专利名称：冯威勒布兰特因子特异性结合物及其应用方法
冯威勒布兰特因子特异性结合物及其应用方法本发明提供针对冯威勒布兰特因子(vWF)的Al结构域的特异性结合物的新应用， 特别是在经历选择性经皮冠状动脉干预的患有稳定型心绞痛的患者中的应用。此外，提供 给药方案和适当的测定法如利托菌素诱导的血小板聚集(RIPA)和利托菌素辅因子活性 (RICO)在特定疾、环境中的应用。
背景技术：
血小板聚集是血块形成中的关键事件。在正常的情形下，血块用于防止血细胞 从血管系统中逃逸。然而，在某些疾病状态过程中，血块可以限制或完全闭塞血流而导致 细胞坏死。例如，在动脉粥样硬化斑块位点的血小板聚集和随后的血栓形成是病症如心绞 痛、急性心肌梗塞和在成功血栓溶解和血管成形术后的再狭窄的产生的重要诱发因素。目 前在血管成形术过程中和之后防止血栓形成的策略包括血小板糖蛋白(GP)IIb/IIIa受 体抑制剂(阿昔单抗(abCiXimab)，ReoPro )和血小板P2Y12受体抑制剂(氯吡格雷
(clopidogrel)，波立维 (Plavix ))的应用。目前使用的抗血栓形成药剂的最显著
的风险是升高的出血素质或明显的出血。因此，存在对于具有优越临床安全模式的改善 抗_血栓形成药剂的明显医疗需求，特别是对于具有减少的出血风险的抗_血栓形成药剂 的需求。此外，阿司匹林 (Aspirin )(乙酰基水杨酸)和氯吡格雷已经在心血管疾病的治 疗中作为重要疗法出现。尽管它们具有功效，患有这些适应症的患者继续遭受并发症。阿 司匹林 (乙酰基水杨酸)和氯吡格雷抗性是正在出现的临床观察，其具有潜在的严重后果 如复发的心肌梗塞、中风或死亡(Wang ΤΗ, Bhatt DL, Topol EJ. Aspirin and clopidogrel resistance, an emerging clinical entity (阿司匹林和氯吡格雷抗性，出现的临床实 European Heart Journal (欧洲心脏杂志)2006 :27，647-54)。因此，具有对于目前的 由阿司匹林 、和氯吡格雷组成的抗-血小板方案的抗性的增加数量的患者需要新的治疗 剂，其不存在交叉抗性并且具有在患有急性冠心病的患者中维持和支持治疗益处的新的作 用机制。最近在早期血小板激活级联中的研究将vWF鉴定为在血小板粘附于血管壁和 随后在冠状动脉中的血栓形成的最初步骤中的关键作用者(Conway DSG. Prognostic Value of Plasma von Willebrand Factor and Soluble P-Selectin as Indices of Endothelial Damage and Platelet Activation in 994Patients With Nonvalvular Atrial Fibrillation (在患有非瓣膜心房纤维颤动的994名患者中，血浆冯威勒 布兰特因子和可溶性P-选择蛋白的预后值作为内皮细胞损伤和血小板激活的指 数).Circulation(循环)2003 ;107 ;3141-5)。如果损伤发生在血管壁(斑块破裂或在经 皮冠状动脉干预过程中的支架放置)中，内皮下的胶原蛋白变得暴露并且吸引血小板形成 血栓。在具有高剪切速率的血管(例如，冠状动脉)中，vWF通过其A3结构域结合内皮下胶 原蛋白，随后Al结构域经历从静止状态到能够与血小板受体GPIb-IX-V相互作用的构象的 结构改变。GPIb-IX-V与胶原蛋白结合的vWF的可逆结合容许血小板在受损区域上滚动，随 后是通过血小板胶原蛋白受体(GPIa/IIa和GPVI)的紧密粘连，这导致了血小板激活。这
4导致了血小板GPIIb/IIIa受体、凝血因子I结合、血小板聚集的构象激活，最终导致血栓形 成。此外，已经显示纳米抗体 ALX-0081(SEQ ID NO :1)干扰了 vWF和血小板之间 的结合，即干扰了 vWF的Al结构域和血小板的糖蛋白Ib受体(也称为GPIb)之间的结 合，并且用所述纳米抗体 进行的治疗在狒狒F0LTS’模型中防止了血栓形成(见，例如 W02006/122825A2 的实验 18)。发明概述已经令人惊奇地发现，上述多肽，ALX_0081(SEQ ID NO 1)可以在人中以具体的 给药方案进行施用。例如，已经发现ALX-0081产生了药效作用，在给药结束时立即具有 快速作用起始(fast onset of action)，并且维持其功效多到约12小时。另外，已经发 现ALX-0081(SEQ ID NO :1)在健康男性志愿者中是充分耐受的和安全的。这些结果显示 ALX-0081 (SEQ IDNO 1)和可能的类似的特异性AlvWF结合物可适合于在这样的患者中的 急性治疗，所述患者患有稳定型心绞痛，经历了选择性的经皮冠状动脉干预(下文也称为 “PCI”)。PCI—般也称为冠状动脉血管成形术或简单的血管成形术。PCI是治疗在冠状动 脉性心脏病中发现的心脏的狭窄(狭窄)冠状动脉的治疗方法。这些狭窄片段是由于充满 胆固醇的斑块的堵塞形成的，所述斑块是由于动脉粥样硬化所形成的。PCI通常通过侵入性 心脏病专家(invasive cardiologist)进行。因此，本发明提供一种用于在患者中，优选人中预防血小板聚集和血栓形成的方 法，所述患者患有稳定型心绞痛，经历选择性经皮冠状动脉干预，其中所述预防包括向所述 患者施用有效量的特异性AlvWF结合物，例如ALX-0081 (SEQ ID NO 1)。本发明还提供特异性AlvWF结合物，例如ALX-0081 (SEQ ID NO 1)在制备药物中 的应用，所述药物用于预防患者，优选人中的血小板聚集和血栓形成，所述患者患有稳定型 心绞痛，经历选择性经皮冠状动脉干预。本发明还提供特异性AlvWF结合物，例如ALX-0081 (SEQ ID NO 1)用于预防患者， 优选人中的血小板聚集和血栓形成的应用，所述患者患有稳定型心绞痛，经历选择性经皮 冠状动脉干预，并且所述患者与其它疾病或病理性病症相关。本发明可特别应用于患者中的血小板聚集和血栓形成的安全预防，S卩，目前使用 的非-VWF-特异性抗血栓形成药剂，如波立维 (Plavix )(氯吡格雷)，Aspirin (乙酰 基水杨酸)，Heparin (肝素)和ReoPn^ (阿昔单抗)的最显著的风险，是升高的出血 素质或明显的出血。在健康雄性受试者中进行I期双盲，安慰剂对照的，随机平行组，单升(single ascending)静脉内给药研究(研究ALX-0081-01/06)(见下面的实验部分)。在该研究中， 尽管观察到随ALX-0081剂量增加，出血时间增加，可以注意到在所有情形中，如果出血时 间延长到输注起始后1小时，用加压绷带和胶带终止出血并且使其至晚在12小时时间点回 复到少于10分钟一一这提示优越(与现存的抗凝结剂或抗-血栓形成剂相比)的安全模 式。优选地，将本发明用于在患有疾病和医学病症的患者中预防血栓形成的急性治 疗，其中不能将现存的抗凝结剂或抗血栓形成剂如波立维 (氯吡格雷)，Aspirin (乙酰基水杨酸)，Heparin (肝素)(阿昔单抗)用于抑制血小板聚集。例如，本 发明可以用于急性治疗中从而在需要抑制血小板聚集但是对目前的抗血小板方案，例如上 述提及的抗血小板方案具有抗性的患者中预防血栓形成。需要抗血小板方案的这些患者的 实例包括经历了 PCI的患有急性冠状动脉综合症的患者。此外，可以将特异性AlvWF结合物，例如ALX-0081施用于个体(例如哺乳动物，如 人)从而在PCI之前，过程中和/或之后作为辅助治疗防止血栓形成。更具体地，可以将特异性AlvWF结合物，例如ALX-0081施用于个体(例如，哺乳动 物，如人)从而在选择性PCI之前，过程中和/或之后作为辅助治疗防止血栓形成。更具体地，可以将特异性AlvWF结合物，例如ALX-0081施用于个体(例如，哺乳动 物，如人)从而在心绞痛患者中，在选择性PCI之前，过程中和/或之后作为辅助治疗防止 血栓形成。更具体地，可以将特异性AlvWF结合物，例如ALX-0081施用于个体(例如哺乳动 物，如人)从而在稳定型心绞痛患者中，在选择性PCI之前，过程中和/或之后，作为辅助治 疗防止血栓形成。发明详述本发明的应用和方法是对现存的冠状动脉疾病的治疗的改善，其中将特异性 AlvffF结合物用于防止或抑制血小板聚集或血栓形成。因此，在本发明的描述中，术语“治疗(treatment) ”或“治疗(treat) ”指预防性 或防止性治疗以及对在高剪切条件下不适合的血栓形成的有疗效或减轻的治疗，例如它们 指狭窄冠状动脉的辅助治疗或指预防性或防止性治疗，从而在狭窄冠状动脉处限制或完全 减少在高剪切条件下的不适合的血栓形成，但是术语“治疗”或“治疗”尤其是指在患有稳 定型心绞痛、经历选择性PCI的患者中的急性治疗设置。因此，在本发明的说明书中，术语“防止(prevent)”，“防止(preventing) ”和“防 止(prevention) ”(等)，除了完全防止，包括“减少(reduce)，，，“减少(reducing)，，，“减少 (reduction)”，“抑制(inhibit) ”，“抑制(inhibiting) ”和“抑制(inhibition) ”在高剪切 条件下不适合的血栓形成。因此在具体的实施方案中，本发明提供-用于在患有稳定型心绞痛经历选择性PCI的患者中预防高剪切条件下的血栓形 成的方法，所述方法包括向所述患者施用有效量的特异性AlvWF结合物；-将特异性AlvWF结合物用于制备药物的应用，所述药物用于在患有稳定型心绞 痛、经历选择性PCI的患者中，预防在高剪切条件下的血栓形成；或-将特异性AlvWF结合物在患有稳定型心绞痛、经历选择性PCI的患者中作为预防 在高剪切条件下的血栓形成的药剂的应用。在本发明中使用的特异性AlvWF结合物典型地是那些，其预防高剪切条件下的血 栓形成，特别是那些，其适应于在患有稳定型心绞痛、经历选择性PCI的患者中具有安全应 用，例如在这样的患者中，其中目前可用的抗凝结剂或抗血栓形成剂是禁忌的或缺乏足够 功效的并且对于完全预防临床相关事件是安全的。因此，例如，在本发明中使用的特异性AlvWF结合物的适合的药剂可以包括在表1 中的化合物或与表1中的化合物具有80 %以上，更优选地85 %以上，最优选的90 %，95 %，
696%，97%，98%，99%以上的氨基酸序列同一性的化合物(见关于“序列同一性”的定义部 分)。在另一个优选的选择中，在本发明中使用的特异性AlvWF结合物的适合的药剂可 以包括药剂如例如抗体，其交叉阻断表1的化合物或被表1的化合物所交叉阻断(见关于 “被交叉阻断(cross-blocked)”和“交叉阻断(cross-block) ”的定义部分)。在另一个优 选的选择中，用于根据本发明使用的特异性AlvWF结合物的适合的药剂是抗体，优选地是 单可变结构域抗体，其交叉阻断至少50%的ALX-0081(SEQ ID NO 1)结合，更优选地至少 60%，更优选地至少70%，甚至更优选地至少80%的ALX-0081结合。在另一个优选的选择 中，用于根据本发明使用的特异性AlvWF结合物的适合的药剂是抗体，优选地单可变结构 域抗体，其被ALX-0081(SEQ IDNO=I)交叉阻断至少50 %，更优选地被ALX-0081交叉阻断 至少60 %，更优选地至少70 %，甚至更优选地至少80 %。所述交叉阻断或被交叉阻断测量 由例如BiaCore测量进行。表1 特异性AlvWF结合物的实例
权利要求
一种用于在患有稳定型心绞痛、经历选择性PCI的患者中预防血栓和/或减少血栓形成的风险的方法，所述方法包括向服用或未服用伴随药物如例如肝素、阿司匹林和/或波立维的患者施用有效量的特异性A1vWF结合物。
2.在有或没有伴随药物，如例如肝素、阿司匹林和/或波立维的情况下，特异性AlvWF 结合物在制备药物中的应用，所述药物用于在患有稳定型心绞痛、经历选择性PCI的患者 中预防血栓和/或减少血栓形成的风险。
3.根据权利要求1或2的方法或应用，其中所述特异性AlvWF结合物是选自由下列各 项组成的组的化合物具有序列SEQ ID NO=I-SEQ IDNO :18中任一种的序列的多肽，或与 序列SEQ ID NO =I-SEQ ID NO :18中的任一种序列具有至少80%相同的化合物。
4.根据权利要求1或2的方法或应用，其中所述特异性AlvWF结合物是这样的化合物， 其选自由下列各项组成的组具有序列SEQ ID NO 1到SEQ ID NO 18的任一种的序列的 多肽，或与序列SEQ ID NO =I-SEQ IDNO :18的任一种的序列具有至少80%相同的化合物， 并且其中任一种所述化合物的缔合常数等于或低于InM，优选地等于或低于ΙΟΟρΜ。
5.根据权利要求1或2的方法或应用，其中所述特异性AlvWF结合物是ALX-0081(SEQ ID NO :1)。
6.根据权利要求5的方法或应用，其中ALX-0081(SEQID NO :1)在PCI的过程中和PCI 后每6小时持续至多24小时给药。
7.根据权利要求5或6的方法或应用，其中只有如果在接下来6小时估计的在RIPA 中测量的％血小板聚集不高于10%，那么给药适合剂量的ALX-0081(SEQ ID N0:1)，或只 有如果在接下来6小时估计的在RICO中测量的％聚集不高于20%，那么给药适合剂量的 ALX-0081 (SEQ ID NO :1)，两者均与施用ALX-0081前的％血小板聚集进行比较。
8.根据权利要求6或7的方法或应用，其中所述剂量是2-12mg，优选地4或8mg。
9.根据权利要求1-4中任一项的方法或应用，其中在PCI过程中和PCI后每6小时持 续至多24小时给药一定剂量的特异性AlvWF结合物。
10.根据权利要求9的方法或应用，其中只有如果在接下来6小时估计的在RIPA中测 量的％聚集不高于10%，那么给药所述剂量的特异性AlvWF结合物，或只有如果在接下来6 小时估计的在RICO中测量的％聚集不高于20%，那么给药所述剂量的特异性AlvWF结合 物，两者均与施用AlvWF结合物前的％血小板聚集进行比较。
11.根据权利要求9或10的方法或应用，其中所述剂量是2-12mg，优选地2_9mg。
12.根据权利要求1或2的方法或应用，其中所述特异性AlvWF结合物包含12a2hl(SEQ ID NO 19)或与SEQ ID NO :19至少80%相同的多肽。
13.根据权利要求1-4中任一项的方法或应用，其中所述特异性AlvWF结合物交叉阻断 至少 50% 的 ALX-0081(SEQ ID NO 1)结合和 / 或被 ALX-0081 (SEQ ID NO 1)交叉阻断至 少 50%。
14.一种评估使用AlvWF结合物的疗法在患有稳定型心绞痛、经历PCI的患者中的功效 的方法，所述方法包括将来自所述患者的例如在RIPA和/或在RICO中测量的血小板聚集水平与预定值进行 比较，和确定所述血小板聚集水平是否在预定水平或在预定水平以下，所述确定指示所述疗法是否有效。
15.根据权利要求14的方法，其中当用RIPA测定法测量时，所述预定值是10%血小板 聚集，当用RICO测定法测量时，所述预定值是20 %血小板聚集，两者均与在施用AlvWF结合 物之前，分别用RIPA或RICO测定法测定的％血小板聚集比较。
16.一种用于监测对患有稳定型心绞痛、经历PCI的患者进行的治疗的方法，所述方法 包括用AlvWF结合物处理经历选择性PCI的受试者(服用或未服用伴随药物如例如肝素、 阿司匹林和/或波立维)；从所述受试者获得血液样品；和确定所述样品中的％血小板聚集，其中当治疗后％血小板聚集小于处理前的％血小板 聚集时，指示所述受试者可能是所述疗法的响应者。
17.根据权利要求16的方法，其中当用RIPA测定法测量血小板聚集时，在所述治疗后 的％血小板聚集等于或小于在治疗前的10%血小板聚集，或当用RICO测定法测量所述血 小板聚集时，所述治疗后的％血小板聚集等于或小于20%的治疗前的血小板聚集。
18.一种用于决定在人受试者中的疗法疗程的方法，所述方法包括(i)在经历疗法的 人受试者中获得血小板聚集水平从而防止血栓形成和/或减少血栓形成的风险，其中所 述％血小板聚集例如通过选自由RIPA和RICO测定法组成的组的测定法进行测量，(ii)将 在(i)中获得的血小板聚集水平与对应于对照群体(例如安慰剂组)中的血小板聚集水平 的预定值进行比较，(iii)确定在(i)中获得的血小板聚集水平是否等于或低于所述预定 水平，和(iv)基于所述确定来决定所述疗法的疗程。
19.权利要求18的方法，其中如果用所述RIPA测定法进行测量，那么所述预定值是 10%血小板聚集，如果用所述RICO测定法进行测量，那么所述预定值是20%血小板聚集。
20.一种用于在患有稳定型心绞痛，经历选择性PCI，服用或未服用伴随药物如例如肝 素、阿司匹林和/或波立维的患者中预防血栓形成和/或减少血栓形成的风险的方法，所述 方法包括向需要所述治疗的患者施用有效量的ALX-0081以使患者中血小板聚集水平降低至预 定值以下。
21.一种用于在患有稳定型心绞痛，经历选择性PCI，服用或不服用伴随药物如，例如 肝素、阿司匹林和/或波立维的患者中，预防血栓形成和/或减少血栓形成风险的方法，所 述方法包括向需要所述预防的受试者施用有效量的ALX-0081，在经历疗法的患者中检测血小板聚集水平，将所述血小板聚集水平与预定值进行比较，和任选地基于所述血小板聚集水平，将第二和/或另外有效量的ALX-0081施用于患者。
22.一种鉴定倾向于有利地响应ALX-0081的患者的方法，所述方法包括检测来自患者 的血液样品中的％血小板聚集，并且用有效量的ALX-0081治疗所述患者，其中当以RIPA测 定法测量时，在来自所述患者的血液样品中的％血小板聚集是10%，并且当以RICO测定法 测量时，在来自所述患者的血液样品中的％血小板聚集是20 %。
23.基本如前文特别参考实施例所述的所有新化合物、工艺、方法和应用。
全文摘要
本发明提供冯威勒布兰特因子(vWF)的A1结构域的特异性结合物的新应用，具体地，在患有稳定型心绞痛、经历选择性经皮冠状动脉干预的患者中的应用。此外，提供给药方案，和适合的测定法如RIPA和RICO在特定疾病环境中的应用。
文档编号A61K31/616GK101977654SQ200980110204
公开日2011年2月16日 申请日期2009年3月23日 优先权日2008年3月21日
发明者卡伦·西莱恩克, 斯特凡·德伯克, 汉斯·乌尔里克, 约瑟夫·巴图内克, 罗伯特·克拉姆罗特, 若泽芬·比特·霍尔茨 申请人:埃博灵克斯股份有限公司