保护剂，组合物中紫杉烷药物浓度为3-6mg/ml，组合物以冻干品形式存在有利于其储存稳定性，复溶重建后仍可得澄清稳定的脂质体溶液。
本发明紫杉烷脂质体冻干组合物，其各组份重量百分比为紫杉烷0.4％-1.9％、磷脂9.5％-25％、胆固醇1.5％-2.3％、环糊精4.5％-1.6％、干赋形剂84.1％-70.2％。
本发明紫杉烷脂质体冻干组合物，其优选的各组份重量百分比为紫杉烷0.6％-1.2％、磷脂14.5％-22.7％、胆固醇1.3％-2.1％、环糊精3.1％-4.7％、冻干赋形剂71.6％-78.1％。
本发明紫杉烷脂质体冻干组合物，其更为优选的各组份重量百分比为紫杉烷0.7％-1.0％、磷脂17.0％-20.4％、胆固醇1.7％-2.1％、环糊精33％-3.7％、冻干赋形剂73.5％-76.4％。
本发明紫杉烷脂质体冻干组合物中，所述的紫杉烷为紫杉醇或多烯紫杉醇；所述的磷脂可以是注射用蛋黄卵磷脂、大豆卵磷脂和/或氢化大豆卵磷脂；所述的环糊精可以是α-环糊精、β-环糊精或其各自的衍生物；所述的冻干赋形剂为蔗糖、海藻糖、麦芽糖。
本发明的另一目的是提供了紫杉烷脂质体冻干组合物的制备方法，该方法是将紫杉烷、磷脂、胆固醇、环糊精按上各组份配比比例先后搅拌溶于无水乙醇或异丙醇中，使溶液成澄明溶液，然后放入温度为30-50℃的恒温水浴中，在旋转蒸发器中减压除去溶剂后成膜，再加入溶于pH6.8的10mM PBS(磷酸缓冲液)的冻干赋形剂，水化、超声或均质至粒径为0.1μm左右，除菌过滤，分装入西林瓶内，冷冻干燥，即得白色块状的紫杉烷脂质体，真空压塞或通氮气、氦气、氩气后压塞，密封。
按本发明技术方案所制备的冻干品，其包封率在90％以上，平均粒径在60-150纳米；尤其是在用5％葡萄糖输液复溶稀释5倍后8小时时的包封率仍在90％以上，平均粒径在60-150纳米。
本发明的冻干组合物在低温(2℃-10℃)储存12个月后仍质量稳定，特别是在复溶稀释后8h(小时)时仍具有较高的药物脂质体包封率和较小的脂质体粒径，从而既达到人体静脉注射用药的安全性要求、也有利于提高紫杉烷的治疗效果。同时，由于本发明不含有表面活性剂，故本发明药物组合物在使用前不予患者抗过敏治疗，其机体也不会产生过敏反应。
本发明达到了提高紫杉烷脂质体给药系统的稳定性、特别是使脂质体冻干组合物在复溶稀释后的一段时间内仍具有较好的脂质体性状维持之目的。
经比较研究发现，本发明紫杉烷脂质体冻干组合物与不含环糊精处方的紫杉烷脂质体冻干组合物相比，在相同制备方法条件下，前者在用5％葡萄糖输液复溶稀释5倍后8小时时的脂质体包封率基本没有变化，而后者的包封率则有非常显著的降低，且本发明产品在室温存放20h时仍无沉淀析出，显示出优越的质量稳定性。
紫杉烷脂质体冻干组合物复溶后的稳定性比较按本发明技术方案制备的紫杉烷脂质体冻干组合物用5％葡萄糖输液复溶稀释5倍后，其脂质体形态更稳定，在室温存放8h时平均粒径80纳米、包封率基本无变化；而按不含环糊精(CD)处方(其余组份和制备方法同本发明、其中样品No.1为紫杉醇脂质体冻干组合物)制备的紫杉烷脂质体，在室温存放8h时的包封率降为59.6％±1.77％；数据见表1表1.CD对紫杉烷脂质体冻干品复溶后包封率的影响
含和不含环糊精(CD)对紫杉烷脂质体冻干品复溶稀释并室温放置8h时包封率的影响有极显著的统计学意义(P＜0.001)。
另，按本发明技术方案制备的紫杉烷脂质体冻干组合物，经复溶稀释5-160倍(多烯紫杉醇浓度可稀释至0.01mg/ml)，室温存放20h以上，仍无沉淀析出。
本发明低温储存质量稳定性观察按本发明技术方案制备的紫杉烷脂质体冻干组合物，在低温(2℃-10℃)储存的稳定性方面也较好。实验结果表明在考察的12个月内，脂质体的包封率和粒径均基本稳定，数据见表2、表3表2.含环糊精的紫杉烷脂质体冻干品低温储存包封率变化(％)
含有环糊精的紫杉烷脂质体冻干组合物，在低温条件下储存12个月期间，包封率变化无显著性差异(P＞0.05)。
表3.含环糊精的紫杉烷脂质体冻干品低温储存粒径变化(nm)
含有环糊精的紫杉烷脂质体冻干组合物，在低温条件下储存12个月期间，粒径变化无显著性差异(P＞0.05)。
由此，本发明紫杉烷脂质体冻干组合物主要优点在于1.具有良好的储存质量稳定性，特别是在复溶后的液态介质中具有优越的质量稳定性，可供临床静脉输注使用；2.不含表面活性剂，患者无须在用药前接受抗过敏药物治疗；3.低成本性环糊精和低毒性溶媒的采用，使本发明具有良好的市场化实施前景。
下面结合具体实施例，进一步阐明本发明。这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的方法，通常按常规条件制备。
具体实施例方式
实施例1紫杉烷脂质体冻干组合物制备取9.5g蛋黄卵磷脂，1.5g胆固醇，0.4g多烯紫杉醇，4.5g HP-β-CD，溶解于无水乙醇，置于圆底烧瓶中，减压旋转蒸发成膜，加入含84.1g海藻糖的pH6.8的10mM PBS溶液，37℃水化2h，用超声波仪超声或高压均质机均质，再用0.22μm滤膜过滤除菌，分装于西林瓶内，使每瓶含20mg多烯紫杉醇。进行冷冻干燥，真空压塞或通惰性气体封口即得白色块状多烯紫杉醇脂质体制剂。冻干品加相同体积注射用水振摇溶解，得澄清稳定的脂质体悬液，平均粒径150nm。
实施例2紫杉烷脂质体冻干组合物制备取25g蛋黄卵磷脂，1.3g胆固醇，1.9g多烯紫杉醇，1.6g HP-β-CD，溶解于无水乙醇，置于圆底烧瓶中，减压旋转蒸发成膜，加入含70.2g蔗糖的pH6.8的10mM PBS溶液，37℃水化2h，用超声波仪超声或高压均质机均质，再用0.22μm滤膜过滤除菌，分装于西林瓶内，使每瓶含20mg多烯紫杉醇。进行冷冻干燥，真空压塞或通惰性气体封口即得白色块状多烯紫杉醇脂质体制剂。冻干品加相同体积注射用水振摇溶解，得澄清稳定的脂质体悬液，平均粒径60nm。
实施例3紫杉烷脂质体冻干组合物制备取4g大豆卵磷脂，450mg胆固醇，170mg多烯紫杉醇，725mg HP-β-CD，溶解于无水乙醇，置于圆底烧瓶中，减压旋转蒸发成膜，加入含28.8g麦芽糖的pH6.8的10mM PBS溶液，37℃水化2h，用超声波仪超声或高压均质机均质，再用0.22μm滤膜过滤除菌，分装于西林瓶内，使每瓶含20mg多烯紫杉醇。进行冷冻干燥，真空压塞或通惰性气体封口即得白色块状多烯紫杉醇脂质体制剂。冻干品加相同体积注射用水振摇溶解，得澄清稳定的脂质体悬液，平均粒径80nm。
实施例4紫杉烷脂质体冻干组合物制备取3.2g蛋黄卵磷脂，0.8g大豆卵磷脂，405mg胆固醇，170mg紫杉醇，870mg HP-β-CD，溶解于无水乙醇，置于圆底烧瓶中，减压旋转蒸发成膜，加入含32g蔗糖的pH6.8的10mM PBS溶液，37℃水化2h，用超声波仪超声或高压均质机均质，再用0.22μm滤膜过滤除菌，分装于西林瓶内，使每瓶含20mg多烯紫杉醇。进行冷冻干燥，真空压塞或通惰性气体封口即得白色块状多烯紫杉醇脂质体制剂。冻干品加相同体积注射用水振摇溶解，得澄清稳定的脂质体悬液，平均粒径145nm。
实施例5紫杉烷脂质体冻干组合物制备取3.6g蛋黄卵磷脂，0.4g氢化大豆卵磷脂，450mg胆固醇，170mg多烯紫杉醇，870mg HP-β-CD，溶解于无水乙醇，置于圆底烧瓶中，减压旋转蒸发成膜，加入含32g蔗糖的pH6.8的10mM PBS溶液，37℃水化2h，用超声波仪超声或高压均质机均质，再用0.22μm滤膜过滤除菌，分装于西林瓶内，使每瓶含20mg多烯紫杉醇。进行冷冻干燥，真空压塞或通惰性气体封口即得白色块状多烯紫杉醇脂质体制剂。冻干品加相同体积注射用水振摇溶解，得澄清稳定的脂质体悬液，平均粒径90。
实施例6紫杉烷脂质体冻干组合物制备脂质体制备步骤同实施例5，只是各组分如下5g蛋黄卵磷脂，450mg胆固醇，170mg紫杉醇，870mg HP-β-CD。冻干品加相同体积注射用水振摇溶解，得澄清稳定的脂质体悬液，平均粒径120nm。
实施例7紫杉烷脂质体冻干组合物制备脂质体制备步骤同实施例5，只是各组分如下4g蛋黄卵磷脂，450mg胆固醇，170mg多烯紫杉醇，850mg磺丁基醚-β-CD。冻干品加相同体积注射用水振摇溶解，得澄清稳定的脂质体悬液，平均粒径90nm。
实施例8紫杉烷脂质体冻干组合物制备脂质体制备步骤同实施例5，只是各组分如下4g蛋黄卵磷脂，450mg胆固醇，170mg多烯紫杉醇，600mg β-CD。冻干品加相同体积注射用水振摇溶解，得澄清稳定的脂质体悬液，平均粒径95nm。
实施例9紫杉烷脂质体冻干组合物制备脂质体制备步骤同实施例5，只是各组分如下4g蛋黄卵磷脂，400mg胆固醇，170mg紫杉醇，850mg羟乙基-β-CD。冻干品加相同体积注射用水振摇溶解，得澄清稳定的脂质体悬液，平均粒径125nm。
实施例10紫杉烷脂质体冻干组合物制备脂质体制备步骤同实施例5，只是各组分如下4g蛋黄卵磷脂，450mg胆固醇，170mg多烯紫杉醇，850mg葡萄糖基-β-CD。冻干品加相同体积注射用水振摇溶解，得澄清稳定的脂质体悬液，平均粒径90nm。
实施例11紫杉烷脂质体冻干组合物制备脂质体制备步骤同实施例5，只是各组分如下4g蛋黄卵磷脂，500mg胆固醇，170mg多烯紫杉醇，850mg甲基-β-CD。冻干品加相同体积注射用水振摇溶解，得澄清稳定的脂质体悬液，平均粒径100nm。
实施例12紫杉烷脂质体冻干组合物制备脂质体制备步骤同实施例5，只是各组分如下5g蛋黄卵磷脂，450mg胆固醇，170mg紫杉醇，705mg α-CD。冻干品加相同体积注射用水振摇溶解，得澄清稳定的脂质体悬液，平均粒径130nm。
实施例13紫杉烷脂质体冻干组合物制备脂质体制备步骤同实施例5，只是各组分如下4g蛋黄卵磷脂，450mg胆固醇，170mg多烯紫杉醇，826mg甲基-α-CD。冻干品加相同体积注射用水振摇溶解，得澄清稳定的脂质体悬液，平均粒径120nm。
实施例14紫杉烷脂质体冻干组合物制备脂质体制备步骤同实施例5，只是各组分如下4g蛋黄卵磷脂，450mg胆固醇，170mg多烯紫杉醇，881mg羟丙基-α-CD。冻干品加相同体积注射用水振摇溶解，得澄清稳定的脂质体悬液，平均粒径79nm。
权利要求
1.一种紫杉烷脂质体冻干组合物，其特征在于该紫杉烷脂质体冻干组合物由下列重量百分比组份组成紫杉烷0.4％-1.9％、磷脂9.5％-25％、胆固醇1.5％-2.3％、环糊精1.6％-4.5％、冻干赋形剂70.2％-84.1％。
2.按权利要求1所述的紫杉烷脂质体冻干组合物，其特征在于该紫杉烷脂质体冻干组合物由下列重量百分比组份组成紫杉烷0.6％-1.2％、磷脂14.5％-22.7％、胆固醇1.3％-2.1％、环糊精3.1％-4.4％、冻干赋形剂71.6％-78.1％。
3.按权利要求1所述的紫杉烷脂质体冻干组合物，其特征在于该紫杉烷脂质体冻干组合物由下列重量百分比组份组成紫杉烷0.7％-1.0％、磷脂17.0％-20.4％、胆固醇1.7％-2.1％、环糊精3.3％-3.7％、冻干赋形剂73.5％-76.4％。
4.按权利要求1所述的紫杉烷脂质体冻干组合物，其特征在于所述的紫杉烷冻干组合物在复溶后的脂质体平均粒径为60-150纳米。
5.按权利要求1-3任一项所述的紫杉烷脂质体冻干组合物，其特征在于所述的紫杉烷为紫杉醇、多烯紫杉醇或其混合物。
6.按权利要求1-3任一项所述的紫杉烷脂质体冻干组合物，其特征在于所述的磷脂为蛋黄卵磷脂、大豆卵磷脂和/或氢化大豆磷脂。
7.按权利要求1-3任一项所述的紫杉烷脂质体冻干组合物，其特征在于所述的环糊精为α-环糊精或其衍生物、β-环糊精或其衍生物。
8.按权利要求1-3任一项所述的紫杉烷脂质体冻干组合物，其特征在于所述的冻干赋形剂为海藻糖、麦芽糖或蔗糖。
9.一种如权利要求1-3任一项所述的紫杉烷脂质体冻干组合物的制备方法，其特征在于，该方法为将紫杉烷与环糊精先溶解于无水乙醇或异丙醇，再与相应配比的磷脂、胆固醇共同溶解于无水乙醇或异丙醇中，于30-50℃的水浴条件下减压旋转蒸发成膜，加入冻干赋形剂pH6.8的10mM磷酸缓冲液，水化，再用高压乳匀或探头超声方法制得粒径在200nm以下的脂质体，0.22μm无菌过滤、分装入西林瓶内，冷冻干燥后通入氮气、氦气或氩气，即得紫杉烷脂质体冻干组合物。
全文摘要
本发明公开了一种紫杉烷脂质体冻干组合物，本发明组合物处方由紫杉烷、磷脂、胆甾醇、环糊精和冻干赋形剂组成。本发明组合物复溶后8小时时粒径在60－150纳米，包封率在90％以上，无沉淀或结晶析出，本发明解决了低成本地提高紫杉烷脂质体药物组合物、尤其是复溶后在液体介质中的药物组合物脂质体性状稳定性之技术难题。可供临床静脉用药。本发明提供了制备方法。
文档编号A61P35/00GK1813679SQ20051011097
公开日2006年8月9日 申请日期2005年11月30日 优先权日2005年11月30日
发明者牛国琴, 高科攀, 胡素招, 甘勇, 苗红, 韩兴梅, 沈蓉, 应丽, 赵亚红, 韩建生 申请人:上海医药(集团)有限公司