专利名称：一种预防自身免疫疾病的药物的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种预防自身免疫疾病的药物。
背景技术：
自身免疫性疾病是自身免疫反应达到一定程度而导致的疾病。免疫系统最基本的 功能是认识自身和识别异体，达到保护自身和排斥异体的目的。正常人体血清中可存在多 种针对自身抗原的抗体，但它们的水平极低，不足以破坏自身成分，可清除衰老退变的自身 组织，这就是自身免疫反应。当这种反应过强，导致严重组织损伤，表现出临床症状时，就称 为自身免疫性疾病。自身免疫病有多种类型，如多发性硬化症、自身免疫性卵巢炎、系统红 斑狼疮、类风湿关节炎、胰岛素依赖型糖尿病、重症肌无力、急性多发性多神经炎等。调节性T细胞(regulatory T cells,Treg)是维持机体免疫平衡的功能成熟的T 细胞，Treg通过抗原非特异性或特异性扩增，下调效应性免疫细胞的功能并削弱其增殖能 力，来抑制或控制机体免疫应答的程度。研究发现Treg的数量减少或功能异常均可能导致 自身免疫性疾病的发生。多发性硬化症(multiple sclerosis, MS)是一种自身免疫性疾病，是中枢神经系 统炎症性脱髓鞘疾病，是由于T细胞异常活化并进入中枢神经系统，对自身抗原产生了免 疫应答引起的。自身免疫性卵巢炎主要表现为T淋巴细胞，少量B淋巴细胞、巨噬细胞和自 然杀伤(NK)细胞等大量浸润到卵巢。
发明内容
本发明的目的是提供一种预防自身免疫疾病的药物。本发明提供了普乐可复(Π(506)的一种新用途。本发明提供的新用途是普乐可复在制备预防自身免疫疾病的药物的佐剂中应用； 所述预防自身免疫疾病的药物可为如下(a)的DNA和/或如下(b)的重组质粒(a)自身免疫疾病的蛋白抗原或其表位多肽的编码DNA;(b)含有(a)所述DNA的重组质粒。所述自身免疫疾病可为多发性硬化症、系统红斑狼疮、类风湿关节炎、1型糖尿病 (胰岛素依赖型糖尿病)、重症肌无力、急性多发性多神经炎或自身免疫性卵巢炎等。当预防目的为预防多发性硬化症时，所述预防自身免疫疾病的药物可为髓鞘少突 胶质细胞糖蛋白多肽自氨基末端第35至55位氨基酸残基。将自身免疫疾病的蛋白抗原或其表位多肽的编码DNA作为一个单元，所述预防自 身免疫疾病的药物既可为一个单元的DNA，也可为若干个重复单元的DNA。当预防目的为预防多发性硬化症时，可将含有序列表的序列1自5'末端第7至 66位核苷酸的DNA作为一个单元。所述预防自身免疫疾病的药物既可为一个单元的DNA， 也可为若干个重复单元的DNA。当预防目的为预防多发性硬化症时，所述预防自身免疫疾病的药物具体可为含有
3序列表的序列1自5'末端第7至132位核苷酸的DNA和/或重组质粒p2M0G35;所述p2M0G35 是将含有序列表的序列1自5'末端第7至132位核苷酸的DNA导入pVAXl质粒得到的重 组质粒。当预防目的为预防自身免疫性卵巢炎时，所述预防自身免疫疾病的药物具体可为 图11所示的重组质粒ρ⑶NA-ZP3。普乐可复是一种非特异性免疫抑制剂，在自身免疫疾病病患的临床使用时，不仅 对病患的自身免疫产生抑制作用，对于外来抗原的免疫也会产生抑制作用，所以具有较大 的副作用。本发明人发现，将普乐可复作为佐剂，与自身免疫疾病的蛋白抗原或其表位多肽 的编码基因(或携带其编码基因的重组质粒)共同免疫动物，可以特异性的抑制由免疫的 蛋白抗原或其表位多肽诱发的自身免疫疾病，从而预防自身免疫疾病的发生。本发明还保护一种预防自身免疫疾病的药物，它的活性成份为功能DNA和作为佐 剂的普乐可复；所述功能DNA为如下(a)的DNA和/或如下(b)的重组质粒(a)自身免疫疾病的蛋白抗原或其表位多肽的编码DNA;(b)含有(a)所述DNA的重组质粒。所述自身免疫疾病可为多发性硬化症、系统红斑狼疮、类风湿关节炎、胰岛素依赖 型糖尿病、重症肌无力、急性多发性多神经炎或自身免疫性卵巢炎等。当所述药物的预防目的为预防多发性硬化症时，所述功能DNA可为髓鞘少突胶质 细胞糖蛋白多肽自氨基末端第35至55位氨基酸残基。当所述药物的预防目的为预防多发性硬化症时，可将含有序列表的序列1自5' 末端第7至66位核苷酸的DNA作为一个单元。所述预防自身免疫疾病的药物既可为一个 单元的DNA，也可为若干个重复单元的DNA。当预防目的为预防多发性硬化症时，所述功能DNA具体可为含有序列表的序列1 自5 ‘末端第7至132位核苷酸的DNA和/或重组质粒p2M0G35 ；所述p2M0G35是将含有序 列表的序列1自5'末端第7至132位核苷酸的DNA导入pVAXl质粒得到的重组质粒。当所述药物的预防目的为预防自身免疫性卵巢炎时，所述预防自身免疫疾病的药 物具体可为图11所示的重组质粒ρ⑶NA-ZP3。所述预防自身免疫疾病的药物中，所述佐剂和所述功能DNA，既可制成混合剂对动 物进行免疫，也可单独包装，分别对动物进行免疫。所述药物中，所述功能DNA与所述佐剂的质量比可为10 (0. 5_10)，具体可为 10 3。根据实际情况，所述佐剂可以分成若干次使用，所述功能DNA可以分成若干次使用。给药时，给药量可为30微克Π(506/每疗程，100微克功能DNA/每疗程；每疗程为 7天，共两个疗程。给药方式通常为第一疗程和第二疗程间隔14天。本发明的发明人通过大量实验发现，利用Π(506和MS的蛋白抗原或其表位多肽的 编码基因(或携带编码基因的重组质粒)共同免疫小鼠后，T细胞增殖受到抑制，诱导产生 了 Treg细胞，并抑制了 DC细胞的成熟。免疫后的小鼠诱导自身免疫性脑脊髓炎(EAE)模 型，发现明显的抑制了 EAE的发病，脊髓的病理切片显示浸润的淋巴细胞和⑶4+IL-17+的细 胞明显减少，而Treg细胞比例增加。同时对脾脏⑶4Τ细胞IFN_g、IL_4和IL-17的表达进 行检测，发现IFN-g、IL-17的表达减少，而IL-4的表达显著增加，说明Π(506和DNA疫苗免 疫后诱导EAE模型，减弱了致病性的Thl和Thl7细胞免疫反应，增强了 Th2细胞免疫反应，最终抑制了 EAE的发病。Π(506和卵巢炎的蛋白抗原或其表位多肽(或其编码基因或携带 编码基因的重组质粒)共同免疫小鼠后，能够预防自身免疫性卵巢炎的发生。本发明与现有技术相比具有以下优点1、本发明使用的功能DNA制备工艺简单、使用安全方便。2、本发明使用的Π(506本身为临床用药，使用安全，用量远远少于临床用量，不会 有副作用。3、本发明的药物能够有效地诱导Treg细胞的产生，抑制DC细胞的成熟，抑制Thl7 细胞致病性的免疫反应，预防自身免疫疾病的发生。4、本发明的药物用途广泛，可以用于预防的自身免疫疾病有多发性硬化症、自身 免疫性卵巢炎、系统红斑狼疮、类风湿关节炎、胰岛素依赖型糖尿病、重症肌无力、急性多发 性多神经炎等严重的自身免疫性疾病。5、本发明的药物不要求特殊的反应条件，一般药厂的普通设备即可生产，生产方 法简单，提纯容易，易于工业化生产。自身免疫疾病的蛋白抗原或其表位多肽会引起自身免疫疾病病患的强烈免疫反 应。当采用Π(506为佐剂，复合自身免疫疾病的蛋白抗原或其表位多肽的编码基因(或携 带编码基因的重组质粒)共同免疫动物，可以使动物患自身免疫疾病的几率大大降低，起 到预防作用。
图1为重组质粒p2M0G35的酶切鉴定；1 :p2M0G35酶切结果；2 =DNA Marker。图2为重组质粒p2M0G35在BHK细胞中表达量的RT-PCR鉴定结果；1 :p2M0G35转染 后RT-PCR结果；2 :p2M0G35转染后未加反转录酶的RT-PCR结果。图3为T细胞增殖反应检测结果。图4为Treg细胞的流式细胞仪检测结果；纵坐标为⑶4+⑶25+FoXp3+细胞相对⑶4+ 细胞的百分含量(％)。图5 为 DC 细胞的流式细胞仪检测结果；(A) =CDlIC+MHCII+ ； (B)CD11C+IL_10+ ； (A) 中，纵坐标为⑶IlC+MHCII+细胞相对⑶IlC+的DC细胞的百分含量(％ ) ； (B)中，纵坐标为 ⑶IlC+IL-IO+细胞相对⑶IlC+的DC细胞的百分含量(％ )。图6为小鼠诱导EAE后的脊髓组织切片；㈧第五组处理；(B)第四组处理；(C)第 二组处理；(D)第三组处理；(E)第一组处理；(F)不作任何处理的C57BL/6小鼠。图7为小鼠诱导EAE后的流式细胞仪检测结果；㈧淋巴细胞；(B)⑶4+CD25+ ； (C) CD4+IL-17+;㈧中，纵坐标为淋巴细胞相对总的脊髓细胞的百分含量(％) ； (B)中，纵坐标 为⑶4+CD25+细胞相对⑶4+T细胞的百分含量(％) ； (C)中，纵坐标为⑶4+IL-17+细胞相对 CD4+T细胞的百分含量(％ )。图8为小鼠诱导EAE后的Treg细胞的流式细胞仪检测结果；纵坐标为 ⑶4+CD25+FOXp3+细胞相对⑶4+T细胞的百分含量(％ )。图9为小鼠诱导EAE后的细胞因子表达分析结果；㈧IFN_ γ ；⑶IL_4 ； (A)中， 纵坐标为⑶4+IFN- y +T细胞相对⑶4+T细胞的百分含量(％ ) ； (B)中，纵坐标为⑶4+IL-4+T 细胞相对CD4+T细胞的百分含量(％ )。
图10为小鼠诱导EAE后的发病情；纵坐标为评分结果，横坐标代表不同分组。图 11 为 pCDNA-ZP3 的图谱。图12为小鼠诱导自身免疫性卵巢炎后的发病情况。纵坐标为评分结果，横坐标代 表不同分组，每个圆点代表一个小鼠。
具体实施例方式以下的实施例便于更好地理解本发明，但并不限定本发明。下述实施例中的实验 方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为 自常规生化试剂商店购买得到的。以下实施例中所用到的抗体均购自BDPharMingen (San Diego, CA, USA)。实施例1、免疫抑制剂作为佐剂对多发性硬化症的作用评价一、功能DNA的制备1、化学合成2个拷贝的髓鞘少突神经胶质细胞糖蛋白35-55 (M0G35_55)的DNA序列， 在两端分别加上限制性内切酶HindIII (AAGCTT)和BamHI (GGATCC)的识别序列，DNA序列 如下5 ‘ -AAGCTTATGGAGGTGGGTTGGTACCGTTCTCCCTTCTCAAGAGTGGTTCACCTCTACCGAAATGGCAAGATGGAGGTGGGTTGGTACCGTTCTCCCTTCTCAAGAGTGGTTCACCTCTACCGAAATGGCAAGTAAGGATCC-3'(见序列表的序列 1)。2、用限制性内切酶HindIII和BamHI酶切步骤1合成的DNA序列，将其构建到 pVAXl真核表达载体(Invitrogen，CA, USA, V26020)相应的酶切位点上，得到重组质粒 p2M0G35。重组质粒p2M0G35的酶切鉴定图见图1。3、将 p2M0G35 转染到 BHK 真核细胞(ATCC，USA, QK10031)，转染 48 小时后，TRIZOL 提取总RNA，反转录为cDNA后，用RT-PCR的方法确定其表达结果，见图2。二、免疫动物的免疫反应检测1、免疫将50只雌性C57BL/6小鼠(购自协和实验动物研究所)分成五组，每组10只，分 别进行如下处理第一组(p2M0G35+FK506组)初次免疫分别在第1、4、7天利用Π(506肌肉注射处理小鼠，其中第4天同时利用 步骤一制备的p2M0G35肌肉注射免疫小鼠；加强免疫第15天开始进行加强免疫，过程同初次免疫；每次注射，p2M0G35用量为每只小鼠100 μ g，FK506用量为每只小鼠10 μ g。第二组(Π(506组)初次免疫分别在第1、4、7天利用Π( 肌肉注射处理小鼠；加强免疫第15天开始进行加强免疫，过程同初次免疫；每次注射，FK506用量为每只小鼠10 μ g。第三组(p2M0G35组)初次免疫在第4天时利用步骤一制备的p2M0G35肌肉注射免疫小鼠；加强免疫第18天加强免疫；
每次注射，p2M0G35用量为每只小鼠100 μ g。第四组(pVAXl组)初次免疫分别在第1、4、7天利用Π(506肌肉注射处理小鼠，其中第4天时同时利 用PVAXl肌肉注射免疫小鼠；加强免疫第15天开始进行加强免疫，过程同初次免疫；每次注射，ρVAXl用量为每只小鼠100 μ g，FK506佐剂为每只小鼠10 μ g。第五组(生理盐水组)分别在第1、4、7、15、18、21天注射生理盐水。2、免疫反应检测试验的第29天，分别进行如下的几项的检测(I)T细胞扩增实验无菌取脾制成单个细胞悬液。用PBS液洗三次，离心并进行细胞计数，调整细胞浓 度到1 X 106/ml，每组细胞悬液分4份加入96孔培养板中(一份加100 μ 1的ConA，终浓度 为5 μ g/ml ；一份加M0G35_55多肽，终浓度为2 μ g/ml ；一份加100 μ 1的BSA，终浓度为2 μ g/ ml作为对照组；另一份不加刺激物)。24h后，每孔加入100 μ 1 MTT至终浓度为5mg/ml，4h 后，每孔加100 μ 1 SDS-DMSO (20 % SDS溶于50 % DMSO, ρΗ2. 0)，使其完全溶解，在酶标仪上 读取570nm处的OD值。通过OD值计算不同处理的刺激指数(Si)；每个处理中，M0G35_55多肽的刺激指数取 每组10只小鼠的平均值；ConA、不加刺激物和BSA的刺激指数取所有小鼠的平均值。刺激 指数的计算公式为刺激指数=(试验组抗原刺激OD值-培养基本底OD值)/ (不加刺激 物OD值-培养基本底OD值)。结果见图3。结果表明与p2M0G35组相比，p2M0G35+FK506组的刺激指数显著下降， 表明T细胞增殖反应显著地受到抑制。(2) Treg细胞的分析采用CD4、CD25、Foxp3的抗体染色分析，CD4+CD25+Foxp3+的T细胞为Treg细胞， 具体如下无菌取脾制成单个细胞悬液。用4%的多聚甲醛固定，0. 的皂素破膜后，利用 小鼠⑶4、⑶25、Foxp3抗体染色，用流式细胞仪进行检测。每个处理中，Treg细胞的含量取 每组10只小鼠的平均值。结果见图4。结果表明与p2M0G35组相比，p2M0G35+FK506组的Treg细胞的比例 明显增高，表明Π(506与p2M0G35共同免疫能够诱导产生Treg细胞。(3)树突状细胞(Dendritic Cells, DC)的分析采用⑶11c、MHCII的抗体染色分析，具体如下无菌取脾制成单个细胞悬液。用 4%的多聚甲醛固定，0. 的皂素破膜后，利用小鼠CDllc、MHCII抗体染色，用流式细胞仪 进行检测。每个处理中，⑶11C+MHCII+细胞的含量取每组10只小鼠的平均值。采用⑶11c、IL-10的抗体染色分析，具体如下无菌取脾制成单个细胞悬液。用 4%的多聚甲醛固定，0. 的皂素破膜后，利用小鼠⑶11c、11-10抗体染色，用流式细胞仪 进行检测。每个处理中，⑶IlC+IL-IO+细胞的含量取10只小鼠的平均值。结果见图5。结果表明与p2M0G35组相比，p2M0G35+FK506组的CD11C+MHCII+表达 显著下降，而⑶IlC+IL-IO+表达显著增多，表明DC细胞的抗原递呈受到抑制，IL-10表达增 多表明此类DC可能具有诱导Treg细胞的功能。
三、免疫抑制剂作为佐剂对多发性硬化症的预防效果评价1、免疫同步骤二。2、诱导 EAE实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis, EAE)，被公认为是中枢神经系统自身免疫性脱髓鞘疾病的理想动物模型。将MOG多肽与完全弗氏佐剂混合，作为诱导剂。第一次免疫功能DNA后第21天， 利用诱导剂在小鼠背部多点注射，每只小鼠每次注射MOG多肽200微克，同时腹腔注射200 纳克的百日咳毒素，48小时后每只小鼠再次注射200纳克的百日咳毒素(ListBiological Laboratories via Cedarlane Ltd.), EAE (:Tompkins, S. Μ. , J. Padilla, Μ. C. Dal Canto, J. P. Y. Ting, L. Van Kaer, and S. D. Miller. 2002. De Novo Central Nervous System Processing of Myelin AntigenIs Required for the Initiation of Experimental Autoimmune Encephalomyelitis. J Immunol 168 :4173_4183)。3、预防效果评价第一次注射诱导剂21天后，分别进行如下的几项的检测(1)脊髓组织切片分析取脊髓，用4%的多聚甲醛固定，进行石蜡包埋切片分析，结果见图6。切片显示， 与p2M0G35组相比，p2M0G35+FK506组脊髓内浸润的淋巴细胞显著减少，表明Π(506与p2M0G35 免疫小鼠后能够预防EAE的发生。(2)脊髓淋巴细胞浸润分析取脊髓，用胶原酶和DNA酶消化，然后利用percoll密度梯度离心，收集中层细胞， 流式细胞仪检测浸润的淋巴细胞。取脊髓，用胶原酶和DNA酶消化，然后利用percoll密度梯度离心，收集中层细胞， 用4%的多聚甲醛固定，0. 的皂素破膜后，利用小鼠D4和⑶25、⑶4和IL-17抗体染色， 用流式细胞仪进行检测，分析浸润的淋巴细胞中⑶4+CD25+和⑶4+IL-17+的比例。每个处理 中，⑶4+⑶25+细胞(或⑶4+IL-17+)的含量取10只小鼠的平均值。结果见图7。结果表明与p2M0G35组相比，p2M0G35+FK506组脊髓组织浸润淋巴细 胞和⑶4+IL-17+T减少，⑶4+⑶25+T细胞增加，表明Π(506与p2M0G35免疫小鼠后能够有效的 减少淋巴细胞浸润。(3) Treg细胞的分析取诱导EAE模型20天后的小鼠脾脏，裂解红细胞后制备单细胞悬液，采用CD4、 ⑶25、Foxp3的抗体染色分析，⑶4+CD25+Foxp3+的T细胞为Treg细胞，具体如下无菌取 脾制成单个细胞悬液。用4%的多聚甲醛固定，0. 的皂素破膜后，利用小鼠⑶4、⑶25、 Foxp3抗体染色，用流式细胞仪进行检测。每个处理中，Treg细胞的含量取10只小鼠的平 均值。结果见图8。结果表明与p2M0G35组相比，p2M0G35+FK506组的Treg细胞比例仍 然保持一定的水平，表明Π(506与p2M0G35诱导的Treg细胞能够持续一定的时间。(4)细胞因子表达分析诱导EAE模型20天后，无菌取脾制成单个细胞悬液，用4%的多聚甲醛固定，0. 1 %的皂素破膜后，利用小鼠⑶4和IFN-γ、⑶4和IL-4、⑶4和IL-17的抗体进行胞内染色，用 流式细胞仪进行检测，分析细胞因子的表达。每个处理中，结果取10只小鼠的平均值。结果见图9。结果表明与p2M0G35组相比，p2M0G35+FK506组的CD4+IFN-γ +表达 减少，而CD4+IL-4+表达增力卩，表明Thl细胞反应受到抑制，Th2细胞反应则增强，能够有利 于预防EAE的发生。(5)发病情况分析观察患病的打分情况，以检测Π(506作为佐剂与功能DNA联合使用，对多发性硬化 症的预防效果。评分标准0分，不发病；1分，尾部张力降低；2分，尾部无张力或后肢中度 无力；3分，双侧后肢麻痹；4分，后肢麻痹伴前肢力弱或麻痹；5分，濒临死亡或死亡。结果见图10。结果表明与p2M0G35组相比，p2M0G35+FK506组的小鼠发病打分显 著降低。实施例2、免疫抑制剂作为佐剂对自身免疫性卵巢炎的作用评价一、功能DNA的制备pcD-mZP3(功能 DNA)制备参考文献[Li J，Jin H，Zhang A，et al.Enhancedcontraceptive response by co-immunization of DNA and protein vaccinesencoding the mouse zona pellucida 3 with minimal oophoritis in mouse ovary. JGene Med 2007 ；9 :1095-1103. ]。pcD_mZP3 的图谱见图 11。二、免疫抑制剂作为佐剂对自身免疫性卵巢炎的作用评价1、免疫用pcD-mZP3代替p2M0G35，用pcDNA3代替pVAXl，每组9只小鼠，其它同实施例1 的步骤二的1。2、诱导小鼠引发卵巢炎用小鼠透明带抗原3(ZP3，小鼠精子受体的多肽)免疫小鼠引发自身免疫性卵 巢炎，方法参见[Li J, Jin H, Zhang A, et al. Enhanced contraceptive responseby co-immunization of DNA and protein vaccines encoding the mouse zonapellucida 3 with minimal oophoritis in mouse ovary. J Gene Med 2007;9:1095-1103·]。3、预防效果评价诱导模型后14天后，取卵巢组织进行切片评分，并统计发病率。评分标准如下1 分，有2-3个细胞浸润的闭锁卵泡、生长或成熟卵泡；2分，有5-6个损害的闭锁卵泡、生长 或成熟卵泡；3分，卵巢切片上广泛分布有细胞浸润的卵泡；4分，卵巢萎缩，完全没有卵泡。结果见图12，诱导模型后进行卵巢切片，发病率为每组患有卵巢炎的小鼠相对于 小鼠总数的百分比(％)，并对卵巢切片进行评分，评分为每组9只小鼠卵巢切片的平均值。 纵坐标为评分结果，横坐标代表不同分组。每个圆点代表一只小鼠。与ρ⑶NA-ZP3组相比， ρ⑶NA-ZP3+FK506组的发病率，显著下降，同时平均值也显著下降，表明此方法能够预防卵 巢炎的发生。序列表<110>中国农业大学<120> —种预防自身免疫疾病的药物<130>CGGNARY92231
9
<160>1<210>1<211>141<212>DNA<213>人工序列<220><223><400>1aagcttatggaatggcaagacgaaatggca
aggtgggttg gtaccgttct cccttctcaa gagtggttca cctctaccga 60 tggaggtggg ttggtaccgt tctcccttct caagagtggt tcacctctac 120 agtaaggatc c14权利要求
普乐可复在制备预防自身免疫疾病的药物的佐剂中的应用；所述预防自身免疫疾病的药物为如下(a)的DNA和/或如下(b)的重组质粒(a)自身免疫疾病的蛋白抗原或其表位多肽的编码DNA；(b)含有(a)所述DNA的重组质粒。
2.如权利要求1所述的应用，其特征在于所述自身免疫疾病为多发性硬化症、系统 红斑狼疮、类风湿关节炎、I型糖尿病、重症肌无力、急性多发性多神经炎或自身免疫性卵巢 炎。
3.如权利要求2所述的应用，其特征在于所述自身免疫疾病为多发性硬化症；所述预 防自身免疫疾病的药物为髓鞘少突胶质细胞糖蛋白多肽自氨基末端第35至55位氨基酸残基。
4.如权利要求3所述的应用，其特征在于所述预防自身免疫疾病的药物为含有序列 表的序列1自5'末端第7至132位核苷酸的DNA和/或重组质粒p2M0G35 ；所述重组质粒 p2M0G35是将含有序列表的序列1自5'末端第7至132位核苷酸的DNA导入pVAXl质粒得 到的重组质粒。
5.如权利要求2所述的应用，其特征在于所述自身免疫疾病为自身免疫性卵巢炎；所 述预防自身免疫疾病的药物为图11所示的重组质粒P⑶NA-ZP3。
6.一种预防自身免疫疾病的药物，它的活性成份为功能DNA和作为佐剂的普乐可复； 所述功能DNA为如下(a)的DNA和/或如下(b)的重组质粒(a)自身免疫疾病的蛋白抗原或其表位多肽的编码DNA;(b)含有(a)所述DNA的重组质粒。
7.如权利要求6所述的药物，其特征在于所述自身免疫疾病为多发性硬化症、系统 红斑狼疮、类风湿关节炎、I型糖尿病、重症肌无力、急性多发性多神经炎或自身免疫性卵巢 炎。
8.如权利要求7所述的药物，其特征在于所述自身免疫疾病为多发性硬化症；所述功 能DNA为髓鞘少突胶质细胞糖蛋白多肽自氨基末端第35至55位氨基酸残基；所述功能DNA优选为含有序列表的序列1自5'末端第7至132位核苷酸的DNA和/ 或重组质粒p2M0G35 ；所述重组质粒p2M0G35是将含有序列表的序列1自5'末端第7至132 位核苷酸的DNA导入pVAXl质粒得到的重组质粒。
9.如权利要求7所述的药物，其特征在于所述自身免疫疾病为自身免疫性卵巢炎；所 述功能DNA为图11所示的pCDNA-ZP3。
10.如权利要求6至9中任一所述的药物，其特征在于所述药物中，所述功能DNA与 所述佐剂的质量比为10 (0.5-10)。
全文摘要
本发明公开了一种预防自身免疫疾病的药物。本发明提供的药物，它的活性成份为功能DNA和普乐可复。所述功能DNA为如下(a)的DNA和/或如下(b)的重组质粒(a)自身免疫疾病的蛋白抗原或其表位多肽的编码DNA；(b)含有(a)所述DNA的重组质粒。本发明还保护普乐可复在制备预防自身免疫疾病的药物的佐剂中的应用。应用本发明的药物免疫动物，能够抑制动物体内抗原提呈细胞成熟及诱导调节性T细胞产生，并够抑制Th17细胞反应，达到预防自身免疫疾病的目的。
文档编号A61K39/00GK101897964SQ200910083049
公开日2010年12月1日 申请日期2009年4月27日 优先权日2009年4月27日
发明者康友敏, 王宾 申请人:中国农业大学