一种姜黄素、去甲氧基姜黄素和双去甲氧基姜黄素的制备方法
【技术领域】
[0001]本发明属药物及天然产物化学领域，具体涉及高纯度姜黄素、去甲氧基姜黄素和双去甲氧基姜黄素的分离纯化方法。
【背景技术】
[0002]姜黄色素通常称为姜黄素，是一种从姜黄根茎中提取得到的黄色色素，在姜黄中含量约为3飞％，姜黄素的主要成分包括姜黄素(C21H2tlO6 70%)、去甲氧基姜黄素(C2tlH18O51(Γ20%)、双去甲氧基姜黄素(C19H16O4 10%)，是极为稀少的二酮类有色物质。姜黄素是一种天然黄色素，被认为最有开发价值的食用天然色素之一。
[0003]同时姜黄素具有广泛的药理活性，如抗菌、抗癌、抗氧化、抗炎等。
[0004]最新研究表明，姜黄素和去甲氧基姜黄素具有良好稳定性，双去甲氧基姜黄素在自然光照射下不稳定；对酪氨酸酶的抑制活性，天然姜黄素类化合物中单去甲氧基姜黄素的活性最强；抗氧化活性大小顺序为姜黄素>去甲氧基姜黄素>双去甲氧基姜黄素；姜黄素对重组人促肝细胞再生磷酸酶PRL-3酶活性的影响最大；对内皮细胞迁移的抑制率:姜黄素>双去甲氧基姜黄素>去甲氧基姜黄素；对肿瘤细胞SGC-7901增值的抑制率:姜黄素>双去甲氧基姜黄素>去甲氧基姜黄素。
[0005]由此可见，三种物质虽然结构相似，但存在不同的药理活性。随着人们对姜黄素、去甲氧基姜黄素和双去甲氧基姜黄素单体化合物不同药理活性的进一步认识，单体化合物的分离将具有非常重要的意义。
[0006]姜黄素见附图1。
[0007]去甲氧基姜黄素见附图2。
[0008]双去甲氧基姜黄素见附图3。
【发明内容】
[0009]针对上述情况，为克服现有技术缺陷，本发明的目的在于提供一种姜黄素、去甲氧基姜黄素和双去甲氧基姜黄素制备方法的技术方案。具有工艺操作简单、生产成本低、收率及纯度高等优点。同时分离得到的高纯度单体，亦可以进行生物活性研究，以分析构效关系O
[0010]所述的一种姜黄素、去甲氧基姜黄素和双去甲氧基姜黄素的制备方法，包括以下步骤:
(I)聚酰胺树脂预处理:取聚酰胺树脂，以90、5%乙醇浸泡，不断搅拌，除去气泡后装入柱中。用3?4倍体积的9(Γ95%乙醇洗脱，洗至洗脱液透明并在蒸干后无残渣(或极少残渣)。用蒸馏水洗脱至pH中性，备用。
[0011](2)层析分离:取适量姜黄用有机溶剂溶解后，上样于聚酰胺层析柱柱顶，然后用洗脱剂(三氯甲烷-甲醇-冰醋酸体系)洗脱。随着洗脱剂的不断加入，柱子会明显出现三条黄色的带，从上往下依次是双去甲氧基姜黄素、去甲氧基姜黄素、姜黄素。将三个单体洗脱液分别收集，在65°C下减压浓缩，减压条件为-0.08、.1 MPa。
[0012]所述的一种姜黄素、去甲氧基姜黄素和双去甲氧基姜黄素的制备方法，其特征在于步骤(I)中，由于新购买的聚酰胺树脂含有蜡质、聚合原料单体及其小分子聚合物等杂质，应进行预处理。用95%乙醇浸泡24小时,95%乙醇洗脱,效果最佳。
[0013]所述的一种姜黄素、去甲氧基姜黄素和双去甲氧基姜黄素的制备方法，其特征在于步骤(2)中姜黄素在丙酮中有很好的溶解度，可用丙酮溶解上样；洗脱剂为三氯甲烷-甲醇-冰醋酸体系；洗脱液流速应为2?3滴/秒，效果最佳；减压浓缩洗脱液时，蒸至溶剂无法蒸出时，会有少量溶剂残余，加入适量水，单体即会析出，过滤、干燥得单体。
[0014]上述一种姜黄素、去甲氧基姜黄素和双去甲氧基姜黄素的制备方法，具有如下有益效果:整个工艺流程操作简单，聚酰胺树脂价格低，同时可分别得到高纯度姜黄素、去甲氧基姜黄素和双去甲氧基姜黄素三种单体化合物，其纯度经过HPLC检测后，均可达到97%以上，回收率可达到78%以上。
【具体实施方式】
[0015]现结合本发明的实施例和相关试验，对本发明作进一步说明。
[0016]待分离姜黄素购买于安耐吉化学公司。附图4为总姜黄素HPLC谱图；附图5为本发明聚酰胺层析树脂分离得到的姜黄素HPLC谱图；附图6为本发明聚酰胺层析树脂分离得到的去甲氧基姜黄素HPLC谱图；附图7为本发明聚酰胺层析树脂分离得到的双去甲氧基姜黄素HPLC谱图；
聚酰胺树脂预处理
量取聚酰胺树脂500 mL，用IL 95%乙醇浸泡，浸泡24小时，期间搅拌以除去气泡。装入直径4cm的层析柱，得到高约40cm的聚酰胺树脂柱。用2L 95%乙醇洗脱，洗至洗脱液透明并在蒸干后无残渣(或极少残渣)。再用蒸馏水洗脱至PH中性，备用。
[0017]层析分离
称取姜黄素1.2 g，用10 mL丙酮溶解，上样于聚酰胺层析柱柱顶，用洗脱剂(三氯甲烷-甲醇-冰醋酸体系)洗脱，流速控制在2?3滴/秒。分别收集三个单体洗脱液，65°C下减压浓缩，减压条件为-0.0f0.1 MPa。浓缩至最后会有少量的冰醋酸残余，加入适量水后，单体会结晶析出，过滤得到单体后，风干。最终得到姜黄素0.41 g，去甲氧基姜黄素0.2 g，双去甲氧基姜黄素0.32 g。经HPLC检测后，其纯度分别为:97%、99%、99%。
[0018]以上试验结果表明，采用聚酰胺树脂为层析填料，三氯甲烷-甲醇-冰醋酸体系为洗脱剂对姜黄素进行分离，可以得到高纯度单体，且流程简短，操作简单。
[0019]
【主权项】
1.一种姜黄素、去甲氧基姜黄素和双去甲氧基姜黄素的制备方法，其特征在于包括以下步骤：（I)聚酰胺树脂预处理：取聚酰胺树脂，以90、5%乙醇浸泡，不断搅拌，除去气泡后装入柱中；用3?4倍体积的9(Γ95%乙醇洗脱，洗至洗脱液透明并在蒸干后无残渣(或极少残渣）；用蒸馏水洗脱至PH中性，备用；（2)层析分离：取适量姜黄用有机溶剂溶解后，上样于聚酰胺层析柱柱顶，然后用洗脱剂洗脱；随着洗脱剂的不断加入，柱子会明显出现三条黄色的带，从上往下依次是双去甲氧基姜黄素、去甲氧基姜黄素、姜黄素；将三个单体洗脱液分别收集，在65°C下减压浓缩，减压条件为-O. 08^-0. I MPa。
2.如权利要求I所述的一种姜黄素、去甲氧基姜黄素和双去甲氧基姜黄素的制备方法，其特征在于步骤（I)中由于新购买的聚酰胺树脂含有蜡质、聚合原料单体及其小分子聚合物等杂质，应进行预处理，用95%乙醇浸泡24小时，95%乙醇洗脱，效果最佳。
3.如权利要求I所述的一种姜黄素、去甲氧基姜黄素和双去甲氧基姜黄素的制备方法，其特征在于步骤（2)中姜黄素在丙酮中有很好的溶解度，可用丙酮溶解上样；洗脱液流速应为2?3滴/秒，效果最佳；减压浓缩洗脱液时，蒸至溶剂无法蒸出时，会有少量溶剂残余，加入适量水，单体即会析出，过滤、干燥得单体。
【专利摘要】本发明涉及一种姜黄素、去甲氧基姜黄素和双去甲氧基姜黄素的制备方法，采用聚酰胺树脂为层析填料，三氯甲烷-甲醇-冰醋酸为洗脱剂，分别收集洗脱液后经浓缩、重结晶得到三种单体化合物，各单体化合物纯度达97%以上，回收率在78%以上。本发明方法先进可靠，流程简短，可操作性强，纯度、回收率高且不会破坏化合物活性，具有很高的应用价值。
【IPC分类】C07C45-78, C07C49-248, C07C49-255
【公开号】CN104591987
【申请号】CN201310531494
【发明人】怀其勇, 李阳, 马庆林
【申请人】山东大学（威海）
【公开日】2015年5月6日
【申请日】2013年11月1日