专利名称：(e)－3,5－二甲氧基二苯乙烯－4＇－o－磷酸酯(盐)及其制备方法、药物组合物和用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种二苯乙烯的衍生物，特别涉及一种(E)-3，5-二甲氧基二苯乙烯-4′-O-磷酸酯(盐)及其制备方法、药物组合物和其在制备降血脂、降血糖、抗真菌药物中的应用。
背景技术：
(E)-3，5-二甲氧基-4′-羟基二苯乙烯(即紫檀茋，Pterostilbene)，其结构如式(1)所示 式(1)为白藜芦醇的同系物，具有反式二苯乙烯骨架结构，是葡萄、蓝草莓、血竭制品及印度抗糖尿病草药“Bijasar”中的重要活性成分(Inter J Biochem & Cell Bio2005，37，1709)，也存在中国剑叶龙血树中，其药理作用不仅与白藜芦醇有部分相似之处(J Agric Food Chem 2002，50，3453)，还具有较强的抗真菌活性(中草药2001，32，241)、癌症化学预防活性(J Agric Food Chem 2004，52，4713)、诱导MDR细胞凋亡活性、PPAR α激动活性(J Agric Food Chem 2005，53，3403)等，其降血脂活性优于环丙贝特、抗糖尿病活性与二甲双胍相当(J Nat Prod 1997，60，609)，具有重要的研究价值和良好的应用前景，已成为血竭制品及印度草药“Bilasar”质量控制的标记物。但是该化合物水溶性极低，生物相容性和生物利用度低，且不利于血管给药。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术中存在的缺点，提供一种水溶性较高的紫檀茋的磷酸酯(盐)前药，即(E)-3，5-二甲氧基二苯乙烯-4′-O-磷酸酯(盐)。
本发明的另一目的在于提供一种上述化合物的制备方法。
本发明的进一步的目的在于提供一种降血脂、降血糖和抗真菌的药物组合物。
本发明的又一目的在于提供上述化合物在制备降血脂、降血糖和抗真菌的药物方面的用途。
本发明的目的通过下述技术方案实现本发明(E)-3，5-二甲氧基二苯乙烯-4′-O-磷酸酯(盐)，其结构用下述式(2)表示 式(2)其中，当M1＝M2时，M1、M2为K+、Na+、NH4+或H+；当M1≠M2时，M1为H+，M2为K+、Na+或NH4+。
本发明(E)-3，5-二甲氧基二苯乙烯-4′-O-磷酸酯盐的制备方法，包括下述步骤(1)在隋性溶剂中，在10～70℃和缚酸剂的存在下，式(1)所示的(E)-3，5-二甲氧基-4′-羟基二苯乙烯与磷酰化试剂反应，得到磷酰化中间体；(2)在碱溶液中，将所述磷酰化中间体加热到50～100℃反应，纯化后得到所述(E)-3，5-二甲氧基二苯乙烯-4′-O-磷酸酯盐。
所述惰性溶剂为二氯甲烷、二氯乙烷或甲苯。
所述缚酸剂是吡啶、吡啶衍生物、三乙胺或其他三烷基胺化合物。所述缚酸剂的用量是(E)-3，5-二甲氧基-4′-羟基二苯乙烯的摩尔数的4～8倍。
所述磷酰化试剂是POCl3Z或POBr3，优选POCl3。所述磷酰化试剂的用量是(E)-3，5-二甲氧基-4′-羟基二苯乙烯的摩尔数的1.5～6倍。
步骤1中，反应时间为2～8小时。
步骤2中，所述碱溶液是浓度范围为0.2～1.5mol/L的NaOH、KOH、氨水、碳酸铵、醇钠或醇钾。所述碱的用量是(E)-3，5-二甲氧基-4′-羟基二苯乙烯的摩尔数的1～4倍。
步骤2中，所述碱溶液的反应溶液可以是水、水/甲醇、或水/乙醇。
步骤2中，反应时间为6～15小时。
步骤2中，所述纯化是用水、水和甲醇的混合溶剂、水和乙醇的混合溶剂、甲醇和丙酮的混合溶剂、或水和丙酮的混合溶剂对反应产物进行重结晶。
本发明所述的(E)-3，5-二甲氧基二苯乙烯-4′-O-磷酸酯的制备方法，包括下述步骤(1)在隋性溶剂中，在10～70℃和缚酸剂的存在下，(E)-3，5-二甲氧基-4′-羟基二苯乙烯与磷酰化试剂反应，得到磷酰化中间体；(2)向所述磷酰化中间体加入盐酸溶液，30～80℃下搅拌反应2～6小时，用乙酸乙酯、乙醚、二氯甲烷或二氯乙烷提取，合并、浓缩有机层，得到(E)-3，5-二甲氧基二苯乙烯-4′-O-磷酸酯。
所述惰性溶剂为二氯甲烷、二氯乙烷或甲苯。
所述缚酸剂是吡啶、吡啶衍生物、三乙胺或其他三烷基胺化合物。所述缚酸剂的用量是(E)-3，5-二甲氧基-4′-羟基二苯乙烯的摩尔数的4～8倍。
所述磷酰化试剂是POCl3或POBr3，优选POCl3。所述磷酰化试剂的用量是(E)-3，5-二甲氧基-4′-羟基二苯乙烯的摩尔数的1.5～6倍。
步骤1中，反应时间为2～8小时。
本发明的式(2)化合物可经口或不经口给药。经口服给药时，可采用常规的制剂技术，将该化学物与常规的药学上可接受的载体混合制成常规的固体制剂如颗粒剂、胶囊、片剂等；非经口服给药时，可采用常规的制剂技术将其制成注射液、输液剂或栓剂等。
本发明的药物组合物含有治疗有效量的上述式(2)化合物即(E)-3，5-二甲氧基二苯乙烯-4′-O-磷酸酯(盐)为活性成分，以及含有一种或多种药学上可接受的载体。该药物组合物的各种剂型可以按照药学领域的常规生产方法制备。如使活性成分与一种或多种载体混合，然后将其制成所需的剂型。
所述药学上可接受的载体是指药学领域常规的药物载体，如赋形剂、崩解剂、粘合剂、润滑剂、抗氧化剂、包衣剂、着色剂、芳香剂、表面活性剂。
本发明的式(2)化合物和上述药物组合物可用于制备降血脂、降血糖和抗真菌的药物。
本发明式(2)化合物的施用量可根据用药途径、患者的年龄、体重、所治疗的疾病和严重程度等变化而采取不同的用量。
本发明与现有技术相比具有如下优点和效果(1)本发明式(2)的化合物相比于式(1)的化合物具有良好的水溶性和生物相容性，式(2)的化合物及其药物组合物可用于制备降血脂、降血糖、抗真菌等药物；(2)本发明的制备方法操作简单、成本低、收率高，采用环保溶剂、环境污染小，而且反应条件温和，后处理程序简单。
具体实施例方式
下面结合实施例对本发明做进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。
实施例1(E)-3，5-二甲氧基二苯乙烯-4′-O-磷酸酯二钠盐的制备将(E)-3，5-二甲氧基-4′-羟基二苯乙烯1.3g(0.005mol)溶于6mL CH2Cl2中，然后加入POCl32.6mL(0.028mol)搅拌均匀。慢慢滴加用6mLCH2Cl2溶解的3.3mL(0.024mol)三乙胺，25℃下搅拌反应6小时。反应结束后用适量的水洗涤三次。有机层用无水硫酸镁干燥后，浓缩得到黄色油状液体即磷酰化中间体。向上述磷酰化中间体浓缩液中加入浓度为0.3mol/L的NaOH溶液50mL(0.015mol)，油浴加热至70～80℃，剧烈搅拌反应8小时。将反应液中的不溶物过滤除去，浓缩至干，再用水和丙酮的混合溶液进行重结晶，得到白色固体1.6g，收率为82.9％。经分析证实是式(2)化合物，其中M1及M2表示为Na+。
谱图数据如下FAB-MS(m/z)403(M+Na)，381(M+H)。
1H-NMR(D2O)3.718(s，6H，2×OMe)，6.372～6.383(t，1H，J＝2.0Hz)，6.700～6.706(d，2H，J＝2.4Hz)，6.929～6.970(d，1H，J＝16.4Hz)，7.069～7.089(d，2H，J＝8.0Hz)，7.089～7.130(d，1H，J＝16.4Hz)，7.400～7.421(d，2H，J＝8.4Hz)。
实施例2(E)-3，5-二甲氧基二苯乙烯-4′-O-磷酸酯二钠盐的制备将(E)-3，5-二甲氧基-4′-羟基二苯乙烯化合物12.8g(0.05mol)溶于80mLCH2Cl2中，然后加入POBr320.5mL(0.2mol)搅拌均匀，慢慢滴加16.OmL(0.2mol)吡啶和40mLCH2Cl2的溶液，25℃下搅拌反应4小时。反应结束后用适量的水洗涤三次。有机层用无水硫酸钠干燥后，浓缩得黄色油状液体即磷酰化中间体。向上述磷酰化中间体浓缩液中加入1mol/LNaOH溶液200mL(0.20mol)，油浴加热至80℃，搅拌反应10小时。将反应液中的不溶物过滤除去，浓缩至干，再用甲酮和丙酮的混合溶液进行重结晶，得到白色固体17.0g，即式(2)化合物，其中M1及M2表示为Na+。收率为89.5％。谱图数据同上。
实施例3(E)-3，5-二甲氧基二苯乙烯-4′-O-磷酸酯二钾盐的制备将(E)-3，5-二甲氧基-4′-羟基二苯乙烯化合物1.3g(0.005mol)溶于6mLCH2Cl2中，然后加入POCl32.6mL(0.028mol)搅拌均匀。慢慢滴加1.4mL(0.02mol)三甲胺和6mLCH2Cl2的溶液，室温下搅拌反应8小时。反应结束后用适量的水洗涤三次。有机层用无水硫酸镁干燥后，浓缩得黄色油状液体即磷酰化中间体。向上述磷酰化中间体浓缩液中加入0.5mol/L KOH溶液30mL(0.015mol)，水浴加热至50℃，剧烈搅拌反应6小时。将反应液中的不溶物过滤除去，浓缩至干，再用水和丙酮的混合溶液进行重结晶，得到白色固体1.5g，即式(2)化合物，且M1及M2表示为K+。收率为77.7％。
FAB-MS(m/z)419(M+K)，381(M+H)。
1H-NMR(D2O)3.720(s，6H，2×OMe)，6.375～6.386(t，1H，J＝2.0Hz)，6.703～6.709(d，2H，J＝2.4Hz)，6.931～6.972(d，1H，J＝16.4Hz)，7.072～7.092(d，2H，J＝8.0Hz)，7.091～7.132(d，1H，J＝16.4Hz)，7.402～7.423(d，2H，J＝8.4Hz)。
实施例4(E)-3，5-二甲氧基二苯乙烯-4′-O-磷酸酯的制备将(E)-3，5-二甲氧基-4′-羟基二苯乙烯化合物1.3g(0.005mol)溶于6mLCH2Cl2中，然后加入POCl32.6mL(0.028mol)搅拌均匀。慢慢滴加1.4mL(0.02mol)三甲胺和6mLCH2Cl2的溶液，室温下搅拌反应8小时。反应结束后用适量的水洗涤三次。有机层用无水硫酸镁干燥后，浓缩得黄色油状液体即磷酰化中间体。向上述磷酰化中间体浓缩液中加入0.2 mol/L盐酸溶液50mL(0.010mol)，50℃下搅拌反应4h，用适量乙酸乙酯提取三次，合并、浓缩乙酸乙酯层，得到白色稠状物1.4g，即式(2)化合物，其中M1及M2表示为H+。收率为82.1％。
FAB-MS(m/z)337(M+H)。
1H-NMR(DMSO-d6)3.716(s，6H，2×OMe)，6.371～6.382(t，1H，J＝2.0Hz)，6.700～6.706(d，2H，J＝2.4Hz)，6.928～6.969(d，1H，J＝16.4Hz)，7.068～7.088(d，2H，J＝8.0Hz)，7.088～7.1 29(d，1H，J＝16.4Hz)，7.400～7.421(d，2H，J＝8.4Hz)。
实施例5(E)-3，5-二甲氧基二苯乙烯-4′-O-磷酸酯单钠盐的制备将(E)-3，5-二甲氧基-4′-羟基二苯乙烯1.3g(0.005mol)溶于6mL CH2Cl2中，然后加入POCl32.6mL(0.028mol)搅拌均匀。慢慢滴加用6mLCH2Cl2溶解的3.3mL(0.024mol)三乙胺，25℃下搅拌反应6小时。反应结束后用适量的水洗涤三次。有机层用无水硫酸镁干燥后，浓缩得到黄色油状液体即磷酰化中间体。向上述磷酰化中间体浓缩液中加入浓度为0.2mol/L的NaOH溶液40mL(0.008mol)，油浴加热至70～80℃，剧烈搅拌反应8小时。将反应液中的不溶物过滤除去，浓缩至干，再用水和丙酮的混合溶液进行重结晶，得到白色固体1.3g，收率为71.5％。经分析证实是式(2)化合物，其中M1表示为H+，M2表示为Na+。
谱图数据如下FAB-MS(m/z)381(M+Na)，359(M+H)。
1H-NMR(D2O)3.717(s，6H，2×OMe)，6.370～6.381(t，1H，J＝2.0Hz)，6.699～6.705(d，2H，J＝2.4Hz)，6.927～6.968(d，1H，J＝16.4Hz)，7.067～7.087(d，2H，J＝8.0Hz)，7.087～7.128(d，1H，J＝16.4Hz)，7.399～7.420(d，2H，J＝8.4Hz)。
实施例6PPAR α激动活性试验(即降血脂试验)PPAR α激动活性实验证实(E)-3，5-二甲氧基二苯乙烯-4′-O-磷酸酯二钠盐具有很高的诱导荧光素酶活性，对于PPRE-AB-LUC报告基因载体转染老鼠肝癌H4IIEC3细胞，以空白的DMSO溶液为对照值，浓度为100μM和300μM(E)-3，5-二甲氧基二苯乙烯-4′-O-磷酸酯二钠盐的最大荧光素酶响应值分别是相应的对照值的9倍和15倍。而浓度为100μM环丙贝特最大荧光素酶响应值只有相应对照值的5倍。结果表明，(E)-3，5-二甲氧基二苯乙烯-4′-O-磷酸酯二钠盐与环丙贝特浓度均为100μM时，前者的PPARα激动活性(33500±600相对的LUC units)较高于后者(18950±1196相对LUC units)。
实施例7降血糖活性试验试验跟踪对比了服用(E)-3，5-二甲氧基二苯乙烯-4′-O-磷酸酯二钠盐和二甲双胍2、4、6周后的老鼠体内葡萄糖水平变化。服用(E)-3，5-二甲氧基二苯乙烯-′-O-磷酸酯二钠盐后，从第二周才观察到明显的抗高血糖作用，但到第六周，老鼠体内葡萄糖浓度大为降低，其中(E)-3，5-二甲氧基二苯乙烯-4′-O-磷酸酯二钠盐剂量60mg/kg(体重)的一组降为初始值的43.14％。而二甲双胍剂量500mg/kg(体重)的一组，六周内的抗血糖效果均不如前述的(E)-3，5-二甲氧基二苯乙烯-4′-O-磷酸酯二钠盐剂量60mg/kg(体重)，到第六周葡萄糖浓度降为初始值的48.71％。
表1实验鼠2、4、6周后葡萄糖水平的变化
注A为(E)-3，5-二甲氧基二苯乙烯-4′-O-磷酸酯二钠盐，B为二甲双胍；括号内数据为其用量。
实施例8抗真菌试验将(E)-3，5-二甲氧基二苯乙烯-4′-O-磷酸酯二钠盐用DMSO溶解，配制成浓度为3mg/mL和30mg/mL(含DMSO≤3％)的溶液，4℃冰箱中保存供实验使用。以红色毛癣菌A、须癣毛癣菌B、白色念珠菌C、近平滑念珠菌D、新生隐球菌E以及烟曲霉菌F作为受试菌株，经马铃薯培养基(PDA)活化，取菌溶于2mL蒸馏水中制成菌悬液，振荡15s，用血细胞计数板将其浓度调至1×104～2×104cfu/mL。各浓度的药液用沙氏液基稀释10倍，然后再以该浓度为初浓度，倍比稀释，实验药物浓度的终浓度为3000～46.9μg/mL和300～4.69μg/mL。取配好的药物稀释液，由高浓度至低浓度每试管中依次加入1mL溶液，以含3％DMSO的沙氏液基作为溶剂对照.以沙氏液基不加药物作空白对照，用接种环分别将各菌悬液1μL接种于试管中，置27℃～30℃恒温箱中培养，分别于24，48，72，96，124和148h观察结果.在不搅动情况下肉眼判断，溶液清晰透明视为真菌完全不生长，取完全不生长管最低药物浓度为最低抑菌浓度(MIC)。
实验结果表明(E)-3，5-二甲氧基二苯乙烯-4′-O-磷酸酯二钠盐有较强抗真菌活性.对6种菌株均有效，对红色毛癣菌的MIC为6.4μg/mL，对须癣毛癣菌的MIC为17.9μg/mL，对白色念珠菌的MIC为12.5μg/mL，对近平滑念珠菌的MIC为180.5μg/mL，新生隐球菌的MIC为12.9μg/mL，对烟曲霉菌的MIC为240.5μg/mL。
实施例9片剂的制备将86.5mg的(E)-3，5-二甲氧基二苯乙烯-4′-O-磷酸酯二钠盐固体粉末与1g葡萄糖、10g玉米淀粉和1.5g 5％玉米淀粉糊相混合均匀，用湿粒法使混合物形成颗粒。然后加入1g硬脂酸镁，通过压片法得到口服剂。
实施例10胶囊的制备将50.0mg的(E)-3，5-二甲氧基二苯乙烯-4′-O-磷酸酯二钾盐固体粉末与30.0mg乳糖完全混合，将混合物以80mg/胶囊的量填入胶囊以得到口服胶囊。
实施例11注射液的制备将50.0mg的(E)-3，5-二甲氧基二苯乙烯-4′-O-磷酸酯二钠盐固体粉末溶于5mL的生理盐水，得到注射液。
权利要求
1.(E)-3，5-二甲氧基二苯乙烯-4′-O-磷酸酯(盐)，其结构式为 其中，当M1＝M2时，M1、M2为K+、Na+、NH4+或H+；当M1≠M2时，M1为H+，M2为K+、Na+或NH4+。
2.一种权利要求1所述的(E)-3，5-二甲氧基二苯乙烯-4′-O-磷酸酯盐的制备方法，其特征在于包括下述步骤(1)在隋性溶剂中，在10～70℃和缚酸剂的存在下，(E)-3，5-二甲氧基-4′-羟基二苯乙烯与磷酰化试剂反应，得到磷酰化中间体；(2)在碱溶液中，将所述磷酰化中间体加热到50～100℃反应，纯化后得到所述(E)-3，5-二甲氧基二苯乙烯-4′-O-磷酸酯盐。
3.根据权利要求2所述的(E)-3，5-二甲氧基二苯乙烯-4′-O-磷酸酯盐的制备方法，其特征在于所述惰性溶剂为二氯甲烷、二氯乙烷或甲苯。
4.根据权利要求2所述的(E)-3，5-二甲氧基二苯乙烯-4′-O-磷酸酯盐的制备方法，其特征在于所述缚酸剂是吡啶、吡啶衍生物、三乙胺或其他三烷基胺；所述缚酸剂的用量是(E)-3，5-二甲氧基-4′-羟基二苯乙烯的摩尔数的4～8倍。
5.根据权利要求2所述的(E)-3，5-二甲氧基二苯乙烯-4′-O-磷酸酯盐的制备方法，其特征在于所述磷酰化试剂是POCl3或POBr3；所述磷酰化试剂的用量是(E)-3，5-二甲氧基-4′-羟基二苯乙烯的摩尔数的1.5～6倍。
6.根据权利要求2所述的((E)-3，5-二甲氧基二苯乙烯-4′-O-磷酸酯盐的制备方法，其特征在于步骤2中，所述碱溶液是浓度范围为0.2～1.5mol/L的NaOH、KOH、氨水、碳酸铵、醇钠或醇钾；所述碱的用量是(E)-3，5-二甲氧基-4′-羟基二苯乙烯的摩尔数的1～4倍。
7.根据权利要求2所述的(E)-3，5-二甲氧基二苯乙烯-4′-O-磷酸酯盐的制备方法，其特征在于步骤2中，所述纯化是用水、水和甲醇的混合溶剂、水和乙醇的混合溶剂、甲醇和丙酮的混合溶剂、或水和丙酮的混合溶剂对反应产物进行重结晶。
8.一种权利要求1所述的(E)-3，5-二甲氧基二苯乙烯-4′-O-磷酸酯的制备方法，其特征在于包括下述步骤(1)在隋性溶剂中，在10～70℃和缚酸剂的存在下，(E)-3，5-二甲氧基-4′-羟基二苯乙烯与磷酰化试剂反应，得到磷酰化中间体；(2)向所述磷酰化中间体加入盐酸溶液，30～80℃下搅拌反应2～6小时，用乙酸乙酯、乙醚、二氯甲烷或二氯乙烷提取，合并、浓缩有机层，得到(E)-3，5-二甲氧基二苯乙烯-4′-O-磷酸酯。
9.一种降血脂、降血糖和抗真菌的药物组合物，其特征在于含有治疗有效量的权利要求1所述的(E)-3，5-二甲氧基二苯乙烯-4′-O-磷酸酯(盐)为活性成分，以及含有一种或多种药学上可接受的载体。
10.权利要求1所述的(E)-3，5-二甲氧基二苯乙烯-4′-O-磷酸酯(盐)的用途，其特征在于在制备降血脂、降血糖和抗真菌的药物中的应用。
全文摘要
本发明公开了一种(E)－3，5－二甲氧基二苯乙烯－4′－O－磷酸酯(盐)及其制备方法、药物组合物和其在制备降血脂、降血糖、抗真菌药物中的应用。本发明的(E)－3，5－二甲氧基二苯乙烯－4′－O－磷酸酯(盐)，是通过(E)－3，5－二甲氧基－4′－羟基二苯乙烯与磷酰化试剂在10～70℃和缚酸剂的存在下反应得到磷酰化中间体；然后在碱溶液中，将所述磷酰化中间体加热到50～100℃反应并纯化后制备得到的。本发明的化合物及其药物组合物具有降血脂、降血糖、抗真菌等治疗效果；所述化合物制备方法操作简单、成本低、收率高，采用环保溶剂、环境污染小，而且反应条件温和，后处理程序简单。
文档编号A61P3/06GK101070328SQ200710028618
公开日2007年11月14日 申请日期2007年6月15日 优先权日2007年6月15日
发明者邹永, 甄永刚, 黄文明, 林慧贞, 魏文, 陈爱民 申请人:中国科学院广州化学研究所