三唑基氨基嘧啶化合物的制作方法

专利名称：三唑基氨基嘧啶化合物的制作方法
专利说明三唑基氨基嘧啶化合物 Plk1属于以已知为极体箱域(polo box domain)的磷酸丝氨酸/苏氨酸结合域为特征的蛋白质激酶的小家族。Plk1在细胞周期的调节上起着中心作用。在众多功能当中，Plk1被认为是调节有丝分裂的起始、发展和离去，即当癌细胞分裂时的阶段。因此，阻断癌细胞中的Plk1可防止癌细胞的分裂或有丝分裂。
已经确定了干涉有丝分裂的有效力的抗癌剂，如长春花生物碱(NAVELBINE

)，紫杉类(TAXOTERE

)和局部异构酶II抑制剂(ADRIAMYCIN

)。VELCADE

是抑制26S蛋白体的抗肿瘤剂。然而，这些药物对正常、非分裂性细胞引起相当大的副作用。Plk抑制剂的特定目标针对分裂性细胞并能够避免不希望有的毒性。
Plk1的抑制剂是现有技术中已知的。参见例如WO 06/066172。另外，WO 06/021548公开某些二氢蝶啶酮类似物(例如，BI-2536)作为Plk1的抑制剂。目前，BI-2536处于第II阶段临床试验中，但具有高的清除率(CL＞1000ml/min)，并且由于在人体中骨髓抑制作用而受到剂量限制。仍然需要具有改进效力或药物动力学性能的抑制Plk1的其它化合物。
本发明提供被认为在临床上可用于通过抑制Plk1来治疗癌症的新型三唑基氨基嘧啶化合物。这些化合物中的某些被认为具有与在WO06/066172中公开的化合物相比得到改进的效力。另外，本发明的这些化合物中的某些被认为具有与BI-2536相比得到改进的药物动力学性能例如廓清率。此外，由于所试验的本发明化合物的口服生物利用率，可以相信这些化合物中的某些可以口服给药。
本发明提供通式I的化合物
其中 R1是氢，甲基，环丙基，环丙基氨基(C1-C2烷基)，氟，乙氧基，羟基，1-(羟基)乙基，2-(羟基)(C2-C3烷氧基)，2-(羟基)乙氧基甲基，1-(氯)乙基，1-((2-氟)乙基氨基)乙基，2-(甲基氨基)乙氧基，(2-羟乙基)氨基，(2-羟乙基)氨基(C1-C2烷基)，氨基，氨基(C1-C4烷基)，氨基(C2-C3烷氧基)，氨基羰基甲基，(1-甲基)-(1-氨基羰基)乙基，(C1-C3烷基)氨基(C1-C2烷基)，甲氧基乙基氨基，N-(C1-C3烷基)-N-甲基-氨基(C1-C2烷基)，吡咯烷-1-基-甲基，3-(二甲基氨基)-吡咯烷-1-基-甲基，3-(吡啶-3-基)-吡咯烷-1-基-甲基，3-(氨基)吡咯烷-1-基-甲基，3-(甲基氨基)吡咯烷-1-基-甲基，(4，4-二甲基噁唑烷-3-基)甲基，[N-(2-羟基)乙基-N-甲基]-氨基甲基，(氮杂环丁烷-1-基)甲基，哌啶-1-基-甲基，4-(甲氧基)哌啶-1-基-甲基，4-(羟基)哌啶-1-基-甲基，4-(羟甲基)哌啶-1-基-甲基，哌嗪-1-基-(C1-C2烷基)，4-(甲基)哌嗪-1-基-甲基，3，5-(二甲基)哌嗪-1-基-甲基，或吗啉-4-基-甲基； R2是氢； R3是氢，甲基，氟，或氯，或R3是氨基并与R2一起形成稠合到吡啶上的吡咯基环； R4是氢，甲基，氟或氯； R5是氢或羟甲基；和 R6是氢或甲基；或 它的药物学上可接受的盐。
本发明提供了治疗在哺乳动物体内的选自于非小细胞肺癌，口咽癌，食道癌，胃癌，黑素瘤，皮肤的表皮样癌，乳腺癌，卵巢癌，子宫内膜癌，结肠直肠癌，神经胶质瘤，成胶质细胞瘤，甲状腺癌，子宫颈癌，胰腺癌，前列腺癌，肝胚细胞瘤和非霍奇金淋巴瘤癌症当中的癌症的方法，该方法包括对需要该治疗的哺乳动物施用治疗有效量的通式I的化合物或它的药物学上可接受的盐。
本发明还提供药物组合物，它包括通式I的化合物或它的药物学上可接受的盐，和相结合使用的药物学上可接受的赋形剂、载体或稀释剂。
本发明还提供用作药物的通式I的化合物或它的药物学上可接受的盐。本发明涉及通式I的化合物或它的药物学上可接受的盐用于制造治疗癌症的药物的用途。尤其，这些癌症选自非小细胞肺癌，口咽癌，食道癌，胃癌，黑素瘤，皮肤的表皮样癌，乳腺癌，卵巢癌，子宫内膜癌，结肠直肠癌，神经胶质瘤，成胶质细胞瘤，甲状腺癌，子宫颈癌，胰腺癌，前列腺癌，肝胚细胞瘤和非霍奇金淋巴瘤癌症。另外，本发明提供了适合于治疗选自于非小细胞肺癌，口咽癌，食道癌，胃癌，黑素瘤，皮肤的表皮样癌，乳腺癌，卵巢癌，子宫内膜癌，结肠直肠癌，神经胶质瘤，成胶质细胞瘤，甲状腺癌，子宫颈癌，胰腺癌，前列腺癌，肝胚细胞瘤和非霍奇金淋巴瘤癌症当中的癌症的药物组合物，该组合物包括通式I的化合物或它的药物学上可接受的盐作为活性成分。
本发明还提供以下通式的化合物
其中 R1是氢，甲基，环丙基，环丙基氨基甲基，卤素，乙氧基，羟基，1-(羟基)乙基，2-(羟基)乙氧基，氨基，氨基(C1-C4烷基)，(C1-C3烷基)氨基甲基，N-(C1-C3烷基)-N-甲基-氨基甲基，氨基羰基甲基，吡咯烷-1-基-甲基，3-(二甲基氨基)吡咯烷-1-基-甲基，3-(吡啶-3-基)-吡咯烷-1-基-甲基，3-(氨基)吡咯烷-1-基-甲基，2-(羟基)乙氧基甲基，(4，4-二甲基噁唑烷-3-基)甲基，[N-(2-羟基)乙基-N-甲基]-氨基甲基，(氮杂环丁烷-1-基)甲基，哌啶-1-基-甲基，4-(甲氧基)哌啶-1-基-甲基，4-(羟基)哌啶-1-基-甲基，4-(羟甲基)哌啶-1-基-甲基，哌嗪-1-基-甲基，4-(甲基)哌嗪-1-基-甲基，3，5-(二甲基)哌嗪-1-基-甲基，或吗啉-4-基-甲基； R2是氢； R3是氢或卤素，或R3是氨基并与R2一起形成稠合到吡啶上的吡咯基环；和 R4是氢或卤素；或 它的药物学上可接受的盐。
在以上通式中使用的一般化学术语具有它们通常的意义。例如，术语“C1-C3烷基”指甲基，乙基，丙基和异丙基。术语“(C1-C2烷基)”包括在术语“(C1-C3烷基)”之内并且指甲基和乙基。该术语“(C2-C3烷氧基)”指乙氧基，丙氧基和异丙氧基。
术语“卤素”指氟，氯，溴和碘。
当取代基通过例如在术语“氨基(C1-C4烷基)”或“(C1-C2烷基)氨基(C1-C2烷基)”中的烷基如乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基或叔丁基来连接时，在取代基(例如氨基)上的连接可以通过烷基或烷氧基的任何碳来实现。例如
本领域中普通技术人员可以理解，绝大部分或全部的本发明化合物能够形成盐。本发明的化合物是胺，并且相应地与许多无机酸和有机酸中的任何一种进行反应，形成药物学上可接受的酸加成盐。此类的药物学上可接受的酸加成盐以及制备它们的常用方法是现有技术中公知的。参见，例如，P.Stahl等人，HANDBOOK OF PHARMACEUTICAL SALTSPROPERTIES，SELECTION AND USE，(VCHA/Wiley-VCH，2002)；S.M.Berge等人，“Pharmaceutical Salts，“Journal of Pharmaceutical Sciences，Vol 66，No.1，January 1977。
优选的是通式I的化合物，其中 a)R1是氨基(C1-C2烷基)； b)R1是1-(氨基)乙基； c)R1是(C1-C3烷基)氨基(C1-C2烷基)； d)R1是1-(甲基氨基)乙基； e)R1是氨基(C1-C2烷基)或(C1-C3烷基)氨基(C1-C2烷基)； f)R2是氢； g)R3是氢； h)R3是氟； i)R3是氢或氟； j)R4是氟； k)R4是氢； l)R4是氢和氟； m)R5是氢； n)R6是氢； o)R1是环丙基氨基(C1-C2烷基)，1-(羟基)乙基，2-(羟基)乙氧基甲基，1-(氯)乙基，1-((2-氟)乙基氨基)乙基，(2-羟乙基)氨基，(2-羟乙基)氨基(C1-C2烷基)，氨基(C1-C4烷基)，氨基羰基甲基，(1-甲基)-(1-氨基羰基)乙基，(C1-C3烷基)氨基(C1-C2烷基)，N-(C1-C3烷基)-N-甲基-氨基(C1-C2烷基)，吡咯烷-1-基-甲基，3-(二甲基氨基)吡咯烷-1-基-甲基，3-(吡啶-3-基)-吡咯烷-1-基-甲基，3-(氨基)吡咯烷-1-基-甲基，3-(甲基氨基)吡咯烷-1-基-甲基，(4，4-二甲基噁唑烷-3-基)甲基，[N-(2-羟基)乙基-N-甲基]-氨基甲基，(氮杂环丁烷-1-基)甲基，哌啶-1-基-甲基，4-(甲氧基)哌啶-1-基-甲基，4-(羟基)哌啶-1-基-甲基，4-(羟甲基)哌啶-1-基-甲基，哌嗪-1-基-(C1-C2烷基)，4-(甲基)哌嗪-1-基-甲基，3，5-(二甲基)哌嗪-1-基-甲基，或吗啉-4-基-甲基； p)R1是氨基(C1-C4烷基)，(C1-C3烷基)氨基(C1-C2烷基)，N-(C1-C3烷基)-N-甲基-氨基(C1-C2烷基)，或吗啉-4-基-甲基； q)R1是氨基(C1-C4烷基)，或(C1-C3烷基)氨基(C1-C2烷基)； R3是氢或氟； R4是氢或氟； R5是氢；和 R6是氢； r)R1是1-(甲基氨基)乙基，R3是氟和R4是氢，R5是氢，和R6是氢； s)R1是1-氨基乙基，R3是氟和R4是氟，R5是氢，和R6是氢； t)R1是1-氨基乙基，R3是氟和R4是氢，R5是氢，和R6是氢；和 u)R1是1-(甲基氨基)乙基，R3是氟和R4是氟，R5是氢，和R6是氢。
反应路线与制备例和实施例举例说明了本发明的化合物的合成。
在反应路线中的化合物5是通过在起始原料1与2，或起始原料3与4之间的钯(0)偶联反应来制备的。合适的钯催化剂，如四(三苯膦)-钯(0)或[1，1’-双(二苯基-膦基)二茂铁]二氯钯(II)配合物与DCM(1∶1)[Pd(dppf)Cl2]。Pd(dppf)Cl2是在碱如碳酸钠或碳酸钾的存在下使用的。反应是在溶剂如四氢呋喃(THF)、二噁烷和水中进行，一般在约100℃到150℃的温度下使用油浴或微波反应器。

化合物5使用在四氢呋喃(THF)和硼酸三异丙酯中的二异丙基胺化锂来锂化，就地形成苯并[b]噻吩硼酸酯物质，随后与2，4-二氯嘧啶(化合物6)进行钯(0)偶联反应而得到化合物7。该硼酸酯一般是在低温如-78℃下形成的。紧接着采用以上对于制备化合物5所述的条件进行偶联反应。
本发明的化合物然后通过其中化合物7与化合物8反应的亲核取代反应来制备。此类反应是在溶剂如正丁醇，二噁烷，N-甲基吡咯烷-2-酮(NMP)中进行的。该反应是通过使用油浴或微波反应器在约120℃到150℃的温度下进行。使用约2当量的1H-1，2，3-三唑-1-乙胺(化合物8)。胺碱，如三乙基胺和二异丙基乙基胺用作除酸剂。
反应路线II 或者，本发明的化合物能够通过起始原料2和9或4和10之间的Suzuki反应，采用如上所述的条件来制备。

因为两种偶联反应用于本发明的化合物的合成中，所以与反应路线I相比，反应路线II的起始原料9和10代表了反向的偶联顺序。
本领域中技术人员将会认识到，不是所有的在本发明化合物中的取代基将能够容忍用于合成该化合物的反应条件。这些结构部分可以在合成中的合适时刻被引入，或根据需要或按照希望来保护和去保护。本领域中技术人员会认识到，在本发明的化合物的合成中的任何方便的时间点上引入或除去保护基团。引入和除去氮和氧保护基团的方法是现有技术中公知的；参见，例如，Greene and Wuts，Protective Groups in OrganicSynthesis，3rd Ed.，John Wiley and Sons，New York，Chapter 7(1999)。本发明的实施例中的一些是从本发明的其它实施例制备的。此外，本领域中技术人员将会认识到，在许多情况下，结构部分引入的顺序不是关键的。为了生产本发明的化合物所需要的步骤的具体顺序可取决于所要合成的具体化合物，起始化合物，和取代的结构部分的相对不稳定性。
本发明的化合物中的一些含有不对称中心。在这些情况下，在本发明中考虑对映异构体以及外消旋物。ChemDraw

版本10.0用于产生实施例名称。
制备例1 2-苯并[b]噻吩-7-基-4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧杂硼杂环戊烷 将7-溴-苯并[b]噻吩(426mg，2mmol)，双(频哪醇基)二硼(756mg，3mmol)，Pd(dppf)Cl2(81mg，0.1mmol)，和乙酸钾(294mg，3mmol)在烧瓶内的二甲亚砜(DMSO)(10mL)中掺混。将氮气鼓泡通入混合物中达到5分钟。密封该烧瓶，放入到油浴中并在100℃下加热4小时(h)。用氯仿/异丙醇(IPA)(3/1)稀释该混合物。用饱和氯化钠水溶液洗涤该溶液。在硫酸钠上干燥。在真空中浓缩该溶液，得到深色残留物。由柱色谱法(从己烷至在己烷中20％乙酸乙酯)提纯，获得无色固体形式的标题化合物(342mg，66％)。MS(ES)m/z 261[M+1]+。
制备例2 苯并[b]噻吩-7-硼酸 在装有机械搅拌器的12L莫顿(Morton)烧瓶中将7-溴苯并[b]噻吩(300g，1.41mmol)和硼酸三异丙酯(403.6g，2.15mmol)在无水四氢呋喃(THF)(4L)中掺混，然后在干冰/丙酮浴中在氮气氛围中冷却至-70℃。将正丁基锂(在己烷中1.6M浓度，714g，1.68mmol)滴加进去，滴加速率要求保持内部温度低于-67.5℃。在添加结束之后，让反应混合物在这一温度下搅拌1小时。移走冷却浴，然后慢慢地添加4L的水，它引起温度升高至大约-5℃。接着，添加浓HCl(75mL)直到溶液的pH是大约pH＝2。让该淤浆搅拌1小时。添加足够的5N NaOH水溶液以便调节混合物的pH到大约pH＝12，然后转移至22-L底部滴液漏斗中。分离和保留下水层。用4L的甲基叔丁基醚稀释上有机层，然后用1L的5N NaOH水溶液萃取。分离该水层，与先前的水性萃取物掺混，然后放回在分液漏斗中。水层用附加的甲基-叔丁基醚(4L)洗涤。再次，分离该水层和转移到装有机械搅拌器的12L的3颈圆底烧瓶中。用冰-水浴将溶液冷却至+5℃。慢慢地添加浓HCl，直到溶液的pH是大约pH＝2。搅拌混合物30分钟，然后滤出所得固体。在漏斗上用2L的水漂洗固体物两次，然后空气干燥30分钟。将固体物放入到50℃的真空烘箱中，然后在真空下干燥一夜。干燥固体用2L的正庚烷经过30分钟制成淤浆，以除去黄色。再次过滤出固体物，空气干燥30分钟，然后在40℃下真空干燥一夜而获得白色固体形式的标题化合物(188.8g，75％)。1H NMR(400MHz，CD3OD)δ7.86(d，J＝8Hz，1H)，7.49-7.57(m，2H)，7.30-7.39(m，2H)。
制备例3 5-溴甲基-2-氟-4-碘-吡啶 在烧瓶中，掺混2-氟-4-碘-甲基吡啶(10.0g，42.2mmol)，N-溴琥珀酰亚胺(9.76g，54.8mmol)，2，2’-偶氮二异丁腈(3.46g，21.1mmol)和干燥CCl4(100mL)。在70℃下和在氮气氛中加热混合物16小时。冷却混合物到室温(RT)。用二氯甲烷(DCM)稀释以及用水和饱和氯化钠水溶液洗涤。分离各层，在硫酸镁上干燥有机层。真空浓缩，得到粗产物。由柱色谱法(在己烷中1％至15％乙酸乙酯)提纯，获得标题化合物(8.27g，62％)。MS(ES)m/z 315[M+1]+。
制备例4 (6-氟-4-碘-吡啶-3-基)-乙腈 在氮气氛围中将三甲基甲硅烷基氰化物(297mg，3.0mmol)和四丁基铵氟化物(785mg，3.0mmol)在20mL的乙腈中掺混。将5-溴甲基-2-氟-4-碘-吡啶(0.63g，2.0mmol)添加到以上溶液中。在室温下搅拌混合物2小时。用氯仿/IPA(3/1)稀释该混合物。用水和随后用饱和氯化钠水溶液洗涤该溶液。在硫酸钠上干燥它。真空浓缩溶液。由柱色谱法(在DCM中5％甲醇)提纯，获得标题化合物，为黄色蜡状固体(500mg，96％)。MS(ES)m/z 263[M+1]+。
制备例5 2-(6-氟-4-碘吡啶-3-基)-2-甲基丙腈 在0℃下将氢化钠(1.51g，62.9mmol)添加到由(6-氟-4-碘-吡啶-3-基)-乙腈(5.5g，20.9mmol)在10mL的二甲基甲酰胺(DMF)中所形成的溶液中。将混合物从0℃到室温搅拌30分钟。添加甲基碘(8.9g，63mmol)和继续在室温下搅拌混合物另外30分钟。用水稀释混合物并萃取到DCM中。在硫酸钠上干燥有机相，真空浓缩得到油性残留物。由快速柱色谱法(FCC)(在己烷中20％乙酸乙酯)提纯残留物，得到标题化合物，为黄色固体(5g，82％)。MS(ES)m/z 291[M+1]+。
制备例6 2-(6-氟-4-碘-吡啶-3-基)-乙酰胺 将(6-氟-4-碘-吡啶-3-基)-乙腈(360mg，1.37mmol)，过氧化氢(10g，30％，158mmol)，18-冠醚(36mg，0.14mmol)，碳酸钾(2M，10mL，20mmol)和10mL的乙醇一起掺混，形成均匀的溶液。搅拌混合物3小时。用水稀释它。将产物萃取到DCM中。用FCC(在DCM中10％甲醇)提纯粗产物，获得标题化合物，为白色固体(250mg，64％)。MS(ES)m/z281[M+1]+。
通过使用与2-(6-氟-4-碘-吡啶-3-基)-乙酰胺的程序相类似的程序来制备以下中间体 制备例8 1-(6-氟-吡啶-3-基)-乙醇 在氮气氛围中在0℃下将溴化甲基镁(在乙醚中3M，12mL，36mmol)添加到由6-氟-吡啶-3-甲醛(3g，24mmol)在THF(20mL)中所形成的溶液中。在室温下继续搅拌混合物一夜。用1N HCl淬灭混合物，随后用稀的氢氧化铵碱化至～pH 9。用氯仿/IPA(3/1)萃取产物。在硫酸钠上干燥。真空浓缩溶液。由柱色谱法(在DCM中10％甲醇)提纯，得到无色油形式的标题化合物(2.3g，68％)。MS(ES)m/z 142[M+1]+。
制备例9 5-(1-叠氮基-乙基)-2-氟-吡啶 向在冰浴中保持冷却的1L烧瓶中添加三苯膦(27.9g，106.3mmol)，4，5-二氯-3，6-二氧代环己-1，4-二烯-1，2-二甲腈(24.12g，106.3mmol)。在搅拌下缓慢地添加DCM(150mL)。向该深色溶液中慢慢地添加四-N-丁基铵叠氮化物(30.23g，106.3mmol)，随后将已溶于DCM(10mL)中的1-(6-氟-吡啶-3-基)-乙醇(10g，70.85mmol)添加进去。从冰浴中移走烧瓶，然后在室温下搅拌1小时。在旋转蒸发器上除去溶剂，然后由正相色谱分离法(在己烷中5％-20％乙酸乙酯)提纯，获得无色油形式的标题化合物(7.75g)。GCMS m/z 166[M]+。
制备例10 1-(6-氟-吡啶-3-基)-乙基胺 在PtO2(6％w/w)存在下在60psi压力下将5-(1-叠氮基-乙基)-2-氟-吡啶(4.09g，24.59mmol)在乙醇(200mL)中氢化。在4小时后过滤混合物，在旋转蒸发器上除去溶剂，然后在真空下干燥所得到的油，从而获得标题化合物(3.15g)。GCMS m/z 140[M]+。
制备例11 1-(6-氯吡啶-3-基)乙醇 将四氢硼酸钠(1.01g，26.35mmol)慢慢地添加到由1-(6-氯-吡啶-3-基)-乙酮(10g，64.27mmol)在甲醇(100mL)中所形成的溶液中。在室温下搅拌15分钟。将反应混合物倾倒在含有饱和NaHCO3(40mL)的烧杯中，然后在水(100mL)和DCM(400mL)之间萃取。有机层用饱和氯化钠水溶液洗涤，在硫酸钠上干燥，然后浓缩。由正相柱色谱法(在己烷中20％乙酸乙酯到在己烷中70％乙酸乙酯)提纯，获得标题化合物(7g，69％)。MS(ES)m/z 158[M+1]+。
制备例12 2-氟-5-(1-甲氧基甲氧基-乙基)-吡啶 在0℃下将二异丙基乙胺和氯甲氧基甲烷添加到由1-(6-氟-吡啶-3-基)-乙醇(3.0g，21.3mmol)在DCM中所形成的溶液中。在0℃下继续搅拌混合物30分钟，然后在室温下搅拌一夜。用氯仿/IPA(3/1)稀释该混合物。用饱和氯化钠水溶液洗涤该溶液。在硫酸钠上干燥它。在真空中浓缩该溶液，得到深色残留物。由柱色谱法(从己烷至在己烷中20％乙酸乙酯)提纯，获得无色固体形式的产物(3g，66％)。MS(ES)m/z 186[M+1]+。
通过使用与2-氟-5-(1-甲氧基甲氧基-乙基)-吡啶的程序相类似的程序来制备下列中间体 制备例14 5-环丙基-2-氟-吡啶 将2-氟-5-碘-吡啶(1.12g，5mmol)，环丙基硼酸(645mg，7.5mmol)，乙酸钯(56mg，0.25mmol)，磷酸钾(3.2g，15mmol)，在甲苯/水(20∶1，21mL)中掺混。混合物在100℃下加热4小时。用氯仿-IPA(3∶1，100mL)稀释该混合物。有机相用饱和氯化钠水溶液和水洗涤。在硫酸钠上干燥混合物。在真空中浓缩溶液，得到棕色油。由柱色谱法(在己烷中20％乙酸乙酯)提纯，获得浅黄色油形式的标题化合物(430mg，63％)。
制备例15 5-环丙基-2-氟-3-碘-吡啶 在氮气氛围中在干冰-丙酮浴中将5-环丙基-2-氟-吡啶(1.3g，9.5mmol)在THF(20mL)中的溶液冷却至-75℃。经过30分钟的时间添加二异丙基胺化锂(在THF中2M，6mL，12mmol)。搅拌混合物另外3小时，然后添加碘(2.9g，11.4mmol，溶于50mL的THF中)。再保持搅拌2个小时，之后将水(100mL)添加到混合物中。然后在搅拌下经过1小时升至室温。混合物用饱和硫代硫酸钠溶液(50mL)处理。用乙醚萃取该溶液。真空浓缩溶液。由柱色谱法(从己烷至在己烷中20％乙酸乙酯)提纯，获得黄色油形式的标题化合物(1.7g，68％)。1H NMR(400MHz-CDCl3)δ7.99(d，J＝3Hz，1H)，7.39(td，J＝3，5Hz，1H)，6.79(dd，J＝3，8Hz，1H)，0.96-1.02(m，2H)，0.63-0.69(m，2H)。
通过使用与5-环丙基-2-氟-3-碘-吡啶的程序相类似的程序来制备以下中间体 制备例18 5-环丙基-2-氟-4-碘-吡啶 在氮气氛围中在干冰-丙酮浴中将5-环丙基-2-氟-3-碘-吡啶(1.7g，6.5mmol)在THF(20mL)中的溶液冷却至-75℃。经过30分钟的时间添加二异丙基胺化锂(在THF中2M，3.9mL，7.8mmol)。将混合物搅拌另外3小时，之后添加水(100mL)。然后在搅拌下经过1小时让温度升至室温。用乙醚萃取该溶液。在真空中浓缩溶液，得到棕色油。由柱色谱法(从己烷至在己烷中15％乙酸乙酯)提纯，获得黄色油形式的标题化合物(1.1g，65％)。1H NMR(400MHz-CDCl3)δ8.03(dd，J＝3，8Hz，1H)，7.99(s，1H)，0.91-1.00(m，2H)，0.71-0.78(m，2H)。
通过使用与5-环丙基-2-氟-4-碘-吡啶的程序相类似的程序来制备下列中间体 制备例21 1-(6-氟-4-碘-吡啶-3-基)-乙醇 将1N HCl(5mL)添加到由2-氟-4-碘-5-(1-甲氧基甲氧基-乙基)-吡啶(1g，3.2mmol)在甲醇(10mL)中所形成的溶液中。搅拌混合物一夜。用碳酸钠(2N)稀释反应混合物。将产物萃取到氯仿中。在硫酸钠上干燥有机相。真空浓缩溶液。由柱色谱分离法(在DCM中10％甲醇)提纯粗产物，获得白色固体形式的标题化合物(0.75g，87％)。MS(ES)m/z 268[M+1]+。
通过使用与1-(6-氟-4-碘-吡啶-3-基)-乙醇的程序相类似的程序来制备以下中间体 制备例23 甲磺酸1-(6-氟-4-碘-吡啶-3-基)-乙酯 在0℃下将甲烷磺酰氯(1.93g，16.8mmol)添加到由1-(6-氟-4-碘-吡啶-3-基)-乙醇(1.5g，5.6mmol)和二异丙基乙胺(2.2g，16.8mmol)在DCM(50mL)中形成的溶液中。在0℃至室温继续搅拌混合物4小时。用稀碳酸钠来稀释反应混合物。将产物萃取到氯仿中。在硫酸钠上干燥有机相。真空浓缩溶液。由柱色谱法(在己烷中20％乙酸乙酯)提纯粗产物，获得白色固体形式的标题化合物(1.24g，64％)。MS(ES)m/z 346[M+1]+。
制备例24 5-(1-叠氮基-乙基)-2-氟-4-碘-吡啶 在0℃下将叠氮化钠(0.45g，7mmol)和四-N-丁基铵溴化物(0.12g，0.4mmol)添加到由甲磺酸1-(6-氟-4-碘-吡啶-3-基)-乙酯(1.2g，3.5mmol)在DMF(20mL)中所形成的溶液中。在室温下搅拌混合物42小时。反应混合物用氯仿稀释。用水和饱和氯化钠水溶液洗涤有机相。在硫酸钠上干燥有机相。真空浓缩溶液。由柱色谱法(在己烷中20％乙酸乙酯)提纯，获得白色固体形式的标题化合物(0.77g，76％)。1H NMR(400MHz-CDCl3)δ1.56(d，J＝6.8Hz，1H)，4.90(m，1H)，7.45(d，J＝3.2Hz，1H)，8.17(s，3H)。
制备例25 4-(1-(6-氯-4-碘吡啶-3-基)乙基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯 向6-氯-4-碘吡啶-3-基)乙醇(300mg，1.06mmol)和三乙基胺(737μL，5.29mmol)在乙腈(10mL)中的冰冷却溶液中滴加由由甲烷磺酸酐(553mg，3.17mmol)在CH3CN(3mL)中所形成的溶液。在同一温度下搅拌40分钟，然后将N-叔丁氧基羰基哌嗪(1.97g，10.6mmol)在CH3CN(5mL)中形成的溶液添加进去。加热混合物到60℃保持一夜。用饱和NaHCO3(10mL)淬灭和用乙酸乙酯(50mL×3)萃取。有机相用饱和氯化钠水溶液洗涤，在Na2SO4上干燥，过滤，和由旋转蒸发除去溶剂。由正相柱色谱法(在己烷中10％乙酸乙酯到在己烷中40％乙酸乙酯)提纯，获得白色固体形式的标题化合物(226mg，47％)。MS(ES)m/z 452[M+1]+。
制备例26 1-(6-氯吡啶-3-基)乙酮肟 将1-(6-氯吡啶-3-基)乙酮(3.4g，22.8mmol)，在水(5.77g，87.4mmol)中的羟胺(50％)以及在15mL的二噁烷中的0.75mL乙酸在压力容器中掺混。密封该容器和在油浴中在150℃下加热混合物3小时。将混合物冷却至室温。用氯仿/IPA(3/1)稀释，用水和饱和氯化钠水溶液洗涤。分离两层，在硫酸钠上干燥有机层。在真空中浓缩，获得标题化合物(3.52g，94％)。MS(ES)m/z 171[M+1]+。
制备例27 1-(6-氯吡啶-3-基)乙胺 在氮气氛围中将由硼氢化钠(2.96g，82.65mmol)和四氯化钛(在甲苯中1M浓度，41.33mL，41.33mmol)在50mL的干燥1，2-二甲氧基乙烷中所形成的溶液冷却到0℃。将1-(6-氯吡啶-3-基)乙酮肟(3.52g，20.66mmol)滴加到该溶液中。在室温下搅拌混合物一夜。用200mL的水淬灭该反应。用氢氧化铵将该混合物调节成碱性。随后，将粗产物萃取到甲苯和乙酸乙酯中。分离两层，在硫酸钠上干燥有机层。在真空中浓缩得到粗产物(1.24g，38％)。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ3.53(s，3H)，5.23(s，2H)，7.39(d，J＝4.0Hz，1H)，7.96(d，J＝1.6Hz，1H)。
制备例28 1-(6-甲基吡啶-3-基)乙胺 在氮气氛围中和在室温下，将1-(6-甲基吡啶-3-基)-乙酮(10g，74mmol)在四(异丙氧基)钛(42.1g，148mmol)和氨溶液(370mmol，在甲醇中2M)中的混合物搅拌6小时。向该混合物添加四氢硼酸钠(4.2g，111mmol)，然后搅拌一夜。反应混合物用氢氧化铵淬灭，然后过滤混合物。从滤液中除去溶剂并用DCM萃取残留物，用饱和氯化钠水溶液洗涤并在Na2SO4上干燥，过滤和除去溶剂，而获得暗黄色油形式的标题化合物(8.16g)。MS(ES)m/z 137[M+1]+。
制备例29 1-(6-甲基吡啶-3-基)乙基氨基甲酸叔丁酯 将二异丙基乙胺(11.6g，89.9mmol)和重碳酸二叔丁酯(15.7g，71.9mmol)添加到由1-(6-甲基吡啶-3-基)-乙基胺(8.16g，59.9mmol)在乙腈(50mL)中所形成的溶液中，然后搅拌混合物一夜。混合物用饱和NaHCO3(200mL)洗涤，然后萃取到DCM中，用饱和氯化钠水溶液洗涤并在Na2SO4上干燥。由柱色谱法(在己烷中5％到50％乙酸乙酯)提纯，获得浅黄色油形式的标题化合物(7.3g)。MS(ES)m/z 237[M+1]+。
制备例30 1-(4-碘-6-甲基吡啶-3-基)乙基氨基甲酸叔丁酯 在N2氛围中通过使用双尖头针，在-78℃下将1-(6-甲基吡啶-3-基)乙基氨基甲酸叔丁酯(6.85g，29mmol)的溶液添加到由叔丁基锂(51.1mL，87mmol)在THF(70mL)中所形成的溶液中。在30分钟后，在-78℃下经过30分钟将在THF(25mL)中的碘(11.0g，43.5mmol)添加进去。搅拌1小时，然后升至室温。用水淬灭反应，在乙酸乙酯中萃取，用饱和氯化钠水溶液洗涤，在Na2SO4上干燥。由柱色谱法(在己烷中5％-50％乙酸乙酯)提纯，获得标题化合物(620mg)。MS(ES)m/z 363[M+1]+。
制备例31 (6-氟-4-碘-吡啶-3-基甲氧基)-乙醇 在0℃下将氢化钠(54mg，2.25mmol)添加到2.5mL乙二醇中，然后在室温下搅拌30分钟。添加5-溴甲基-2-氟-4-碘-吡啶(0.69g，2.14mmol)，然后加热它到120℃保持30分钟。冷却到室温，用70mL的水稀释，然后用乙醚(3×50mL)萃取。合并有机层，用饱和氯化钠水溶液洗涤，在MgSO4上干燥，然后除去溶剂。使用乙醚由色谱法提纯，获得标题化合物(240mg，38％)。MS(ES)m/z 296[M+1]+。
制备例32 4-(6-氟-4-碘-吡啶-3-基甲基)-吗啉 在烧瓶中在氮气氛围中掺混5-溴甲基-2-氟-4-碘-吡啶(6.13g，19.4mmol)，吗啉(3.38g，38.8mmol)和干燥CH3CN(100mL)。添加N，N-二异丙基乙胺(6.76mL，38.80mmol，2M THF溶液)。在80℃下加热混合物2小时，然后冷却至室温。用DCM稀释以及用水和饱和氯化钠水溶液洗涤。将有机层与水层分离，并在硫酸镁上干燥有机层。在过滤之后，在真空中浓缩，得到标题化合物6.23g(100％)。MS(ES)m/z 323[M+1]+。
通过使用与4-(6-氟-4-碘-吡啶-3-基甲基)-吗啉的程序相类似的程序制备以下中间体 制备例45 2-氟-5-甲氧基甲氧基-吡啶 将6-氟-吡啶-3-醇(3.5g，30.95mmol)添加到氢化钠(1.49g，37.1mmol)在DMF(20mL)中的悬浮液中。搅拌混合物1小时。添加氯甲基甲基醚(2g，25.0mmol)。在室温下搅拌混合物一夜。用乙酸乙酯和水稀释混合物。用水和饱和氯化钠水溶液洗涤有机层。在硫酸钠上干燥混合物。在真空中浓缩溶液，得到棕色油。由柱色谱法(在己烷中10％乙酸乙酯)提纯，获得黄色油形式的标题化合物(4.30g，88％)。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ3.48(s，3H)，5.15(s，2H)，6.85(dd，J＝3.6Hz，J＝8.8Hz，1H)，7.47(m，1H)，7.96(m，1H)。
制备例46 2-氟-4-碘-5-甲氧基甲氧基-吡啶 将2-氟-5-甲氧基甲氧基-吡啶(4.1g，26.1mmol)在THF(60mL)中的溶液冷却至-75℃。经过30分钟添加叔丁基锂(在戊烷中1.7M，30.4mL，51.7mmol)。将混合物搅拌另外半小时。添加碘(9.8g，38.6mmol，已溶于60mL的四氢呋喃中)。在添加结束之后搅拌1小时。在搅拌的同时，经过1小时让温度升至室温。混合物用水处理。溶液用乙酸乙酯萃取三次。用饱和氯化钠水溶液洗涤有机层。在硫酸钠上干燥混合物。在真空中浓缩该溶液，得到棕色固体。用己烷研制棕色固体物。过滤获得标题化合物(3.9g，53％)，为棕色固体。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ3.53(s，3H)，5.23(s，2H)，7.39(d，J＝4.0Hz，1H)，7.96(d，J＝1.6Hz，1H)。
制备例47 6-氟-4-碘-吡啶-3-醇 将HCl(在水中3M，31mL，93.0mmol)添加到2-氟-4-碘-5-甲氧基甲氧基-吡啶(3.9g，13.8mmol)在THF(20mL)中所形成的溶液中。在60℃下搅拌混合物3小时，然后冷却混合物。通过缓慢添加饱和碳酸氢钠水溶液来调节pH至7。溶液用乙酸乙酯萃取三次。用饱和氯化钠水溶液洗涤有机层。在硫酸钠上干燥混合物。在真空中浓缩溶液，获得黄色固体形式的标题化合物(3.2g，97％)。MS(ES)m/z 240[M+1]+。
制备例48 2-[2-(6-氟-4-碘-吡啶-3-基氧基)-乙基]-异吲哚-1，3-二酮 在氮气中在冰浴中将6-氟-4-碘-吡啶-3-醇(1.5g，6.28mmol)和K2CO3(4.38g，31.4mmol)在DMF(10mL)中形成的悬浮液冷却到0℃。添加2-(2-溴-乙基)-异吲哚-1，3-二酮(3.19g，12.55mmol)。在室温下搅拌混合物一夜。添加水。用乙酸乙酯萃取。用饱和氯化钠水溶液洗涤该溶液。在硫酸钠上干燥。真空浓缩溶液。由柱色谱法(从己烷到在己烷中30％乙酸乙酯)提纯，获得黄色油形式的标题化合物(1.51g，58％)。MS(ES)m/z 413[M+1]+。
制备例49 2-(6-氟-4-碘-吡啶-3-基氧基)-乙基胺 将肼(70mg，2.12mmol)添加到由2-[2-(6-氟-4-碘-吡啶-3-基氧基)-乙基]-异吲哚-1，3-二酮(440mg，1.06mmol)在乙醇(10mL)中所形成的溶液中。在室温下搅拌溶液一夜。过滤除去固体，浓缩该滤液得到浅黄色固体。由柱色谱法(10％2M氨-甲醇，在二氯甲烷中)获得浅黄色油形式的标题化合物(250mg，83.8％)。1H NMR(400MHz，CD3CN)δ2.12(s，2H)，3.03(t，J＝5.2Hz，2H)，4.10(t，J＝5.2Hz，2H)，7.47(d，J＝4.0Hz，1H)，7.69(d，J＝2.0Hz，1H)。
制备例50 1-(6-氟-4-碘-吡啶-3-基氧基)-丙-2-酮 在氮气中在冰浴中将6-氟-4-碘-吡啶-3-醇(1.6g，6.69mmol)和K2CO3(2.8g，20.1mmol)在DMF(10mL)中形成的悬浮液冷却到0℃。在30分钟的时间中添加氯丙酮(0.78g，8.03mmol)。在室温下搅拌混合物1.5小时。添加水和用乙酸乙酯萃取。用饱和氯化钠水溶液洗涤该溶液。在硫酸钠上干燥。真空浓缩溶液。由柱色谱法(从己烷到在己烷中10％乙酸乙酯)提纯，获得标题化合物(1.5g，76％)。MS(ES)m/z 296[M+1]+。
制备例51 1-(6-氟-4-碘-吡啶-3-基氧基)-丙-2-醇 将NaBH4(35mg，0.94mmol)缓慢地添加由1-(6-氟-4-碘-吡啶-3-基氧基)丙-2-酮(240mg，0.81mmol)在甲醇(4mL)中所形成的溶液中。在室温下搅拌混合物3小时。添加1N HCl和水。用二氯甲烷萃取。用饱和氯化钠水溶液洗涤有机层。在硫酸钠上干燥。在真空中浓缩该溶液，得到黄色固体。由柱色谱法(从己烷至在己烷中10％乙酸乙酯)提纯，获得浅黄色固体形式的标题化合物(240mg，99％)。MS(ES)m/z 298[M+1]+。
制备例52 2-[2-(6-氟-4-碘-吡啶-3-基氧基)-1-甲基-乙基]-异吲哚-1，3-二酮 将6-氟-4-碘-吡啶-3-醇(150mg，0.63mmol)，甲苯-4-磺酸2-(1，3-二氧代-1，3-二氢-异吲哚-2-基)-丙酯(226mg，0.63mmol)，碳酸铯(206mg，0.63mmol)在DMF(2mL)中的混合物在100℃下加热5小时。冷却混合物，然后添加水。用乙酸乙酯萃取。用饱和氯化钠水溶液洗涤有机层。在硫酸钠上干燥。在真空中浓缩该溶液，得到浅黄色固体。由柱色谱法(从己烷至在己烷中10％乙酸乙酯)提纯，获得白色固体形式的标题化合物(115mg，43％)。MS(ES)m/z 427[M+1]+。
通过使用与2-[2-(6-氟-4-碘-吡啶-3-基氧基)-1-甲基-乙基]-异吲哚-1，3-二酮的程序相类似的程序来制备以下中间体 制备例55 2-氟-4-碘-5-[2-(四氢-吡喃-2-基氧基)-乙氧基]-吡啶 将6-氟-4-碘-吡啶-3-醇(0.5g，2.09mmol)添加到由氢化钠(在矿物油中的60％分散体，0.1g，2.51mmol)在DMF(6mL)中所形成的悬浮液之中。搅拌混合物1小时。添加2-(2-溴-乙氧基)-四氢吡喃(0.51g，2.34mmol)。在室温下搅拌溶液一夜。用乙酸乙酯和水稀释混合物。用饱和氯化钠水溶液和水洗涤有机层。在硫酸钠上干燥混合物。真空浓缩溶液。由柱色谱分离法(在己烷中10％乙酸乙酯)提纯，获得浅黄色油形式的标题化合物(0.58g，75.5％)。MS(ES)m/z 368[M+1]+。
通过使用与2-氟-4-碘-5-[2-(四氢-吡喃-2-基氧基)-乙氧基]-吡啶的程序相类似的程序来制备以下中间体 制备例57 3-甲氧基甲氧基-吡啶 将3-羟基吡啶(7g，74mmol)溶解在THF(20.6mL)和DMF(34.4mL)中，然后冷却至-15℃。添加叔丁醇钾(8.3g，74mmol)，然后在-15℃下搅拌30分钟。经过40分钟滴加氯甲基甲基醚(5.81mL，77mmol)来处理该混合物。在添加结束之后，让混合物在-15℃下搅拌另外1小时。移走冰浴，让混合物慢慢地升至15℃。将混合物倾倒在饱和氯化钠水溶液中，然后剧烈搅拌10分钟。所得溶液用三份的乙酸乙酯萃取。合并有机萃取物并用饱和氯化钠水溶液洗涤，在硫酸钠上干燥，过滤，和真空浓缩。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.42(d，J＝3Hz，1H)，8.28(d，J＝5Hz，1H)，7.37-7.42(m，1H)，7.21-7.27(m，1H)，5.20(s，2H)，3.49(s，3H)。
制备例58 2-氯-5-甲氧基甲氧基-吡啶 将氢化钠(3.7g，93mmol)悬浮在DMF(50mL)中，然后经过45分钟将2-氯-5-羟基吡啶(10g，77mmol)在DMF(20mL)中所形成的溶液滴加进去。在室温下搅拌该溶液1.5小时。经过45分钟滴加氯甲基甲基醚(6.6mL，86mmol)。在室温下搅拌所得混合物达12小时。用乙酸乙酯，水，和饱和氯化钠水溶液稀释该混合物。分离出有机溶液，然后用三份的水、一份的饱和氯化钠水溶液洗涤，在硫酸钠上干燥，过滤，和真空浓缩。通过经过20分钟用从己烷至在己烷中30％乙酸乙酯的梯度洗脱，然后在己烷中30％乙酸乙酯的浓度下保持30分钟，在330g的硅胶上进行柱色谱分离提纯粗产物，得到澄明油形式的标题化合物(10.8g，81％)。MS(ES)m/z 174.0[M+1]+。
制备例59 2-氯-4-碘-5-甲氧基甲氧基-吡啶 经过10分钟将叔丁基锂(在戊烷中1.7M，72mL，123mmol)滴加到2-氯-5-甲氧基甲氧基-吡啶(10.8g，62mmol)在THF(300mL)中的处于-70℃的溶液中。所得溶液在-70℃下搅拌30分钟。经过30分钟，将碘(23g，92mmol)在THF(150mL)中的溶液滴加进去。所得溶液在-70℃下搅拌1小时。移走冰浴，和让反应升至室温。混合物用乙酸乙酯和水稀释，然后分离两相。用两份的乙酸乙酯萃取水相。合并有机萃取液，然后用两份的硫代硫酸钠水溶液，一份的水，一份的饱和氯化钠水溶液洗涤。在硫酸钠上干燥，过滤，和蒸发。用己烷研制所得固体物。真空过滤收集固体物，然后用己烷洗涤固体。在真空下干燥该固体，得到棕色固体形式的标题化合物(10.8g，58％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.08(s，1H)，7.98(s，1H)，5.43(s，2H)，3.40(s，3H)。
通过与2-氯-4-碘-5-甲氧基甲氧基-吡啶的程序相类似的程序来制备下列中间体 制备例61 [2-(6-氟-4-碘-吡啶-3-基氧基)-乙基]甲基-氨基甲酸叔丁酯 将氢化钠(620mg，26mmol)添加到由[2-(6-氟-4-碘-吡啶-3-基氧基)-乙基]-氨基甲酸叔丁酯(0.33g，0.86mmol)在3mL的DMF中所形成的溶液中。在室温下搅拌混合物1小时和添加甲基碘(0.37g，2.59mmol)。在室温下搅拌反应混合物一夜。添加水和用乙酸乙酯萃取。有机层用饱和氯化钠水溶液洗涤。在硫酸钠上干燥混合物。真空浓缩溶液。由柱色谱法(在己烷中20％乙酸乙酯)提纯残留物，获得浅黄色固体形式的标题化合物(0.13g，38％)。1H NMR(400MHz，CD3CN)δ1.45(s，9H)，3.08(s，3H)，3.59(t，J＝5.6Hz，2H)，4.20(t，J＝5.6Hz，2H)，5.07(s，1H)，7.38(d，J＝3.2Hz，1H)，7.61(d，J＝1.2Hz，1H)。
制备例62 6-氯-4-碘-吡啶-3-醇 2-氯-4-碘-5-甲氧基甲氧基-吡啶(8.1g，27mmol)在THF(40mL)中的溶液用3N HCl(61mL)处理。将所得混合物加热至60℃保持3小时。将混合物冷却至室温，然后通过缓慢添加饱和碳酸氢钠水溶液将pH调节到7。混合物用三份的乙酸乙酯萃取。合并有机萃取液，然后在硫酸钠上干燥，过滤，和真空浓缩，得到棕色固体形式的标题化合物(6.8g，98％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.04(s，1H)，7.81-7.87(m，2H)。
制备例63 2-氯-5-乙氧基-4-碘-吡啶 6-氯-4-碘-吡啶-3-醇(4.9g，19mmol)和碳酸钾(8.0g，58mmol)在DMF(50mL)中的溶液用乙基碘(4.7mL，58mmol)处理。将混合物在60℃下加热3小时。冷却混合物到室温，然后经由滤纸过滤。混合物用乙酸乙酯稀释，然后用10％柠檬酸水溶液洗涤。合并水溶液，并用两个附加份的乙酸乙酯萃取。合并该有机萃取液，然后用三份的水、一份的饱和氯化钠水溶液洗涤，在硫酸钠上干燥，过滤，和真空浓缩，得到棕色固体形式的标题化合物(5.1g，93％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.00(s，1H)，7.93(s，1H)，4.18(q，J＝7Hz，2H)，1.35(t，J＝7Hz，3H)。
制备例64 2，2-二甲基-N-吡啶-3-基-丙酰胺 为250mL圆底烧瓶安装冰浴，磁力搅拌器，和N2气氛。添加3-氨基吡啶(15g，159mmol)，THF(60mL)，乙醚(60mL)，三乙胺(17.7g，24.4mL，175mmol)。冷却混合物到0℃和经由注射器慢慢地添加三甲基乙酰氯(21.0g，14.9mL，175mmol)。混合一夜，同时升至室温。添加水(100mL)，转移到分液漏斗中，萃取，废弃底下水层。在Na2SO4上干燥有机层，过滤，和经由旋转蒸发器浓缩成无色油，它在冷却时凝固。在高真空下干燥2.5小时得到黄褐色固体形式的标题化合物21.56g(76％)。MS(ES)m/z 179[M+1]+。
制备例65 N-(4-碘-吡啶-3-基)-2，2-二甲基-丙酰胺 为250mL圆底烧瓶安装磁力搅拌器，热电偶，干冰/丙酮浴，N2氛围，和加料漏斗。添加2，2-二甲基-N-吡啶-3-基-丙酰胺(3.0g，16.8mmol)，乙醚(67mL)，和四亚甲基二胺(4.68g，6.08mL，40.3mmol)。冷却反应至-78℃。利用玻璃注射器经过10分钟慢慢地添加正丁基锂(在己烷中2.5M溶液，16.2mL，40.3mmol)。经过2小时让反应升至-13℃。冷却反应至-78℃。制备碘溶液(I28.5g，33.6mmol，在THF(20mL)中)。经由加料漏斗将碘溶液添加到反应中，然后在-68℃下搅拌2.5小时。添加饱和NH4Cl溶液(40mL)淬灭反应，和转移到分液漏斗中。添加乙酸乙酯(100mL)。萃取和废弃底下水相。用饱和硫代硫酸钠水溶液(100mL)洗涤有机层，然后萃取。用饱和氯化钠水溶液洗涤有机相，和萃取。在Na2SO4上干燥有机相，然后过滤。经由旋转蒸发浓缩该产物。通过用100％DCM至70％乙酸乙酯/30％DCM的梯度洗脱，在硅石(80g)上进行色谱分离，获得标题化合物(1.19g，23％)。MS(ES)m/z 306[M+1]+。
制备例66 [2-(6-氟-4-碘-吡啶-3-基氧基)-乙基]-氨基甲酸叔丁酯 将二异丙基乙胺(0.23g，1.77mmol)添加到由2-(6-氟-4-碘-吡啶-3-基氧基)-乙基胺(0.25g，0.89mmol)和重碳酸二叔丁酯(0.29g，1.33mmol)在5mL的DCM中形成的溶液中。在室温下搅拌混合物一夜。用DCM稀释混合物，用饱和氯化钠水溶液洗涤有机层，在硫酸钠上干燥，和真空浓缩，得到粗油。由柱色谱法(在己烷中30％乙酸乙酯)提纯，获得标题化合物(0.33g，97％)。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ1.41(s，9H)，3.56(t，J＝5.2Hz，2H)，4.10(t，J＝5.2Hz，2H)，5.07(s，1H)，7.34(d，J＝3.6Hz，1H)，7.69(d，J＝1.6Hz，1H)。
通过使用与[2-(6-氟-4-碘-吡啶-3-基氧基)-乙基]-氨基甲酸叔丁酯的程序相类似的程序制备下列中间体 制备例70 1-(6-氯-4-碘吡啶-3-基)乙基氨基甲酸叔丁酯 将1-(6-氯吡啶-3-基)乙基氨基甲酸叔丁酯(3.77g，14.7mmol)溶解在THF(60mL)中。在N2氛围中在-78℃下添加叔丁基锂(1.7M庚烷溶液，25.9mL，44.0mmol)。在-78℃下搅拌反应溶液0.5小时。在氮气氛围中在-78℃下经过30分钟的时间将碘(5.59g，22.0mmol)在THF(44mL)中的溶液滴加进去。将所得溶液在-78℃下搅拌1小时，然后从-78℃到室温搅拌1小时。用水淬灭反应。用乙酸乙酯萃取。用水和饱和氯化钠水溶液洗涤有机层。在MgSO4上干燥。在过滤之后，浓缩和由FCC(0.1％到1％2M NH3甲醇溶液/CH2Cl2)提纯，获得标题化合物(1.34g，24％)，具有98％HPLC纯度。MS(ES)m/z 383[M+1]+。
通过使用与1-(6-氯-4-碘吡啶-3-基)乙基氨基甲酸叔丁酯的程序相类似的程序来制备以下中间体 制备例73 6-氟-4-碘吡啶-3-胺 将6-氟-4-碘吡啶-3-基氨基甲酸叔丁酯(1.47g，4.35mmol)溶解在DCM(20mL)中。添加三氟乙酸(TFA)(20mL)。在氮气氛围中在室温下搅拌2小时。在减压下除去溶剂。在真空中干燥，获得6-氟-4-碘吡啶-3-胺，为TFA盐(1.02g，99％)，具有100％HPLC纯度。MS(ES)m/z 239[M+1]+。
制备例74 6-氟-4-碘-N-(2-(四氢-2H-吡喃-2-基氧基)乙基)吡啶-3-胺 在密封的反应器中，将6-氟-4-碘吡啶-3-胺TFA盐(0.36g，1.50mmol)，2-[(2-溴乙基)氧基]四氢-2H-吡喃(1.38g，6.60mmol)，氢氧化钾(0.19g，3.30mmol)，氟化钾(0.19g，3.30mmol)，和碘化四丁铵(0.11g，0.3mmol)在1，4-二噁烷(1.5mL)中混合。在100℃下加热反应混合物一夜。将反应混合物冷却到室温。用水淬灭。用乙酸乙酯萃取，用水和饱和氯化钠水溶液洗涤有机层。在MgSO4上干燥。在过滤之后，浓缩和由FCC(0.1％到1％2M NH3甲醇溶液/CH2Cl2)提纯，得到标题化合物(0.36g，66％)，具有100％HPLC纯度。MS(ES)m/z 367[M+1]+。
制备例75 2-(6-氟-4-碘吡啶-3-基氨基)乙醇 将6-氟-4-碘-N-(2-(四氢-2H-吡喃-2-基氧基)乙基)吡啶-3-胺(0.20g，0.55mmol)溶解在乙醇(5.5mL)中。添加对甲苯磺酸吡啶鎓盐(0.014g，0.055mmol)。在50℃下加热反应混合物一夜。在减压下除去溶剂。由FCC(0.1％到1％2M NH3甲醇溶液/CH2Cl2)提纯，得到标题化合物(44mg，28％)，具有100％HPLC纯度。MS(ES)m/z 283[M+1]+。
制备例76 6-氟-4-碘-N-(2-甲氧基乙基)吡啶-3-胺 在密封反应器中将6-氟-4-碘吡啶-3-胺TFA盐(0.36g，1.50mmol)，2-氯乙基甲基醚(0.31g，3.30mmol)，氢氧化钾(0.19g，3.30mmol)，氟化钾(0.19g，3.30mmol)和碘化四丁铵(0.11g，0.30mmol)在1，4-二噁烷(1.5mL)中混合。在100℃下加热反应混合物一夜。将反应混合物冷却到室温。用水淬灭。用乙酸乙酯萃取，用水和饱和氯化钠水溶液洗涤有机层。在MgSO4上干燥。在过滤之后，在减压下除去反应溶剂。由FCC(0.1％到1％2M NH3甲醇溶液/CH2Cl2)提纯，得到标题化合物(0.09g，20％)，具有80％HPLC纯度。MS(ES)m/z 279[M+1]+。
制备例77 [2-(6-氟-4-碘-吡啶-3-基氧基)-乙基]甲基-氨基甲酸叔丁酯 将氢化钠(620mg，26mmol)添加到由[2-(6-氟-4-碘-吡啶-3-基氧基)-乙基]-氨基甲酸叔丁酯(0.33g，0.86mmol)在3mL的DMF中所形成的溶液中。在室温下搅拌混合物1小时和添加甲基碘(0.37g，2.59mmol)。在室温下搅拌反应混合物一夜。添加水和用乙酸乙酯萃取。有机层用饱和氯化钠水溶液洗涤。在硫酸钠上干燥混合物。真空浓缩溶液。由柱色谱法(在己烷中20％乙酸乙酯)提纯残留物，获得浅黄色固体形式的标题化合物(0.13g，38％)。1H NMR(400MHz，CD3CN)δ1.45(s，9H)，3.08(s，3H)，3.59(t，J＝5.6Hz，2H)，4.20(t，J＝5.6Hz，2H)，5.07(s，1H)，7.38(d，J＝3.2Hz，1H)，7.61(d，J＝1.2Hz，1H)。
通过使用与[2-(6-氟-4-碘-吡啶-3-基氧基)-乙基]甲基-氨基甲酸叔丁酯的程序相类似的程序来制备以下中间体 制备例80 (S)-1-(6-氟-4-碘吡啶-3-基)乙基(甲基)氨基甲酸叔丁酯由手性HPLC(4.6×150mm Chiralpak

AD-H，5∶953A/C7，0.6ml/min 270nm)分离1-(6-氟-4-碘吡啶-3-基)乙基(甲基)氨基甲酸叔丁酯(3.11g，8.48mmol)，得到第一级分(R)-1-(6-氟-4-碘吡啶-3-基)乙基(甲基)氨基甲酸叔丁酯(1.09g，35％，＞99％ee)和第二级分(S)-1-(6-氟-4-碘吡啶-3-基)乙基(甲基)氨基甲酸丁酯(1.13g，36％，＞99％ee)。MS(ES)m/z383[M+1]+。由震动圆形二色性(VCD)光谱法研究归属两种对映异构体的绝对构型。
通过使用与(S)-1-(6-氟-4-碘吡啶-3-基)乙基(甲基)氨基甲酸叔丁酯的程序相类似的程序来制备以下中间体 制备例83 4-苯并[b]噻吩-7-基-2-氯-吡啶 在烧瓶中，掺混7-溴-苯并[b]噻吩(1.7g，12mmol)，2-氯-4-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-吡啶(1.6g，7mmol)，Pd(dppf)Cl2(285mg，0.3mmol)，2-(二-叔丁基膦基)联苯(63mg，0.2mmol)，碳酸钠(2M，8mL，16mmol)和THF(20mL)。混合物在100℃下加热3小时。用氯仿/IPA(3/1)稀释该混合物。用饱和氯化钠水溶液洗涤该溶液。在硫酸钠上干燥。在真空中浓缩该溶液，得到深色残留物。由柱色谱法(从DCM至在DCM中20％THF)提纯，获得黄色固体形式的标题化合物(1.14mg，66％)。MS(ES)m/z 246[M+1]+。
制备例84 4-苯并[b]噻吩-7-基-2-氟-5-甲基-吡啶 在烧瓶中，掺混2-氟-4-碘-5-甲基-吡啶(355mg，1.5mmol)，2-苯并[b]噻吩-7-基-4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧杂硼杂环戊烷(282mg，1.8mmol)，Pd(dppf)Cl2(61mg，0.07mmol)，2-(二叔丁基膦基)联苯(13mg，0.04mmol)，碳酸钠(2M，1.5mL，3mmol)和THF(10mL)。将混合物在油浴中在100℃下加热3小时。用氯仿/IPA(3/1)稀释该混合物。用饱和氯化钠水溶液洗涤该溶液。在硫酸钠上干燥。在真空中浓缩，得到深色残留物。由柱色谱法(在己烷中20％乙酸乙酯)提纯，获得黄色油形式的标题化合物(300mg，82％)。MS(ES)m/z 244[M+1]+。
通过使用与4-苯并[b]噻吩-7-基-2-氟-5-甲基-吡啶的程序相类似的程序来制备以下中间体 制备例95 1-(4-(苯并[b]噻吩-7-基)吡啶-3-基)乙醇 在250-mL圆底烧瓶中将4-苯并[b]噻吩-7-基-吡啶-3-甲醛(1.5g，6.27mmol)在THF(50mL)中)形成的溶液冷却到0℃，然后逐渐将甲基溴化镁(2.38g，6.90mmol，2.30mL)添加到该溶液中。将混合物从0℃到室温搅拌2小时。通过与1N HCl(200mL)混合来水解该混合物。用氢氧化铵调节pH至11。萃取到氯仿/IPA(3/1，200mL)中。用水和饱和氯化钠水溶液洗涤有机相。在硫酸钠上干燥有机相，然后真空浓缩。由FCC(从己烷到在己烷中10％乙酸乙酯，然后在DCM中20％THF)提纯，得到黄色油形式的标题化合物(1.00g，62％)。MS(ES)m/z 256[M+1]+。
制备例96 3-(1-叠氮基乙基)-4-(苯并[b]噻吩-7-基)吡啶 通过使用与用于以上5-(1-叠氮基-乙基)-2-氟-吡啶的程序类似的程序，从1-(4-(苯并[b]噻吩-7-基)吡啶-3-基)乙醇制备棕色油形式的标题中间体(0.66g，93％)。MS(ES)m/z 280[M+1]+。
制备例97 2-(4-(苯并[b]噻吩-7-基)-6-氟吡啶-3-基)-2-甲基丙-1-胺 将四氢硼酸钠(296mg，7.83mmol)和四氯化锆(684mg，2.9mmol)溶解在THF(1mL)中形成奶状的溶液。在氮气氛围中在室温下将2-(4-苯并[b]噻吩-7-基-6-氟-吡啶-3-基)-2-甲基-丙腈(580mg，1.96mmol)在THF(20mL)中的溶液添加进去。在室温下搅拌混合物一夜。将混合物倾倒在冰-水溶液中来淬灭反应。将混合物萃取到氯仿/IPA(3/1)中。通过添加稀氢氧化铵将水相碱化，然后过滤。用氯仿萃取该滤液，干燥所合并的有机相，浓缩得到浅黄色固体(500mg，84％)。MS(ES)m/z 301[M+1]+。
制备例98 1-(4-(苯并[b]噻吩-7-基)吡啶-3-基)乙胺 将拉内镍(1.38g，23.5mmol)添加到在放置于冰浴中的50-mL圆底烧瓶之内的由3-(1-叠氮基-乙基)-4-苯并[b]噻吩-7-基-吡啶(0.66g，2.35mmol)在乙醇(10mL)，甲酸(1.08g，23.54mmol)和肼(754.4mg，23.54mmol)中所形成的溶液中。在室温下搅拌混合物1小时，然后过滤出拉内镍。用稀氢氧化铵稀释滤液。将产物萃取到氯仿中。用水洗涤有机相，在硫酸钠上干燥，然后浓缩得到棕色油形式的标题化合物(0.6g，100％)。MS(ES)m/z 255[M+1]+。
通过使用与对于1-(4-(苯并[b]噻吩-7-基)吡啶-3-基)乙胺所述的程序相类似的程序来制备以下中间体 制备例101 1-(4-(苯并[b]噻吩-7-基)吡啶-3-基)乙基氨基甲酸叔丁酯 将三乙胺(477.4mg，4.72mmol)添加到由1-(4-苯并[b]噻吩-7-基-吡啶-3-基)-乙基胺(0.6g，2.36mmol)和重碳酸二叔丁酯(1.03g，4.72mmol)在1，4-二噁烷(10mL)和水(5mL)中所形成的溶液中。在室温下搅拌混合物1小时。用氯仿(100mL)稀释混合物，用饱和氯化钠水溶液洗涤，在硫酸钠上干燥，然后浓缩。由FCC(在己烷中20％乙酸乙酯到在DCM中10％甲醇)提纯残留物，得到黄色固体形式的标题化合物(0.84g，67％)。MS(ES)m/z 355[M+1]+。
通过使用与对于1-(4-(苯并[b]噻吩-7-基)吡啶-3-基)乙基氨基甲酸叔丁酯所述的程序相类似的程序来制备以下中间体 制备例105 1-(6-氟-4-碘吡啶-3-基)乙基(2-氟乙基)氨基甲酸叔丁酯 在0℃下将氢化钠(58.9mg，2.46mmol)添加到[1-(6-氟-4-碘-吡啶-3-基)-乙基]-氨基甲酸叔丁酯(300mg，819μmol)的溶液中。将混合物在0℃到室温下搅拌1小时。添加1-氟-2-碘-乙烷(570mg，3.28mmol)。在室温下搅拌混合物4小时，然后在50℃下搅拌一夜。用氯仿/IPA(3/1，100mL)稀释混合物，然后用水/饱和氯化钠水溶液洗涤。在硫酸钠上干燥有机相，然后真空浓缩，得到粗产物。由FCC(在己烷中20％乙酸乙酯)提纯粗产物，得到140mg的标题化合物(41％)。MS(ES)m/z 413[M+1]+。
制备例106 4-苯并[b]噻吩-7-基-3-甲氧基甲氧基-吡啶 溶液A3-甲氧基甲氧基-吡啶(2.5g，18mmol)在乙醚(90mL)中的处于-70℃下的溶液通过经过10分钟滴加叔丁基锂(在戊烷中1.7M，10mL，18mmol)来进行处理。将混合物在-70℃下搅拌40分钟，然后将硼酸三异丙酯(5mL，22mmol)在THF(10mL)中的溶液滴加进去。将混合物在-70℃下搅拌一小时，然后移走冰浴，让混合物缓慢地升至室温。
溶液B7-溴-苯并[b]噻吩(3.8g，18mmol)，2-(二叔丁基膦基)联苯(268mg，0.90mmol)，Pd(dppf)Cl2(732mg，0.90mmol)在1，4-二噁烷(30mL)中的溶液用2M碳酸钠水溶液(72mL，36mmol)处理。一旦溶液A达到室温，加热溶液至80℃。
通过经过10分钟滴加溶液A来处理溶液B。将合并的溶液加热至85℃保持5小时。冷却混合物至室温，然后用乙酸乙酯和水稀释。用水和饱和氯化钠水溶液洗涤有机相，在硫酸钠上干燥，过滤，和真空浓缩。通过用DCM至乙酸乙酯的梯度洗脱，在120g硅胶上进行柱色谱分离来提纯残留物，得到含有一些起始3-甲氧基甲氧基-吡啶的标题化合物(3.8g)。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.68(s，1H)，8.42(d，J＝4Hz，1H)，7.88(d，J＝8Hz，1H)，7.33-7.50(m，5H)，5.12(s，2H)，3.36(s，3H)。
制备例107 2-氯-4-[7-(2-氯-吡啶-4-基)-苯并[b]噻吩-2-基]-嘧啶 在500mL圆底烧瓶中，在氮气氛中将4-苯并[b]噻吩-7-基-2-氯-吡啶(13g，53.1mmol)和硼酸三异丙酯(20g，106mmol)在THF(150mL)中的溶液冷却至-70℃。经过30分钟的时间向冷却了的溶液中逐渐添加二异丙基胺化锂(在THF中2M，53mL，106mmol)。将混合物在冷却浴中连续搅拌另外1小时。经过30分钟的时间，将混合物逐渐地转移到2，4-二氯-嘧啶(12g，106mmol)，Pd(dppf)Cl2(2.2g，53mmol)和碳酸钠(35mL，3M，106mmol)在THF(150mL)中的回流溶液中。回流进行另外1小时。冷却混合物至室温，然后用500mL的氯仿/IPA(3/1)和200mL的水稀释。由过滤收集所得固体，贮存该氯仿/IPA/水混合物。用DCM洗涤固体，然后在真空下干燥。分离氯仿/IPA/水混合物的各层。用水和饱和氯化钠水溶液洗涤有机相，在硫酸钠上干燥和真空浓缩，得到棕色残留物。由FCC(在DCM中10％甲醇)提纯残留物，获得附加产物。合并这两个部分，得到标题化合物(13g，68％)。MS(ES)m/z 358[M+1]+。
通过使用合适的起始原料，基本上根据2-氯-4-[7-(2-氯-吡啶-4-基)-苯并[b]噻吩-2-基]-嘧啶的制备方法，来制备下列中间体 制备例126 4-[2-(2-氯-5-氟-嘧啶-4-基)-苯并[b]噻吩-7-基]-吡啶-3-醇 2-氯-5-氟-4-[7-(3-甲氧基甲氧基-吡啶-4-基)-苯并[b]噻吩-2-基]-嘧啶(4g，10mmol)在THF(10mL)中的溶液用5N HCl(3mL)处理。在室温下搅拌混合物6小时。真空浓缩反应混合物，然后用饱和的碳酸氢钠水溶液和DCM稀释。分离各相，然后过滤各相。用DCM洗涤来自有机相的固体，得到黄褐色固体形式的标题化合物(300mg)。用水洗涤来自水层的固体，然后干燥得到黄褐色固体形式的标题化合物(300mg)。合并固体物，得到黄褐色固体形式的标题化合物(600mg，17％)。MS(ES)m/z358[M+1]+。
通过使用合适的起始原料，使用与4-[2-(2-氯-5-氟-嘧啶-4-基)-苯并[b]噻吩-7-基]-吡啶-3-醇的程序相类似的程序来制备下列中间体 制备例128 2-(2-(5-(羟甲基)-1H-1，2，3-三唑-1-基)乙基)异吲哚啉-1，3-二酮 将2-(2-叠氮基乙基)异吲哚啉-1，3-二酮(12g，55.5mmol)和2-丙炔-1-醇(3.88mL，66.6mmol)在甲苯(50mL)中的混合物在密封反应器中于90℃加热3天。冷却到室温和收集固体。由柱色谱法(从DCM到在DCM中2％甲醇)提纯，得到标题化合物(第一级分)，为白色固体(4.7g，31％)。MS(EI)m/z 273[M+1]+。
制备例129 2-(2-(4-(碘甲基)-1H-1，2，3-三唑-1-基)乙基)异吲哚啉-1，3-二酮 将三苯基膦(0.29g，1.10mmol)和碘(0.28g，1.10mmol)在DCM(4mL)中的混合物搅拌10分钟。添加1H-咪唑(0.12g，1.84mmol)和搅拌10分钟。添加2-(2-(4-(羟甲基)-1H-1，2，3-三唑-1-基)乙基)异吲哚啉-1，3-二酮(0.2g，0.73mmol)和在室温下搅拌一夜。用DCM稀释以及用水和饱和氯化钠水溶液洗涤。在硫酸钠上干燥。真空浓缩溶液。由柱色谱法(从DCM到在DCM中20％乙酸乙酯)提纯，得到标题化合物，为黄色固体(0.22g，78％)。MS(EI)m/z 383[M+1]+。
制备例130 2-(2-(4-甲基-1H-1，2，3-三唑-1-基)乙基)异吲哚啉-1，3-二酮 在氢气球的气氛下将2-(2-(4-(碘甲基)-1H-1，2，3-三唑-1-基)乙基)异吲哚啉-1，3-二酮(1g，2.62mmol)和0.2g的10％钯/碳在乙醇(10mL)中的混合物搅拌一夜。过滤除去固体和进行浓缩。由柱色谱法(从DCM到在DCM中20％乙酸乙酯)提纯，得到标题化合物，为黄色固体(0.5g，74％)。MS(EI)m/z 257[M+1]+。
制备例131 2-(2-[1，2，3]三唑-1-基-乙基)-异吲哚-1，3-二酮 将1H-1，2，3-三唑(250g，3.51mol)，N-(2-溴乙基)邻苯二甲酰亚胺(942g，3.52mol)和1500mL的DMF添加到装有机械搅拌器、氮气导入管和测温探头的5升圆底烧瓶中；冷却混合物到15℃。搅拌混合物直到全部固体几乎溶解为止，然后在冰-水浴中冷却。经过10分钟将碳酸铯(1145g；3.51mol)分几份添加进去。反应混合物放热升温到21℃。搅拌混合物，恢复到室温保持一夜。将反应混合物倾倒在含有8L冰水的12升烧瓶中。将悬浮液搅拌30分钟，然后过滤和用3升水漂洗固体。空气干燥2小时。从7L的绝对乙醇中重结晶区域异构体的混合物。过滤分离固体，空气干燥。再次从16L的绝对乙醇中重结晶。再次过滤分离出固体，用新鲜的乙醇(1000mL)漂洗。在40℃下真空干燥固体，得到白色固体形式的标题化合物292.7g(34％)。MS(EI)m/z 243[M+1]+。
制备例132 2-[1，2，3]三唑-1-基-乙基胺 将2-(2-[1，2，3]三唑-1-基-乙基)-异吲哚-1，3-二酮(106g；437.59mmol)溶解在含2升绝对乙醇的5升圆底烧瓶内。在氮气氛围中将该搅拌混合物加热到70℃；在这一温度下经过10分钟滴加肼一水合物(23mL；463.76mmol)。混合物变均匀的且变成黄色。在这一温度下约30分钟之后，在反应中开始形成固体，随着时间的推移颜色逐渐变得不太黄。在7小时之后移走加热源，经过1小时加热到室温。在硅藻土上过滤，然后用1000mL的乙醇漂洗。蒸发成半固体。溶于2升的CH2Cl2中，在硅藻土上过滤，和再次进行蒸发。用甲苯(1500mL)稀释残留物，在硅藻土上过滤而除去不溶性的褐色固体。蒸发和在真空下放置一夜。将油溶解在100mL的CH2Cl2中，然后经由硅藻土的垫片再次过滤。蒸发得到43.9g(90％)的标题化合物，为浑浊的油。MS(ES)m/z 112[M+1]+。
使用与对于2-[1，2，3]三唑-1-基-乙基胺所描述的那些程序相类似的程序制备下列中间体 通过使用与用于以下{5-氟-4-[7-(2-氟-5-甲基-吡啶-4-基)-苯并[b]噻吩-2-基]-嘧啶-2-基}-(2-[1，2，3]三唑-1-基-乙基)-胺的程序类似的程序来制备以下中间体 制备例143 {5-氟-4-[7-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-苯并[b]噻吩-2-基]-嘧啶-2-基}-(2-[1，2，3]三唑-1-基-乙基)-胺 将[4-(7-溴-苯并[b]噻吩-2-基)-5-氟-嘧啶-2-基]-(2-[1，2，3]三唑-1-基-乙基)-胺(1.5g，3.45mmol)，双(频哪醇)二硼(1.05g，4.14mmol)，乙酸钾(1.02g，10.36mmol)，和Pd(dppf)Cl2(280mg，0.35mmol)在DMSO(30mL)中掺混。将所得混合物脱气三次，然后将它加热至80℃保持一夜。冷却混合物到室温并将其倾倒在水中。过滤得到湿的固体，溶于氯仿/IPA(3∶1，v/v)，用饱和氯化钠水溶液洗涤，然后在硫酸钠上干燥。真空浓缩溶液。由色谱法(己烷到乙酸乙酯)提纯，获得标题化合物(1.3g，81％)。
通过使用基本上与用于以上中间体的那些程序类似的程序来制备下面中间体 通过使用与以下N-(2-(1H-1，2，3-三唑-1-基)乙基)-4-(7-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)苯并[b]噻吩-2-基)-5-氟嘧啶-2-胺所用的程序类似的程序来制备以下中间体 实施例1 N-(2-(1H-1，2，3-三唑-1-基)乙基)-5-氟-4-(7-(2-氟-5-甲基吡啶-4-基)苯并[b]噻吩-2-基)嘧啶-2-胺
在压力容器中将2-氯-5-氟-4-[7-(2-氟-5-甲基-吡啶-4-基)-苯并[b]噻吩-2-基]-嘧啶(200mg，0.54mmol)和2-[1，2，3]三唑-1-基-乙基胺(120mg，21.1mmol)掺混在正丁醇(2mL)[备选二噁烷，二噁烷-NMP(N-甲基吡咯烷酮)，NMP单独作为溶剂]中。将混合物在油浴中在120-150℃下加热一夜(或在微波反应器中加热10-60分钟)。用氯仿/IPA(3/1)稀释该混合物。用饱和氯化钠水溶液洗涤有机相，在硫酸钠上干燥，和真空浓缩该溶液，得到深色残留物。由柱色谱法(从DCM到在DCM中10％甲醇)提纯，获得黄色固体形式的标题化合物(140mg，59％)。MS(ES)m/z 450[M+1]+。
用与以上实施例的程序类似的程序来制备下列实施例

实施例13 N-(2-(1H-1，2，3-三唑-1-基)乙基)-5-氟-4-(7-(2-氟-5-((甲基氨基)甲基)吡啶-4-基)苯并[b]噻吩-2-基)嘧啶-2-胺
掺混(6-氟-4-{2-[5-氟-2-(2-[1，2，3]三唑-1-基-乙基氨基)-嘧啶-4-基]-苯并噻吩-7-基}-吡啶-3-基甲基)-甲基-氨基甲酸叔丁酯(0.30g，0.51mmol)以及干燥TFA(2.0mL)和干燥DCM(2.2mL)。在室温下搅拌1小时。蒸发掉溶剂。用DCM稀释所得残留物，然后用饱和碳酸氢钠溶液、水和饱和氯化钠水溶液洗涤。分离有机层，然后在硫酸镁上干燥。过滤和真空浓缩该溶液，得到粗产物。由柱色谱法[在甲醇/DCM中0.1％到2％2M氨溶液]提纯，获得标题化合物(0.20g，83％)。MS(ES)m/z 479[M+1]+。
实施例14 N-(2-(1H-1，2，3-三唑-1-基)乙基)-5-氟-4-(7-(5-氟-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)苯并[b]噻吩-2-基)嘧啶-2-胺
将{5-氟-4-[7-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-苯并[b]噻吩-2-基]-嘧啶-2-基}-(2-[1，2，3]三唑-1-基-乙基)-胺(0.105g，0.23mmol)，3-氟-4-溴-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶(51mg，0.30mmol)，氢氧化钡八水合物(0.21g，0.68mmol，或者碳酸钠，碳酸钾，碳酸氢钠)，Pd(dppf)Cl2(20mg，0.025mmol)在2mL的由DMF(或者二噁烷，THF，DMSO，和CH3CN)和水(4/1，v/v)组成的混合溶剂中进行掺混。加热反应混合物到80℃保持2.5小时。(或微波加热10-60分钟)。冷却至室温。用氯仿/IPA(3∶1，v/v)50mL稀释它。用水和饱和氯化钠水溶液洗涤，然后在硫酸镁上干燥。除去有机溶剂得到粗产物。由柱色谱法(己烷到乙酸乙酯)提纯，获得标题化合物(0.05g，47％)。MS(ES)m/z 475[M+1]+。
实施例15 N-(2-(1H-1，2，3-三唑-1-基)乙基)-4-(7-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)苯并[b]噻吩-2-基)-5-氟嘧啶-2-胺
将N-(2-(1H-1，2，3-三唑-1-基)乙基)-5-氟-4-(7-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯并[b]噻吩-2-基)嘧啶-2-胺(0.28g，0.6mmol)，4-溴-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶(100mg，0.51mmol)，氢氧化钡八水合物(0.48g，1.52mmol)，Pd(dppf)Cl2(40mg，0.05mmol)掺混在4mL的由DMF和水(4/1，v/v)组成的混合溶剂中。加热反应混合物到80℃保持45分钟。冷却至室温。用氯仿/IPA(3∶1，v/v)50mL稀释。用水和饱和氯化钠水溶液洗涤，然后在硫酸镁上干燥。除去有机溶剂得到粗产物。由柱色谱法(己烷到乙酸乙酯)提纯，获得标题化合物(0.17g，75％)。MS(ES)m/z 457[M+1]+。
用与以上实施例的程序类似的程序来制备下列实施例




实施例36 N-(2-(1H-1，2，3-三唑-1-基)乙基)-4-(7-(2-氯-5-(1-(甲基氨基)乙基)吡啶-4-基)苯并[b]噻吩-2-基)嘧啶-2-胺
将1-(4-(2-(2-(2-(1H-1，2，3-三唑-1-基)乙基氨基)嘧啶-4-基)苯并[b]噻吩-7-基)-6-氯吡啶-3-基)乙基(甲基)氨基甲酸叔丁酯(300mg，0.5mmol)和干燥TFA(2.0mL)掺混在干燥DCM(6mL)中。在室温下搅拌溶液1小时。用DCM稀释所得残留物，然后用饱和碳酸氢钠溶液、水和饱和氯化钠水溶液洗涤。分离有机层，然后在硫酸镁上干燥。过滤和真空浓缩，得到残留物。由柱色谱法[在甲醇/DCM中0.1％到2％2M氨溶液]提纯，获得标题化合物(175mg，70％)。MS(ES)m/z 491[M+1]+。
通过使用对于N-(2-(1H-1，2，3-三唑-1-基)乙基)-4-(7-(2-氯-5-(1-(甲基氨基)乙基)吡啶-4-基)苯并[b]噻吩-2-基)嘧啶-2-胺所述的程序相类似的程序来制备下列实施例
实施例40 1-(4-(2-(2-(2-(1H-1，2，3-三唑-1-基)乙基氨基)-5-氟嘧啶-4-基)苯并[b]噻吩-7-基)-6-氟吡啶-3-基)乙醇
将5mL的1N HCl添加到由5-氟-4-{7-[2-氟-5-(1-甲氧基甲氧基-乙基)-吡啶-4-基]-苯并[b]噻吩-2-基}-嘧啶-2-基)-(2-[1，2，3]三唑-1-基-乙基(350mg，0.67mmol)在甲醇(10mL)中形成的溶液中。搅拌混合物一夜。用碳酸钠(2N)稀释反应混合物。将产物萃取到氯仿中。在硫酸钠上干燥有机相。在真空中浓缩溶液，得到粗产物。由柱色谱分离法(在DCM中10％甲醇)提纯粗产物，获得黄色固体形式的标题化合物(150mg，47％)。MS(ES)m/z 480[M+1]+，502[M+Na]+。
实施例41 N-(2-(1H-1，2，3-三唑-1-基)乙基)-4-(7-(5-(1-氨基乙基)-2-氟吡啶-4-基)苯并[b]噻吩-2-基)-5-氟嘧啶-2-胺
在氮气氛围中将碲(1.27g，10mmol)和钠四氢硼酸物(0.9g，2.4mmol)掺混在乙醇(20mL)中。加热混合物到回流状态，直到它变成澄明的红色溶液为止。将5mL的该溶液添加到由(4-{7-[5-(1-叠氮基-乙基)-2-氟-吡啶-4-基]-苯并[b]噻吩-2-基}-5-氟-嘧啶-2-基)-(2-[1，2，3]三唑-1-基-乙基)-胺(400mg，0.8mmol)在乙醇(10mL)中所形成的溶液中。在室温下搅拌混合物20分钟。滤出黑色固体。用甲醇和DCM洗涤固体。蒸发该合并的母液得到粗产物。用FCC(氯仿/甲醇/氢氧化铵，7/3/0.05)提纯粗产物，得到黄色固体形式的标题化合物(200mg，52％)。MS(ES)m/z 479[M+1]+。
实施例42 2-(4-(2-(2-(2-(1H-1，2，3-三唑-1-基)乙基氨基)-5-氟嘧啶-4-基)苯并[b]噻吩-7-基)-6-氟吡啶-3-基氧基)乙醇
将对甲苯磺酸吡啶鎓盐(8.23mg，0.03mmol)添加到由[5-氟-4-(7-{2-氟-5-[2-(四氢吡喃-2-基氧基)-乙氧基]-吡啶-4-基}-苯并[b]噻吩-2-基)-嘧啶-2-基]-(2-[1，2，3]三唑-1-基-乙基)-胺(190mg，0.32mmol)在乙醇(4mL)中所形成的溶液中。在55℃下搅拌混合物一夜。冷却溶液。在真空中浓缩溶液，得到黄色油。由柱色谱法(从二氯甲烷至在二氯甲烷中的10％甲醇)提纯，获得浅黄色固体形式的标题化合物(0.14g，88％)。MS(ES)m/z 496[M+1]+。
通过使用与对于以上实施例所述的程序相类似的程序，从(5-氟-4-{7-[2-氟-5-(1-甲氧基甲氧基-乙基)-吡啶-4-基]-苯并[b]噻吩-2-基}-嘧啶-2-基)-(2-[1，2，3]三唑-1-基-乙基)-胺制备下列实施例
实施例44 N-(2-(1H-1，2，3-三唑-1-基)乙基)-4-(7-(3-(氨基甲基)吡啶-4-基)苯并[b]噻吩-2-基)-5-氟嘧啶-2-胺
将3-(Boc-氨基甲基)-吡啶-4-硼酸(100mg，0.4mmol)，[4-(7-溴-苯并[b]噻吩-2-基)-5-氟-嘧啶-2-基]-(2-[1，2，3]三唑-1-基-乙基)-胺(100mg，0.24mmol)，Pd(dppf)Cl2(9mg，0.01mmol)，2-(二-叔丁基膦基)联苯(3mg，0.01mmol)，和碳酸钠(2M，0.3mL，0.6mmol)掺混在10mL二噁烷中。将混合物在油浴中在100℃下加热31小时。用氯仿/IPA(3/1)稀释该混合物。用饱和氯化钠水溶液洗涤该溶液。在硫酸钠上干燥。在真空中浓缩该溶液，得到深色残留物。由柱色谱法(在己烷中20％乙酸乙酯)提纯，获得黄色固体形式的Boc保护产物。溶于TFA(在DCM中30％)中，然后搅拌它30分钟。蒸发掉TFA。将该TFA盐溶解在5mL的氨/甲醇溶液(7N)中。由FCC(从DCM至氯仿/甲醇/30％氢氧化铵，7/3/0.05)提纯最终产物，获得黄色固体形式的标题化合物(40mg，39％)。MS(ES)m/z 467[M+1]+。
用与以上实施例的程序类似的程序来制备下列实施例

实施例51 (S)-N-(2-(1H-1，2，3-三唑-1-基)乙基)-4-(7-(2-氟-5-(1-(甲基氨基)乙基)吡啶-4-基)苯并[b]噻吩-2-基)嘧啶-2-胺
将{5-氟-4-[7-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-苯并[b]噻吩-2-基]-嘧啶-2-基}-(2-[1，2，3]三唑-1-基-乙基)-胺(0.32g，0.71mmol)和(S)-1-(6-氟-4-碘吡啶-3-基)乙基(甲基)氨基甲酸叔丁酯(0.25g，0.65mmol)掺混在乙腈(3mL)和水(1.5mL)中。用氮气鼓泡吹扫10分钟，然后添加Pd(dppf)Cl2(0.039g，0.047mmol)。在微波反应器中将混合物在120℃下加热10分钟，冷却到室温和在氮气流中除去溶剂。使用梯度1％THF/乙酸乙酯至10％THF/乙酸乙酯；然后使用另一个梯度1％(在DCM中10％甲醇，含有0.5M氨)/DCM至20％(在DCM中10％甲醇，含有0.5M氨)/DCM，在硅胶中对残留物进行色谱分离，得到Boc保护的中间体(0.14g，37％)。在室温下用TFA(2mL)处理已溶于DCM(2mL)中的Boc保护中间体2小时。在真空中蒸发TFA，然后将残留物分配在DCM和饱和碳酸氢钠水溶液之间。用水、饱和盐水洗涤有机相，在硫酸镁上干燥，过滤和在真空下蒸发溶剂。用反相色谱法提纯，得到标题化合物(0.1g)MS(ES)m/z 475[M+1]+。
实施例52 1-((4-(2-(2-(2-(1H-1，2，3-三唑-1-基)乙基氨基)-5-氟嘧啶-4-基)苯并[b]噻吩-7-基)-6-氟吡啶-3-基)甲基)哌啶-4-醇
将5-(溴甲基)-2-氟-4-碘吡啶(0.2g，0.63mmol)，哌啶-4-醇(0.192mg，1.9mmol)，和二异丙基乙基胺(0.22mL，1.27mmol)掺混在乙腈(3.0mL)中。在80℃下加热反应混合物2小时，然后冷却至室温。除去该有机溶剂得到粗1-((6-氟-4-碘吡啶-3-基)甲基)哌啶-4-醇。将粗1-((6-氟-4-碘吡啶-3-基)甲基)哌啶-4-醇(0.63mmol)，N-(2-(1H-1，2，3-三唑-1-基)乙基)-5-氟-4-(7-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯并[b]噻吩-2-基)嘧啶-2-胺(0.15g，0.32mmol，碳酸钠(0.102g，0.96mmol)，2-(二叔丁基膦基)联苯(0.006g，0.06mmol)和Pd(dppf)Cl2(0.026g，0.1mmol)掺混在THF(3mL)和水(1mL)中。将混合物在微波反应器中在120℃下加热10分钟。将粗的反应混合物倾倒在强阳离子交换(SCX)(10g)柱上。用2N氨/甲醇溶液(40mL)洗脱所需产物，然后浓缩。由反相色谱分离法(28％等强度，在80ml/min流速下8分钟，在30×75mm，5mm，C18ODBMS XBridgeTM柱上，溶剂A有0.01M碳酸氢铵的水，溶剂B乙腈)提纯，获得标题化合物(91mg，52％)。MS(ES)m/z 549[M+1]+。
通过使用与用于1-((4-(2-(2-(2-(1H-1，2，3-三唑-1-基)乙基氨基)-5-氟嘧啶-4-基)苯并[b]噻吩-7-基)-6-氟吡啶-3-基)甲基)哌啶-4-醇的程序相类似的程序来制备下列实施例


实施例63 N-(2-(1H-1，2，3-三唑-1-基)乙基)-5-氟-4-(7-(2-氟-5-((3-(甲基氨基)吡咯烷-1-基)甲基)吡啶-4-基)苯并[b]噻吩-2-基)嘧啶-2-胺
将5-(溴甲基)-2-氟-4-碘吡啶(0.2g，0.63mmol)，3-(N-叔丁氧基羰基-N-甲基胺)吡咯烷(0.381mg，1.9mmol)，和二异丙基-乙胺(0.22mL，1.27mmol)在乙腈(3.0mL)中掺混。反应混合物在80℃下加热2小时，然后冷却到室温。除去该有机溶剂，得到粗1-((6-氟-4-碘吡啶-3-基)甲基)吡咯烷-3-基(甲基)氨基甲酸叔丁酯。将粗1-((6-氟-4-碘吡啶-3-基)甲基)吡咯烷-3-基(甲基)氨基甲酸叔丁酯(0.63mmol)，N-(2-(1H-1，2，3-三唑-1-基)乙基)-5-氟-4-(7-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯并[b]噻吩-2-基)嘧啶-2-胺(0.15g，0.32mmol)，碳酸钠(0.102g，0.96mmol)，2-(二叔丁基膦基)联苯(0.006g，0.06mmol)和Pd(dppf)Cl2(0.026g，0.1mmol)掺混在THF(3mL)和水(1mL)中。将混合物在微波反应器中在120℃下加热10分钟。将粗的反应混合物倾倒在强阳离子交换(SCX)(10g)柱上。用2N氨/甲醇溶液(40mL)洗脱所需产物，然后浓缩。由反相色谱分离法(56％等强度，在80ml/min流速下8分钟，在30×75mm，5mm，C18ODBMS XBridgeTM柱上，溶剂A有0.01M碳酸氢铵的水，溶剂B乙腈)提纯，获得Boc保护产物。
将1-((4-(2-(2-(2-(1H-1，2，3-三唑-1-基)乙基氨基)-5-氟嘧啶-4-基)苯并[b]噻吩-7-基)-6-氟吡啶-3-基)甲基)吡咯烷-3-基(甲基)氨基甲酸叔丁酯(118mg，0.18mmol)稀释在DCM(3mL)中，然后用在二噁烷(0.45mL，1.8mmol)中的4M盐酸处理。混合物在35℃下加热2小时。除去有机溶剂得到粗的去保护产物。稀释在DCM(3mL)和甲醇中。将混合物倾倒在强阳离子交换(SCX)(10g)柱上。用2N氨/甲醇溶液(40mL)洗脱所需产物，然后浓缩。通过冻干从1∶1乙腈/水干燥浓缩物质，获得标题化合物(88mg，46％)。MS(ES)m/z 548[M+1]+。
实施例64 N-(2-(1H-1，2，3-三唑-1-基)乙基)-4-(7-(5-(1-(环丙基氨基)乙基)-2-氟吡啶-4-基)苯并[b]噻吩-2-基)-5-氟嘧啶-2-胺
在-78℃下慢慢地将甲烷磺酰氯(0.04mL，0.55mmol)添加到由新合成的1-(4-(2-(2-(2-(1H-1，2，3-三唑-1-基)乙基氨基)-5-氟嘧啶-4-基)苯并[b]噻吩-7-基)-6-氟吡啶-3-基)乙醇(240mg，0.50mmol)和三乙胺(0.14mL，1.0mmol)在二氯甲烷(5mL)中所形成的溶液中。在同一温度下搅拌混合物另外60分钟后，添加环丙基胺(0.040mL，0.55mmol)，然后在室温下保持一夜。加热它到45℃保持5小时，冷却到室温，然后除去溶剂。由柱色谱法(在DCM中10％甲醇)提纯，获得标题化合物(42mg，17％)。MS(ES)m/z 519[M+1]+。
通过使用合适的起始原料，采用与用于N-(2-(1H-1，2，3-三唑-1-基)乙基)-4-(7-(5-(1-(环丙基氨基)乙基)-2-氟吡啶-4-基)苯并[b]噻吩-2-基)-5-氟嘧啶-2-胺的程序相类似的程序来制备下列实施例
通过使用对于以上N-(2-(1H-1，2，3-三唑-1-基)乙基)-4-(7-(2-氯-5-(1-(甲基氨基)乙基)吡啶-4-基)苯并[b]噻吩-2-基)嘧啶-2-胺所述的程序相类似的程序来制备下列实施例

实施例70 (R)-1-(4-(2-(2-(2-(1H-1，2，3-三唑-1-基)乙基氨基)-5-氟嘧啶-4-基)苯并[b]噻吩-7-基)-6-氟吡啶-3-基)乙醇
由手性色谱法分离180mg的外消旋1-(4-(2-(2-(2-(1H-1，2，3-三唑-1-基)乙基氨基)-5-氟嘧啶-4-基)苯并[b]噻吩-7-基)-6-氟吡啶-3-基)乙醇，得到标题化合物44mg(24％)。MS(ES)m/z 480[M+1]+。手性OJ-H柱20％甲醇，在CO2中0.2％异丙胺，流动速率5mL/min，在225nm下检测；或Column Chiralpak

AS-H100％MeOH/0.02％DMEA(二甲基乙基胺)\CO2，5mL/min，225nm；或Column Chiralpak

AD-H15∶853A/C7w/0.2％DMEA，0.6mL/min 225nm。
实施例71 (R)-N-(2-(1H-1，2，3-三唑-1-基)乙基)-4-(7-(5-(1-氨基乙基)-2-氟吡啶-4-基)苯并[b]噻吩-2-基)-5-氟嘧啶-2-胺
使用0.2％DMEA甲醇溶液，流速1ml/min，用Column Chiralpak

AD-H分离出190mg的外消旋N-(2-(1H-1，2，3-三唑-1-基)乙基)-4-(7-(5-(1-氨基乙基)-2-氟吡啶-4-基)苯并[b]噻吩-2-基)-5-氟嘧啶-2-胺。该(R)对映异构体在5.22分钟洗脱出来，得到标题化合物(0.4mg，21％)。MS(ES)m/z479[M+1]+。
通过使用与用于(R)-1-(4-(2-(2-(2-(1H-1，2，3-三唑-1-基)乙基氨基)-5-氟嘧啶-4-基)苯并[b]噻吩-7-基)-6-氟吡啶-3-基)乙醇或(R)-N-(2-(1H-1，2，3-三唑-1-基)乙基)-4-(7-(5-(1-氨基乙基)-2-氟吡啶-4-基)苯并[b]噻吩-2-基)-5-氟嘧啶-2-胺的色谱分离法相类似的色谱法，从它们的外消旋物分离下列实施例


·在上表中一些对映异构体的绝对构型没有测定。例如，对映异构体实施例76，77，79，和80是用停留时间，即离柱(off column)的第一级分或第二级分，来说明。
实施例81 (R)-N-(2-(1H-1，2，3-三唑-1-基)乙基)-4-(7-(5-(1-氨基乙基)-2-氟吡啶-4-基)苯并[b]噻吩-2-基)嘧啶-2-胺
将NH2NH2-HCOOH(预先制备的，1mL)添加到由(R)-N-(2-(1H-1，2，3-三唑-1-基)乙基)-4-(7-(5-(1-叠氮基乙基)-2-氟吡啶-4-基)苯并[b]噻吩-2-基)嘧啶-2-胺(250mg，513.84μmol)在乙醇(10mL)中所形成的溶液中。冷却混合物到0℃和添加拉内镍(0.5g，8.52mmol，在包装时已用水润湿)。将溶液在室温下搅拌另外1.5小时，过滤出拉内镍，用甲醇洗涤。用氯仿/IPA(3/1)稀释滤液，用饱和碳酸钠水溶液洗涤。在硫酸钠上干燥有机相，然后真空浓缩，得到棕色焦油。通过FCC(在DCM中10％甲醇)提纯固体，得到标题化合物，为淡棕色固体(200mg，85％)。MS(ES)m/z 461[M+1]+。
实施例82 (R)-N-(2-(1H-1，2，3-三唑-1-基)乙基)-4-(7-(5-(1-(二甲基氨基)乙基)-2-氟吡啶-4-基)苯并[b]噻吩-2-基)-5-氟嘧啶-2-胺
将(R)-N-(2-(1H-1，2，3-三唑-1-基)乙基)-4-(7-(5-(1-氨基乙基)-2-氟吡啶-4-基)苯并[b]噻吩-2-基)-5-氟嘧啶-2-胺(120mg，251μmol)，低聚甲醛(1.45g，4.11mmol)，和乙酸(15mg，251μmol)添加到在50mL圆底烧瓶内的1，4-二噁烷(5mL)中。在室温下搅拌混合物10分钟和添加四氢硼酸钠(37.95mg，1mmol)。所得混合物在室温下搅拌3小时，用氯仿稀释，用稀氢氧化铵溶液洗涤，然后在真空中浓缩。由FCC(在DCM中的10％甲醇)提纯粗产物，得到标题化合物，为黄色固体(34mg，27％)。(ES)m/z 507[M+1]+。
实施例83 N-(2-(1H-1，2，3-三唑-1-基)乙基)-4-(7-(5-(2-氨基乙氧基)-2-氟吡啶-4-基)苯并[b]噻吩-2-基)-5-氟嘧啶-2-胺
将肼(0.03mL，0.8mmol)添加到由2-(2-(4-(2-(2-(2-(1H-1，2，3-三唑-1-基)乙基氨基)-5-氟嘧啶-4-基)苯并[b]噻吩-7-基)-6-氟吡啶-3-基氧基)乙基)异吲哚啉-1，3-二酮(0.25g，0.4mmol)在乙醇(5mL)中所形成的溶液中。混合物在40℃下搅拌一夜。除去溶剂，由柱色谱法(在DCM中10％甲醇)提纯残留物，获得标题化合物(70mg，35％)。MS(ES)m/z 495[M+1]+。
使用与对于N-(2-(1H-1，2，3-三唑-1-基)乙基)-4-(7-(5-(2-氨基乙氧基)-2-氟吡啶-4-基)苯并[b]噻吩-2-基)-5-氟嘧啶-2-胺所述的程序相类似的程序来制备下列实施例
Plk 1已经表明在许多人肿瘤中过分表达，如在非小细胞肺癌，口咽癌，食道癌，胃癌，黑素瘤，乳腺癌，卵巢癌，子宫内膜癌，结肠直肠癌，成胶质细胞瘤，乳头瘤，胰腺癌，前列腺癌，肝胚细胞瘤和非霍奇金淋巴瘤癌症中。此外，Plk1表达在非小细胞肺癌，口咽癌，食道癌，黑素瘤，结肠直肠癌，肝胚细胞瘤和非霍奇金淋巴瘤癌症中具有预后意义[Strebhardt，K.and A.Ullrich.Nature Reviews Cancer 6(4)321-30(2006)]。Plk1磷酸化的底物通过协调中心体熟化、进入有丝分裂、姐妹染色单体分离和胞质分裂来调控有丝分裂的进展[Eckerdt F.Strebhardt K.Cancer Research.66(14)6895-8，2006；Strebhardt and Ullrich2006；van de Weerdt，B.C.and R.H.Medema.Cell Cycle 5(8)853-64(2006)]。通过使用抗体注射、显性阴性Plk1的表达和反义mRNA还原来抑制Plk1功能可以产生单极纺锤体(monopole spindles)和分裂后期阻滞，导致在肿瘤细胞系中有丝分裂性细胞死亡，但是在正常的非转变的原发细胞系中的可逆的G2阻滞。
另外，已经报道Plk可用于横纹肌样肿瘤(rhabdoid tumors)的治疗，(Morozov A.等人，Clinical Cancer Research.13(16)4721-30，(Aug 15，2007)。
BI-2536在使用HCT116、A549和NCIH460鼠异种移植的临床使用前的模型中显示活性(Baum，A.，P.Garin-Chesa等人(2006).#C191 In vivoactivity of BI 2536，a potent and selective inhibitor of the mitotic kinasePLK1，in a range of cancer xenografts.AACR-NCI-EORTC InternationalConference on″Molecular Targets and Cancer Therapeutics″，Philidelphia，PA)。
下列分析的结果表明了本发明的化合物可用作抗癌剂的证据。在这里描述的某些实施例化合物是外消旋混合物。这些化合物是作为外消旋混合物和/或作为单种对映异构体进行试验。至少一种对映异构体或外消旋物满足下面的分析标准。
Plk1的表达和提纯 人Plk1cDNA可以在它的一个末端上直接与表达His6标记物(tag)如C-末端FLAG-His6标记的多核苷酸序列相连，然后被插入到合适的表达载体如pFastBacTM载体(Invitrogen)并转染到合适的体系如杆状病毒中，后者类似于Yue-Wei Qian等人，Science，282，1701(1998)对于xPlk1所报道的类型。如果使用病毒表达体系，则该病毒(例如，携带Plk1-Flag-His6标记多核苷酸构造段的杆状病毒)感染到合适的宿主细胞如Sf9细胞的培养物中。当足够量的Plk1-Flag-His6标记融合蛋白已经表达时，例如，在感染后的约46小时，该培养物应该用冈田酸(0.1μM)处理足够的时间(例如3小时)。该Plk1-Flag-His6标记融合蛋白通过使用现有技术中公知的方法，采用金属亲合性树脂如TALONTM从细胞碎片提纯得到。提纯的Plk1-Flag-His6标记融合蛋白以小的等分部分在-80℃下被贮存在合适介质中，如10mM HEPES，150mM NaCl，0.01％TRITON

X-100，1mM二硫苏糖醇(DTT)，10％甘油，pH 7.5，直到使用为止。提纯的Plk1-Flag-His6标记融合蛋白的身份由MALDI(基质辅助的激光解吸/电离(Matrix-Assisted Laser Desorption/Ionization))证实。
GST-Cdc25C(1-206)的表达和提纯 人Cdc25C cDNA(可由合适的来源获得)可以在任何合适的表达体系中表达，在此之后由与Bin Ouyang等人，Oncogene，18，6029-6036(1999)描述的方法类似的众所周知的方法来进行提纯。一种合适的体系包括用pGEX-2T载体(Amersham)转变的大肠杆菌(E.coli BL21)在18℃下的一夜生长，在该载体中已经设计了人Cds25C的cDNA以便用于采用1mM异丙基-β-D-硫代半乳糖吡喃糖苷的诱导表达。表达的GST-Cdc25C(1-206)-Plk1的底物-可以(例如由GLUTATHIONESEPHAROSE

4B)提纯，并以小的等分部分在-80℃下在合适的溶液中贮存，如在10mM HEPES，100mM NaCl，pH 7.5中。
Plk1仰制分析 Plk1激酶反应物含有在缓冲液中的Plk1-Flag-His6标记融合酶(0.2ng/μL)，该缓冲液含有50mM HEPES，pH 7.3，1.0mM二硫苏糖醇，5.0μm ATP，10mM MgCl2，0.01％TRITON

X-100，0.4μCi 33P-ATP，和0.06μg/μL GST-Cdc25c(1-206)肽。化合物作为在DMSO中的10mM贮备液来提供。化合物在20％DMSO中按1∶3系列稀释而产生10点浓度响应曲线，随后在反应混合物中按1∶5稀释(20μM至0.001μM最终，在4％最终DMSO浓度中)，以测定化合物活性。反应在室温下进行60分钟，然后通过添加60μL的10.0％H3PO4来淬灭。反应混合物(85μL)被转移到已用30μL的10.0％H3PO4预润湿的96孔磷酸纤维素过滤板中，在室温下培养20-30分钟，然后用0.5％H3PO4洗涤三次。干燥这些孔，然后添加40μL的MicroScintTM20(Packard)，然后在WallacMICROBETA

Jet上计数。从10点浓度响应数据得到的百分抑制值随后进行分析，例如通过使用ACTIVITY BASETM软件(IDBS)，采用4-参数逻辑斯谛方程。从所得曲线拟合计算绝对IC50值。全部的举例化合物具有低于100nM的IC50，且有3.6的IC50的最低显著性比率(MinimumSignificant Ratio，MSR)，预示着外消旋混合物和/或至少一种对映异构体具有低于100nM的IC50。例如，实施例41外消旋物具有12nM的IC50。这表明本发明的化合物是Plk1的有效抑制剂。
pHH3(S10)，有丝分裂细胞，和DNA含量分析 希拉细胞以200个细胞/孔被点在96孔Beckman DickinsonBIOCOATTM板中，并在37℃，5％CO2下在有10％FBS(胎牛血清)的MEM(极限必需培养基)中培养24小时。通过在跨越0.5μM-0.0098μM范围的10点上按剂量向培养基中添加化合物(在0.25％DMSO中)来处理细胞。在接触到化合物后的23小时，细胞例如用PREFERTM固定剂固定30分钟，然后用在磷酸盐缓冲盐水(PBS)溶液中的0.1％TRITON

X100进行渗透15分钟。细胞用PBS洗涤3次，然后用50μg/mL RNAse消化。主要抗体，phosphohistone H3，在4℃下按照在有1％牛血清清蛋白(BSA)的PBS中的1∶500比率被添加到细胞中保持一夜。在3次PBS洗涤后，细胞在室温下用Alexa488标记的二级抗体培养1小时。再次它们用PBS洗涤3次，然后经过30分钟添加15μM碘化丙啶来染色核。荧光板用ACUMEN EXPLORERTM[激光扫描荧光微板血细胞计数器(包括488nm氩离子激光器激发和多重光电倍增管检测)，由TTP LABTECHLTD制造]扫描以测量anti-phosphohistone H3 Serine 10，DNA含量，和由DNA凝聚(condensation)测量的有丝分裂细胞。以细胞荧光信号为基础进行图像分析，以确定不同亚群的细胞。通过高于阈值的在500-530nm的平均强度确认pHH3(S10)阳性细胞。从碘化丙啶/DNA获得的在655-705nm处的总强度用于确定个体细胞(具有2N-4N的DNA含量的细胞)和在细胞周期中的亚群(2N细胞，4N细胞)。在575-640nm处的峰强度用于确定DNA凝聚(condensation)，后者用作标记物来确定在4N细胞当中的有丝分裂细胞。分析输出数据是各个确定的亚群的百分数，％pHH3，％2N，％4N，％有丝分裂和总细胞数。通过使用ACTIVITYBASETM，由曲线拟合到各输出数据的四参数逻辑斯蒂(four parameterlogistic)来测定EC50。所得到的PHH3(s10)、DNA含量和有丝分裂的EC50分别具有2.6、2.4和2.5的MSR。例如，实施例41外消旋物具有pHH3(s10)EC50＝25nM，DNA含量EC50＝30nM和有丝分裂EC50＝23nM。
抗增殖分析 化合物对于细胞增殖的影响作用能够通过使用现有技术中公知的细胞和细胞增殖方法来测定(Robert C.Squatrito等人，GynecologicalOncology，58，101-105，(1995))。例如，HCT116细胞(可从美国模式培养物保藏所获得)可以以～2000个细胞/孔接种在96孔板中，然后在加湿的CO2培养器中在37℃下放置一夜。在20-24小时培养之后，添加半log系列稀释的化合物，将这些板送回到培养器中。在合适的暴露时间(例如，72小时)之后，使用众所周知的方法估算细胞增殖。在一种方法中，10μL的四唑盐如Alamar BlueTM被添加到细胞板中。在染料中的合适暴露之后，测定荧光(530nm激发，580nm发射)。所得IC50具有3.1的MSR。例如，实施例41外消旋物具有平均IC50＝31nM(n＝2)。这表明本发明的化合物可用于治疗增殖病症，其中包括各种类型的癌症。
本发明的化合物优选被配制成通过各种途径给药的药物组合物。最优选，此类组合物用于口服或静脉内给药。此类药物组合物和制备它们的方法是本领域中公知的。参见，例如，REMINGTONTHE SCIENCEAND PRACTICE OF PHARMACY(A.Gennaro等人编著，19th ed.，MackPublishing Co.，1995)。
通式I的化合物一般在宽的剂量范围中是有效的。例如，每天的剂量通常是在约1-约10mg/kg的体重，更优选2-6.5mg/kg的体重的范围内。在一些情况下，低于上述范围的下限的剂量水平可能是足够的，而在其它情况下可以使用更大的剂量而不会引起任何有害的副作用，因此以上剂量范围无论如何不希望限制本发明的范围。可以理解的是，实际上施用的化合物的量是由医生根据相关的情况决定的，这些情况包括所要治疗的病状，所选择的给药途径，施用的实际化合物，个体患者的年龄、体重和响应，以及患者症状的严重。
权利要求
1.下式的化合物或其药物上可接受的盐
其中
R1是氢，甲基，环丙基，环丙基氨基(C1-C2烷基)，氟，乙氧基，羟基，1-(羟基)乙基，2-(羟基)(C2-C3烷氧基)，2-(羟基)乙氧基甲基，1-(氯)乙基，1-((2-氟)乙基氨基)乙基，2-(甲基氨基)乙氧基，(2-羟乙基)氨基，(2-羟乙基)氨基(C1-C2烷基)，氨基，氨基(C1-C4烷基)，氨基(C2-C3烷氧基)，氨基羰基甲基，(1-甲基)-(1-氨基羰基)乙基，(C1-C3烷基)氨基(C1-C2烷基)，甲氧基乙基氨基，N-(C1-C3烷基)-N-甲基-氨基(C1-C2烷基)，吡咯烷-1-基-甲基，3-(二甲基氨基)-吡咯烷-1-基-甲基，3-(吡啶-3-基)-吡咯烷-1-基-甲基，3-(氨基)吡咯烷-1-基-甲基，3-(甲基氨基)吡咯烷-1-基-甲基，(4，4-二甲基噁唑烷-3-基)甲基，[N-(2-羟基)乙基-N-甲基]-氨基甲基，(氮杂环丁烷-1-基)甲基，哌啶-1-基-甲基，4-(甲氧基)哌啶-1-基-甲基，4-(羟基)哌啶-1-基-甲基，4-(羟甲基)哌啶-1-基-甲基，哌嗪-1-基-(C1-C2烷基)，4-(甲基)哌嗪-1-基-甲基，3，5-(二甲基)哌嗪-1-基-甲基，或吗啉-4-基-甲基；
R2是氢；
R3是氢，甲基，氟，或氯，或R3是氨基并与R2一起形成稠合到吡啶上的吡咯基环；
R4是氢，甲基，氟或氯；
R5是氢或羟甲基；和
R6是氢或甲基。
2.根据权利要求1的化合物或它的药物学上可接受的盐，其中
R1是环丙基氨基(C1-C2烷基)，1-(羟基)乙基，2-(羟基)乙氧基甲基，1-(氯)乙基，1-((2-氟)乙基氨基)乙基，(2-羟乙基)氨基，(2-羟乙基)氨基(C1-C2烷基)，氨基(C1-C4烷基)，氨基羰基甲基，(1-甲基)-(1-氨基羰基)乙基，(C1-C3烷基)氨基(C1-C2烷基)，N-(C1-C3烷基)-N-甲基-氨基(C1-C2烷基)，吡咯烷-1-基-甲基，3-(二甲基氨基)吡咯烷-1-基-甲基，3-(吡啶-3-基)-吡咯烷-1-基-甲基，3-(氨基)吡咯烷-1-基-甲基，3-(甲基氨基)吡咯烷-1-基-甲基，(4，4-二甲基噁唑烷-3-基)甲基，[N-(2-羟基)乙基-N-甲基]-氨基甲基，(氮杂环丁烷-1-基)甲基，哌啶-1-基-甲基，4-(甲氧基)哌啶-1-基-甲基，4-(羟基)哌啶-1-基-甲基，4-(羟甲基)哌啶-1-基-甲基，哌嗪-1-基-(C1-C2烷基)，4-(甲基)哌嗪-1-基-甲基，3，5-(二甲基)哌嗪-1-基-甲基，或吗啉-4-基-甲基。
3.根据权利要求1-2的化合物或它的药物学上可接受的盐，其中
R1是氨基(C1-C4烷基)，(C1-C3烷基)氨基(C1-C2烷基)，N-(C1-C3烷基)-N-甲基-氨基(C1-C2烷基)，或吗啉-4-基-甲基。
4.根据权利要求1-3的化合物或它的药物学上可接受的盐，其中
R1是氨基(C1-C4烷基)，或(C1-C3烷基)氨基(C1-C2烷基)；
R3是氢或氟；
R4是氢或氟；
R5是氢；和
R6是氢。
5.根据权利要求1-4的化合物或它的药物学上可接受的盐，其中R1是1-(甲基氨基)乙基，R3是氟和R4是氢，R5是氢，和R6是氢。
6.根据权利要求1-4的化合物或它的药物学上可接受的盐，其中R1是1-氨基乙基，R3是氟和R4是氟，R5是氢，和R6是氢。
7.根据权利要求1-4的化合物或它的药物学上可接受的盐，其中R1是1-氨基乙基，R3是氟和R4是氢，R5是氢，和R6是氢。
8.根据权利要求1-4的化合物或它的药物学上可接受的盐，其中R1是1-(甲基氨基)乙基，R3是氟和R4是氟，R5是氢，和R6是氢。
9.药物组合物，它包括权利要求1-8的化合物或它的药物学上可接受的盐，和相结合使用的药物学上可接受的赋形剂、载体或稀释剂。
10.在哺乳动物体内治疗选自于非小细胞肺癌，口咽癌，食道癌，胃癌，黑素瘤，皮肤的鳞状细胞癌，乳腺癌，卵巢癌，子宫内膜癌，结肠直肠癌，神经胶质瘤，成胶质细胞瘤，甲状腺癌，子宫颈癌，胰腺癌，前列腺癌，肝胚细胞瘤和非霍奇金淋巴瘤癌症当中的癌症的方法，该方法包括对需要该治疗的哺乳动物施用治疗有效量的权利要求1-8中任何一项的化合物或它的药物学上可接受的盐。
11.权利要求1-8中任何一项的化合物或它的药物学上可接受的盐作为药物的用途。
12.根据权利要求1-8中任何一项的化合物或它的药物学上可接受的盐用于治疗癌症。
全文摘要
本发明提供用于治疗癌症的三唑基氨基嘧啶化合物。
文档编号A61P35/00GK101679396SQ200880015907
公开日2010年3月24日 申请日期2008年5月7日 优先权日2007年5月16日
发明者H·B·布鲁克斯, J·Z·克里奇, J·R·亨利, 红 胡, 蒋德炉, 李宏宇, S·G·米尼尔, W·T·麦米伦, J·S·索耶, M·K·斯拉特, 延 王 申请人:伊莱利利公司