专利名称：超临界二氧化碳法制备纳米盐酸小檗碱脂质体的方法
技术领域：
本发明属涉及药物载体制备领域，具体地是一种纳米盐酸小檗碱脂质体的制备方法。
背景技术：
药物与载体相结合形成药物载体系统后，药物的吸收和分布不再由药物本身决定，而 是受到载体理化性质的影响。根据临床要求选择适当的药物载体材料，不仅可以将药物输 送到靶器官，而且对于药物的理化性质和药理活性起到有益的作用。
盐酸小檗碱(黄连素)是从黄连、黄柏、三颗针等植物干燥根茎中提取出的一种异喹啉 类生物碱，过去主要应用于通过肠道给药来治疗胃肠炎、细菌性痢疾以及一般肠道感染等。 近年来的研究发现盐酸小檗碱对人类肝癌细胞，结肠肿瘤细胞，食管癌细胞系，恶性畸胎 瘤细胞、大鼠9L脑肿瘤细胞，Lewis肺癌细胞等都有一定的抑制和杀灭作用。但研究还 发现盐酸小檗碱体内抑瘤作用没有体外作用明显，可能是因为盐酸小檗碱肠道吸收较差， 在体内很难达到对肿瘤细胞直接作用的较高的血药浓度。盐酸小檗碱静脉给药，可能引起 药疹、过敏反应、血色素及红细胞减少、药敏性休克等副作用，1982年我国已经禁止使 用盐酸小檗碱静脉给药。由于盐酸小檗碱具有价格低廉，安全性高的特点，使其成为一种 值得在肿瘤防治方面深入研究的药物。因此，如何发挥盐酸小檗碱在癌症治疗上的效果， 抑制其副作用是我们面临的一大问题。为了提高盐酸小檗碱疗效，同时降低其毒副作用， 本专利提出制备纳米盐酸小檗碱脂质体的新方法。
脂质体是类脂双分子层形成的超微型球体，类似生物膜结构，它能将药物包裹于囊 内而成为一种新型药物载体。其基本组分磷脂是生物体内固有的成分，在生物体内经生物 转化而降解，无毒性及免疫原性，因此，脂质体被认为是最具发展前途的药物载体之一。
目前，制备脂质体的方法主要有薄膜分散法，逆向蒸发法，超声波分散法，冻融法， 冷冻干燥法，乙醇注入法，乙醚注入法，逆相蒸发法，表面活性剂处理法等，但上述制备 方法存在严重的缺点，如产物中有机溶剂残留导致脂质体的安全性下降，颗粒单分散性 差不利于体系的稳定，药物的包封率低等。超临界二氧化碳流体是一种环境友好型溶剂， 在制备结束后易于与产物分离且不造成环境污染，并具备优良溶剂的特性。近几年来，随着超临界二氧化碳流体技术的迅速发展，应用领域的不断扩大，其渐渐被应用于脂质体的 制备中。在脂质体制备过程中，超临界二氧化碳的优势主要表现在以下几个方面第一， 与脂质体的其它制备方法比较，超临界二氧化碳法制备的脂质体粒径较为均匀，单分散性 高。第二，与蒸发、萃取或稀释等操作比较，利用超临界二氧化碳法制备的脂质体无有机 溶剂残留，为脂质体的安全临床应用提供了可能。第三，在孵化过程中，超临界二氧化碳 流体可以溶解磷脂中的小分子杂质，释放二氧化碳时杂质会同时被带离体系，以达到纯化 磷脂提高脂质体质量的作用。第四，超临界二氧化碳流体是一种新兴的优良溶剂，传质速 率高，这有利于孵化过程中药物分子从膜外向膜内的扩散，同时超临界二氧化碳流体是二 氧化碳气体在一定温度下经高压作用形成的，体系中的高压同样有利于药物进入脂质体的 内水相，进而提高脂质体的包封率。此外，超临界二氧化碳流体环境可以塑化磷脂分子的 结构，这种塑化作用有利于磷脂分子形成热力学更稳定的构象，使双分子层的排列更加均 匀，以达到提高脂质体稳定性的目的。上述优点说明超临界二氧化碳法在制备盐酸小檗碱 脂质体方面具有一定的优势。
发明内容
针对现有的制备脂质体的方法中普遍存在的产物中有机溶剂残留导致脂质体的安.全 性下降，颗粒单分散性差不利于体系的稳定等缺陷，本发明提出一种超临界二氧化碳法制 备纳米盐酸小檗碱脂质体的新方法，以有效地克服传统制备方法中粒径不均匀、稳定性差、 包封率低、有机溶剂残留的缺点。
本发明采用的技术方案是
根据超临界二氧化碳流体的传质均匀及速率高等特点，运用超临界二氧化碳流体作为 介质，制备单分散性好、药物包封率高的纳米盐酸小檗碱脂质体，并可通过调节制备压力 控制脂质体的尺寸。
依照上述技术方案，本发明的具体操作是
1) 成膜 ■
称取适量卵磷脂及胆固醇置于圆底烧瓶中，卵磷脂与胆固醇的重量比为3.8-2.5: 1。 再以体积比2.5-2: 1配制的氯仿甲醇混合液，加入其中至将其溶解为止。完全溶解后，
在35-42。C恒温和氮气保护条件下，在旋转蒸发仪中成膜，然后抽真空使有机溶剂完全挥 发。
2) 包封药物a) 盐酸小檗碱脂质体混悬液的制备
移取盐酸小檗碱药物溶液，置于步骤l)中具有的圆底烧瓶中，磁力搅拌使膜脱落， 获得盐酸小檗碱脂质体混悬液。其中盐酸小檗碱药物溶液与卵磷脂的质量比(药脂比)为
1: 9-12。
b) 在超临界二氧化碳流体中孵化
将a)中制得的混悬液置于高压反应釜中，另加入适量无水乙醇，再将高压反应釜置 于恒温水浴中，通入二氧化碳气体，达到一定温度和压力后，二氧化碳进入其临界区域， 呈现超临界流体状态。制备压力是可以调节的。如16， 18， 20， 22， 24MPa等。只要该 压力下二氧化碳呈超临界态即可。然后关闭进气阀，在40-45。C的水浴中搅拌孵化半个小 时。无水乙醇与盐酸小檗碱药物溶液的质量比为1: 4-5.5。取无水乙醇密度为0.789g/mL， 盐酸小檗碱药物溶液的密度近似为lg/mL。
3)释放二氧化碳
孵化结束后，释放二氧化碳气体将体系压力降至常压，即得产品。 比较现有技术，本发明具有以下积极效果
1) 制备获得的盐酸小檗碱脂质体的粒径分散均匀，单分散性好，稳定性高(图1， 图2，表l);
2) 如表2的比较可见，本发明所得的药物的包封率高于传统的方法；
3) 有机溶剂残留量少；
4) 可通过调节孵化时高压釜中超临界二氧化碳的压力控制脂质体粒径的尺寸大小和 稳定性(包封压力对尺寸及其分散的影响，见图3)。制备压力与盐酸小檗碱脂质体粒径
的关系压力越大，粒径越小。
图1是纳米盐酸小檗碱脂质体的粒径与形态(原子力显微镜)
图2a和图2b是本发明提出的制备方法与传统的薄膜分散法制备的盐酸小檗碱脂质体 的粒径比较(激光光散射测定结果)。
其中图2a是本发明提出的超临界二氧化碳法制备纳米脂质体的粒径和粒径分布，图 2b是薄膜分散法制备的脂质体的粒径和粒径分布。
6图3表明通过调节超临界二氧化碳的制备压力，可以控制纳米盐酸小檗碱脂质体的尺 寸和分散性
实施例
以下通过实施例进一步说明本发明
实施例l:制备盐酸小檗碱脂质体混悬液，称取50mg卵磷脂及16.5mg胆固醇置于 圆底烧瓶中，用3mL体积比2.2: 1的氯仿与甲醇混合液溶解，完全溶解后旋转蒸发成膜， 水浴温度设定为4rc，再抽真空使溶剂挥发。移取6mllmg/mL盐酸小檗碱溶液，置于上 述圆底烧瓶中，磁力搅拌使膜脱落。将上述混悬液及磁子置于高压反应釜中，另加入1.3mL 无水乙醇，通二氧化碳气体至12MPa。然后关闭进气阀，在一定温度的水浴中搅拌孵化 半个小时。孵化结束后，释放二氧化碳气体将体系压力降至常压，即得产品。
实施例2:制备盐酸小檗碱脂质体混悬液，称取50mg卵磷脂及16.5mg胆固醇置于 圆底烧瓶中，用4mL体积比2: 1的氯仿与甲醇混合液溶解，完全溶解后旋转蒸发成膜， 水浴温度设定为45。C，再抽真空使溶剂挥发。移取5mL lmg/mL盐酸小檗碱溶液，置于 上述圆底烧瓶中，磁力搅拌使膜脱落。将上述混悬液及磁子置于高压反应釜中，另加入 1.3mL无水乙醇，通二氧化碳气体至16MPa。然后关闭进气阀，在一定温度的水浴中搅 拌孵化半个小时。孵化结束后，释放二氧化碳气体将体系压力降至常压，即得产品。
实施例3:制备盐酸小檗碱脂质体混悬液，称取50mg卵磷脂及16.5mg胆固醇置于 圆底烧瓶中，用3.5mL体积比2.5: 1的氯仿与甲醇混合液溶解，完全溶解后旋转蒸发成 膜，水浴温度设走为42t:，再抽真空使溶剂挥发。移取5mL lmg/mL盐酸小檗碱溶液， 置于成膜的圆底烧瓶中，磁力搅拌使膜脱落。将上述混悬液及磁子置于高压反应釜中，另 加入1.3mL无水乙醇，通二氧化碳气体至20MPa。然后关闭进气阀，在一定温度的水浴 中搅拌孵化半个小时。孵化结束后，释放二氧化碳气体将体系压力降至常压，即得产品。
实施例4:制备盐酸小檗碱脂质体混悬液，称取55mg卵磷脂及16.5mg胆固醇置于 圆底烧瓶中，用体积比2丄1的氯仿与甲醇混合液溶解，完全溶解后旋转蒸发成膜，水 浴温度设定为43。C，再抽真空使溶剂挥发。移取5mL lmg/mL盐酸小檗碱溶液，置于上述圆底烧瓶中，磁力搅拌使膜脱落。将上述混悬液及磁子置于高压反应釜中，另加入1.3mL 无水乙醇，通二氧化碳气体至24MPa。然后关闭进气阀，在一定温度的水浴中搅拌孵化 半个小时。孵化结束后，释放二氧化碳气体将体系压力降至常压，即得产品。
本发明根据超临界二氧化碳流体的传质均匀及速率高等特点，运用超临界二氧化碳流 体作为介质，制备单分散性好、药物包封率高的纳米盐酸小檗碱脂质体，并可通过调节孵 化时高压釜中超临界二氧化碳的压力控制脂质体粒径的大小。
表l、本发明提出的超临界二氧化碳法与传统超临界二氧化碳法制备的脂质体稳定性比较
-_______JI定常数(KE) 方法~~~~______________KE 。771' 25天J
本发明提出的超临界二氧化碳法 一般的超临界二氧化碳法0.112 0.429
(注1、稳定常数的测定条件a稳定常数的计算公式KEKA2sd-Ao)/A();b温度为277.2K;
2、稳定常数越小脂质体越稳定)
表2、本发明提出的超临界二氧化碳法与传统超临界二氧化碳法制备的脂质体包封率比较
^-^^^^参数制备压强/MPa孵化温度厂C包封率/%
本发明提出的超临界二氧化碳法 一般的超临界二氧化碳法16 1643 4355.22 50.87
(注包封率的计算公式包封率=(1-游离药《吻质量/药物总质量>100%)8
权利要求
1，一种超临界二氧化碳法制备纳米盐酸小檗碱脂质体的方法，其特征在于它包括以下步骤1)成膜称取适量卵磷脂及胆固醇置于圆底烧瓶中，卵磷脂与胆固醇的重量比为3.8-2.5∶1，再以体积比2.5-2∶1配制的氯仿甲醇混合液，加入其中至将其溶解为止；完全溶解后，在35-42℃恒温和氮气保护条件下，在旋转蒸发仪中成膜，然后抽真空使有机溶剂完全挥发；2)包封药物a)盐酸小檗碱脂质体混悬液的制备移取盐酸小檗碱药物溶液，置于步骤1)中具有的圆底烧瓶中，磁力搅拌使膜脱落，获得盐酸小檗碱脂质体混悬液；所述的盐酸小檗碱药物溶液与卵磷脂的质量比为1∶9-12；b)在超临界二氧化碳流体中孵化将a)中制得的混悬液置于高压反应釜中，另加入适量无水乙醇，再将高压反应釜置于恒温水浴中，通入二氧化碳气体，增加压力后，二氧化碳进入其临界区域，呈现超临界流体状态；然后关闭进气阀，在40-45℃的水浴中搅拌孵化20-45分钟；无水乙醇与盐酸小檗碱药物溶液的质量比为1∶4-5.5；3)释放二氧化碳孵化结束后，释放二氧化碳气体将体系压力降至常压，得到产品。
2，如权利要求1所述的超临界二氧化碳法制备纳米盐酸小檗碱脂质体的方法，其特征在于所述的盐酸小檗碱与卵磷脂的质量比优选为1:10。
3，如权利要求1所述的超临界二氧化碳法制备纳米盐酸小檗碱脂质体的方法，其特征在于所述的无水乙醇与盐酸小檗碱药物溶液中两者的质量比优选为1: 5。
4，如权利要求1所述的超临界二氧化碳法制备纳米盐酸小檗碱脂质体的方法，其特征在于在超临界二氧化碳流体中孵化中，水-洛的温度优选为43'C。
5,如权利要求1所述的超临界二氧化碳法制备纳米盐酸小檗碱脂质体的方 法，其特征在于在超临界二氧化碳流体中孵化中，搅拌孵化的时间优选为30分 钟。
6，如权利要求1所述的超临界二氧化碳法制备纳米盐酸小檗碱脂质体的方 法，其特征在于步骤l)中的胆固醇与卵磷脂的最优质量比为1: 3.
全文摘要
本发明是一种超临界二氧化碳法制备纳米盐酸小檗碱脂质体的方法，本发明的具体操作步骤包括1)成膜；2)包封药物；a)盐酸小檗碱脂质体混悬液的制备；b)在超临界二氧化碳流体中孵化；3)释放二氧化碳孵化结束后，释放二氧化碳气体将体系压力降至常压，即得产品。比较现有技术，本发明根据超临界二氧化碳流体的传质均匀及速率高等特点，运用超临界二氧化碳流体作为介质，制备单分散性好、药物包封率高的纳米盐酸小檗碱脂质体，并可通过调节制备压力控制脂质体的尺寸。
文档编号A61K9/127GK101683322SQ20081020054
公开日2010年3月31日 申请日期2008年9月26日 优先权日2008年9月26日
发明者安学勤, 敏 张, 沈伟国, 丹 裘 申请人:华东理工大学