专利名称：一种茯苓酸性多糖提取物的制备方法及应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及中药有效成分的制备方法及其应用，更具体涉及一种茯苓酸性多糖提取物的制备方法及其在制备免疫增强药物中的应用。
背景技术：
茯苓Poria cocosGctiw.) Wolf为常用中药，自古以来药食两用。史载于《神农本草经》，被列为上品，为多孔菌科真菌Poria cocos (Schw. )ffolf的干燥菌核。性味甘淡，平， 归入心脾肺经。具有祛湿利水、健脾和胃、宁心安神的作用。临床用于治疗小便不利，水肿胀满，痰饮咳逆，呕秽，泄泻，遗精，淋浊，惊悸，健忘等。茯苓的主要成份为茯苓多糖、三萜类化合物、蛋白质、脂肪及无机盐等。其中茯苓多糖和三萜为其主要活性成分，国内外学者对茯苓多糖、三萜等成份的药理作用及临床应用方面作了较多的研究，并且有了较大的进展。研究表明，茯苓多糖具有抗肿瘤作用，能增高老年患者体液免疫功能，降低白血病放疗中产生的副作用。茯苓中酸性多糖含量占茯苓药材中50%以上，为水不溶性成分，但临床应用中多采用水煎煮提取的方法，药理学研究也主要针对的是茯苓中水溶性部分，对其碱溶性部分研究甚少，从而造成了茯苓中有效成分的损失。结合现代化学与药理研究成果，对茯苓多糖类成分加以开发利用，发掘新药，将对传统中药茯苓的开发与应用有现实意义。
发明内容
本发明的一个目的是提供了一种茯苓酸性多糖提取物的制备方法。本发明的另一个目的是提供了一种上述方法制备的茯苓酸性多糖提取物在制备具有免疫调节作用的药物中的应用。为了实现上述第一个目的，本发明采用的技术措施如下一种茯苓酸性多糖提取物的制备方法，其步骤如下(1)称取茯苓，按照其重量的4-8倍加入浓度为60 80V/V%的乙醇浸泡3_12小时；(2)浸泡后回流提取1-3次，每次时间为1-2小时，过滤，弃提取液，得滤渣；在步骤(1)的浸泡完成后直接加热进行第一次回流提取，提取完后分离出提取液，后续每次提取时加入8倍原料茯苓重量的70v/v%的乙醇作为提取剂；(3)将步骤O)的滤渣加4-10倍重量的水浸泡3-12小时，浸泡后回流提取1_3 次，每次时间为1-3小时，过滤，弃提取液，得滤渣；在步骤(3)的浸泡完成后直接加热进行第一次回流提取，提取完后分离出提取液，后续每次提取时再加入4-10倍步骤O)的滤渣重量的水作为提取剂；(4)将步骤(3)得到的滤渣碾碎，加入其重量30-70倍的0. 1-0. 5mol/L NaOH溶液搅拌提取30-120min，过滤，滤液加2wt% HCl中和至中性，离心分离出沉淀，再用水洗沉淀以除盐，得沉淀；
(5)将步骤(4)所得沉淀经喷雾干燥，即得茯苓酸性多糖提取物产品。在步骤(1)⑵中，乙醇回流提取的目的在于分离出茯苓三萜类成分。在步骤(3)中，水回流提取的目的在于分离出茯苓水溶性多糖。在步骤⑷中，NaOH的最佳浓度为0. 5mol/L，其最佳用量为步骤(3)得到的滤渣重量的70倍。在步骤(5)中，所述的喷雾干燥操作条件如下进风口温度为175°C，出风口温度为90°C，雾化盘转速为29040转/分钟。利用上述制备方法得到的茯苓酸性多糖提取物中多糖含量以葡萄糖计为 1. 9-50. Owt %。上述方法制备得到的茯苓酸性多糖提取物可用于制备免疫增强药物。与现有技术相比，本发明的优点和有益效果在于本发明提高了茯苓药材的利用率，开辟了其新的药用途径。本发明所得的茯苓酸性多糖提取物具有很好的调节免疫功能的作用。不仅可单独使用还可以与其他药物配伍联合使用。
具体实施例方式下面结合具体的实施例进一步阐述本发明的方法及其应用。茯苓是一种常用中药材，一般以饮片的形式使用，该药材可从各茯苓产地直接购得，本发明方法中使用到的茯苓片购自有“茯苓之乡”之称的湖北省罗田县九资河镇。实施例1 一种茯苓酸性多糖提取物的制备方法，步骤如下(1)称取茯苓片，按照其重量的8倍加入浓度为70V/V%的乙醇浸泡12小时；(2)浸泡后回流提取2次，第一次为池，第二次为Ih (第二次提取时加入茯苓片重量8倍的70V/V%乙醇)，过滤，得到滤渣；(3)加入8倍步骤⑵滤渣重量的水浸泡12h ；(4)浸泡后回流提取3次，每次提取lh，后两次提取用水量依次为步骤( 滤渣重量的6倍和4倍；过滤，得到滤渣；(5)将滤渣碾碎，加入70倍步骤(4)所得滤渣重量的0. 5mol/L的NaOH搅拌提取 Ih;过滤，得滤液;(6)向上述滤液中加入2wt% HCl中和至中性，离心得到茯苓酸性多糖粗品；(7)将上述茯苓酸性多糖粗品三次水洗离心后，得沉淀，再将所得沉淀喷雾干燥， 即得茯苓酸性多糖提取物。经测试，制得的茯苓酸性多糖提取物中，多糖的含量为21. 8wt% (以葡萄糖计)， 干膏得率为5% (重量)。实施例2 一种茯苓酸性多糖提取物的制备方法，步骤如下(1)称取茯苓片，按照其重量的4倍加入浓度为80V/V%的乙醇浸泡10小时；(2)浸泡后回流提取2次，第一次为池，第二次为Ih (第二次提取时加入茯苓片重量8倍的70V/V%乙醇)，过滤，得到滤渣；
(3)加入10倍步骤⑵滤渣重量的水浸泡他；(4)浸泡后回流提取3次，每次提取lh，后两次提取用水量依次为步骤( 滤渣重量的8倍和6倍；过滤，得到滤渣；(5)将滤渣碾碎，加入70倍步骤(4)所得滤渣重量的0. 2mol/L的NaOH搅拌提取 Ih;过滤，得滤液;(6)向上述滤液中加入2wt% HCl中和至中性，离心得到茯苓酸性多糖粗品；(7)将上述茯苓酸性多糖粗品四次水洗离心后，得沉淀，再将所得沉淀喷雾干燥， 即得茯苓酸性多糖提取物。经测试，制得的茯苓酸性多糖提取物中，多糖的含量为1. 7wt% (以葡萄糖计)，干膏得率为9. 8% (重量)。实施例3 一种茯苓酸性多糖提取物的制备方法，步骤如下(1)称取茯苓片，按照其重量的7倍加入浓度为70V/V%的乙醇浸泡6小时；(2)浸泡后回流提取2次，第一次为池，第二次为Ih (第二次提取时加入茯苓片重量8倍的70V/V%乙醇)，过滤，得到滤渣；(3)加入8倍步骤⑵滤渣重量的水浸泡Mi ；(4)浸泡后回流提取3次，每次提取lh，后两次提取用水量依次为步骤( 滤渣重量的4倍和6倍；过滤，得到滤渣；(5)将滤渣碾碎，加入70倍步骤(4)所得滤渣重量的0. 2mol/L的NaOH搅拌提取 2h;过滤，得滤液;(6)向上述滤液中加入2wt% HCl中和至中性，离心得到茯苓酸性多糖粗品；(7)将上述茯苓酸性多糖粗品五次水洗离心后，得沉淀，再将所得沉淀喷雾干燥， 即得茯苓酸性多糖提取物。经测试，制得的茯苓酸性多糖提取物中，多糖的含量为1.69wt% (以葡萄糖计)， 干膏得率为9. 8% (重量)。实施例4 一种茯苓酸性多糖提取物的制备方法，步骤如下(1)称取茯苓片，按照其重量的6倍加入浓度为60V/V%的乙醇浸泡3小时；(2)浸泡后回流提取2次，第一次为池，第二次为Ih (第二次提取时加入茯苓片重量8倍的70V/V%乙醇)，过滤，得到滤渣；(3)加入8倍步骤⑵滤渣重量的水浸泡池；(4)浸泡后回流提取3次，每次提取lh，后两次提取用水量依次为步骤( 滤渣重量的4倍和6倍；过滤，得到滤渣；(5)将滤渣碾碎，加入70倍步骤(4)所得滤渣重量的0. 5mol/L的NaOH搅拌提取 1.5h;过滤，得滤液;(6)向上述滤液中加入2wt% HCl中和至中性，离心得到茯苓酸性多糖粗品；(7)将上述茯苓酸性多糖粗品三次水洗离心后，得沉淀，再将所得沉淀喷雾干燥， 即得茯苓酸性多糖提取物。经测试，制得的茯苓酸性多糖提取物中，多糖的含量为23. 6wt% (以葡萄糖计)，干膏得率为25.0% (重量)。实施例5 中试放大实验一种茯苓酸性多糖提取物的制备方法称取茯苓片20kg，加入其8倍重量的70V/V%乙醇浸泡12小时后，回流提取两次， 第一次池，第二次加入8倍原料茯苓片重量的70v/v%乙醇回流提取lh，过滤；向滤渣中加入其8倍重量的水浸泡12h，回流提取3次(后两次提取时加水量与第一次同)，每次lh， 过滤，得滤渣；将滤渣碾碎，加入70倍滤渣重量的0. 5mol/LNa0H搅拌提取lh，过滤，滤液加 2wt% HCl中和至中性，离心得到的茯苓酸性多糖粗品经三次水洗除盐后，再喷雾干燥，收集干燥物，即得茯苓酸性多糖提取物中试产品，密封，称重，置于干燥处保存。三批中试放大实验结果见表1。表1三批中试放大试验结果表
权利要求
1.一种茯苓酸性多糖提取物的制备方法，步骤如下(1)称取茯苓，按照其重量的4-8倍加入浓度为60-80V/V%的乙醇浸泡3-12小时；(2)浸泡后回流提取1-3次，每次时间为1-2小时，过滤，得滤渣；在步骤(1)的浸泡完成后直接加热进行第一次回流提取，提取完后分离出提取液，后续每次提取时加入8倍原料茯苓重量的70v/v%的乙醇作为提取剂；(3)向步骤(2)的滤渣中加入其重量的4-10倍的水浸泡3-12小时，浸泡后回流提取 1-3次，每次提取时间为1-3小时，过滤，得滤渣；在步骤(3)的浸泡完成后直接加热进行第一次回流提取，提取完后分离出提取液，后续每次提取时再加入4-10倍步骤(2)的滤渣重量的水作为提取剂；(4)将步骤(3)得到的滤渣碾碎，加入其重量的30-70倍的0.1-0. 5mol/L NaOH溶液搅拌提取30-120min，过滤，滤液加2wt%HCl中和至中性，离心分离出沉淀，再用水洗沉淀以除盐，得沉淀；(5)将所得沉淀经喷雾干燥，即得茯苓酸性多糖提取物产品。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于所述的喷雾干燥操作条件如下进风口温度为175°C，出风口温度为90°C，雾化盘转速为29040转/分钟。
3.根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于步骤(1)中所述的乙醇浓度是 70v/v%,乙醇用量为茯苓重量的8倍。
4.根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于步骤(2)中所述的回流提取次数为2次，第一次时间为2小时，第一次时间为1小时。
5.根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于步骤(3)中所述的每次提取时间为1小时，回流提取的次数为3次。
6.根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于步骤(4)中所述的NaOH溶液的浓度为0. 5mol/L，用量为步骤(3)得到的滤渣重量的70倍，提取时间为1小时。
7.根据权利要求1-6中任一所述的制备方法制得的茯苓酸性多糖提取物在制备具有抗肿瘤和免疫调节作用的药物中的应用。
全文摘要
本发明属于中药有效部位提取纯化技术领域，具体公开了一种茯苓酸性多糖提取物的制备方法，其步骤取茯苓，加4-8倍重量的60-80v/v％乙醇浸泡3-12h，回流提取1-3次，每次1-2h，过滤，得滤渣；将滤渣用4-10倍重量的水回流提取1-3次，每次1-3h，过滤，得滤渣；加入30-70倍重量的0.1-0.5M的NaOH提取0.5-2h，过滤，滤液用HCl中和，再水洗除盐，得沉淀；再将沉淀喷雾干燥，得茯苓酸性多糖提取物。该方法简单，所用溶媒均可重复回收利用，降低了生产成本，节约了能源，所得提取物中茯苓酸性多糖的含量以葡萄糖计为1.9-50.0wt%。该提取物具有明显的调节免疫及抗肿瘤的功能。
文档编号A61P37/02GK102399299SQ20111039933
公开日2012年4月4日 申请日期2011年12月5日 优先权日2011年12月5日
发明者刘国庆, 刘焱文, 叶晓川, 张卫元, 张永丹, 王光忠, 邓嫒嫒, 邵贝贝 申请人:武汉回盛生物科技有限公司