专利名称：一种人体外用复方制剂及其用途的制作方法
技术领域：
本发明为人用制剂技术领域，制剂含有的活性成分为植物凝集素和银耳多糖，主要供人类在性行为过程中外用，起避孕、防治性传播疾病和润滑作用。
背景技术：
凝集素(PHA)是一种非免疫源性的蛋白质或糖蛋白，在动物、植物及微生物(如细菌、病毒)中广泛存在。豆科植物的凝集素由2个或4个单体组成，每个单体的分子量为 25 30KD，有一个结合糖位点。凝集素不仅具有凝集诸如血细胞、淋巴细胞、精子细胞等作用，而且参与了生物体内的一些重要生理和药理过程，因此是研究生物体内细胞癌变、受精、分化及分子识别等生命过程极其有用的工具，同时在临床医学检验上有着重要地位，而且是抗肿瘤药物(如干扰素、白细胞介素-2等)生产所需的促有丝分裂原。近来还报道某些凝集素对艾滋病毒等也有抑制作用，并应用于试验性治疗。性行为是绝大多数人一生中生命活动的一个重要组成部分。除少数性行为与生殖相关外，绝大多数的性活动都与生殖无关。目前，与世界上其他国家和地区一样，我国性传播疾病(sexual transmitted diseases, STDs)患者人数急剧增加，其中艾滋病(AIDS)已进入快速增长期。由于缺乏有效的疫苗来预防HIV的感染，而避孕套又有其自身的缺陷， 近年来一类被称为杀微生物剂(microbicides)的药物研究开发已被联合国艾滋病规划署 (UNAIDS)和世界卫生组织(WHO)定为全球优先发展的策略。杀微生物剂是一种含有抗HIV/ STDs成分的凝胶、乳脂、栓剂、药膜或海绵，在性交前置入阴道，以预防HIV或STDs的性传播。杀微生物剂的最大优点在于妇女能够自主使用，另外也不象避孕套那样在性交过程中存在一层隔膜，因而在男性和女性中都有很高的可接受性。调查显示在我国，每年人工流产约达1300万人次，其中24. 9%到42. 7%是未生育妇女。在全国近1亿的20至四岁女性中，超过27%做过人流，人流率约62%。。造成人流的主要原因除避孕失败外，有3%的女性是因为未采取任何避孕措施。因此，研究和开发方便有效的非留体的避孕药具有迫切和重要的意义。目前，已有的避孕药一类是通过口服或注射给药的留体激素类药物，另一类是对精子产生直接杀灭作用的药物如N-9等。在高度特异性、非留体激素方面还缺乏相应的药物和产品。从已有的实验结果及相关研究表明，植物凝集素类很有发展潜能。最早进入临床试验的杀精子(以及杀微生物)剂是壬苯醇醚(N-9或N29)，此药是已被批准多年的阴道用杀精剂，体外研究表明能有效杀灭HIV、生殖器疱疹病毒、沙眼衣原体和淋病奈瑟氏菌等病原体。2000年，N-9作为杀微生物剂完成了 III期临床试验，然而统计结果表明，使用N-9凝胶后HIV感染率高于安慰剂对照组，尤其是在使用频率高的受试者中，感染率竟然高出了 1倍多。至2008年，有20个杀微生物剂产品已进入临床试验的各个阶段，其中6个已结束或正进行IIB/III期大规模临床试验，有4个已经宣布失败或被中止(N-9、Savvy, Ushercell和Carraguard)，另外2个还在进行中(PR0-2000和BufferGel)。南非医学研究会发表研究报告称，至2008年9月，来自南非、津巴布韦、马拉维、赞比亚和美国5个国家的 3 099名妇女参与有关PR0-2000和BufferGel的试验。结果表明，BufferGel基本上无预防HIV感染的作用，而PR02000可以使HIV感染率下降30%。但是，在2009年12月结束的实验表明，Pro 2000凝胶没有证据显示在试验的0. 5和2%的浓度能降低感染艾滋病病毒 (HIV)的危险。英国医学理事会(MRC)在2009年12月的声明中称，目前为止，没有任何凝胶类杀微生物产品被证明能有效预防艾滋病感染，此次实验也彻底证明，Pro 2000对预防艾滋病没有任何益处。但该三期临床研究的主要研究人员认为，该研究依然为正在进行中的更有效的抗HIV凝胶临床试验提供了一些有用的信息。至少应用药物凝胶作为预防HIV传播的策略，受到妇女的欢迎。以往的研究表明，植物凝集素可以使动物的血细胞和精子发生凝集；在体外细胞培养中，植物凝集素可以使淋巴细胞增殖；在整体实验中，植物凝集素可提高机体的免疫能力。因此，植物凝集素是具有高度特异性的活性避孕成份。它符合世界卫生组织(WHO)提出的的要求，即发展非留体避孕药，使女性避免激素不平衡的并发症，以及发展成为妇科肿瘤的危险。例如可见文献“白芸豆植物凝集素对不同物种精子的凝集作用与抗孕效果研究”(《中国计划生育学杂志》，2010年5期，作者王昌梅，张丽芬，杨明洁，张田，王敏康)。本发明制剂中另一种重要的活性组份为植物多糖，特别是来源于银耳(拉丁文 Tremella fuciformis Berk.；英文:jelly fungi)的植物多糖。银耳多糖具有抗病毒、免疫调节、抗肿瘤、抗突变、降血脂和抗辐射等作用。植物多糖大多具有良好水溶性，具有一定保健功能及起到一定的增稠、稳定作用。银耳多糖作为避孕润滑剂基质使用可以具有润滑， 营养皮肤粘膜和稳定制剂的作用。
发明内容
本发明的目的是提供一种人体外用复方制剂及其用途，复方制剂主要供人类在性行为过程中外用，同时具有避孕、防治性传播疾病和润滑的作用。本发明复方制剂的特征在于以植物凝集素和银耳多糖为活性组分，制剂中所含两种活性组分之间的相对重量份额为植物凝集素0. 5 1. 0份，银耳多糖1. 5 3. 0份。本发明复方制剂可以是凝胶液，其特征在于在IOOml凝胶液中含有如下组分植物凝集素0. 5 1.0克，银耳多糖1.5 3.0克，NaCl 0.8 0.9 克，pH缓冲剂药学上凝胶液可以接受的量，稳定剂药学上凝胶液可以接受的量，防腐剂药学上凝胶液可以接受的量。本发明复方制剂的剂型也可以是水溶性的固体，其特征在于制剂中所含两种活性组分之间的相对重量份额为植物凝集素0. 5 1. 0份，银耳多糖1. 5 3. 0份，并含有相应剂型的赋型剂和药学上可以接受量的一种或多种辅料。所述辅料包括药学领域常规的稀释剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、吸收促进剂、缓蚀剂，表面活性剂、润滑剂或稳定剂等。水溶性的固体剂型可以是栓剂，崩解片等适于外用的药物剂型。
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本发明复方制剂以凝胶液为优选剂型。本发明复方制剂中的植物凝集素可以是豆类植物凝集素，也可以是包括板蓝根等非豆科植物的植物凝集素，但最好是芸豆植物凝集素。芸豆植物凝集素主要包括白芸豆，红芸豆，紫花芸豆等豆类植物凝集素。凝集素的实验证明，植物凝集素较低浓度时(彡2mg/ml)对不同动物包括人的精液具有凝集作用，在高浓度(>ang/ml)时对精子有制动和杀死作用。同时在受精早期具有终止早孕的作用，整体应用时可提高机体的免疫能力。本发明复方制剂的避孕原理是1.凝集精子而使其失去运动能力；2.精子和卵母细胞(卵子)表面有许多糖基，植物凝集素分子可以选择性地和它们结合，封闭或遮盖精卵结合的位点，使精-卵无法结合受精。植物凝集素和银耳多糖的组合不仅不会降低植物凝集素和银耳多糖各自的效果， 而且可以相互协同，发挥二者的优势。通过植物凝集素和银耳多糖的协同作用，让具有的避孕、防治性传播疾病和润滑作用更易于实现，更有效。本发明复方制剂的用途1、供人类在性行为过程中外用，同时具有避孕、防治性传播疾病和润滑的作用。凝胶液使用时可直接涂抹于阴道，阴茎或肛门内外，使用量可以从Iml到5ml。可以在性活动前，性活动中使用，起避孕、预防性传播疾病和润滑作用，还可终止早孕和增强免疫力。最好是在性活动前使用。2、由于复方制剂有嫩肤、保湿和淡化色斑的作用，对皮肤表面创伤和烫伤有促进愈合的作用，具有抗疱疹病毒的作用，并可增强机体的细胞免疫功能，因此也可作为皮肤保养品使用。下面通过实验对本发明作进一步说明。下述实验中所用方法如无特别说明均为常规方法。实验1、白芸豆等凝集素的提取、纯化和活性测定。(1)白芸豆等凝集素的提取和纯化采用申请号为200910094233. 1的中国专利文件所公开的技术进行，蛋白质含量采用通用的双缩脲法进行测定。(2)凝集素(PHA)活性测定·将浓缩的植物凝集素提取液或干粉用pH = 6. 8 7. 0的磷酸缓冲液配制成Img/ ml的浓度。采用96孔培养板，取100 μ 1上述磷酸缓冲液分别加入1_8孔中，然后取100 μ 1 浓度为lmg/ml的植物凝集素提取物加入96孔板的第一孔，充分混勻(吹吸5次)，然后吸取100 μ 1加入第二孔，充分混勻，再取100 μ 1加入第三孔，充分混勻，依次加入到第八孔。 得到倍比稀释的PHA磷酸缓冲液。然后从1 8孔顺序各取50 μ 1加入9孔血凝板中，留最后一孔为对照。取混勻的2%新鲜或醛化的兔或人的红细胞50 μ 1分别加入1 9孔血凝板，再取50 μ 1磷酸缓冲液加入血凝板的第9孔为对照组。室温25°C放置1小时，肉眼或显微镜观察凝血情况。一般情况下，以此技术提取的凝集素的效价在7. 8-15. 6 μ g之间，即 1/64-1/U8。实验2、低浓度和高浓度凝集素集对精子的凝集、制动和杀死作用。(1)不同浓度PHA对精子的作用。
分别采用人，小鼠，牛，羊和兔的精子作为实验材料。其中牛，羊精子为冻精(云南省种畜场)。从液氮灌中取出后，分别用37°C和38°C的水浴解冻，并用预温的BO(含3% BSA, 10 μ g/ml肝素，5mM咖啡因)液或SOF培养液稀释，1000转/min离心洗涤3次，调节精子密度50 80 X 106/ml，pH(7. 6 士0. 4)，检测精子活力及相关指标。人精子样本取自成年健康男子(年龄25 38岁)，禁欲3 7天，手淫法取精液于洁净试管内，37°C，0.5小时内液化后置于EF液4°C保存，使用前用Bffff液复苏，光镜下常规检查，调节精子浓度为50 80 XlOfVml，pH (7.6 士0. 4)。小鼠精子为鲜精，取8 15周龄昆明白小鼠，麻醉后取附睾尾部精子，置于T6培养液37 °C培养待精子释放后调节精子密度50 80 X 106/ml，pH (7. 6 士 0. 4)，检测精子活力及相关指标。兔精子为鲜精，取性成熟家兔附睾尾部精子，置于T6或M16培养液37°C培养待精子释放后调节精子密度50 80X 106/ml，pH(7. 6士0. 4)，检测精子活力及相关指标。将PHA 用 PBS 配制成 160、320、640、1000、1280、2000、3000、4000 μ g/ml 浓度，实验时将含有不同物种精子的培养液与PHA按1 l(v/v)加入。所以实际培养液中PHA浓度分别为:80，160，320，500，640，1000，1500，2000 μ g/ml。微镜观察精子发生凝集或制动的时间。划分标准参照郭晓慧等并作修改。根据实验结果可将凝集素浓度分为低浓度组及高浓度组。即把PHA为1000 μ g/ml 以下定义为低浓度，而等于或高于1000 μ g/ml为高浓度PHA。在低浓度PHA条件下，精子未凝集时用“_”表示，凝集用“ + ” ；在高浓度PHA条件下，精子完全被制动而不发生凝集用 “0”表示。“0”和“-”的区别在于前者会随时间的延长发生凝集，而后者不发生凝集并逐渐死亡。实验结果见下面的表。芸豆植物凝集素对人精子的凝集
权利要求
1.一种人体外用复方制剂，其特征在于以植物凝集素和银耳多糖为活性组分，制剂中所含两种活性组分之间的相对重量份额为植物凝集素0. 5 1. 0份，银耳多糖1. 5 3.0 份。
2.如权利要求1所说的人体外用复方制剂，其特征在于所说植物凝集素是芸豆植物凝集素。
3.如权利要求1所说的人体外用复方制剂，其特征在于IOOml凝胶液中含有如下组分植物凝集素0. 5 1. 0克，银耳多糖1.5 3.0克，NaCl 0. 8 0. 9 克，PH缓冲剂药学上凝胶液可以接受的量，稳定剂 药学上凝胶液可以接受的量，防腐剂 药学上凝胶液可以接受的量。
4.如权利要求1所说的人体外用复方制剂，其特征在于剂型为水溶性的固体，含有相应剂型的赋型剂和药学上可以接受量的一种或多种辅料。
5.如权利要求1所说的人体外用复方制剂的用途，其特征在于供人类在性行为过程中外用，同时具有避孕、防治性传播疾病和润滑的作用。
6.如权利要求1所说的人体外用复方制剂的用途，其特征在于作为皮肤保养品使用。
全文摘要
一种人体外用复方制剂及其用途，为人用制剂技术领域。以植物凝集素和银耳多糖为活性组分，制剂中所含两种活性组分之间的相对重量份额为植物凝集素0.5～1.0份，银耳多糖1.5～3.0份。所说植物凝集素最好是芸豆植物凝集素。剂型优选凝胶液，100ml凝胶液中含有植物凝集素0.5～1.0克，银耳多糖1.5～3.0克，NaCl 0.8～0.9克，以及pH缓冲剂，稳定剂，防腐剂。制剂主要供人类在性行为过程中外用，同时具有避孕、防治性传播疾病和润滑的作用；也可作为皮肤保养品。其作用原理是全新的，不会对人体内分泌系统产生影响；可干扰和阻止包括HIV病毒和其它病原体入侵体内正常细胞；安全性极高。
文档编号A61K47/36GK102274486SQ20111018406
公开日2011年12月14日 申请日期2011年7月1日 优先权日2011年7月1日
发明者张丽芬, 王敏康, 王昌梅, 赵红 申请人:云南师范大学