专利名称：油茶蒲提取物的用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及油茶蒲提取物的新用途，具体涉及油茶蒲提取物用于制备药品、保健 品和日化用品，治疗5 α -还原酶相关疾病的应用。
背景技术：
5α-还原酶(5 α -reductase, 5AR)是依赖NADPH的酶，在体内能催化睾酮⑴生 成活性更强的二氢睾酮(DHT)。抑制该酶的活性，可减少DHT的生成，进而影响与DHT相关 的疾病，如前列腺增生、前列腺癌、痤疮、男性脱发等。5α-还原酶有三种同工酶，5 α-还原 酶I和5 α -还原酶II和5 α -还原酶III。其中I型酶主要在非生殖性的组织中表达，如 肝脏和非生殖器皮肤；II型酶主要在生殖性的组织中表达，如前列腺、生殖器皮肤、附睾、 精囊、睾丸等；III型酶具体的特征和功能还需进一步确定。研究表明，5 α-还原酶在体内的表达与前列腺增生、前列腺癌、痤疮等疾病密切相 关，并且5 α -还原酶抑制剂可很好地治疗上述疾病。在增生的前列腺中，I型5 α -还原酶 和II型5 α -还原酶mRNA的表达明显比正常前列腺组织中高，且II型5 α -还原酶的表达 占主导。在前列腺癌组织中，无论是mRNA水平，还是蛋白质水平，I型5α-还原酶的表达 增强，而II型5 α -还原酶的表达减弱或不改变。另外，I型和II型5 α -还原酶在高等级 的前列腺癌组织中的表达均高于低等级的前列腺癌组织。而III型酶在良性前列腺组织中 呈低表达，在前列腺癌组织中呈高表达。可见5 α -还原酶的表达与前列腺增生及前列腺癌 的产生和恶化密切相关，抑制该酶的活性可明显改善前列腺增生的症状，减轻前列腺癌的 症状并减小患病几率。多次实验证明，5 α-还原酶的抑制剂如度他雄胺和非那雄胺均能显 著的减小前列腺的体积，减少前列腺增生症的评分，增加最大尿流量，降低患者患急性尿潴 留和进行外科手术的风险。且上述两种抑制剂可明显的降低患者患前列腺癌的风险，减小 并抑制癌组织的生长。另外，5 α-还原酶在皮肤中广泛分布并参与皮肤的类固醇激素代谢， 其活性表达异常可以引起男性脱发、女性多毛及痤疮等病，在临床上应用5 α -还原酶抑制 剂也取得很好的疗效。油茶(Camelliaoleifera Abel)，属于茶科(Theacae)、山茶属(Camellia Linn) 多年生木本油料植物，为常绿灌木或小乔木，高3 細，有时可达Sm。其品种繁多，主要包 括普通油茶、浙江红花油茶、广宁红花油茶、小叶油茶和华南油茶等。我国油茶资源丰富且 分布广泛。全国油茶林约有4，000，OOOhm2，主要分布在西南和东南部各省。油茶果是油茶 的果实，为卵圆形，表面有长绒毛，由油茶蒲(也称油茶果壳、油茶果皮和茶包)和油茶籽 (也称茶子心)构成。其中油茶蒲的含量占油茶果的60%左右。油茶蒲中含有丰富的木质 素、多缩戊糖、鞣质和茶皂素等，作为油茶加工的副产物，通常作为燃料使用或被废弃。有报 道指出将油茶蒲用于生产糠醛、木糖醇、活性炭、碳酸钾和焦磷酸钾等化工原料和栽培食用 菌，但对其生物活性和药用价值的研究仍十分缺乏。所以加深对油茶蒲的开发和利用对振 兴油茶产业、增加油茶的附加值、实现油茶副产物的综合利用，具有深远意义。油茶蒲提取物的制备已经属于公知技术，例如可按照在专利《一种油茶蒲提取物及其制备方法和用途》中公开的方法进行制备相应的水提物或醇提物。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种油茶蒲提取物的新用途，作为5α_还原酶 抑制剂，能用于治疗因5 α -还原酶所导致的一系列疾病。为了解决上述技术问题，本发明提供一种油茶蒲提取物的用途，作为5 α-还原酶 抑制剂。作为本发明的油茶蒲提取物的用途的改进用于制备治疗前列腺炎的药物，用于 制备治疗前列腺增生的药物，用于制备治疗前列腺癌的药物，用于制备治疗痤疮的药物或 日化产品，用于制备治疗雄激素依赖性脱发的药物或日化产品。作为本发明的油茶蒲提取物的用途的进一步改进油茶蒲提取物为油茶蒲水提取 物、油茶蒲醇提取物、油茶蒲水提取物的分离纯化产物、或者油茶蒲醇提取物的分离纯化产 物。本发明的发明人在研究过程中发现油茶蒲提取物具有抑制5α-还原酶的能力， 并能减轻大鼠前列腺增生症状，抑制前列腺癌细胞的生长，治疗座疮等功能，上述内容在本 发明之前从未被报道过。本发明所述的油茶蒲提取物(包括其分离纯化产物)能应用于防治与5α-还原 酶相关疾病的保健食品、药品和日化用品等领域。本发明提供了一种来源广泛、安全有效、经济适用的植物提取物——油茶蒲提 取物，对其在防治5α_还原酶相关疾病的作用进行了系统的研究，表明具有显著的抑制 5 α-还原酶活性、抗前列腺增生、抗前列腺癌、抑制痤疮的作用。先前大量的研究已表明油 茶蒲提取物具有显著的抗自由基、抗氧化、抗辐射、保护心脑血管等生理和药理活性，因此 其具有安全、无毒、性能稳定、长期食用无副作用等优点。综合上述研究，可将其单独或与其 它辅料复配制成保健食品、药品或日化用品，用于5 α -还原酶相关疾病的防治。本发明的主要优点在于1、确定了油茶蒲提取物抑制5 α-还原酶的活性，确定了油茶蒲提取物在防治与 5 α-还原酶相关疾病上的作用，如前列腺炎、前列腺增生、前列腺癌、座疮等，拓展了其在保 健品、药品和日化用品中的应用。2、利用了被废弃的油茶蒲，有利于减少资源浪费和环境污染，有利于农民的增收。本发明的油茶蒲提取物作为5α_还原酶抑制剂，实际使用方法为口服或外敷，具 体使用剂量如下当用于治疗前列腺炎时，每天口服用量为5 50mg/kg(体重)。当用于治疗前列腺增生时，每天口服用量为5 50mg/kg(体重)。当用于治疗前列腺癌时，每天口服用量为5 50mg/kg(体重)。当用于治疗痤疮时，在日化用品中的重量含量为十万分之一到万分之五。当用于治疗雄激素依赖性脱发药物时，在日化用品中的重量含量为十万分之一到 万分之五。
下面结合附图对本发明的具体实施方式
作进一步详细说明。图1是丙酸睾酮致大鼠前列腺增生各组的病理学切片图(X40)；注放大40倍前列腺组织切片图A为正常组，B为模型组，C为油茶蒲低剂量组， D为油茶蒲高剂量组，E为非那雄胺组；图2是不同浓度油茶蒲50%乙醇提取物及三个分级相对PC-3细胞生长的抑制作 用图；图3是正丁醇相及其大孔树脂洗脱物对PC-3细胞生长的抑制作用图；图4是60AL分别在M、48、72h对PC-3细胞的抑制作用图；图5是80AL分别在M、48、72h对PC-3细胞的抑制作用图。
具体实施例方式下面通过实例对本发明作进一步阐述。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而 不用于限制本发明的范围。除非另行定义，文中所使用的所有专业与科学用语与本领域熟 练人员所熟悉的意义相同。此外，任何与所记载内容相似或均等的方法及材料皆可应用于 本发明方法中。文中所述的较佳的实施方法与材料仅作示范之用。1、油茶蒲提取物对5 α -还原酶的抑制作用1.15 α-还原酶的制备取清洁级雌性SD大鼠3只，禁食不禁水过夜后脱颈椎处死，取出肝脏冰台上剪碎。 用预冷的缓冲液1 5(肝脏质量g 缓冲液体积mL)勻浆，在4°C下，10，000g~|l5min， 取胞浆部分做100，OOOg离心lh，沉淀即为粗微粒提取物，加入缓冲液(体积为前次缓冲液 加入量的1/10)，勻浆，作为酶提取液。考马斯亮蓝法测定蛋白质的含量作为5 α -还原酶的 量。分装，-80°C冰箱保存。提酶缓冲液0. 32M蔗糖，0. ImM DTT, ImM EDTA，20mM磷酸钠，其余为去离子水，pH6. 5。1.25 α-还原酶活性测定方法在每anL缓冲溶液中含有睾酮T 20 μ M, NADPH 40 μ Μ,酶提取液216mg，DTT ImM、 磷酸钠40mM、其余为去离子水、pH 6. 5中，在37°C的温度下，反应％iin。以NADPH在340nm 处吸光值下降速率为酶的活性。1. 3油茶蒲提取物的制备油茶果壳经挑选后热风干燥，粉碎过60目筛子，按体积比1 10加入50%乙醇溶 液，40°C 60°C超声30min，过滤，滤液50°C减压浓缩至干粉，制备得油茶蒲醇提取物。称取一定量10. Og的油茶蒲提取物，用IOOOmL水配制成悬浮液，依次用与水量相 等体积的石油醚、乙酸乙酯和正丁醇各萃取3次(先用石油醚萃取3次，再用乙酸乙酯萃取 3次，最后用正丁醇萃取3次；每种萃取液每次的用量=水的体积)。各不同极性的萃取液合 并后用旋转蒸发仪浓缩至干粉，即得石油醚相、乙酸乙酯相，正丁醇相和剩余的水分级相。称取一定量5. Og的正丁醇相，用水5mL配制成悬浮液，过DlOl大孔吸附树脂，分 别用2倍柱体积的水、20% (体积浓度)乙醇、40%乙醇、60%乙醇、80%乙醇、100%乙醇梯 度洗脱，各洗脱相用旋转蒸发仪浓缩至干粉。1. 4实验结果
取油茶蒲提取物及其分离纯化产物，浓度为10 μ g/mL时(以1. 2中所述的缓冲溶 液作为溶剂)测定其对5α_还原酶的抑制活性，结果见表1。可见50%醇提取物经分级萃 取后，正丁醇相活性最高，剩余活性仅有20. 71 %。正丁醇相过大孔树脂乙醇洗脱，40%乙醇 洗脱物活性最高，剩余活性仅有3. 18%。实验方法按照1. 2。表1油茶蒲提取物及其分离纯化部分对5 α -还原酶的抑制活性油茶蒲提取物剩余活性
50%醇提物54.92%
乙酸乙酯相30.58%
正丁醇相20.71%
水相96.60%
20AL77.65%
40AL3.18%
60AL66.21%
80AL84.40%注“20AL”代表20%乙醇洗脱而得，其余类同。2、油茶蒲提取物对丙酸睾酮致大鼠前列腺增生的作用2. 1实验方法取雄性SD大鼠50只，每只体重220 250g，随机取出10只为空白组。另40只用 2%戊巴比妥钠麻醉后，常规消毒皮肤，经阴囊摘除双侧睾丸，残端处结扎，以确保止血，缝 合皮肤，肌肉注射青霉素20万U/只，连续3天。1周后，将去睾丸大鼠随机分为4组，每组10 只，分别为模型组、非那雄胺阳性对照组、油茶蒲提取物高剂量组、油茶蒲提取物低剂量组， 分笼饲养。除空白组外，其余大鼠每天皮下注射丙酸睾丸酮Smg^kg-1O). lml/100g体重)。 并同时分别灌胃给药，模型组以生理盐水0. 4ml/100g体重灌胃，样品高剂量组给予水提液 500mg · kg—1 · cT1 (0. 4ml/100g 体重)，样品剂量组给予水提液 200mg · kg—1 · cf1 (0. 4ml/100g 体重)，非那雄胺组灌胃非那雄胺Img · kg-1 · cf1 (0. 4ml/100g体重)，连续用药30天。2. 2检测指标在给药期间第22d，用代谢笼收集大鼠24h代谢尿量。于末次给药24h后，称取各组大鼠重量，解剖分离出大鼠前列腺用分析天平称重， 计算前列腺指数(前列腺湿重mg/体重g)。前列腺组织立即用10%甲醛固定，取腹叶，HE染色，光镜观察下观察各前列腺组 织的细胞学形态。大鼠肝脏冰台上剪碎。用预冷的缓冲液1 5(肝脏质量g 缓冲液体积mL)勻 浆，在4°C下，10，OOOg勻浆15min，取上清液作为5α-还原酶粗酶。在含睾酮T 20 μ Μ, NADPH40 μ Μ, DTT ImM,磷酸钠40mM，pH 6. 5的缓冲溶液中，加入此酶提取液40 μ L，在37°C 的温度下，反应細in，测定反应速率，作为大鼠肝脏5 α -还原酶的活力。2. 3实验结果
从前列腺指数结果表明，大鼠良性前列腺增生模型造模成功，P < 0.01o阳性对 照，试样低剂量，高剂量均可减少增生前列腺的重量，但未达到显著性差异。具体如表2所 表2油茶蒲提取物对大鼠前列腺指数的影响
权利要求
1.油茶蒲提取物的用途，其特征是作为5α -还原酶抑制剂。
2.根据权利要求1所述的油茶蒲提取物的用途，其特征是在制备治疗前列腺炎药物 中的应用。
3.根据权利要求1所述的油茶蒲提取物的用途，其特征是在制备治疗前列腺增生药 物中的应用。
4.根据权利要求1所述的油茶蒲提取物的用途，其特征是在制备治疗前列腺癌药物 中的应用。
5.根据权利要求1所述的油茶蒲提取物的用途，其特征是在制备治疗痤疮药物或日 化产品中的应用。
6.根据权利要求1所述的油茶蒲提取物的用途，其特征是在制备治疗雄激素依赖性 脱发药物或日化产品中的应用。
7.根据权利要求广6中任意一种油茶蒲提取物的用途，其特征是所述油茶蒲提取物 为油茶蒲水提取物、油茶蒲醇提取物、油茶蒲水提取物的分离纯化产物、或者油茶蒲醇提取 物的分离纯化产物。
全文摘要
本发明公开了一种油茶蒲提取物的用途，作为5α-还原酶抑制剂。油茶蒲提取物可用于制备治疗前列腺炎的药物，用于制备治疗前列腺增生的药物，用于制备治疗前列腺癌的药物，用于制备治疗痤疮的药物或日化产品，或者用于制备治疗雄激素依赖性脱发的药物或日化产品。
文档编号A61P17/14GK102139019SQ20111007433
公开日2011年8月3日 申请日期2011年3月26日 优先权日2011年3月26日
发明者吴晓琴, 李利勉, 沈建福, 罗晓伟, 肖仁显, 车璐, 陈忠海, 陈秋平 申请人:浙江大学