专利名称：脂质代谢改善剂的制作方法
技术领域：
我们发明了具有出色的脂质代谢改善能力、苦味小、稳定性优异并且安全的试剂。 该试剂能够抑制人类及其它哺乳动物脂肪细胞摄取脂质。本申请还将描述包含该试剂的食品、饮品、营养补充剂和饲料。
背景技术：
近年来，由饮食习惯改变、长期缺乏锻炼和过度紧张引起的生活方式疾病如肥胖症、高血压、以及高脂血症和糖尿病相关的风险增加。当此类生活方式相关的疾病发展时， 它们可导致更严重的疾病如动脉硬化和心肌梗塞。生活方式疾病中，饮食习惯的大部分改变可归于从日本饮食到西方饮食的转变，与传统的日本饮食相比，西方饮食主要由肉组成并具有更高的卡路里。主要有两种预防由高卡路里饮食引起的生活方式相关疾病的方法。 第一种方法涉及降低血液中的甘油三酯和低密度脂蛋白胆固醇的水平，即改善脂质代谢。 第二种方法涉及抑制脂肪累积，即，预防肥胖症。虽然两种方法被认为是一样的，但其背后的实际机理却不同。存在改善脂质代谢、但不抑制体重增加的试剂(参见专利文献1)以及抑制体重增加但与脂质代谢无关的试剂(参见专利文献幻。从健康和美容方面，对于预防和治疗肥胖症，抑制脂肪累积的后一种方法已受到了关注。尝试的治疗方法包括药物和运动疗法以及限制饮食。虽然药物疗法被认为是有效的，但还需要考虑其副作用。运动疗法和限制饮食在长期执行方面伴随着时间和精神上的困难，并且成功率低。另外，不能忽视营养缺乏和由过度限制饮食引起的厌食症的风险。针对此背景，存在对能够基于日常摄食并具有改善脂质代谢能力的简单然而安全的试剂或饮食试剂的需求。作为改善脂质代谢的机理，可以考虑抑制血清胆固醇和甘油三酯累积。所有物质中，已知来自大豆蛋白的大豆肽抑制这些指标的累积(参见非专利文献1)。此外，已披露了来自乳清蛋白的水解物具有脂质代谢改善能力(参见专利文献3)。来自乳蛋白质的水解物用于各种产品以预防来自乳和乳制品的食物过敏。由牛乳得到的乳清蛋白不同于母乳的乳清蛋白，并被认为是变应原。为了应对该问题，已披露了乳清蛋白的酶水解，其制备方法(参见专利文献4和幻以及在特定条件下通过加热和由耐热水解酶的酶水解来变性乳清蛋白以得到乳清蛋白水解物的方法(参见专利文献6)。引文列表
专利文献
专利文献1JP2002--226394A
专利文献2JP 2007'-308469A
专利文献3JP H05--176713A
专利文献4JP H02--2319A
专利文献5JP H02--138991A
专利文献6JP H04--112753A
非专利文献
非专利文献 1 :Cho SJ 等人· Cholesterollowering mechanism of soybean protein hydrolysate. J Agric Food Chem. 2007 Dec 26 ；55 (26) : 10599—604。
发明内容
发明要解决的问题来自乳的乳清蛋白水解物是有利的，这是因为其与来自大豆蛋白的大豆肽相比具有更高的支链氨基酸含量(专利文献幻，来自乳的乳清蛋白水解物能够生产更好的脂质代谢改善剂。然而，典型的乳清蛋白水解物溶液是混浊的，当作为实际产品使用时具有局限性， 并且不能作为需要外观透明的产品使用。此外，肽具有风味苦的特性，制约了其在口服食品和饲料中的使用。虽然已报道乳清蛋白水解物降低变态反应(专利文献6)，但还没有报道其改善脂质代谢。因此，本发明的目的是提供脂质代谢改善剂或包含此类试剂并能够作为正常饮食的一部分而摄取的食品、饮品、营养补充剂或饲料。此外，并不限制其在改善脂质代谢和预防或治疗代谢综合症中的应用，这是因为其非常安全，并且水溶液高度透明和风味中极小的苦味。用于解决问题的方案本发明的优选实施方案如下所示(1) 一种包含乳清蛋白水解物作为活性成分的脂质代谢改善剂，其具有以下特征(i) IOkDa以下的分子量分布，在200Da和3kDa之间具有主峰。(i i) 2至8的APL (平均肽链长度)。(iii) 20%以下的游离氨基酸含量。(iv)抗原性为β -乳球蛋白抗原性的1/10，000以下。(2)根据上述项(1)所述的脂质代谢改善剂，其特征在于乳清蛋白水解物可通过以下获得在PH 6至10和50°C至70°C下变性乳清蛋白，并由耐热水解酶来酶水解，随后进一步加热以失活所述酶。(3)根据上述项(1)所述的脂质代谢改善剂，其特征在于乳清蛋白水解物可通过以下获得在PH 6至10和20°C至55°C下酶水解乳清蛋白，随后在pH 6至10和50°C至 70°C下加热以用耐热水解酶来酶水解未水解的乳清蛋白，同时通过加热变性，以及进一步加热以失活所述酶。(4) 一种食品和饮品，其包含根据上述项(1)至( 中任一项所述的脂质代谢改善剂。(5) 一种营养补充剂，其包含根据上述项(1)至( 中任一项所述的脂质代谢改善剂。(6) 一种饲料，其包含上述项(1)至(3)中任一项所述的脂质代谢改善剂。本发明的其它优选实施方案如下所示(A) 一种改善脂质代谢的方法，其包括施用具有以下特征的乳清蛋白水解物
(i) IOkDa以下的分子量分布，在200Da和3kDa之间具有主峰。(ii) 2至8的APL (平均肽链长度)。(iii) 20%以下的游离氨基酸含量。(iv)抗原性为β -乳球蛋白抗原性的1/10，000以下。(B)根据上述项(A)所述的方法，其特征在于乳清蛋白水解物可通过以下获得在 PH 6至10和50°C至70°C下变性乳清蛋白，并由耐热水解酶酶水解，随后进一步加热以失活所述酶。(C)根据上述项(A)所述的方法，其特征在于乳清蛋白水解物可通过以下获得在 PH 6至10和20°C至55°C下酶水解乳清蛋白，随后在pH 6至10和50°C至70°C下加热以用耐热水解酶来酶水解未水解的乳清蛋白，同时通过加热变性，以及进一步加热以失活所述酶。(D) 一种抑制血清中甘油三酯、胆固醇或磷脂累积的方法，其特征在于施用具有以下特征的乳清蛋白水解物(i) IOkDa以下的分子量分布，在200Da和3kDa之间具有主峰。(i i) 2至8的APL (平均肽链长度)。(iii) 20%以下的游离氨基酸含量。(iv)抗原性为β -乳球蛋白抗原性的1/10，000以下。(E)根据上述项⑶所述的方法，其特征在于乳清蛋白水解物可通过以下获得在 PH 6至10和50°C至70°C下变性乳清蛋白，并由耐热水解酶酶水解，随后进一步加热以失活所述酶。(F)根据上述项⑶所述的方法，其特征在于乳清蛋白水解物可通过以下获得在 PH 6至10和20°C至55°C下酶水解乳清蛋白，随后在pH 6至10和50°C至70°C下加热以用耐热水解酶来酶水解未水解的乳清蛋白，同时通过加热变性，以及进一步加热以失活所述酶。(G) 一种预防和/或治疗高脂血症的方法，其特征在于施用具有以下特征的乳清蛋白水解物(i) IOkDa以下的分子量分布，在200Da和3kDa之间具有主峰。(ii) 2至8的APL (平均肽链长度)。(iii) 20%以下的游离氨基酸含量。(iv)抗原性为β -乳球蛋白抗原性的1/10，000以下。(H)根据上述项(G)所述的方法，其特征在于乳清蛋白水解物可通过以下获得在 PH 6至10和50°C至70°C下变性乳清蛋白，并由耐热水解酶酶水解，随后进一步加热以失活所述酶。(I)根据上述项(G)所述的方法，其特征在于乳清蛋白水解物可通过以下获得在 PH 6至10和20°C至55°C下酶水解乳清蛋白，随后在pH 6至10和50°C至70°C下加热以用耐热水解酶来酶水解未水解的乳清蛋白，同时通过加热变性，以及进一步加热以失活所述酶。(J) 一种预防和/或治疗肥胖症的方法，其特征在于施用具有以下特征的乳清蛋白水解物
(i) IOkDa以下的分子量分布，在200Da和3kDa之间具有主峰。(ii) 2至8的APL (平均肽链长度)。(iii) 20%以下的游离氨基酸含量。(iv)抗原性为β -乳球蛋白抗原性的1/10，000以下。(K)根据上述项(J)所述的方法，其特征在于乳清蛋白水解物可通过以下获得在 PH 6至10和50°C至70°C下变性乳清蛋白，并由耐热水解酶酶水解，随后进一步加热以失活所述酶。(L)根据上述项(J)所述的方法，其特征在于乳清蛋白水解物可通过以下获得在 PH 6至10和20°C至55°C下酶水解乳清蛋白，随后在pH 6至10和50°C至70°C下加热以用耐热水解酶来酶水解未水解的乳清蛋白，同时通过加热变性，以及进一步加热以失活所述酶。发明的效果该脂质代谢改善剂对血清中的甘油三酯和总胆固醇累积以及肝脏中的甘油三酯累积具有显著的抑制效果。其在预防和治疗疾病如高脂血症和肥胖症中是有效的。
具体实施例方式与脂质代谢改善剂混合的乳清蛋白水解物可改善脂质代谢。所述水解物可通过以下获得在50°C至70°C和pH 6至10下变性乳清蛋白，并由耐热水解酶酶水解，随后进一步加热以失活所述酶。在进行上述酶水解之前，如果所述乳清蛋白在PH 6至10和20至55°C 下由蛋白水解酶水解，并且未冷却，则产率相当地更高。此外，通过使用超滤和/或微滤膜浓缩以该方式制备的乳清蛋白水解物，可以达到更强的脂质代谢改善效果。另外，所述膜将降低苦味并改善乳清蛋白水解物的透明性。超滤膜的截留分子量应当在1至20kDa，或优选2至IOkDa范围内。微滤膜的截留分子量应当在100至500Da，或优选150至300Da范围内。为了不限制该乳清蛋白水解物的用途，高度的透明性是期望的。透明性试验(下述)应当使吸光度小于0. 014，优选小于0. 010或小于0. 005。本发明中的乳清蛋白是源自不同哺乳动物，如母牛、水牛、山羊或人的乳的乳清的凝集物、粉末或纯化的蛋白质。另外，在水溶液条件下进行乳清蛋白酶反应。乳清蛋白水溶液的pH通常为6至10 ；因此，当发生酶反应时无需调节pH。然而，在需要调节的情况中，可以使用酸性溶液如盐酸、柠檬酸或乳酸，或者碱性溶液如氢氧化钠、 氢氧化钙或磷酸钠来相应地调节pH(pH 6至10)。虽然本发明描述了在50至70°C下加热，但优选在加热乳清蛋白溶液之前添加耐热水解酶及进行酶水解，从而得到更高的产率。虽然对于蛋白酶通常使用的温度为<40°C，但对于本方法中使用的耐热水解酶最佳的温度为> 45°C。只要它是在该温度下工作最佳的已知耐热水解酶，就可以没有限定的使用任何酶。耐热水解酶的一些实例是木瓜蛋白酶、蛋白酶S (商标名称)、pr0leather (商标名称)、thermoase (商标名称)、alcalase (商标名称)禾口 protin—A (商标名称)。在该方法中，在80°C下加热30分钟后具有约10%以上残余活性的耐热水解酶是期望的。另外， 使用多种酶是更有效的。优选的反应时间为30分钟至10小时。
最后，需要加热反应溶液以失活水解酶。用于该方法的酶可通过在100°C以上加热反应溶液10秒以上来失活。离心如上所述收集的反应溶液，并收集上清液。干燥上清液以得到粉末化的乳清蛋白水解物产品。离心过程中形成的沉淀物与上清液相比，对降低变态反应具有较小的作用，并且应当将其除去。然而，可以干燥反应溶液并原样使用。可通过该方法得到的乳清蛋白水解物通过抑制ELISA法[Japanese Journal of Pediatric Allergy 1,36(1987)]来定量。证实其抗原性与β-乳球蛋白相比为1/10,000 以下并为乳清蛋白的< 1/10，000，且其极其安全。另外，由于乳清蛋白水解物溶液是透明的，并且其苦味得分大约为2，对于该产品的不存在局限性。通过以下方法评价透明性和苦味。透明性评价方法制备1 %的乳清蛋白水解物并在650nm下测量吸光度。苦味评价方法制备10%的乳清蛋白溶液，并添加苦味物盐酸奎宁以评价苦味。如表1所示，如果苦味得分为< 2，则可将其用于食品和饮品。[表 1]
权利要求
1.一种脂质代谢改善剂，其包含具有以下特征的乳清蛋白水解物作为活性成分 (1) IOkDa以下的分子量分布，在200Da和3kDa之间具有主峰0)2至8的APL (平均肽链长度)(3)20%以下的游离氨基酸含量(4)抗原性为乳球蛋白抗原性的1/10,000以下。
2.根据权利要求1所述的脂质代谢改善剂，其特征在于所述乳清蛋白水解物可通过以下得到在PH 6至10和50°C至70°C下变性乳清蛋白，并由耐热水解酶酶水解，随后进一步加热以失活所述酶。
3.根据权利要求1所述的脂质代谢改善剂，其特征在于所述乳清蛋白水解物可通过以下获得在PH 6至10和20°C至55°C下酶水解乳清蛋白，随后在pH 6至10和50°C至70°C 下加热以用耐热水解酶来酶水解未水解的乳清蛋白，同时通过加热变性，以及进一步加热以失活所述酶。
4.一种食品和饮品，其包含根据权利要求1至3中任一项所述的脂质代谢改善剂。
5.一种营养补充剂，其包含根据权利要求1至3中任一项所述的脂质代谢改善剂。
6.一种饲料，其包含根据权利要求1至3中任一项所述的脂质代谢改善剂。
全文摘要
公开一种脂质代谢改善剂，其具有优异的脂质代谢改善效果，并对于预防和治疗高脂血症、肥胖症及其它疾病有效。还公开包含该脂质代谢改善剂的脂质代谢改善产品如食品、饮品、营养补充剂和饲料。脂质代谢改善剂的特征在于包含乳清蛋白水解物作为活性成分，其中所述乳清蛋白水解物的特征在于具有10kDa以下的分子量分布，其中主峰出现在200Da和3kDa的范围内，还具有2至8的APL(平均肽链长度)、20％以下的游离氨基酸含量以及抗原性为β-乳球蛋白抗原性的1/10,000以下。
文档编号A61K38/00GK102395376SQ20108001681
公开日2012年3月28日 申请日期2010年4月8日 优先权日2009年4月16日
发明者上辻大辅, 日暮聪志, 福田亘博, 窄野昌信, 芹泽笃 申请人:雪印惠乳业株式会社