专利名称：：4-(4-羟基-3-甲氧基苯甲基)姜黄素及其用于制备抗肿瘤药物的应用的制作方法
技术领域：
：本发明涉及合成抗肿瘤药物，具体涉及合成4-(4-羟基-3-甲氧基苯甲基)姜黄素及其用于制备抗肿瘤药物的应用。
背景技术：
：姜黄素在印度、中国、日本、韩国等地有上千年的食用和药用记载。目前国内外研究发现姜黄素具有抗肿瘤、抗炎、抗血管生成、抗氧化和神经保护等多种活性。但是姜黄素水溶性差，其水溶液不稳定，尤其在中性至碱性pH值条件下更不稳定，姜黄素口服后在体内代谢快，生物利用度低，血药浓度较低，己成为限制其临床应用的主要因素。通过结构改造合成姜黄素衍生物，增强活性、水溶性有重要意义。目前姜黄素类似物抗肿瘤方面研究主要集中在抑制NF-kB和AP-1因子，抗血管生成活性和抗雄激素的体外研究，姜黄素类似物抗肿瘤方面国外专利授权的有VanderJagt等用对NF-icB和AP-1因子抑制，筛选抗肿瘤活性姜黄素类似物(US20070060644)，Lee等的雄激素受体拮抗剂(US006790979)，Snyder等的抗肿瘤和抗血管生成活性姜黄素类似物(US006664272)。国内外对姜黄素的结构改造路线主要有改变苯环上取代基种类和位置、P-二酮縮合或为单酮、改变中间不饱和共扼连接链、还原不饱和双键、4位活泼亚甲基取代等，对活性研究仍处于体外实验阶段。本发明通过在姜黄素母体4位引入活性结构单元3，4-二取代苯甲基合成新的姜黄素类似物，并评价其抗肿瘤活性。
发明内容本发明的目的之一在于提供4-(4-羟基-3-甲氧基苯甲基)姜黄素，其结构式为本发明目的之二在于提供4-(4-羟基-3-甲氧基苯甲基)姜黄素的制备方法。本发明化合物4-(4-羟基-3-甲氧基苯甲基)姜黄素可由2，4-戊二酮与香草醛先经Knovenagel縮合后得到3-(4-羟基-3-甲氧基苯亚甲基)-2，4-戊二酮(中间体A)，催化氢化3-(4-羟基-3-甲氧基苯亚甲基)-2，4-戊二酮后得到3-(4-羟基-3-甲氧基苯甲基)-2，4-戊二酮(中间体B)，3-(4-羟基-3-甲氧基苯甲基)-2，4-戊二酮再与香草醛经羟醛縮合制得4-(4-羟基-3-甲氧基苯甲基)姜黄素。其反应示意式如下所示<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>中间体A中间体B本发明目的之三在于提供4-(4-羟基-3-甲氧基苯甲基)姜黄素用于制备抗肿瘤药物的应用。4-(4-羟基-3-甲氧基苯甲基)姜黄素，可用于但不局限于制备治疗白血病、皮肤癌、胃癌、结肠癌、肝癌、乳腺癌或前列腺癌药物。4-(4-羟基-3-甲氧基苯甲基)姜黄素能够显著抑制多种人肿瘤细胞的增殖。根据表二可以看到，该化合物对本实验中的七种细胞株都表现出比母体姜黄素更强的抑制作用，尤其是K562、B16这二株细胞株，该化合物对它们的增殖抑制作用明显比姜黄素的好，其半数抑制浓度约为姜黄素的l/4和1/7。以上结果表明4-(4-羟基-3-甲氧基苯甲基)姜黄素体外肿瘤细胞增殖抑制作用比其母体姜黄素的抑制作用强。具体实施例方式实施例l4-(4-羟基-3-甲氧基苯甲基)姜黄素的合成。合成原料3-羟基-4-甲氧基苯甲醛(香草醛)、2，4-戊二酮、三氧化二硼、硼酸三正丁酯、正丁胺、哌啶均为国药集团化学试剂有限公司。催化氢化装置(美国Parrl100),核磁共振波谱仪(Unity500，美国Varian公司，500MHz)，离子阱质谱仪(DECAX-30000,美国ThermoFinnigan公司)；显微熔点仪(X-4，上海精密仪器厂)。250ml单口烧瓶中加入2，4-戊二酮lOg(O.lmol)，乙醇100ml，加入催化量哌啶，香草醛15g(0.lmol)，室温下搅拌反应48小时，浓縮移去溶剂，重结晶得浅黄色粉末中间体A12.0g。250ml催化氢化反应瓶中加入丙酮100ml，中间体A10g，10%钯碳lg，25PSI下加压催化氢化反应1小时，反应液过滤，滤液浓縮后重结晶得浅棕色油状固体中间体B8.8g。中间体B2.36g(10mmol)与三氧化二硼0.49g(7咖o1)溶于乙酸乙酯10ml中，40。C搅拌反应0.5小时；加入香草醛3.04g(20咖o1)、，硼酸三正丁酯llml(40.5ramo1)，室温下搅拌反应O.5小时，滴入正丁胺O.2ml(2咖o1)与乙酸乙酯10ml的混合液，0.5小时滴加完，室温下搅拌反应48小时，加入0.5M盐酸15ml，升温至60。C反应1小时，反应液用乙酸乙酯萃取，饱和食盐水洗，无水硫酸镁干燥，浓縮后用乙醇重结晶，得桔红色粉末2.50克(产率50%)。mp203-205°C,分子式(:2晶808，'H丽R(DMSO)S(ppm)3.69(s，3H)，3.79(s，3H)，3.82(s，3H)，3.99(s，2H)，6.78(d，2H，J=7.5Hz)，6.60-7.27(m，9H)，7.58(d，2H，J=15.0Hz)，17.9(s，lH);ESI-MS(M-H)503.5。实施例24-(4-羟基-3-甲氧基苯甲基)姜黄素抑制肿瘤细胞K562，HL_60，B-16，SW480，H印G2，MGC80-3，SH-SY5Y的体外生长活性:2.1.细胞系K562:人类慢性粒细胞白血病急变细胞系HL-60:人类急性髓系白血病细胞系B16:小鼠黑色素瘤B16细胞株。SW480:人结肠癌细胞H印G2:人肝肿瘤细胞MGC80-3:人胃癌细胞SH-SY5Y:人神经母细胞瘤细胞以上细胞均来源于中科院上海细胞库。2.2细胞培养细胞培养液配方见表l，细胞在37t:，5%C02孵育箱中培养，取对数生长期细胞用于增殖、凋亡实验。表l培养液配方<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>2.3MTT法观察4-(4-羟基-3-甲氧基苯甲基)姜黄素对细胞增殖的抑制作用将处于对数生长期的细胞，按密度为悬浮细胞50000个/孔、贴壁细胞800012000个/孔接种于96孔板里。实验组(贴壁细胞待贴壁后)分别加入不同浓度的4-(4-羟基-3-甲氧基苯甲基)姜黄素和姜黄素，对照组不加药，另设空白组(只加培养基，无细胞)，每组设三个平行孔，37。C培养48h，加入5mg/ml的MTT溶液20ul/孔，继续培养4h后，离心弃上清，加入DMS0150ul，振荡10min，充分裂解后，用全自动酶标仪(美国BI0-RAD公司生产)检测570nm处的吸光度(0D570)值。根据吸光度计算细胞生长抑制率。细胞生长抑制率4对照孔0D值一实验孔0D值]/[对照孔0D值一空白孔OD值]X100%以同一药物的不同浓度对肿瘤细胞生长抑制率作图，可得到剂量反应曲线，根据线性回归方程求出该药物的半数抑制浓度IC50，7即细胞存活率减少50%时的药物浓度。2.4结果4-(4-羟基-3-甲氧基苯甲基)姜黄素能够显著抑制多种人肿瘤细胞的增殖，根据表2，我们可以看到，该化合物对本实验中的七种细胞株都表现出比母体姜黄素更强的抑制作用，尤其是K562、B16这二株细胞株，该化合物对它们的增殖抑制作用明显比姜黄素的好，其半数抑制浓度约为姜黄素的1/4和1/7。以上结果表明4-(4-羟基-3-甲氧基苯甲基)姜黄素体外肿瘤细胞增殖抑制作用比其母体姜黄素的抑制作用强。表2<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>权利要求1.4-(4-羟基-3-甲氧基苯甲基)姜黄素，其结构式为2.—种权利要求l所述的4-(4-羟基-3-甲氧基苯甲基)姜黄素的制备方法，包括如下步骤由2，4-戊二酮与香草醛先经Knovenagel縮合后得到3-(4-羟基-3-甲氧基苯亚甲基)-2，4-戊二酮，催化氢化3-(4-羟基-3-甲氧基苯亚甲基)-2，4-戊二酮后得到3-(4-羟基-3-甲氧基苯甲基)-2，4-戊二酮，3-(4-羟基-3-甲氧基苯甲基)-2，4-戊二酮再与香草醛经羟醛縮合制得4-(4-羟基-3-甲氧基苯甲基)姜黄素。3.权利要求1所述的4-(4-羟基-3-甲氧基苯甲基)姜黄素用于制备抗肿瘤药物的应用。4.如权利要求3所述的4-(4-羟基-3-甲氧基苯甲基)姜黄素用于制备抗肿瘤药物的应用，其特征在于所述的抗肿瘤药物为治疗白血病、皮肤癌、胃癌、结肠癌、肝癌、乳腺癌、前列腺癌或其他恶性肿瘤的药物。全文摘要本发明涉及合成抗肿瘤药物，具体涉及合成4-(4-羟基-3-甲氧基苯甲基)姜黄素及其用于制备抗肿瘤药物的应用。该化合物由2，4-戊二酮与香草醛先经Knovenagel缩合后，催化氢化后得到3-(4-羟基-3-甲氧基苯甲基)-2，4-戊二酮，3-(4-羟基-3-甲氧基苯甲基)-2，4-戊二酮再与香草醛经羟醛缩合制得4-(4-羟基-3-甲氧基苯甲基)姜黄素。该化合物用于制备治疗白血病、皮肤癌、胃癌、结肠癌、肝癌、乳腺癌、前列腺癌或其他恶性肿瘤的药物。文档编号A61P35/00GK101434525SQ200810071179公开日2009年5月20日申请日期2008年6月5日优先权日2008年6月5日发明者洋刘,吴丽贤,娜李,许建华申请人:福建医科大学