专利名称：双饱和脂肪链醇His-Gly-Glu-Asp四肽酯，其制备方法及应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种人工合成的化合物及其制备方法和应用，特别涉及一种通式I的6种具有免疫抑制活性的双饱和脂肪链醇His-Gly-Glu-Asp四肽酯，还涉及它们的制备方法，以及其在作为免疫抑制剂中的应用。本发明属于生物医药领域。
背景技术：
数千年前，人们就曾设想用正常的器官组织来置换病变的器官组织，但20世纪前的移植除角膜移植外，大部分是失败的。直到20世纪40年代，英国外科医生Mdewaar应用家兔皮肤移植的实验模型，初次论证了器官组织移植中出现的排斥反应本质上是一种免疫应答反应，从而奠定了移植免疫学的基础。80年代以后，有效的免疫抑制剂如环抱素A及 FK506等的发现及应用，使移植器官的存活时间进一步延长，但是由于临床用药普遍存在易降解，生物利用度低，脂溶性差，难以透过生物膜等缺点，所以亟待研究药剂纳米包材去改善这些不足之处。两亲性肽因其能自组装成明确的纳米纤维结构而受到广泛重视，从纳米技术到组织工程，在许多领域得到应用。而且由于两亲性肽化学结构的多样性和易于合成，必将成为生物医药和生物材料领域新的研究热点。发明人认识到，具有免疫抑制活性的尿毒素肽是从人体内分离出来的具有免疫抑制活性的内源性肽。从结构修饰增加肽的脂溶性的设计思想出发以提高其在体内的生物利用度。按照这种构想，发明人发现尿毒素肽与脂肪链偶联确实具有免疫抑制活性。于是，发明人提出本发明。
发明内容
本发明所要解决的第一个技术问题是，提供通式I的6种具有免疫抑制活性的双饱和脂肪链醇His-Gly-Glu-Asp四肽酯(用9a_f表示)His-Gly-Glu-Asp [OCH2 (CH2) nCH3] -OCH2 (CH2) nCH3 I通式I 中的 n = 6、8、10、12、14 或 16 ;其中，9a中 n = 6 ；9b 中 n = 8 ；9c 中 n = 10 ；9d 中 n = 12 ；9e 中 n = 14 ；9f 中 n=16 ；本发明所要解决的第二个技术问题是，提供通式I的6种具有免疫抑制活性的双饱和脂肪链醇His-Gly-Glu-Asp四肽酯的制备方法；具体的包括以下步骤(I)在(Boc)2O和NaOH存在下将甘氨酸转化为N-叔丁氧羰基甘氨酸；(2)在(Boc) 20和NaOH存在下将天冬氨酸转化为N-叔丁氧羰基天冬氨酸；(3)在(Boc)2O和三乙胺存在下将组氨酸转化为N-叔丁氧羰基-Nim-叔丁氧羰基-组氨酸；(4)在二环己基羰二亚胺(DCC)、N_羟基苯并三氮唑(HOBt)、无水四氢呋喃(THF)存在下将N-叔丁氧羰基天冬氨酸与两倍量的饱和脂肪醇缩合，生成双饱和脂肪醇N-叔丁氧羰基天冬氨酸酯；(5)在氯化氢-乙酸乙酯中将双饱和脂肪醇N-叔丁氧羰基天冬氨酸酯脱除叔丁氧羰保护基，生成双饱和脂肪醇天冬氨酸酯；(4)在二环己基羰二亚胺、N-羟基苯并三氮唑、无水四氢呋喃存在下将N°_叔丁氧羰基苄基谷氨酸与双饱和脂肪醇天冬氨酸酯 缩合，生成双饱和脂肪醇N°-叔丁氧羰基苄氧基谷氨酸天冬氨酸酯；(6)在氯化氢-乙酸乙酯中将双饱和脂肪醇N°-叔丁氧羰基苄氧基谷氨酸天冬氨酸酯脱除叔丁氧羰保护基，生成双饱和脂肪醇苄氧基谷氨酰天冬氨酸酯；(7)在无水四氢呋喃中，在二环己基羰二亚胺和N-羟基苯并三氮唑存在下将双饱和脂肪醇苄氧基谷氨酰天冬氨酸酯与N-叔丁氧羰基甘氨酸缩合，生成双饱和脂肪醇N-叔丁氧羰基甘氨酰苄氧基谷氨酰天冬氨酸酯；(8)在氯化氢-乙酸乙酯存在下将双饱和脂肪醇N-叔丁氧羰基甘氨酰苄基谷氨酰天冬氨酸酯脱除叔丁氧羰基，生成双饱和脂肪醇甘氨酰苄氧基谷氨酰天冬氨酸酯；(9)在无水四氢呋喃中，在二环己基羰二亚胺和N-羟基苯并三氮唑存在下将双饱和脂肪醇甘氨酰苄氧基谷氨酰天冬氨酸酯与N-叔丁氧羰基-Nim-叔丁氧羰基-组氨酸缩合，生成双饱和脂肪醇N-叔丁氧羰基-Nim-叔丁氧羰基组氨酰甘氨酰苄氧基谷氨酰天冬氨酸酯；(10)在氯化氢-乙酸乙酯中将双饱和脂肪醇N-叔丁氧羰基-Nim-叔丁氧羰基组氨酰甘氨酰苄氧基谷氨酰天冬氨酸酯脱除叔丁氧羰基，生成双饱和脂肪醇组氨酰甘氨酰苄氧基谷氨酰天冬氨酸酯；(11)在无水乙醇中，在Pd/C存在下将双饱和脂肪醇组氨酰甘氨酰苄氧基谷氨酰天冬氨酸酯氢解，生成双饱和脂肪醇组氨酰甘氨酰谷氨酰天冬氨酸酯，即得。本发明所要解决的第三个技术问题是，评价6种双饱和脂肪链醇His-Gly-Glu-Asp四肽酯对小鼠脾淋巴细胞对丝裂原的增殖反应的抑制作用；本发明所要解决的第四个技术问题是，评价6种双饱和脂肪链醇His-Gly-Glu-Asp四肽酯对巨噬细胞吞噬活性的抑制作用；本发明所要解决的第五个技术问题是，评价6种双饱和脂肪链醇His-Gly-Glu-Asp四肽酯的自主装性能；本发明所要解决的第六个技术问题是，评价6种双饱和脂肪链醇His-Gly-Glu-Asp四妝酷小鼠耳后心肌组织移植存活时间；本发明通过研究所述的饱和脂肪链醇对脾淋巴细胞丝裂原增殖反应的抑制作用、对巨噬细胞吞噬活性的抑制作用以及对小鼠耳后心肌移植后的存活时间，进一步表明了本发明的化合物具有优秀的免疫抑制作用，在制备免疫抑制剂药物中具有广泛的应用前景。本发明的双饱和脂肪链醇Glu-Asp-Gly-Asp四肽酯的用途之一是在制备免疫抑制剂中的用途；本发明的双饱和脂肪链醇Glu-Asp-Gly-Asp四肽酯的用途之二是在制备免疫抑制药质体中的用途。本发明的双饱和脂肪链醇Glu-Asp-Gly-Asp四妝酯的用途之二是在制备微乳或脂质体靶向药物中的用途。
图I为通式I的6种具有免疫抑制活性的双饱和脂肪链醇His-Gly-Glu-Asp四肽酯的合成路线；i)无水THF、DCC、H0Bt和NMM ；ii)4N氯化氢-乙酸乙酯溶液；iii)无水乙醇、Pd/C 和 H2 ; I-9a n = 6、l_9b n = 8、l_9c n = 10，l_9d n = 12，l_9e n = 14，l-9f n = 16 ；图2为9b在水溶液中形成的纳米球的代表性透射电镜照片。缩略术语THF 四氢呋喃HOBt N-羟基苯并三氮唑DCC 二环己基羰二亚胺 DCU 二环己基脲NMM N-甲基吗啉TLC 薄层色谱Boc 叔丁氧羰基
具体实施例方式为了进一步阐述本发明，下面给出一系列实施例。这些实施例完全是例证性的，它们仅用来对本发明进行具体描述，不应当理解为对本发明的限制。实施例 I 制备 Boc-Asp [OCH2 (CH2) 6CH3] -OCH2 (CH2) 6CH3 (Ia)将I. Ig(4. 8mmol)Boc-Asp-OH溶于20mL无水THF,冰浴下向得到的溶液中加入
I.5g(l. 2mmol)N-羟基苯并三氮唑(HOBt)，并使其完全溶解。10分钟后加入2. 3g(l. 2mmol)二环己基碳二亚胺(DCC)。得到反应液(I)，待用。冰浴下把I. 5g(IJmmol)CH3(CH2)6CH2OH悬浮于20ml无水THF中，然后加入ImLN-甲基吗啉(NMM)，调pH 8_9。搅拌35分钟，得到反应液(II)，待用。冰浴下把反应液(I)加入反应液(II)中，冰浴条件下搅拌lh，再室温搅拌12h, TLC(乙酸乙酯/石油醚=2 I)显示Boc-Asp消失。滤除二环己基脲(D⑶)，减压除去THF。残留物用50mL乙酸乙酯溶解。得到的溶液依次用饱和NaHCO3水溶液洗、饱和NaCl水溶液洗、5% KHSO4水溶液洗和饱和NaCl水溶液洗。有机相用无水Na2SO4干燥、过滤、滤液减压浓缩至干，得到I. 6g(73. 0% )本实施例标题化合物，为米黄色油状化合物。ESI-MS(m/e) 458[M+H]+；实施例2 制备 Boc-Asp [OCH2 (CH2) 8CH3] -OCH2 (CH2) 8CH3 (Ib)按照实施例I 的制备方法由 0. 6g(2. 5mmol) Boc-Asp 和 0. Ig (6. lmmol)CH3(CH2)8CH2OH制得I. 2g(90. 2% )本实施例标题化合物，为无色油状物。ESI_MS(m/e)514[M+H]+；实施例3 制备 Boc-Asp [OCH2 (CH2) 10CH3] -OCH2 (CH2) 10CH3(lc)按照实施例I 的方法由 2. 3g (10. Ommol) Boc-Asp 和 4. Ig (24. Ommol)CH3(CH2)ltlCH2OH制得5. Og(87.7% )本实施例标题化合物，为无色固体。ESI_MS(m/e)570[M+H]+；实施例4 制备 Boc-Asp [OCH2 (CH2) 12CH3] -OCH2 (CH2) 12CH3 (Id)
按照实施例I 的方法由 2. 3g (10. Ommol) Boc-Asp 和 5. Og (23. 3mmol)CH3 (CH2) 6CH20H制得5. 2g (83. 0 % )本实施例标题化合物，为无色固体。ESI-MS (m/e)626[M+H]+；实施例5 制备 Boc-Asp [OCH2 (CH2) 14CH3] -OCH2 (CH2) 14CH3 (Ie)按照实施例I 的方法由 5. 3g (22. 9mmol) Boc-Asp 和 13. 30g (54. 90mmol)CH3(CH2)6CH2OH制得14. 30g(91. 70% )本实施例标题化合物，为无色固体。ESI_MS(m/e)682[M+H]+；实施例 6 制备 Boc-Asp [OCH2 (CH2) 16CH3] -OCH2 (CH2) 16CH3(lf)
按照实施例I 的方法由 5. 4g (23. lmmol) Boc-Asp 和 15. Og (55. Bmmol)CH3(CH2)16CH2OH制得15. 6g(91.5% )本实施例标题化合物，为无色固体。ESI-MS(m/e)738[M+H]+；实施例I 制备 HCl Asp [OCH2 (CH2) 6CH3] -OCH2 (CH2) 6CH3 (2a)将I. 60g (3. 50mmol) Boc-Asp (OCH2 (CH2) 6CH3) -OCH2 (CH2) 6CH3 溶解在 25ml4mol/l 氯化氢-乙酸乙酯溶液中，室温搅拌2小时，TLC (乙酸乙酯/石油醚=I 2)显示原料点消失，减压浓缩除去乙酸乙酯，残留物反复加少量乙醚进行减压浓缩以除去氯化氢气。最后加少量乙醚将残留物研磨成I. Sg(95. 2% )本实施例标题化合物，为无色固体粉末，直接用于下一步反应。ESI-MS(m/e) 394[M+H]+ ；实施例8 制备 HCl Asp [OCH2 (CH2) 8CH3] -OCH2 (CH2) 8CH3 (2b)按照实施例I 的方法，从 3. OOg (5. 85mmol) Boc-Asp [OCH2 (CH2) 8CH3] -OCH2 (CH2) 8CH3制得2. 13g(80. 99% )本实施例标题化合物，为米黄色固体粉末。ESI-MS (m/e) 450 [M+H]+ ；实施例9 制备 HCl Asp [OCH2 (CH2) 10CH3] -OCH2 (CH2) 10CH3 (2c)按照实施例7的方法,从I. 8g(5. Ommol)Boc-Asp[OCH2(CH2)ltlCH3]-OCH2(CH2)ltlCH3 制得 2. 3g(92. I % )本实施例标题化合物，为米黄色固体粉末。ESI-MS (m/e) :506 [M+H]+，实施例10 制备 HCl Asp [OCH2 (CH2) 12CH3] -OCH2 (CH2) 12CH3 (2d)按照实施例7的方法,从0. 6g(l. Ommol)Boc-Asp [OCH2 (CH2) 12CH3]-OCH2 (CH2) 12CH3 制得 0. 5g(89. 2% )本实施例标题化合物，为米黄色固体粉末。ESI-MS(m/e) 562[M+H]+ ；实施例11 制备 HCl Asp [OCH2 (CH2) 14CH3] -OCH2 (CH2) 14CH3 (2e)按照实施例7的方法,从0. 6g(l. Ommol)Boc-Asp [OCH2 (CH2)14CH3]-OCH2 (CH2)14CH3 制得 0. 6g(96. 7% )本实施例标题化合物，为无色固体。ESI-MS(m/e) 618[M+H]+ ；实施例12 制备 HCl Asp [OCH2 (CH2) 16CH3] -OCH2 (CH2) 16CH3 (2f)按照实施例7的方法，从0. 7g (I. Ommol)Boc-Asp [OCH2 (CH2)16CH3]-OCH2 (CH2)16CH3 制得 0. 5g(88. 6% )本实施例标题化合物，为无色固体。ESI-MS(m/e) 674[M+H]+ ；实施例13 制备 Boc-Glu (OBzl) -Asp [OCH2 (CH2) 6CH3] -OCH2 (CH2) 6CH3 (3a)按照实施例I 的方法由 3. Ig(9. 4mmoI)Boc-Glu(OBzl)和 2. 60g(6. 60mmol)HCl *Asp [OCH2 (CH2)6CH]-OCH2 (CH2)6CH3制得4. 5g(76. 3% )本实施例标题化合物，为无色油状物。ESI-MS (m/e) :692 [M+H]+，[a] 了 = -2.4 (c = 0.5, CH3OH);实施例14 制备 Boc-Glu (OBzl)-Asp-[OCH2 (CH2)8CH3]-OCH2 (CH2)8CH3 (3b)按照实施例I 的方法由 I. 6g(4. 7mmo1)Boc-Glu(OBzl)和 2. Og(4. 4mmoI)HCl Asp[OCH2(CH2)8CH]-OCH2(CH2)8CH3制得2. lg(72. 4% )本实施例标题化合物，为无色固体。ESI-MS (m/e) :671 [M+H]+，[a]g = -8.5 (c = 0.5, CH3OH);实施例15 制备 Boc-Glu (OBzl) -Asp- [OCH2 (CH2) 10CH3] -OCH2 (CH2) 10CH3 (3c)按照实施例I 的方法由 3. 6g(10. Bmmol)Boc-Glu(OBzl)和 6. Og(ll. 8mmol)HCl Asp [OCH2 (CH2)ltlCH]-OCH2 (CH2)ltlCH3制得5. 5g(62. 6% )本实施例标题化合物，为无色固体。ESI-MS (m/e) :832[M+H]+，[a]g = -9.6 (c = 0.5, CH3OH);实施例16 制备 Boc-Glu (OBzl) -Asp- [OCH2 (CH2) 12CH3] -OCH2 (CH2) 12CH3 (3d)按照实施例I 的方法由 2. 8g(8. 3mmol)Boc-Glu(OBzl)和 5. Og(7. 5mmol)HCl A·sp [OCH2 (CH2)12CH]-OCH2 (CH2)12CH3制得5. 3g(78. 8% )本实施例标题化合物，为无色固体。ESI-MS (m/e) :889 [M+H]+，[a] g = -8.8 (c = 0.5, CH3OH);实施例17 制备 Boc-Glu (OBzl) -Asp- [OCH2 (CH2) 14CH3] -OCH2 (CH2) 14CH3 (3e)按照实施例I 的方法由 I. 5g(4. 4mmoI)Boc-Glu(OBzl)和 3. Og(4. lmmol)HCl Asp [OCH2 (CH2)14CH]-OCH2 (CH2)14CH3制得2. Og (52. 6% )本实施例标题化合物，为无色固体。ESI-MS (m/e) 902 [M+H]+, [a] = -9.7 (c = 0.5, CH3OH);实施例18 制备 Boc-Glu (OBzl) -Asp- [OCH2 (CH2) 16CH3] -OCH2 (CH2) 16CH3 (3f)按照实施例I 的方法由 0. 6g(I. 8mmol)Boc-Glu(OBzl)和 I. 3g(I. Bmmol)HCl Asp [OCH2 (CH2)16CH]-OCH2 (CH2)16CH3制得I. Og (62. 5% )本实施例标题化合物，为无色固体。ESI-MS (m/e) :958 [M+H]+，[a] 了 = -7.7 (c = 0.5, CH3OH);实施例 19 制备 HCl Glu (OBzl) -Asp-[OCH2 (CH2) 6CH3] -OCH2 (CH2) 6CH3 (4a)按照实施例7的方法,从4. 5g(6. 5mmol)Boc-Glu (OBzl) -Asp- [OCH2 (CH2) 6CH3] -OCH2 (CH2) 6CH3 制得 3. 5g (86. 2 % )本实施例标题化合物，为米黄色油状物。ESI-MS(m/e) 592[M+H]+,[a]^7 = 5.4 (c = 0.5,CH3OH);实施例20 制备 HCl Glu (OBzl) -Asp-[OCH2 (CH2) 8CH3] -OCH2 (CH2) 8CH3 (4b)按照实施例7的方法,从6. 5g(8. 8mmol)Boc-Glu (OBzl) -Asp- [OCH2 (CH2) 8CH3] -OCH2 (CH2) 8CH3 制得 5. 6g (94. 9 % )本实施例标题化合物，为米黄色油状物。ESI-MS(m/e) 635[M+H]+,[a]^7 = 11.4 (c = 0.5,CH3OH);实施例21 制备 HCl Glu (OBzl)-Asp-[OCH2 (CH2)10CH3]-OCH2 (CH2)10CH3 (4c)按照实施例7的方法,从4. 4g(5. 3mmol)Boc-Glu (OBzl)-Asp-[OCH2 (CH2)10CH3]-OCH2 (CH2)10CH3 制得 3. 2g(78. 0% )本实施例标题化合物，为米黄色油状物。ESI-MS (m/e) 733[M+H]+,[a]^7 = 9.6 (c = 0.5,CH3OH);实施例22 制备 HCl Glu (OBzl) -Asp-[OCH2 (CH2) 12CH3] -OCH2 (CH2) 12CH3 (4d)按照实施例7的方法，从3. 2g(3. 6mmol)Boc-Glu (OBzl)-Asp-[OCH2 (CH2)12CH3]-OCH2 (CH2)12CH3 制得 2. 6g(86. 6% )本实施例标题化合物，为米黄色油状物。ESI-MS(m/e) 890[M+H]+,[a]^7 = 22.5 (c = 0.5,CH3OH);实施例23 制备 HCl Glu (OBzl) -Asp-[OCH2 (CH2) 14CH3] -OCH2 (CH2) 14CH3 (4e)
按照实施例7的法,从6. 5g(7. 2mmol)Boc-Glu (OBzl)-Asp-[OCH2 (CH2)14CH3]-OCH2 (CH2)14CH3 制得 6. Og (98. 3% )本实施例标题化合物，为米黄色固体。ESI-MS(m/e) 802[M+H]+,[a]^7 = 23.1 (c = 0.5,CH3OH);实施例24 制备 HCl Glu (OBzl) -Asp-[OCH2 (CH2) 16CH3] -OCH2 (CH2) 16CH3 (4f)按照实施例7的方法，从2. 5g (2. 5mmol)Boc-Glu (OBzl)-Asp-[OCH2 (CH2)16CH3]-OCH2 (CH2)16CH3 制得 2. 3g(98. 4% )本实施例标题化合物，为米黄色油状物。ESI-MS(m/e) :824[M+H]+，[a]了 = 24.3 (c = 0.5,CH3OH);实施例25 制备 Boc-Gly-Glu (OBzl)-Asp-[OCH2 (CH2)6CH3]-OCH2 (CH2)6CH3 (5a)按照实施例I 的方法 I. 3g (7. 4mmoI) Boc-Gly 和 4. 3g (7. 03mmol) HCl .Glu (OBzl)- Asp-[OCH2 (CH2)6CH3]-OCH2 (CH2)6CH3 制得 3. 3. g(64. 08% )本实施例标题化合物，为米黄色油状物。ESI-MS(m/e) :734[M+H]+，[a]了 = -10.1 (c = 0.5,CH3OH);实施例26 制备 Boc-Gly-GlU (OBzl)-Asp-[OCH2 (CH2)8CH3]-OCH2 (CH2)8CH3 (5b)按照实施例I 的方法 0. 7g (4. Ommol) Boc-Gly 和 2. 3g (3. 5mmol) HCl .Glu(OBzl)-Asp-[OCH2 (CH2)8CH3]-OCH2 (CH2)8CH3制得2. Ig(77. 7% )本实施例标题化合物，为米黄色油状物。ESI-MS(m/e) :790[M+H]+，[a]了 = -5.8 (c = 0.5,CH3OH);实施例27 制备 Boc-Gly-Glu (OBzl)-Asp-[OCH2 (CH2)10CH3]-OCH2 (CH2)10CH3 (5c)按照实施例I 的方法由 I. Og(5. 7mmol)Boc-Gly 和 4. Og(5. 5mmol)HCl .Glu(OBzl)-Asp-[OCH2 (CH2)ltlCH3]-OCH2 (CH2)ltlCH3 制得 4. Og (85. 1% )本实施例标题化合物，为米黄色油状物。ESI-MS (m/e) :846[M+H]+，[a]g = -2.5 (c = 0.5,CH3OH);实施例28 制备 Boc-Gly-Glu (OBzl)-Asp-[OCH2 (CH2)12CH3]-OCH2 (CH2) 12CH3(5d)按照实施例I 的方法由 0. 5g(2. 8mmol)Boc-Gly 和 2. Og(2. 5mmol)HCl .Glu(OBzl)-Asp-[OCH2 (CH2)12CH3]-OCH2 (CH2)12CH3 制得 2. Ig (90. 9% )本实施例标题化合物，为淡黄色固体。ESI-MS(m/e) 902[M+H]+,[a]D = -2.9 (c = 0.5,CH3OH);实施例29 制备 Boc-Gly-Glu (OBzl)-Asp-[OCH2 (CH2)14CH3]-OCH2 (CH2) 14CH3(5e)按照实施例I 的方法由 0. 6g(3. 4mmol)Boc-Gly 和 3. Og(3. 5mmol)HCl .Glu(OBzl)-Asp-[OCH2(CH2)14CH3]-OCH2(CH2)14CH3 制得 2. 5g(91.4% )本实施例标题化合物，为淡黄色
固体。ESI-MS(m/e) :958[M+H]+，[a]g = .3.1 (c = 0.5,CH3OH);实施例30 制备 Boc-Gly-Glu (OBzl)-Asp-[OCH2 (CH2)16CH3]-OCH2 (CH2) 16CH3(5f)按照实施例I 的方法由 I. Og(5. 7mmo1)Boc-Gly 和 5. 6g(6. 2mmol)HCl *Glu (OBzl)-Asp-[OCH2 (CH2)16CH3]-OCH2 (CH2)16CH3 制得 4. 2g(72. 8% )本实施例标题化合物，为淡黄色固体。ESI-MS(m/e) 1056[M+H]+,[a]= -2.6 (c = 0.5,CH3OH);实施例31 制备 HCl Gly-Glu (OBzl)-Asp-[OCH2 (CH2)6CH3]-OCH2 (CH2)6CH3 (6a)按照实施例7的方法,从3. 3g(4. 5mmol)Boc-Gly-Glu (OBzl)-Asp-[OCH2 (CH2)6CH3]-OCH2 (CH2)6CH3 制得 2. 3g(77. 1% )本实施例标题化合物，为米黄色固体。ESI-MS(m/e) 635[M+H]+,[a]= 11.5 (c = 0.5,CH3OH);实施例32 制备 HCl Gly-Glu (OBzl)-Asp-[OCH2 (CH2)8CH3]-OCH2 (CH2)8CH3 (6b)按照实施例7的方法,从2. Ig (2. 6mmol)Boc-Gly-Glu (OBzl)-Asp-[OCH2 (CH2)8CH3]-OCH2 (CH2)8CH3 制得 I. 5g(80. 8% )本实施例标题化合物，为米黄色固体。ESI-MS(m/e) :691 [M+H]+，[a]了 = 26.9 (c = 0.5,CH3OH);实施例33 制备 HCl Gly-Glu (OBzl)-Asp-[OCH2 (CH2)10CH3]-OCH2 (CH2)10CH3 (6c)按照实施例7的方法,从4. Og (4. 7mmol)Boc-Gly-Glu (OBzl)-Asp-[OCH2 (CH2)10CH3]-OCH2 (CH2)10CH3 制得 2.2g(59.4 % )本实施例标题化合物，为米黄色固体。ESI-MS(m/e) 747[M+H]+, [a]^7 = 11.8 (c = 0.5,CH3OH);实施例34 制备 HCl Gly-Glu (OBzl)-Asp-[OCH2 (CH2)12CH3]-OCH2 (CH2) 12CH3(6d)按照实施例7的方法，从2. Ig (2. 3mmol)
Boc-Gly-Glu (OBzl)-Asp-[OCH2 (CH2)12CH3]-OCH2 (CH2)12CH3 制得 1.2g(63.1 % )本实施例标题化合物，为米黄色液体。ESI-MS(m/e) :803[M+H]+，[a]〗7 = 14.2 (c = 0.5,CH3OH);实施例35 制备 HCl Gly-Glu (OBzl)-Asp-[OCH2 (CH2)14CH3]-OCH2 (CH2) 14CH3(6e)按照实施例7的方法,从5. 7g(5. 9mmol)Boc-Gly-Glu (OBzl)-Asp-[OCH2 (CH2)14CH3]-OCH2 (CH2)14CH3 制得 4.8g(92.3 % )本实施例标题化合物，为米黄色液体。ESI-MS(m/e) :859[M+H]+，[a]〗7 = 15.1 (c = 0.5,CH3OH);实施例36 制备 HCl Gly-Glu (OBzl)-Asp-[OCH2 (CH2)16CH3]-OCH2 (CH2) 16CH3(6f)按照实施例7的方法，从4. 2g(4. lmmol)Boc-Gly-Glu (OBzl)-Asp-[OCH2 (CH2)16CH3]-OCH2 (CH2)16CH3 制得 3.2g(81.4 % )本实施例标题化合物，为米黄色固体。ESI-MS(m/e) 915[M+H]+, [a]= 16.2 (c = 0.5,CH3OH);实施例37制备Boc-His (Boc) -Gly-Glu (OBzl) -Asp- [OCH2 (CH2) 6CH3] -OCH2 (CH2) 6CH3 (7a)按照Boc-Asp [OCH2 (CH2)6CH3]-OCH2 (CH2)6CH3 的制备方法由 2. 7g (5. 2mmol)Boc-His(Boc)和 4. 6g(6. 9mmol)HCl Gly-Glu (OBzI) -Asp- [OCH2 (CH2) 8CH3] -OCH2 (CH2)8CH3制得，所得化合物经柱层析纯化得I. 2g无色透明油状物，纯化条件石油醚丙酮=2 1，收率为 17.7 %。ESI-MS(m/e) 993[M+Na]+ ；mp 36-37 °C [a]
=-19.8 (c = 0.5, CH3OH). 1H-Nmr(CdcI3JOOMHz) 8 /ppm = 8. 19 (s，1H)，7. 88 (s，1H)，7. 35(m，7H)，7. 06 (m, 1H)，5. 77 (s, 1H)，5. 12(m，2H)，4. 84 (m, 1H) ,4. 72 (s，1H) ,4. 57 (m,1H)，4. 36 (m, 1H)，4. 19-4. 04 (m, 4H)，3. 90 (m, 2H)，3. 18 (m, 1H)，3. 03 (m, 2H)，2. 84 (m, 1H)，
2.51 (m, 2H)，2. 28 (m, 1H)，2. 02 (m, 1H)，I. 70-1. 15 (m, 45H) ,0. 89 (t, J = 5. 7Hz,6H).实施例38制备Boc-His (Boc) -Gly-Glu (OBzl)) -Asp- [OCH2 (CH2) 8CH3] -OCH2 (CH2) 8CH3 (7b)按照Boc-Asp [OCH2 (CH2)6CH3]-OCH2 (CH2)6CH3 的制备方法由 I. Og (2. 8mmol)Boc-His(Boc)和 I. 8g(2. 5mmol)HCl Gly-Glu (OBzl) -Asp- [OCH2 (CH2) 8CH3] -OCH2 (CH2) 8CH3制得，所得化合物经柱层析纯化得0.6g无色固体，纯化条件石油醚丙酮=2 1，收率为 25.2 %。ESI-MS(m/e) 1050[M+H]+ ；mp 43-44 °C . [a]=-11.2 (c = 0.5, CH3OH).1H-匪R (CDCl3, 300MHz) 8 /ppm = 8. 12 (s，1H)，8. 01 (s，1H)，7. 31 (m，5H)，7. 18 (m，1H)，6.98 (s，1H)，5. 79 (s, 1H)，5. 08 (s, 2H)，4. 83 (m, 1H)，4. 58 (m, 1H)，4. 42 (m, 1H)，4. 07 (m, 5H)，
3.39 (m, 1H)，3. 14-2. 7 (m, 4H)，2. 46 (m, 2H)，2. 27 (m, 2H)，2. 00 (m, 1H)，I. 59-1. 14 (m, 48H)，
0.85 (t, J = 6. 6Hz,6H).实施例39制备Boc-His (Boc) -Gly-Glu (OBzl) -Asp- [OCH2 (CH2) 10CH3] -OCH2 (CH2) 10CH3 (7c)按照Boc-Asp [OCH2 (CH2)6CH3]-OCH2 (CH2)6CH3 的制备方法由 I. Og (4. 5mmol)Boc-His (Boc)和 2. 2g(2. 5mmol)HCl Gly-Glu (OBzl) -Asp- [OCH2 (CH2) 10CH3] -0CH2(CH2)10CH3制得，所得化合物经柱层析纯化得500mg无色透明油状物，纯化条件石油谜丙酮=2 : 1，收率为 15.9 %。ESI-MS(m/e) 1106[M+H]+ ；mp46-47C. [a] D7 = -14.8 (c = 0.5, CH3OH). 1H-Nmr(CdcI3JOOMHz) 8 /ppm = 8. 14 (m, 1H)，
7.95 (m, 1H)，7. 34 (m, 5H)，7. 16 (m, 2H)，5. 77 (s, 1H)，5. 10 (m, 2H)，4. 56 (m, 1H) ,4. 41 (m, 1H)，
4.11 (m, 4H)，3. 94 (m, 2H)，3. 17 (m, 1H)，2. 98 (m, 2H)，2. 79 (m, 1H)，2. 56 (m, 2H)，2. 30 (m, 1H)，
2.21 (m, 1H) ,2. 01 (m, 1H)，I. 69-1. 20 (m, 64H) ,0. 89 (t, J = 5. 7Hz,6H).实施例40制备Boc-His (Boc) -Gly-Glu (OBzl) -Asp- [OCH2 (CH2) 12CH3] -OCH2 (CH2) 12CH3 (7d)按照Boc-Asp [OCH2 (CH2)6CH3]-OCH2 (CH2)6CH3 的制备方法由 4. 3g(5. 13mmol)Boc-His(Boc)和 3. 9g(4. 6mmol)HCl Gly-Glu (OBzl) -Asp-[OCH2 (CH2) 12CH3] -OCH2 (CH2) 12CH3制得，所得化合物经柱层析纯化得1.5g无色固体，纯化条件石油醚丙酮=2 1，收率为 26.7%。ESI-MS(m/e) 1162[M+H]+ ；mp 66-67°C . [a]^7= -16.3 (c = 0.5, CH3OH).1H-匪R (CDCl3, 300MHz) 8 /ppm = 8. 14 (m，1H)，7. 95 (m，1H)，7. 34 (m，4H)，7. 21 (m，2H)，7. 01 (m, 1H)，5. 77 (s, 1H)，5. 11 (m, 2H)，4. 82 (m, 1H)，4. 57 (m, 1H)，4. 42 (m, 1H) ,4. 01 (m, 4H)，
3.94 (m, 2H)，3. 18 (m, 1H)，2. 98 (m, 4H)，2. 79 (m, 4H)，2. 56 (m, 2H)，2. 24 (m, 1H)，2. 02 (m, 1H)，
1.99 (m, 1H)，I. 63 (m, 13H)，I. 43 (m, 9H)，I. 35(m，45H)，0. 89 (t, J = 5. 7Hz,6H).实施例41制备Boc-His (Boc) -Gly-Glu (OBzl) -Asp- [OCH2 (CH2) 14CH3] -OCH2 (CH2) 14CH3 (7e)按照Boc-Asp [OCH2 (CH2)6CH3]-OCH2 (CH2)6CH3 的制备方法由 0. 9g (2. 7mmol)Boc-His(Boc)和 2. 2g(2. 4mmol)HCl Gly-Glu (OBzl) -Asp- [OCH2 (CH2) 14CH3] -OCH2 (CH2) 14CH3制得，所得化合物经柱层析纯化得500mg无色固体，纯化条件石油醚丙酮=2 1，收率为 15. 1%0 ESI-MS (m/e) 1196 [M+H]+ ；mp 53-55°C [a] = -10.6 (c = 0.5, CH3OH).1H-匪R (CDCl3, 300MHz) 8 /ppm = 8. 15 (s，1H)，7. 94 (m，1H)，7. 31 (m，5H)，7. 21 (m，1H)，
7.07 (m, 1H)，5. 76 (s, 1H)，5. 10 (m, 2H)，4. 84 (m, 1H)，4. 58 (m, 1H)，4. 42 (m, 1H)，4. 12 (m, 4H)，
3.94 (m, 2H)，3. 73 (m, 1H)，3. 50 (m, 1H)，3. 12 (m, 1H)，2. 94 (m, 2H)，2. 79 (m, 1H)，2. 50 (m, 2H)，
2.24 (m, 1H) ,2. 01 (m, 2H)，I. 83-1. 07 (m, 79H) ,0. 89 (t, J = 5. 7Hz,6H).实施例42制备Boc-His (Boc) -Gly-Glu (OBzl) -Asp- [OCH2 (CH2) 16CH3] -OCH2 (CH2) 16CH3 (7f)按照Boc-Asp [OCH2 (CH2)6CH3]-OCH2 (CH2)6CH3 的制备方法由 I. 4g (3. 9mmol)Boc-His(Boc)和 3. 9g(4. lmmol) HCl Gly-Glu (OBzl) -Asp- [OCH2 (CH2) 16CH3] -OCH2 (CH2) 16CH3制得，所得化合物柱层析柱纯化得700mg无色固体，纯化条件石油醚丙酮=2 1，收率为 14.2%。ESI-MS(m/e) 1253[M+H]+ ；mp 59-60 °C . [a]= -19.4 (c = 0.5, CH3OH).1H-匪R (CDCl3, 300MHz) 8 /ppm = 8. 16 (s，1H)，7. 85 (s，1H)，7. 35 (m，4H)，7. 18 (m，2H)，
7.01 (s, 1H)，5. 75 (s, 1H)，5. 11 (s，2H)，4. 82 (m, 1H) ,4. 51 (m, 1H)，4. 42 (m, 1H)，4. 08 (m, 4H)，
3.96 (m, 2H)，3. 72 (m, 1H)，3. 48 (m, 1H)，3. 17 (m, 1H)，3. 00 (m, 2H)，2. 80 (m, 1H)，2. 50 (m, 2H)，
2.04 (m, 3H)，I. 91-1. 19(m，80H)，0. 87 (t, J = 5. 7Hz,6H).实施例43制备HCl His-Gly-Glu-Asp-[OCH2 (CH2)6CH3]-OCH2 (CH2)6CH3 (9a)按照HCl Asp [OCH2 (CH2) 6CH3] -OCH2 (CH2) 6CH3 的制备方法，从 200mg (0. 2mmol) Boc-His (Boc) -Gly-Glu (OBzl) -Asp-[OCH2 (CH2) 6CH3] -OCH2 (CH2) 6CH3制得HCl .His-Gly-Glu (OBzI) -Asp-[OCH2 (CH2) 6CH3] -OCH2 (CH2) 6CH3，将所得化合物置于IOOml茄形瓶中、用乙醇溶解、力口入适量Pd/C (约20% )、通H2(0. 02Mba)，室温搅拌至原料点消失。滤除Pd/C、滤液减压浓缩 至干。制得99. 6mg(73% )本实施例标题化合物，为褐色液体。ESI-MS (m/e) 681 [M+H]+ ；mp123-125 °C [a] D7 = -7.1 (c= 0.5, CH3OH). 1H-NMR (DMS0-d6，300MHz) 8 /ppm = 9. 02 (m,1H)，8. 88 (m, 1H)，8. 55 (m, 1H)，7. 50 (m, 1H)，4. 62 (m, 1H)，4. 33 (m, 2H)，4. 25 (m, 1H)，4. 00 (m,4H), 3. 91 (m, 1H), 3. 81 (m, 1H), 3. 75 (m, 1H), 2. 77 (m, 2H)，2. 30 (m, 2H)，I. 91 (m, 1H)，I. 76 (m,1H)，I. 52 (m, 4H)，I. 24-1. 15(m，22H)，0. 85 (t, J = 5. 7Hz,6H).实施例44制备HCl His-Gly-Glu-Asp-[OCH2 (CH2)8CH3]-OCH2 (CH2)8CH3 (9b)按照HCl Asp [OCH2 (CH2) 6CH3] -OCH2 (CH2) 6CH3 的制备方法，从 200mg (0. 2mmol) Boc-His (Boc) -Gly-Glu (OBzl) -Asp-[OCH2 (CH2) 8CH3] -OCH2 (CH2) 8CH3制得HCl .His-Gly-Glu (OBzI) -Asp-[OCH2 (CH2) 8CH3] -OCH2 (CH2) 8CH3，将所得化合物置于100ml茄形瓶中、用乙醇溶解、力口入适量Pd/C (约20% )、通H2(0. 02Mba)，室温搅拌至原料点消失。滤除Pd/C、滤液减压浓缩至干。制得110. 7mg(79% )本实施例标题化合物，为褐色固体。ESI-MS(m/e) 738[M+H]+；mp 133-133 0C [a] = -7.2 (c = 0.5, CH3OH). 1H-NMR (DMS0_d6，300MHz) 8 /ppm =
8.94 (m, 1H)，8. 54 (m, 1H)，7. 53 (m, 1H)，4. 65 (m, 1H)，4. 36 (m, 1H)，4. 23 (m, 1H) ,4. 01 (m, 5H)，
3.82 (m, 1H)，2. 94 (m, 1H)，2. 74 (m, 2H)，2. 26 (m, 2H)，I. 93 (m, 1H)，I. 82 (m, 1H)，I. 54 (m, 5H)，I. 24-1. 13(m，30H)，0. 85 (t, J = 5. 7Hz,6H).实施例45制备HCl His-Gly-Glu-Asp-[OCH2 (CH2) 10CH3] -OCH2 (CH2) 10CH3 (9c)按照HCl Asp [OCH2 (CH2) 6CH3] -OCH2 (CH2) 6CH3 的制备方法，从 200mg (0. 2mmol) Boc-His (Boc)-Gly-Glu (OBzl)-Asp-[OCH2 (CH2)10CH3]-OCH2 (CH2)10CH3 制得 HCl His-Gly-Glu(OBzl) -Asp-[OCH2 (CH2) 10CH3]-OCH2 (CH2) 10CH3,将所得化合物置于 100ml 茄形瓶中、用乙醇溶解、加入适量Pd/C(约20% )、通H2(0. 02Mba)，室温搅拌至原料点消失。滤除Pd/C、滤液减压浓缩至干。制得102. 5mg(71% )本实施例标题化合物，为无色固体。ESI-MS(m/e) 738 [M+H]+ ；mp 168-171 °C [a] = -6.6 (c = 0.5, CH3OH). 1H-NMR (DMS0_d6，300MHz)8 /ppm = 9. 06 (m, 1H)，8. 56 (m, 1H)，7. 53 (s, 1H)，4. 65 (m, 1H)，4. 36 (m, 1H)，4. 24 (m, 1H)，
4.00 (m, 5H)，3. 82 (m, 1H)，2. 73 (m, 2H)，2. 23 (m, 1H)，2. 27 (m, 1H)，I. 91 (m, 1H)，I. 78 (m, 1H)，I. 54(m，4H)，I. 23-1. 15(m，37H)，0. 85 (t, J = 5. 7Hz,6H).实施例46制备HCl His-Gly-Glu-Asp-[OCH2 (CH2) 12CH3] -OCH2 (CH2) 12CH3(9d)
按照HCl Asp [OCH2 (CH2) 6CH3] -OCH2 (CH2) 6CH3 的制备方法，从 200mg (0. 2mmol) Boc-His (Boc)-Gly-Glu (OBzl)-Asp-[OCH2 (CH2)12CH3]-OCH2 (CH2)12CH3 制得 HCl His-Gly-Glu(OBzl) -Asp-[OCH2 (CH2) 12CH3]-OCH2 (CH2) 12CH3，将所得化合物置于 IOOml 茄形瓶中、用乙醇溶解、加入适量Pd/C(约20% )、通H2(0. 02Mba)，室温搅拌至原料点消失。滤除Pd/C、滤液减压浓缩至干。制得105. 3mg(69% )本实施例标题化合物，为无色固体。ESI_MS(m/e) 850 [M+H]+ ；mp 173-175 °C [a] = -8.7 (c = 0.5, CH3OH). 1H-NMR (DMS0_d6，300MHz)8 /ppm = 8. 89 (m, 1H)，8. 55 (m, 1H)，7. 46 (m, 1H)，4. 63 (m, 1H)，4. 37 (m, 1H)，4. 25 (m, 1H)，4. 00 (m, 4H)，3. 92 (m, 1H)，3. 82 (m, 1H)，3. 76 (m, 1H)，2. 28 (m, 2H)，I. 92 (m, 1H)，I. 78 (m, 1H)，
I.54(m，4H)，I. 23-1. 15(m，46H)，0. 85 (t, J = 5. 7Hz,6H).实施例47制备HCl His-Gly-Glu-Asp-[OCH2 (CH2) 14CH3] -OCH2 (CH2) 14CH3(9e)
按照 HCl Asp [OCH2 (CH2) 6CH3] -OCH2 (CH2) 6CH3 的制备方法，从 200mg (0. 2mmol) Boc-His (Boc)-Gly-Glu (OBzl)-Asp-[OCH2 (CH2)14CH3]-OCH2 (CH2)14CH3 制得 HCl His-Gly-Glu (OBzl)-Asp-[OCH2 (CH2)14CH3]-OCH2 (CH2)14CH3,将所得化合物置于 IOOml 茄形瓶中、用乙醇溶解、加入适量Pd/C(约20% )、通H2(0. 02Mba)，室温搅拌至原料点消失。滤除Pd/C、滤液减压浓缩至干。制得98. 4mg(64% )本实施例标题化合物，为无色固体。ESI_MS(m/e) 906 [M+H]+ ；mp 173-174 °C [a] ^7= -26.8 (c = 0.5, CH3OH). 1H-NMR(DMS0_d6，300MHz)8 /ppm = 8. 99 (m, 1H)，8. 94 (m, 1H)，8. 56 (m, 1H)，8. 42 (m, 1H)，8. 14 (m, 1H)，7. 48 (m, 1H)，
4.62 (m, 4H)，4. 36 (m, 1H)，4. 28 (m, 1H)，4. 00 (m, 8H)，2. 74 (m, 2H)，2. 27 (m, 2H)，I. 91 (m, 3H)，
1.54-1. 10(m，57H)，0. 85 (t, J = 5. 7Hz,6H).实施例48制备HCl His-Gly-Glu-Asp-[OCH2 (CH2) 16CH3]-OCH2 (CH2) 16CH3 (9f)按照HCl Asp [OCH2 (CH2) 6CH3] -OCH2 (CH2) 6CH3 的制备方法，从 200mg (0. 2mmol) Boc-His (Boc) -Gly-Glu (OBzl) -Asp-[OCH2 (CH2) 16CH3] -OCH2 (CH2) 16CH3制得HCl .His-Gly-Glu (OBzl) -Asp-[OCH2 (CH2) 16CH3] -OCH2 (CH2) 16CH3，将所得化合物置于IOOml茄形瓶中、用乙醇溶解、加入适量Pd/C (约20% )、通H2(0. 02Mba)，室温搅拌至原料点消失。滤除Pd/C、滤液减压浓缩至干。制得100. 4mg(65% )本实施例标题化合物，为无色固体。ESI-MS (m/e) :961 [M+H]+ ；mp 183-184 °C [a] = -27.4 (c = 0.5, CH3OH). 1H-Nmr(Dmso-CI6JoomHz) 8 /ppm =
8.99 (m, 3H)，8. 53 (m, 2H)，7. 48 (m, 2H)，5. 66 (m, 2H)，4. 66 (m, 1H)，4. 32 (m, 2H)，4. 00 (m, 8H)，
2.96 (m, 1H), 2. 74 (m, 2H), 2. 25 (m, 2H)，I. 91-1. 10(m，75H)，0. 85 (t, J = 5. 7Hz,6H).实施例49双饱和脂肪链醇His-Gly-Glu-Asp四肽酯对小鼠脾淋巴细胞丝裂原增殖的抑制作用脱颈处死小鼠，无菌取脾，用200目钢网和注射器芯研磨，用PBS液洗两次，1500转/分条件下离心10分钟，计数后用完全RPMI-1640培养液配成脾细胞5 X IO6AiL的细胞悬液，加100 u L细胞悬液于96孔培养板中(每空含5 X IO5个细胞)。每孔加20 ii L刀豆蛋白(ConA终浓度为5 u g/mL)，该96孔细胞培养板置于体积分数为0. 05的CO2饱和湿度的培养箱内37°C培养4h。4h后按预设的浓度梯度加入待测、经灭菌处理的样品(1X10_4，8 X 1(T5，5 X 1(T5，2 X 1(T5，I X 1(T5，8 X 10' 5 X 10' I X 1(T6)，每个浓度 3 个复孔，对照组加入等体积的溶解样品的溶媒。同时设不含化合物对照孔和只含同量培养液无ConA的细胞空白孔。各个孔均重复3次(n = 3)。培养48h后用MTT法检测化合物对脾淋巴细胞的抑制作用。按照公式“抑制率=(D对照-D含药)/D对照X 100%”计算不同浓度的化合物对脾淋巴细胞增殖的抑制作用，根据细胞相对生存率和化合物的浓度绘制细胞生长曲线，利用该生长曲线求得半数抑制率(dxIC5ci)。结果列入表1，结果表明本发明的双饱和脂肪链醇His-Gly-Glu-Asp四肽酯对小鼠脾淋巴细胞增殖有明确的抑制作用。表I 9a_f对小鼠脾淋巴细胞丝裂原增殖的抑制作用
化合物名 IC5Q ( IO-5M )
称
CsA1.7 ±0.3
9a25.4 ±3.2·9b25.4 ±4.0
9c 12.7 ±0.6 9d 18.5 ± 1.5 9e 10.3 ±3.6 9f_8.2 士 3.9注CsA为环孢菌素，n = 3实施例50双饱和脂肪链醇His-Gly-Glu-Asp四肽酯对巨噬细胞吞噬的抑制作用将生长状态良好、处于对数生长期的Ana-I小鼠巨噬细胞以I X IO5个/mL的密度接种于96孔板，每孔100 u L，37°C、5% CO2培养箱中培养4小时，按预设的浓度梯度加入待测、经灭菌处理的样品(1X10_4,8X10_5,5X10_5,2X10_5,1X10_5,8X10_6,5X10_6,
IX 10_6)，每个浓度3个复孔，对照组加入等体积的溶解样品的溶媒。继续培养24小时后，吸弃上清液，每孔加入50 ii L 0. 1%的中性红溶液，置于37°C孵育30分钟。吸弃中性红溶液，并用PBS缓冲溶液洗涤2-3次(除去未被巨噬细胞吞噬的中性红)，加入细胞溶解液(乙醇乙酸=I 1)501^，41过夜，酶标仪检测吸光度值，波长54()11111。各个孔均重复3次(n = 3)。按照公式“抑制率=(D对照-D含药)/D对照X100%”计算不同浓度的化合物对巨噬细胞的吞噬能力的抑制作用，根据细胞相对生存率和化合物的浓度绘制细胞生长曲线，利用该生长曲线求得半数抑制率(dxIC5ci)。结果列入表2，结果表明本发明的双饱和脂肪链醇His-Gly-Glu-Asp四肽酯对Ana-I小鼠巨噬细胞吞噬有明确的抑制作用。表2 9a_f对小鼠巨噬细胞吞噬的抑制作用
权利要求
1.通式I的6种具有免疫抑制活性的双饱和脂肪链醇His-Gly-Glu-Asp四肽酯His-Gly-Glu-Asp [OCH2 (CH2) nCH3] -OCH2 (CH2) nCH3 I 通式 I 中的 n = 6、8、10、12、14 或 16。
2.一种制备权利要求I所述的的双饱和脂肪链醇His-Gly-Glu-Asp四肽酯的方法，其特征在于，包括以下步骤 (1)在(Boc)20和NaOH存在下将甘氨酸转化为N-叔丁氧羰基甘氨酸； (2)在(Boc)20和NaOH存在下将天冬氨酸转化为N-叔丁氧羰基天冬氨酸； (3)在(Boc)2O和三乙胺存在下将组氨酸转化为N-叔丁氧羰基-Nim-叔丁氧羰基-组氨酸； (4)在二环己基羰二亚胺、N-羟基苯并三氮唑、无水四氢呋喃存在下将N-叔丁氧羰基天冬氨酸与两倍量的饱和脂肪醇缩合，生成双饱和脂肪醇N-叔丁氧羰基天冬氨酸酯； (5)在氯化氢-乙酸乙酯中将双饱和脂肪醇N-叔丁氧羰基天冬氨酸酯脱除叔丁氧羰保护基，生成双饱和脂肪醇天冬氨酸酯； (4)在二环己基羰二亚胺、N-羟基苯并三氮唑、无水四氢呋喃存在下将N°-叔丁氧羰基苄基谷氨酸与双饱和脂肪醇天冬氨酸酯缩合，生成双饱和脂肪醇N°-叔丁氧羰基苄氧基谷氨酸天冬氨酸酯； (6)在氯化氢-乙酸乙酯中将双饱和脂肪醇N°-叔丁氧羰基苄氧基谷氨酸天冬氨酸酯脱除叔丁氧羰保护基，生成双饱和脂肪醇苄氧基谷氨酰天冬氨酸酯； (7)在无水四氢呋喃中，在二环己基羰二亚胺和N-羟基苯并三氮唑存在下将双饱和脂肪醇苄氧基谷氨酰天冬氨酸酯与N-叔丁氧羰基甘氨酸缩合，生成双饱和脂肪醇N-叔丁氧羰基甘氨酰苄氧基谷氨酰天冬氨酸酯； (8)在氯化氢-乙酸乙酯存在下将双饱和脂肪醇N-叔丁氧羰基甘氨酰苄基谷氨酰天冬氨酸酯脱除叔丁氧羰基，生成双饱和脂肪醇甘氨酰苄氧基谷氨酰天冬氨酸酯； (9)在无水四氢呋喃中，在二环己基羰二亚胺和N-羟基苯并三氮唑存在下将双饱和脂肪醇甘氨酰苄氧基谷氨酰天冬氨酸酯与N-叔丁氧羰基-Nim-叔丁氧羰基-组氨酸缩合，生成双饱和脂肪醇N-叔丁氧羰基-Nim-叔丁氧羰基组氨酰甘氨酰苄氧基谷氨酰天冬氨酸酯； (10)在氯化氢-乙酸乙酯中将双饱和脂肪醇N-叔丁氧羰基-Nim-叔丁氧羰基组氨酰甘氨酰苄氧基谷氨酰天冬氨酸酯脱除叔丁氧羰基，生成双饱和脂肪醇组氨酰甘氨酰苄氧基谷氨酰天冬氨酸酯； (11)在无水乙醇中，在Pd/C存在下将双饱和脂肪醇组氨酰甘氨酰苄氧基谷氨酰天冬氨酸酯氢解，生成双饱和脂肪醇组氨酰甘氨酰谷氨酰天冬氨酸酯，即得。
3.权利要求I的所述的6种双饱和脂肪链醇His-Gly-Glu-Asp四肽酯在制备具有免疫抑制剂中的用途。
4.权利要求I的所述的6种双饱和脂肪链醇His-Gly-Glu-Asp四肽酯在制备免疫抑制药质体中的用途。
5.权利要求I的所述的6种双饱和脂肪链醇His-Gly-Glu-Asp四肽酯在制备微乳或脂质体靶向药物中的用途。
全文摘要
本发明涉及通式I的6种具有免疫抑制活性的饱和脂肪链醇His-Gly-Glu-Asp四肽酯，在饱和脂肪链醇中n＝6、8、10、12、14或16，还涉及它们的制备方法，本发明通过研究所述的饱和脂肪链醇对脾淋巴细胞丝裂原增殖反应的抑制作用、对巨噬细胞吞噬活性的抑制作用以及对小鼠耳后心肌移植后的存活时间，实验结果进一步表明本发明的化合物具有优秀的免疫抑制作用，在制备免疫抑制药物中具有广泛的应用前景。His-Gly-Glu-Asp[OCH2(CH2)nCH3]-OCH2(CH2)nCH3 I。
文档编号A61K38/07GK102796171SQ20111014177
公开日2012年11月28日 申请日期2011年5月27日 优先权日2011年5月27日
发明者彭师奇, 赵明, 李婕 申请人:首都医科大学