专利名称：一种参麦注射液质谱指纹图谱质量控制方法
技术领域：
本发明属于指纹图谱分析技术领域，特别涉及一种参麦注射液质谱指纹图谱质量 控制方法。
背景技术：
指纹图谱是从整体上研究复杂物质体系的一种方法学。在中药质量控制领域，由 于现有测定一个或几个化学成分含量的方法并不能对中药整体质量做出准确评价，难以根 据“量”达到控制“质”的目的，指纹图谱技术因其整体性和模糊性，引起了业内研究人员的 广泛关注，已被美国FDA、国家食品与药品监督管理局等机构广泛接受用于评价植物药或中 药的批次间质量稳定性。目前，中药指纹图谱技术主要采用高效液相色谱、气相色谱等色谱 分析方法来获取样品分析谱图，进行定性分析。参麦注射液源于传统中药名方“生脉散”，由红参和麦冬两味中药组成。红参是五 加科植物人参的栽培品经蒸制后的干燥根及根蓬，具有大补元气，益血，养心安神的作用， 麦冬为百合科沿阶草属，是常用的滋阴中药，具有生津润肺、养阴清热的功能。参麦注射液 在心血管疾病与肿瘤辅助治疗中疗效明确，并得到了广泛的临床应用。红参中主要有效成 分是人参皂苷类化合物，麦冬中主要有效成分是麦冬皂苷类和黄酮类化合物。皂苷类化合 物都仅在紫外末端有吸收。制剂中人参皂苷类化合物含量较高，麦冬化学成分含量较低。现 有研究采用高效液相色谱技术以紫外或蒸发光散射检测器为检测手段进行参麦注射液指 纹图谱分析，谱图中主要反映了人参皂苷类化合物信息，麦冬成分体现不足。如能将麦冬成 分也纳入质控范围，将有利于提升参麦注射液的质控标准，进一步保障该产品的质量稳定 性。
发明内容
本发明针对上述技术需求，提供一种参麦注射液质谱指纹图谱质量控制方法，通 过以下步骤实现采用液相色谱为分离手段，以质谱检测器为检测手段同时获取表征至少 10批次的参麦注射液中红参和麦冬化合物信息的两种液质联用(LC/MS)指纹图谱，采用相 关系数法计算各批次的相似度，相似度3 0.9的样品评价为质量稳定的产品。具体步骤如下 (1)供试产品溶液制备
分别取10批次以上参麦注射液适量，10000转/min离心10 min，取上清液备用。(2)获取指纹图谱I和II
将备用的上清液，通过液质联用(LC/MS)，分别获得指纹图谱， a.色谱条件
采用C18键合的快速液相色谱柱(100 mmX4.6 mm i. d.，1. 8 Mm)，流动相为0. 06%甲 酸水溶液A和乙腈B，梯度洗脱程序为0 10 min，5 15% B ； 10 25 min，15 25% B ； 25 30 min, 25 30% B ;30 45 min, 30 35% B ；45 50 min, 35 45% B ;50 70min，45 70% B ；70 75 min，70 90% B，柱温30°C，进样量5μ 1。b.指纹图谱I的质谱条件
氮气温度25(T350°C ；雾化压力40 50 psi ；氮气流速9 12 L/min ；毛细管电压 2500 4000 V ；源内裂解电压250 V ；负离子扫描检测模式，扫描m/z范围:200-1400 ；
最佳的质谱条件为氮气温度350°C ；雾化压力45 psi ；氮气流速11 L/min ；毛细管 电压3500 V ；源内裂解电压250 V ；负离子扫描检测模式，扫描m/z范围200_1400。c.指纹图谱II质谱条件
氮气温度25(T350°C ；雾化压力40 50 psi ；氮气流速9 12 L/min ；毛细管电压 2500^4000 V;负离子选择离子检测模式，共选择64种不同m/z的离子，选择离子的m/z为 233、249、301、309、313、319、327、329、337、339、341、351、353、355、359、369、375、409、411、 419、445、447、477、493、515、519、533、563、565、567、641、667、675、681、685、715、737、753、 767、787、833、835、839、853、863、869、885、899、915、931、953、961、987、1031、1047、1061、 1063、1093、1095、1135、1255、1257、1271 ；源内裂解电压100 350 V，各选择离子对应各自 最佳的源内裂解电压。最佳的质谱条件为氮气温度350°C ；雾化压力45 psi ；氮气流速11 L/min ；毛 细管电压3500 V ；负离子选择离子检测模式，共选择64种不同m/z的离子，选择离子的m/ ζ 为233、249、301、309、313、319、327、329、337、339、341、351、353、355、359、369、375、409、 411、419、445、447、477、493、515、519、533、563、565、567、641、667、675、681、685、715、737、 753、767、787、833、835、839、853、863、869、885、899、915、931、953、961、987、1031、1047、 1061、1063、1093、1095、1135、1255、1257、1271，源内裂解电压范围:100 350 V，各选择离子 对应各自最佳的源内裂解电压。3.质量稳定性评价
将获取的10批次以上的参麦注射液指纹图谱I和II，分别以串行方式融合成一张指 纹图谱，以所有批次样本均值为标准指纹图谱，采用相关系数法计算各批次的相似度，相似 度3 0. 9的样品评价为质量稳定的产品。本发明的有益之处采用液质联用技术进行参麦注射液指纹图谱分析，利用质谱 检测器灵敏度高、专属性强、可以多通道采样的特点，通过选择多通道不同模式检测的方 法，一次分析可获取两种指纹图谱。同时反映制剂中红参和麦冬二种药材的化合物信息。确 保了参麦注射液指纹图谱信息的完整性和专属性，为参麦注射液质量控制提供了很好的技 术保障。该方法具有良好的重现性，指纹图谱中各共有峰保留时间RSD小于0. 11%，单峰面 积占总峰面积2 %的共有峰峰面积RSD小于4. 9 %。
图1不同氮气温度参麦注射液指纹图谱I总离子流图。图2不同毛细管电压参麦注射液指纹图谱I总离子流图。图3不同氮气流速参麦注射液指纹图谱I总离子流图。图4不同雾化压力参麦注射液指纹图谱I总离子流图。图5参麦注射液指纹图谱I总离子流图。图6不同氮气温度参麦注射液指纹图谱II总选择离子流图。
图7不同毛细管电压参麦注射液指纹图谱II总选择离子流图。图8不同氮气流速参麦注射液指纹图谱II总选择离子流图。图9不同雾化压力参麦注射液指纹图谱II总选择离子流图。图10参麦注射液指纹图谱II总选择离子流图。图11参麦注射液相似度评价结果(ri=20，相似度均大于0. 9)。图12参麦注射液相似度评价结果(ri=10，，相似度均大于0. 9)。
具体实施例方式下面结合实施例和附图对本发明作进一步的说明。实施例1参麦注射液指纹图谱I分析
1.供试品溶液制备
取参麦注射液适量，10000转/min离心10 min，取上清液备用；
2.参麦注射液LC/MS指纹图谱I色谱条件
采用 C18 键合的快速液相色谱柱 Edipse Plus C18 ( 100 mmX4. 6 mm i. d. ,1.8 Mm), 流动相为0. 06%甲酸水溶液A和乙腈B，梯度洗脱程序为0 10 min，5 15% B ； 10 25 min, 15 25% B ;25 30 min, 25 30% B ；30 45 min, 30 35% B ；45 50 min, 35 45% B ；50 70 min, 45 70% B ；70 75 min, 70 90% B，柱温30°C，进样量5μ 1 ；
3.参麦注射液LC/MS指纹图谱I质谱条件
雾化压力45 psi;氮气流速12 L/min ；毛细管电压3000 V ；源内裂解电压250 V ； 氮气温度250、300和350°C ；负离子扫描检测模式，扫描m/z范围200-1400 ； 分析结果见附图1，不同氮气温度参麦注射液指纹图谱I总离子流图。实施例2参麦注射液指纹图谱I分析
供试品溶液制备及色谱条件如实施例1，所不同的是质谱条件。质谱条件氮气温度 3500C ；雾化压力45 psi ；氮气流速12 L/min ；源内裂解电压250 V ；毛细管电压2500、 3000,3500和4000 V ；负离子扫描检测模式，扫描m/z范围=200-1400 ；
分析结果见附图2，不同毛细管电压参麦注射液指纹图谱I总离子流图。实施例3参麦注射液指纹图谱I分析
供试品溶液制备及色谱条件如实施例1，所不同的是质谱条件。质谱条件氮气温度350°C;雾化压力45 psi ；源内裂解电压250 V ；毛细管电 压:3500 ；氮气流速:9、10、11、12 L/min ；负离子扫描检测模式，扫描m/z范围=200-1400 ；
分析结果见附图3，不同氮气流速参麦注射液指纹图谱I总离子流图。实施例4参麦注射液指纹图谱I分析
供试品溶液制备及色谱条件如实施例1，所不同的是质谱条件。质谱条件氮气温度350°C;氮气流速11 L/min ；源内裂解电压250 V ；毛细管 电压:3500 ；雾化压力=40,45和50psi ；负离子扫描检测模式，扫描m/z范围=200-1400 ；
分析结果见附图4，不同雾化压力参麦注射液指纹图谱I总离子流图。实施例5最佳质谱条件下参麦注射液指纹图谱I分析
供试品溶液制备及色谱条件如实施例1，所不同的是质谱条件。质谱条件氮气温度350°C;氮气流速11 L/min ；源内裂解电压250 V ；毛细管电压3500 ；雾化压力45 psi ；负呙子扫描检测模式，扫描m/z范围200-1400 ；； 分析结果见附图5，参麦注射液指纹图谱I总离子流图。实施例6参麦注射液指纹图谱II分析
供试品溶液制备及色谱条件如实施例1，所不同的是质谱条件。质谱条件雾化压力45 psi ；氮气流速12 L/min ；毛细管电压3000 V ；源内裂 解电压250 V ；氮气温度250、300和350°C ；负离子选择离子检测模式，选择离子m/z及其 对应源内裂解电压见表1。分析结果见附图6，不同氮气温度参麦注射液指纹图谱II总选择离子流图。实施例7参麦注射液指纹图谱II分析
供试品溶液制备、色谱条件及质谱条件中检测模式、选择离子m/z及其对应源内裂解 电压如实施例6，所不同的是其他质谱条件。其他质谱条件氮气温度350°C ；雾化压力45 psi ；氮气流速12 L/min ；毛细管 电压2500、3000、3500 和 4000 V。分析结果见附图7，不同毛细管电压参麦注射液指纹图谱II总选择离子流图。
权利要求
1. 一种参麦注射液质谱指纹图谱质量控制方法，其特征在于，通过以下步骤实现采 用液相色谱为分离手段，以质谱检测器为检测手段同时获取表征至少10批次的参麦注射 液中红参和麦冬化合物信息的两种液质联用(LC/MS)指纹图谱，采用相关系数法计算各批 次的相似度，相似度3 0.9的样品评价为质量稳定的产品。
2..根据权利要求1所述的一种参麦注射液质谱指纹图谱质量控制方法，其特征在于， 具体步骤为(1)供试产品溶液制备取10批次以上参麦注射液，分别进行10000转/min离心10 min，取上清液备用；(2)获取指纹图谱I和II将备用的上清液，通过液质联用，分别获得指纹图谱，a.色谱条件采用C18键合的快速液相色谱柱，100 mmX4.6 mm i. d.，1. 8 Mm，流动相为0. 06%甲酸 水溶液A和乙腈B，梯度洗脱程序为0 10 min，5 15% B; 10 25 min，15 25% B ； 25 30 min, 25 30% B ;30 45 min, 30 35% B ；45 50 min, 35 45% B ;50 70 min, 45 70% B ;70 75 min, 70 90% B,柱温30°C，进样量5 μ 1 ；b.指纹图谱I的质谱条件氮气温度25(T350°C ；雾化压力40 50 psi ；氮气流速9 12 L/min ；毛细管电压 2500 4000 V ；源内裂解电压250 V ；负离子扫描检测模式，扫描m/z范围=200-1400 ；c.指纹图谱II质谱条件质谱条件为氮气温度=250^3500C ；雾化压力:4(T50 psi ；氮气流速:9 12 L/min ；毛 细管电压250(Γ4000 V;负离子选择离子检测模式，共选择64种不同m/z的离子，选择离 子的 m/z 为:233、249、301、309、313、319、327、329、337、339、341、351、353、355、359、369、 375、409、411、419、445、447、477、493、515、519、533、563、565、567、641、667、675、681、685、 715、737、753、767、787、833、835、839、853、863、869、885、899、915、931、953、961、987、1031、 1047、1061、1063、1093、1095、1135、1255、1257、1271，源内裂解电压范围100^350 V，各选 择离子对应各自最佳的源内裂解电压；(3)质量稳定性评价取获取的10批次以上的参麦注射液指纹图谱I和II，分别以串行方式融合成一张指 纹图谱，以所有批次样本均值为标准指纹图谱，采用相关系数法计算各批次的相似度，相似 度3 0. 9的样品评价为质量稳定的产品。
3.根据权利要求1或2所述的一种参麦注射液质谱指纹图谱质量控制方法，其特征在 于，步骤(2) b指纹图谱I的质谱条件为氮气温度350°C，雾化压力45 psi，氮气流速 11 L/min，毛细管电压3500 V，源内裂解电压250 V，负离子扫描检测模式，扫描m/z范围 200-1400。
4.根据权利要求1或2所述的一种参麦注射液质谱指纹图谱质量控制方法，其特征在 于，步骤(2)c指纹图谱II的质谱条件为氮气温度350°C;雾化压力45 psi ；氮气流速11 L/min ；毛细管电压3500 V ；负离子选择离子检测模式，共选择64种不同m/z的离子，选择 离子的 m/z 为233、249、301、309、313、319、327、329、337、339、341、351、353、355、359、369、 375、409、411、419、445、447、477、493、515、519、533、563、565、567、641、667、675、681、685、.715、737、753、767、787、833、835、839、853、863、869、885、899、915、931、953、961、987、1031、 1047、1061、1063、1093、1095、1135、1255、1257、1271，源内裂解电压范围100^350 V，各选择离子对应各自最佳的源内裂解电压。
全文摘要
本发明提供一种参麦注射液质谱指纹图谱质量控制方法，采用液相色谱为分离手段，以质谱检测器为检测手段同时获取表征参麦注射液中红参和麦冬化合物信息的两种指纹图谱，采用相关系数法计算相似度，以相似度≧0.9的样品判断为质量稳定的产品。本发明利用质谱检测器灵敏度高、专属性强、可以多通道采样的特点，通过选择多通道不同模式检测的方法，一次分析获取两种指纹图谱，可同时反映制剂中红参和麦冬二种药材的化合物信息，确保制剂的指纹图谱信息的完整性和专属性，具有良好的重现性，为参麦注射液质量控制提供了技术保障。
文档编号A61K36/8968GK102133333SQ20111007397
公开日2011年7月27日 申请日期2011年3月25日 优先权日2011年3月25日
发明者张建兵, 沈培强, 聂晶, 范骁辉, 邵青 申请人:浙江大学