咖啡酰奎尼酸衍生物－1－磷酸酯及其制备与应用的制作方法

专利名称：咖啡酰奎尼酸衍生物－1－磷酸酯及其制备与应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及药物化合物及其合成方法与应用。特别是咖啡酰奎尼酸衍生物-1-磷酸酯及其制备与药学应用。
背景技术：
咖啡酰奎尼酸衍生物的-1-磷酸酯系以3-咖啡酰奎尼酸衍生物药理作用为药学背景的一类化合物。咖啡酰奎尼酸衍生物是多酚类有机酸酯化合物，水溶性差，在水中的溶解度为4％(见Merk索引，12版，1996年，p2199)，如3-咖啡酰奎宁酸。由于结构中存在多酚基团和烯键，见光极易氧化变色，表现出化合物的不稳定性。给原料制备和制剂生产的带来相当大的难度。同时因溶解性差直接影响其在体内的吸收和分布，使体内生物利用度低下。另外一方面，咖啡酰奎尼酸衍生物给药后在体内中广泛分布(见任霞等，绿原酸静脉给药动物体内分析方法的建立及其药代动力学研究，中国优秀博硕士论文集，2005)，缺乏靶向性，使得到达病患组织的药物浓度相对较低，治疗时必须加大剂量以满足必要的治疗浓度，由此会造成相应的毒副作用加重，引起不良反应。

发明内容
本发明的目的是为了克服上述现有技术中的不足之处，提供一种溶解性更好、制剂工艺更简单的咖啡酰奎尼酸衍生物的-1-磷酸酯化合物，进而开发出适合临床应用的前体药物。
本发明的咖啡酰奎尼酸衍生物-1-磷酸酯，其通式化合物I如下 其中R表示H、C1-5烷基、苄基或者碱金属及碱土金属，胺基、哌嗪、哌啶、吗啉、三乙醇胺、葡甲胺；与含羧基有机胺成盐，如氨基酸、二肽、三肽、多肽；
R″表示H、C1-5烷基、苄基或者碱金属及碱土金属；胺基、哌嗪、哌啶、吗啉、三乙醇胺、葡甲胺等；与含羧基有机胺成盐，如氨基酸、二肽、三肽、多肽；R1和R2可以相同或者不同，表示H、羟基、C1-5烷氧基、烷基、胺基、氟、氯、溴取代基、咖啡酰基，特别是羟基或者咖啡酰基。
R3、R4可以相同或者不同，表示H、羟基、CnH2n-1烷氧基、C1-5烷基、胺基、氟、氯、溴取代基，其中n为1-8的整数。
本发明咖啡酰奎尼酸衍生物-1-磷酸酯的制备，是将通式化合物III在惰性气体保护下，加入与通式化合物III等当量的氧氯化磷，于-40℃～0℃反应，得通式化合物III的-1-磷酸酯二氯，按反应体积10～20倍量加水分解产生1-磷酸酯同时脱去3，4位的丙酮保护基，减压浓缩除去溶剂，必要时，用硅胶柱层析分离，其流动相为乙醇:乙酸乙酯系统，得通式化合物II，通式化合物II加入R″，如碱金属及碱土金属，胺基、哌嗪、哌啶、吗啉、三乙醇胺、葡甲胺；与含羧基有机胺成盐，如氨基酸、二肽、三肽、多肽，生成通式化合物I。
本发明咖啡酰奎尼酸衍生物-1-磷酸酯的制剂，是注射液、无菌粉针、无菌冻干粉针、片剂、胶囊、各种缓控释制剂、滴眼液、软膏，在这些配方中使用所指的咖啡酰奎尼酸衍生物-1-磷酸酯含量是在1000个制剂单位量，如1000片或粒、1000ml、1000瓶或1000支中含有1-3000mg，咖啡酰奎尼酸衍生物-1-磷酸酯的含量应为标示量的90％～110％，w/w或w/v。
本发明咖啡酰奎尼酸衍生物-1-磷酸酯及其制剂的应用，是在制备抗癌、抗艾滋病领域药物制剂中的应用。
本发明咖啡酰奎尼酸衍生物-1-磷酸酯及其制剂的应用，是在制备镇痛药物制剂中的应用。
本发明与现有技术相比具有如下优点
1.改善溶解性 咖啡酰奎尼酸衍生物经过1位磷酸酯化后，可在磷酸酯基上形成不同的碱盐，形成咖啡酰奎尼酸衍生物-1-磷酸酯盐类化合物将大大改善咖啡酰奎尼酸衍生物的溶解性，使原溶解度从4％提高到20％以上。降低了不同制剂工艺研究的难度。
2.提高生物利用度 溶解性的增加极有利于化合物作为药物时体内的吸收，提高了药物的生物利用度。
3.药物靶向性 另一方面咖啡酰奎尼酸衍生物-1-磷酸酯类化合物不仅可以作为前体药物提高溶解性低的药物的溶解性，同时，磷酸酯类化合物还可利用体内磷酸酯酶的性质形成靶向分布的作用。虽然磷酸酯酶广泛分布与体内，但是当机体出现疾患时，病患组织部位磷酸酯酶浓度将异常增高，需要大量摄取体内磷酸酯类化合物，以提供机体修复需要。由此出现磷酸酯类化合物向病患组织集中的趋向，实现药物的靶向移动，将咖啡酰奎尼酸衍生物-1-磷酸酯类化合物大量集中于病患组织，水解出大量的咖啡酰奎尼酸衍生物充分发挥药物治疗作用。如肿瘤中磷酸酯酶分布远远大于正常机体组织，从而使母体化合物产生肿瘤组织靶向作用，实现对肿瘤的集中治疗。
具体实施例方式
本发明以下将结合实施例作进一步详述实施例1. 3-咖啡酰奎宁酸-1-磷酸酯的合成将3-咖啡酰-4，5-o-异亚丙基奎宁酸10mmol，三乙胺(NEt3)10mmol，20mlTHF加入到100ml的圆底烧瓶中，反应体系用氩气保护，用液氨的冷却至-30℃以下，缓慢滴加氧氯化磷10mmol，然后自然升温至室温，反应过夜，过滤除去三乙胺盐酸盐，减压浓缩掉THF，将浓缩油状物加入20g冰水中，在氩气保护下搅拌反应24小时，于40℃以下减压浓缩掉水溶液，用乙醇20ml加热溶解，活性炭脱色20min、过滤，浓缩至10ml左右，加入乙酸乙酯20ml，冷却，析出白色固体，过滤，减压干燥，得3-咖啡酰奎宁酸-1-磷酸酯白色固体。
实施例2. 3，5-二咖啡酰奎宁酸-1-磷酸酯的合成将3，5-二咖啡酰奎宁酸10mmol，NEt310mmol，20mlTHF加入到100ml的圆底烧瓶中，反应体系用氩气保护，用干冰丙酮的冷却至-30℃以下，缓慢滴加氧氯化磷10mmol的THF10ml溶液，然后自然升温至室温，反应过夜，过滤除去三乙胺盐酸盐，减压浓缩掉THF，将浓缩油状物加入20g冰水中，在氩气保护下搅拌反应24小时，于40℃以下减压浓缩掉水溶液，用乙醇20ml加热溶解，活性炭脱色20min、过滤，浓缩至干，用硅胶柱层析分离(洗脱液为乙醇∶乙酸乙酯＝1∶2)，得3，5-二咖啡酰奎宁酸-1-磷酸酯白色固体。
实施例3.3-咖啡酰奎宁酸-1-磷酸二钠的合成将3-咖啡酰奎宁酸磷酸酯10mmol，20ml乙醇加入到100ml的圆底烧瓶中，反应体系用氩气保护，用冰盐水冷却至0℃以下，加入20mmol的正辛酸钠，然后自然升温至室温，反应过夜，过滤得白色固体，减压干燥，得3-咖啡酰奎宁酸-1-磷酸二钠白色固体。
实施例4.3，5-二咖啡酰奎宁酸-1-磷酸甘氨酸盐的合成将3，5-二咖啡酰奎宁酸磷酸酯10mmol，10ml乙醇加入到100ml的圆底烧瓶中，反应体系用氩气保护，用冰盐水却至0℃以下，加入10mmol的甘氨酸，然后自然升温至室温，反应过夜，加入10ml的乙酸乙酯，过滤得白色固体，减压干燥，得3，5-二咖啡酰奎宁酸-1-磷酸酯甘氨酸盐白色固体。
实施例5.3-咖啡酰奎宁酸-1-磷酸三乙醇胺盐的合成将3-咖啡酰奎宁酸-1-磷酸酯5.00g加入100ml反应瓶中，加入丙酮20ml，冷却到-30℃，于-30℃在氩气的保护下，搅拌并滴加等当量三乙醇胺的丙酮溶液，约20min滴加完毕，然后升温至60℃反应1小时。然后减压浓缩，加入20ml乙酸乙酯，加热至80℃回流，冷却至0℃，过滤并干燥，得3-咖啡酰奎宁酸-1-磷酸三乙醇胺盐的白色结晶。
实施例6.3，5-二咖啡酰奎宁酸-1-磷酸葡甲胺盐的合成将3，5-二咖啡酰奎宁酸-1-磷酸酯5.00g加入100ml反应瓶中，加入丙酮20ml，冷却到-30℃，于-30℃在氩气的保护下，搅拌并滴加等当量葡甲胺的丙酮溶液，约20min滴加完毕，然后升温至60℃反应1小时。然后减压浓缩，加入20ml乙酸乙酯，加热至80℃回流，冷却至0℃，过滤并干燥，得3，5-二咖啡酰奎宁酸-1-磷酸葡甲胺盐的白色结晶。
实施例7.3-咖啡酰奎宁酸-1-磷酸二钠的氯化钠0.9％的静脉注射用注射液及滴眼剂处方一3-咖啡酰奎宁酸-1-磷酸二钠(≥95％) 1.0g枸橼酸 1.0g枸橼酸钠0.5g氯化钠 18.0g注射用水2000ml按注射剂的常规操作共制成2ml的注射剂1000支，每支含3-咖啡酰奎宁酸-1-磷酸二钠1毫克处方二3-咖啡酰奎宁酸-1-磷酸二钠(≥95％) 1000g氯化钠 180g注射用水20000ml按注射剂的常规操作共制成20ml的注射剂1000支，每支含3-咖啡酰奎宁酸-1-磷酸二钠1.0克处方三3-咖啡酰奎宁酸-1-磷酸二钠(≥95％) 1500g氯化钠 2250g注射用水2000,000ml按注射剂的常规操作共制成1000ml的注射剂1000瓶，每瓶含3-咖啡酰奎宁酸-1-磷酸二钠1500毫克防止3-咖啡酰奎宁酸-1-磷酸二钠分解的稳定剂如环糊精包合物、表面活性剂(阴离子表面活性剂、阳离子表面活性剂、两性离子表面活性剂、非离子表面活性剂)抗氧化剂亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、焦亚硫酸钠、硫代硫酸钠、抗坏血酸、半胱氨酸。
生理可用的pH值调节剂柠檬酸、富马酸、谷氨酸、L-天冬氨酸、乳酸、乳糖酸、半乳糖醛酸、葡萄糖醛酸、抗坏血酸、盐酸、醋酸。
实施例8 含3，5-二咖啡酰奎宁酸-1-磷酸葡甲胺盐的无菌粉针剂处方一3，5-二咖啡酰奎宁酸-1-磷酸葡甲胺盐2.0g无菌粉(≥95％)18g氯化钠无菌粉按无菌粉针剂的常规操作共制成2ml粉针剂1000支，每支含3，5-二咖啡酰奎宁酸-1-磷酸葡甲胺盐2.0毫克处方二3，5-二咖啡酰奎宁酸-1-磷酸葡甲胺盐无750g菌粉(≥95％)180g氯化钠无菌粉按无菌粉针剂的常规操作共制成20ml粉针剂1000支，每支含3，5-二咖啡酰奎宁酸-1-磷酸葡甲胺盐750毫克处方三3，5-二咖啡酰奎宁酸-1-磷酸葡甲胺3000g盐无菌粉(≥95％)按无菌粉针剂的常规操作共制成5ml粉针剂1000支，每支含3，5-二咖啡酰奎宁酸-1-磷酸葡甲胺盐3克实施例9 3-咖啡酰奎宁酸-1-磷酸二钠的无菌冻干粉针剂将实施例7各配方产品经冻干设备冷冻干燥制得3-咖啡酰奎宁酸-1-磷酸二钠氯化钠的无菌冻干粉针剂。
实施例10 3，5-二咖啡酰奎宁酸-1-磷酸甘氨酸盐的5％葡萄糖静脉注射用注射液及滴眼剂处方一
3，5-二咖啡酰奎宁酸-1-磷酸甘氨酸盐1.5g(≥95％) 1.0g枸橼酸0.5g枸橼酸钠 100g葡萄糖2000ml注射用水按注射剂的常规操作共制成2ml的注射剂1000支，每支含3，5-二咖啡酰奎宁酸-1-磷酸甘氨酸盐1.5毫克处方二3，5-二咖啡酰奎宁酸-1-磷酸甘氨2500g酸盐(≥95％) 1000g葡萄糖20000ml注射用水按注射剂的常规操作共制成20ml的注射剂1000支，每支含3，5-二咖啡酰奎宁酸-1-磷酸甘氨酸盐2.5克处方三3，5-二咖啡酰奎宁酸-1-磷酸甘氨3000g酸盐(≥95％) 10,000g葡萄糖2000,000ml注射用水按注射剂的常规操作共制成1000ml的注射剂1000瓶，每瓶含3，5-二咖啡酰奎宁酸-1-磷酸甘氨酸盐3克防止3，5-二咖啡酰奎宁酸-1-磷酸甘氨酸盐分解的稳定剂如环糊精包合物、表面活性剂(阴离子表面活性剂、阳离子表面活性剂、两性离子表面活性剂、非离子表面活性剂)抗氧化剂亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、焦亚硫酸钠、硫代硫酸钠、抗坏血酸、半胱氨酸。
生理可用的pH值调节剂柠檬酸、富马酸、谷氨酸、L-天冬氨酸、乳酸、乳糖酸、半乳糖醛酸、葡萄糖醛酸、抗坏血酸、盐酸、醋酸。
实施例11 含葡萄糖的无菌粉针剂处方一3，5-二咖啡酰奎宁酸-1-磷酸甘氨1g酸盐(≥95％) 100g葡萄糖无菌粉按无菌粉针剂的常规操作共制成2ml粉针剂1000支，每支含3，5-二咖啡酰奎宁酸-1-磷酸甘氨酸盐1毫克处方二3，5-二咖啡酰奎宁酸-1-磷酸甘氨酸1500g盐无菌粉(≥95％)1000g葡萄糖无菌粉按无菌粉针剂的常规操作共制成20ml粉针剂1000支，每支含3，5-二咖啡酰奎宁酸-1-磷酸甘氨酸盐1.5克实施例12 3，5-二咖啡酰奎宁酸-1-磷酸甘氨酸盐片剂处方3，-二咖啡酰奎宁酸-1-磷酸甘氨10.0g酸盐(≥95％)淀粉 184.00g聚乙烯吡咯烷酮 5.00g硬脂酸镁(120目) 10.00g共计 200.00g共制成1000片，每片3，5-二咖啡酰奎宁酸-1-磷酸甘氨酸盐10mg。
填充剂如淀粉、糊精、糖粉、预胶化淀粉、乳糖、葡萄糖、微晶纤维素、碳酸钙、硫酸钙、碳酸氢钙。
黏合剂如羟丙甲纤维素、聚维酮、淀粉浆、糊精浆、糖浆、胶浆、海藻酸钠、聚乙二醇、桃胶、阿拉伯胶。
崩解剂如交联羧甲基纤维素钠、交联聚维酮、羧甲基淀粉钠、羟丙基淀粉、低取代羟丙基纤维素柠檬酸、酒石酸、酸酐、碳酸氢钠、碳酸钠。
实施例13. 3-咖啡酰奎宁酸-1-磷酸二钠对60Coγ射线照射所致小鼠白细胞降低有治疗1.方法 动物适应性饲养3天，根据体重和性别随机分为3-咖啡酰奎宁酸-1-磷酸二钠高、中、低剂量组和阳性对照组、模型对照组及正常对照组，每组40只，雌雄各半。除正常对照组外其余动物均用60Coγ射线全身照射，照射剂量为4Gy(剂量率为256Gy/h，照射时间为2min)，照射后各组根据下表给予相应的受试物(对照组和模型组给予体积的氯化钠注射液)，每天一次，连续给药14天。在给药第4、7、11、14天，用一次性定量取血管断尾法采血20ul，将血液缓慢吹入加有500ul稀释液的试管内，使血液与稀释液混匀，用海狮-18型全自动血球计数仪检测外周血象。每次采完血后每组随机抽取10只动物(最少不低于8只，雌雄各半)，颈椎脱臼处死动物后立即取股骨作骨髓推片，瑞氏染色，镜下检查骨髓象。取骨髓的同时，取脾脏称重并计算脾脏指数结果用SPSS13.0统计软件进行单因素方差统计分析。

分组与给药剂量

2.结果试验小鼠的体重统计结果(g)

3-咖啡酰奎宁酸-1-磷酸二钠治疗性给药对辐照小鼠白细胞数的影响(×109/L)

与正常对照组比较*P＜0.05，*P＜0.01；与模型对照组比较aP＜0.05，bP＜0.01(下同)。
3.结论造模后，动物白细胞明显下降，与正常对照组比较有非常显著性差异(P＜0.01)，给药11天后药物高剂量组白细胞升高，与模型对照组比较有显著性差异(P＜0.05)；药物高、中、低剂量组在给药7、11、17天白细胞均升高，对所抑制的骨髓增生有一定的促进恢复的效果。3-咖啡酰奎宁酸-1-磷酸二钠对60Coγ射线照射所致小鼠白细胞降低有治疗作用。
实施例14 3，5-二咖啡酰奎宁酸-1-磷酸葡甲胺盐对环磷酰胺所致Beagle犬白细胞降低得治疗给药方法1.方法除正常对照组外，其它5组犬静脉注射8mg/ml的环磷酰胺(CY)0.8ml/kg(8mg/kg)，每日一次，连续5天。第6天开始给与各受试药，模型对照组和正常对照组给生理盐水，连续13天。在造模前、造模后每天、治疗后的2、4、6、8、10、12、14天分别取外周血检查各动物的白细胞；造模前(注射环磷酰胺)、造模结束(注射环磷酰胺第5天)、治疗第7天和第14天，分别取清醒犬侧卧弯腰，髂骨上脊穿刺抽取骨髓，涂片，瑞氏染液染色。显微镜下进行分类计数、粒细胞、红细胞、巨核细胞、单核细胞系统等。计数200个细胞。巨核细胞全片计数总和，血小板计数25个(成熟有血小板形成和成熟无血小板形成)，结果进行统计学处理。
2.检测指标及检测频率1)一般观察每日观察记录给药前后每只动物一般状况和行为活动，进食情况，大、小便性状、颜色，外观体征、可视粘膜、体温等，每隔7日称体重。
2)外周血象给药前1次，注射CY每天1次，治疗给药第1、2、3、4、6、7、9、11天、15天各1次。取空腹犬前肢静脉血，M-4000仪器测定WBC(白细胞)、LYM(淋巴细胞计数)、MID(中间细胞计数)、GRAN(粒细胞计数)、LYM(淋巴细胞百分率)，MI D(中间细胞百分率)、GRAN(粒细胞百分率)、RBC(红细胞)、HGB(血红蛋白)、HCT(红细胞压积)、MCV(平均红细胞体积)、MCH(平均红细胞血红蛋白量)、MCHC(红细胞平均血红蛋白浓度)、RDW-CV(红细胞分布宽度变异数)、RDW-SD(红细胞分布宽度标准差)、PLT(血小板计数)、MPV(平均血小板体积)、PCT(血小板压积容量)、RCDW(红细胞与血小板之间的分布控制区间)、PDW(血小板体积分布宽度)，普通光镜方法计数RC(网织红细胞)。
3)骨髓像检测给药前1次，注射CY6天，治疗给药第7、14天各1次。取清醒犬侧卧弯腰，髂骨上脊穿刺抽取骨髓，涂片，瑞氏染液染色。显微镜下进行分类计数、粒细胞、红细胞、巨核细胞、单核细胞系统等。计数200个细胞。巨核细胞全片计数总和，血小板计数25个(成熟有血小板形成和成熟无血小板形成)，结果进行统计学处理。
4)数据处理计量数据均用x±s(均值±标准差)表示，用t检验比较组间差异的显著性。
3.结果1)对行为体征的影响大剂量组造模5天中，动物未见异常，在治疗的第3至7天内动物食量减少，活动减少，治疗第7天后动物恢复正常，其它各动物均未见异常。
中剂量组造模5天中动物未见异常，在治疗的第2至第8天3只动物懒动、食量仅为正常食量的1/2，第6天各动物精神状态较前一天好，活动量和食量均有增加，第8天动物后恢复正常。
小剂量组造模5天中动物未见异常，治疗的第3天开始，有2只动物食欲减退、精神欠佳、活动减少，第三至第五天动物懒动、食量仅为正常食量的1/2，个别动物食量仅为正常食量的1/4，第6天各动物精神状态较前一天好，活动量和食量均有增加，第9天动物的食量、行为活动基本恢复正常，直至试验结束动物均未见异常。
阳性对照组造模5天中动物未见异常，在开始治疗的第2至7天内动物食量减少，精神状态欠佳，第7天后动物恢复正常，其它各动物均未见异常。
模型对照组环磷酰胺造模5天中动物未见异常，给生理盐水的第二天开始，有一只动物食欲减退、精神欠佳、活动减少，第5天死亡，其余动物懒动、食量仅为正常食量的1/4，个别动物出现了整天不食的现象，第6天后动物精神状态较前稍好，活动量和食量均有增加，至第9天后余下动物的食量、行为活动基本恢复正常，直至试验结束动物均未见异常。
正常对照组在试验过程中各动物健康，食欲食量、行为活动、体温均正常。
各组动物在给CY造模过程中，行为活动、食欲食量、大小便及体温(直肠)均未见异常，在给药治疗的第3-6天内，除正常对照组外，其它五个组均出现了个别动物体温明显升高，升高40-41℃，动物食欲食量减退，精神欠隹，活动减少等症状。在治疗7天后至实验结束，各组动物体温逐渐恢复正常，精神状态、行为活动、食欲食量均恢复正常。
各剂量组动物在造模(注射环磷酰胺)的5天中，未出现明显反应，治疗第二天开始，除正常对照组外，各组均有动物出现饮食减少、精神沉郁、活动减少等症状，其中模型对照组在治疗的第5天一只犬(♀性)死亡，从治疗第8天开始，各组动物逐渐恢复正常。
2)对骨髓的影响骨髓像增生情况分6级，1极度活跃，2明显活跃，3活跃，4减低，5明显减低，6极度低下。
各组动物骨髓细胞增生情况

结果显示注射环磷酰胺后，各组犬骨髓增生均减低，3，5-二咖啡酰奎宁酸-1-磷酸葡甲胺盐各剂量组给药第7天均明显可看见犬骨髓细胞增生，其大、中剂量组略见明显，阳性药组和模型组作用效果略差，模型组死亡1只犬，第14天药物组恢复较好，模型组仍有1例处于增生低下，正常对照组未见异常。
各组犬给药前正常骨髓象显微镜下观察，各犬骨髓细胞增生活跃，未见异常。
中性粒细胞杆状为主，占全片总数45-50％，其次为中幼、晚幼、分叶细胞。偶见嗜酸粒细胞，未见原始、早幼粒细胞。未见中幼和晚幼粒细胞。红细胞系统以晚幼红细胞为主，约占全片计数25～30％左右，其次为中幼红细胞，全片镜下未见原红、早幼红、早巨、中巨、晚巨红细胞。淋巴系统以成熟淋巴细胞为主(约占10～12％)，未见原始和幼稚淋巴细胞。单核系统各组各犬未见有原始、幼稚、单核细胞。巨核细胞以成熟有血小板形成为主，成熟无血小板形成次之，未见幼稚巨核细胞。其它细胞未见浆细胞，未见网状、内皮、吞噬、寄生虫、组织巨细胞、不明细胞以及特殊细胞。粒细胞系统与红细胞系统之比各组间比较均无统计学差异(P＞0.05)。
除正常对照组外，其余各组犬骨髓像增生明显受到抑制，粒红比严重异常，非造血细胞淋巴细胞增多，粒系细胞，红系细胞，巨核细胞总数减少，未见成熟有血小板形成和成熟无血小板形成。正常骨髓像各细胞计数平均数标准差增大，表明注射CY8mg/kg4天，粒细胞(WBC)系统明显受到抑制，造模是成功的。
治疗第7天药物组各犬骨髓像增生基本恢复正常，粒细胞系，红细胞系，淋巴细胞系，巨核细胞总数，成熟有血小板形成和成熟无血小板形成，镜下计数与正常对照组相差不大。而模型对照组2只动物增生仍低下，非造血细胞淋巴细胞增多，淋系减少。结果表明药物组犬骨髓像受CY急性抑制，比模型对照组恢复快，药物对白细胞下降有升高的作用。
治疗第14天，低剂量组2只犬，模型组1只犬骨髓象增生低下，非造血细胞淋巴细胞增多，粒系细胞，红细胞系统减少，骨髓增生未能恢复，其余各犬骨髓细胞增生活跃，恢复正常。
3)对白细胞计数的影响造模后(i.vCY)动物白细胞明显下降，与对照组和自身造模前有非常显著性差异(P＜0.01)，治疗6天后药物组和对照组白细胞均升高。结果见表。
不同时间各组动物的白细胞(×109/L x±s)


注第6天起模型组动物数为5只注射CY使WBC计数下降，药物治疗后使下降的白细胞计数明显升高，三个受试药组均显示药物有升高作用，大剂量组在第12天后，中剂量组在第8天后略显明显，阳性对照组与模型组不明显。正常对照组在正常值范围内波动。
4.结论3，5-二咖啡酰奎宁酸-1-磷酸葡甲胺盐对环磷酰胺所致Beagle犬白细胞降低有一定治疗作用，对所抑制的骨髓增生有促进恢复的效果，有量效关系。
实验例15 3-咖啡酰奎宁酸-1-磷酸二钠对小鼠镇痛的影响采用热板法研究3-咖啡酰奎宁酸-1-磷酸二钠对小鼠镇痛的影响。取雌性昆明小鼠，每组10只，设绿原酸给药组100mg/kg；阳性对照组氨基比林50mg/kg；阴性对照组生理盐水10ml/kg。给药途径均为腹腔注射。置热板温度60℃。将小鼠投入热板，用秒表记录小鼠自投入热板到舔后足的时间为痛阈值(单位秒)。
给药前先测定每只小鼠的痛阈值，共测2次，取平均值，超过30秒者为不合格，给药后每30分钟测一次，连续四次，如痛阈值超过60秒即停止测试，按60秒计。痛阈提高百分率按公式计算。痛阈提高百分率＝[(用药后平均痛阈值-用药前平均痛阈值)/用药前平均痛阈值]*100％。结果(见表)提示3-咖啡酰奎宁酸-1-磷酸二钠具有镇痛作用。
3-咖啡酰奎宁酸-1-磷酸二钠对小鼠镇痛作用(热板法)

实验例16 3-咖啡酰奎宁酸-1-磷酸二钠对大鼠抗炎作用的影响采用足浮肿法研究3-咖啡酰奎宁酸-1-磷酸二钠对大鼠抗炎作用的影响。取SD大鼠，体重120±10克，每组10只，雌雄各半。设3-咖啡酰奎宁酸-1-磷酸二钠给药组100mg/kg；对照组生理盐水2.5ml/kg。给药途径均为腹腔注射。给药30分钟后，左后肢足跖皮下注射1％角叉菜液0.1ml，每隔1小时用软皮尺测量足跖和踝关节圆周，右后足作对照，连续5次。肿胀度＝左踝关节及足跖圆周-左踝关节及足跖圆周。
结果(见表)提示3-咖啡酰奎宁酸-1-磷酸二钠具有抗炎作用。
3-咖啡酰奎宁酸-1-磷酸二钠对大鼠抗炎作用的影响

权利要求
1.一种咖啡酰奎尼酸衍生物-1-磷酸酯，其通式化合物I的特征如下 其中R表示H、C1-5烷基、苄基或者碱金属及碱土金属，胺基、哌嗪、哌啶、吗啉、三乙醇胺、葡甲胺；与含羧基有机胺成盐，如氨基酸、二肽、三肽、多肽；R″表示H、C1-5烷基、苄基或者碱金属及碱土金属；胺基、哌嗪、哌啶、吗啉、三乙醇胺、葡甲胺等；与含羧基有机胺成盐，如氨基酸、二肽、三肽、多肽；R1和R2可以相同或者不同，表示H、羟基、C1-5烷氧基、烷基、胺基、氟、氯、溴取代基、咖啡酰基，特别是羟基或者咖啡酰基。R3、R4可以相同或者不同，表示H、羟基、CnH2n-1烷氧基、C1-5烷基、胺基、氟、氯、溴取代基，其中n为1-8的整数。
2.根据权利要求1所述咖啡酰奎尼酸衍生物-1-磷酸酯的制备，其特征在于通式化合物III在惰性气体保护下，加入与通式化合物III等当量的氧氯化磷，于-40℃～0℃反应，得通式化合物III的-1-磷酸酯二氯，按反应体积10～20倍量加水分解产生1-磷酸酯同时脱去3，4位的丙酮保护基，减压浓缩除去溶剂，必要时，用硅胶柱层析分离，其流动相为乙醇:乙酸乙酯系统，得通式化合物II，通式化合物II加入R″，如碱金属及碱土金属，胺基、哌嗪、哌啶、吗啉、三乙醇胺、葡甲胺；与含羧基有机胺成盐，如氨基酸、二肽、三肽、多肽，生成通式化合物I。
3.根据权利要求所述咖啡酰奎尼酸衍生物-1-磷酸酯的制剂，其特征在于是注射液、无菌粉针、无菌冻干粉针、片剂、胶囊、各种缓控释制剂、滴眼液、软膏，在这些配方中使用所指的咖啡酰奎尼酸衍生物-1-磷酸酯含量是在1000个制剂单位量，如1000片或粒、1000ml、1000瓶或1000支中含有1-3000mg，咖啡酰奎尼酸衍生物-1-磷酸酯的含量应为标示量的90％～110％，w/w或w/v。
4.根据权利要求1和2咖啡酰奎尼酸衍生物-1-磷酸酯及其制剂的应用，其特征在于在制备抗癌、抗艾滋病领域药物制剂中的应用。
5.根据权利要求1和2咖啡酰奎尼酸衍生物-1-磷酸酯及其制剂的应用，其特征在于在制备镇痛药物制剂中的应用。
全文摘要
本发明涉及前体药物及制备与应用。咖啡酰奎尼酸衍生物经过1位磷酸酯化后，可在磷酸酯基上形成不同的碱盐，将大大改善其溶解性，使原溶解度从4％提高到20％以上，降低了不同制剂工艺研究的难度。溶解性的增加极有利于化合物作为药物时体内的吸收，提高了药物的生物利用度。本发明的磷酸酯类化合物还可利用体内磷酸酯酶的性质形成靶向分布的作用。由此出现磷酸酯类化合物向病患组织集中的趋向，实现靶向给药，将咖啡酰奎尼酸衍生物－1－磷酸酯类化合物大量集中于病患组织，水解出的咖啡酰奎尼酸衍生物充分发挥药物治疗作用。如肿瘤中磷酸酯酶分布远远大于正常机体组织，从而使母体化合物产生肿瘤组织靶向作用，实现对肿瘤的集中治疗。
文档编号A61P31/18GK1844127SQ200610020939
公开日2006年10月11日 申请日期2006年4月29日 优先权日2006年4月29日
发明者张洁, 徐小平, 张舒, 雍智全, 江波 申请人:四川九章生物化工科技发展有限公司