2-亚氨基生物素制剂及其应用的制作方法

专利名称：2-亚氨基生物素制剂及其应用的制作方法
技术领域：
本公开涉及改进2-亚氨基生物素的水溶性。在具体方面，本发明涉及适用于对哺乳动物进行2-亚氨基生物素给药的制剂，所述哺乳动物患有受益于所述给药的失调或病症。
背景技术：
据报导，2-亚氨基生物素能够在新生儿中用于预防和/或治疗围生期窒息(缺氧缺血)影响(美国专利No. 6894069，该专利通过引用整体并入本文)。尤其是，在涉及小猪的体内研究表明，2-亚氨基生物素在预防和/或治疗这些影响中比别嘌呤醇或去铁胺中任一种都更有效。然而，2-亚氨基生物素在生理pH下的低溶解度限制了其作为治疗剂的实用性。本领域中需要改进的2-亚氨基生物素制剂以及提高其溶解度的方法。本公开提供了这样的改进。

发明内容
本公开的一个方面提供了 2-亚氨基生物素(2-1B)或其衍生物的水溶性(aqueoussoluble)的制剂,该制剂具有在约3和约7之间的pH,且包括约lmg/ml或更高的2-亚氨基生物素或其衍生物，以及约2. 5至约40%的取代的β -环糊精。

在一些实施方式中，所述制剂具有在约4和约7之间的pH，且包括约2mg/ml或更高的2-亚氨基生物素或其衍生物，以及约2. 5至约20%的取代的β -环糊精，优选地选自磺丁基醚-β -环糊精(SBE-⑶)和羟丙基-β -环糊精(HP-⑶)。在一些实施方式中，所述制剂具有在约4和约5之间的pH，且包括约3. 5mg/ml或更高的2-亚氨基生物素，以及约2. 5至约40之间，优选约5至约10%的取代的β -环糊精，优选地选自磺丁基醚-β -环糊精(SBE-⑶)和羟丙基-β -环糊精(HP-⑶)。在一些实施方式中，所述制剂具有在约4和约5之间的pH,且包括约3至约5mg/ml之间，优选约4至约5mg/ml之间的2-亚氨基生物素，以及约2. 5至约5%的取代的β -环糊精，优选地选自磺丁基醚-β -环糊精(SBE-⑶)和羟丙基-β -环糊精(HP-⑶)。优选地，所述制剂进一步包括作为增溶剂的柠檬酸或其去质子化的变体(柠檬酸盐)。在一些实施方式中，提供了 2-亚氨基生物素或其衍生物的可溶制剂，具有约5的pH,且包括约3mg/ml或更高的2-亚氨基生物素，以及约3至约40%，优选约5%的SBE-⑶。在一些实施方式中，提供了 2-亚氨基生物素或其衍生物的可溶制剂，具有约4的pH,且包括约3mg/ml或更高的2-亚氨基生物素，以及约5至约40 %的HP-⑶。优选地，所述制剂包括约5至约20%的HP-⑶。在一些实施方式中，所述制剂进一步包括作为等渗剂的NaCl，优选在O.1和2%之间，更优选在O. 5和O. 8 %之间。
本公开的发明的另一方面提供一种2-亚氨基生物素(2-1B)或其衍生物的水溶性的制剂，该制剂具有约3和约7之间的pH，且包括约O. 75mg/ml或更高的2-亚氨基生物素，以及柠檬酸、所述柠檬酸的去质子化的变体或它们的混合物。出人意料地发现，2-1B在柠檬酸缓冲液中具有较高的溶解度。在本文中所使用的柠檬酸缓冲液是指柠檬酸、其去质子化的变体或它们的混合物，以及包括例如无水柠檬酸钠的水性溶液。优选地，所述制剂具有约3和约7之间的pH，优选地约3和约6之间，更优选约3. 5和约4. 5之间，甚至更优选约4的pH,且包括约O. 5mg/ml和10mg/ml之间，优选在约O. 5mg/ml和约5mg/ml之间的2-亚氨基生物素,更优选在约O. 5mg/ml和约2mg/ml之间，甚至更优选在约O. 5mg/ml和约lmg/ml之间的2-亚氨基生物素，以及朽1檬酸、其去质子化的变体或它们的混合物。优选地，所述制剂包括在约I至约40之间，约5至约30之间，优选约10至约20之间，更优选地约12. 5至约17. 5mM之间，甚至更优选约15mM的柠檬酸、其去质子化的变体或它们的混合物。本领域技术人员知晓的是，能够调节缓冲液的量得到所需要的PH值。优选地，所述制剂包括O.1和2%之间的作为等渗剂的NaCl，更优选在O. 5和1. 5%之间。示例性的制剂具有约O. 9%的NaCl浓度。优选地，该制剂适用于对人类新生儿给药。优选地，2-亚氨基生物素或其衍生物于5 °C下保持水溶性至少3天。在一些实施方式中，2-亚氨基生物素或其衍生物于5°C下保持水溶性至少O. 5、1、1. 5、2或3年。本公开的另一方面提供用于治疗分娩期间并发症的影响的本文中所述的2-亚氨基生物素或其衍生物制剂，优选用于治疗新生儿的围产期窒息或其危险性。在一些实施方式中，制剂给药至新生儿。在一些实施方式中，制剂在阵痛(labor)前和/或阵痛期间给药至新生儿的母体。本公开提供的另一方面提供2-亚氨基生物素或其衍生物在治疗分娩期间并发症影响的应用，优选用于治疗围产期窒息或其危险性，其中该治疗可与使新生儿承受低体温
彡口口 本公开的另一方法提供了用于治疗新生儿的分娩期间并发症影响的方法，包括将治疗有效量的本文中所述的制剂给药至需要该制剂的新生儿。在一些实施方式中，在阵痛前和/或阵痛期间制剂也被给药或替代给药至需要制剂的新生儿的母体。优选地，并发症为围产期窒息或其危险性。本公开的另一方面提供了用于治疗新生儿分娩期间并发症影响的方法，包括将治疗有效量的2-亚氨基生物素或其衍生物给药至需要该制剂的新生儿并使新生儿承受低体温。在一些实施方式中，2-亚氨基生物素或其衍生物在阵痛前或阵痛期间也被给药或替代给药至需要该制剂的新生儿的母体。优选地，并发症是围产期窒息或其危险性。优选地，2-亚氨基生物素或其衍生物存在于本文中所述的制剂中。本公开的另一方面提供了 2-亚氨基生物素或其衍生物在制备用于治疗分娩期间并发症影响的具有本文中所述的制剂的药物中的应用。在一些实施方式中，治疗与使新生儿承受低体温结合。优选地，并发症是围产期窒息。所述制剂也提供在治疗响应2-亚氨基生物素的疾病或失调中的应用。本公开的另一方面提供用于制备本文所述的制剂的方法，包括以下步骤将2-亚氨基生物素或其衍生物溶解在包括β -环糊精的水性溶液中，随后调节所述溶液的PH以得到2-亚氨基生物素或其衍生物。优选地，利用柠檬酸调节2-亚氨基生物素溶液的pH。优选地，PH被调节至约3至约7之间。优选地，水性溶液的pH在4和6. 6之间。优选地，β -环糊精是SBE-⑶。优选地，水性溶液包括NaCl。优选地，水性溶液包括柠檬酸或其去质子化的变体。优选地，2-ΙΒ衍生物为2-亚氨基生物素羧基衍生物。优选地，2-亚氨基生物素羧基衍生物是2-亚氨基生物素酰阱和/或2-亚氨基生物素N-羟基丁二酰亚胺酯。优选地，本文所述的制剂包括2-ΙΒ。
具体实施例方式2-亚氨基生物素(2-ΙΒ)的水溶性较差，因此难以形成用于给药的水性溶液(参见对比例)。根据本公开，已经发现通过将2-ΙΒ加入至柠檬酸/柠檬酸盐缓冲液和/或取代的β -环糊精，2-1B的水溶性可显著提高以允许其形成水性溶液。本文中所使用的术语“不溶的”和“较差溶解”是用来表征药物的水溶性。本文中所使用的不溶的是指小于O.1mg/ml的溶解度，较差溶解是指在O.1至lmg/ml范围内的溶解度。2-1B的溶解度依赖于pH。在pH为7. 4时，2-1B在水中的溶解度约为O. 34mg/ml，pH为5时，约为O. 59mg/ml,以及pH为3. 5时，约4. 5mg/ml。低pH溶液的肌肉给药会违禁导致受治疗者疼痛(Rukwied R. , J Pain. 2007 May ；8(5) :443-51)，且当连续静脉滴注(infusion)给药时可导致代谢性酸中毒(Federman MD, Clinical Neuropharmacology2009 Nov-Dec ；32(6) :340-1)，本公开的一个目的是提供具有适用于在治疗环境中给药的pH和2-1B浓度的2-1B制剂。在与例如窒息或缺氧的相关病症的治疗中，需要在特定的时间内给药药物的治疗有效量以确保有效性。对于现有技术中存在的制剂，由于2-1B的低溶解度，需要进行较多体积的2-1B溶液给药。需要给药`的溶液的体积越多，在体内达到治疗有效浓度前的时间越长。在一些应用中，例如新生儿的治疗中，限制因素是需要在治疗窗内给药的溶液体积。典型地，考虑对窒息的新生儿患者进行静脉内给药的流体的最大量是50ml/kg/天。通过增加2-1B的溶解度，药物可以较小的体积更快地给药。最优地，2-1B制剂应该在较长一段时间内稳定，优选几年。此外，当冷藏储藏时，例如5 °C，制剂不应该沉淀。使用不同的溶剂、共溶剂、表面活性剂、环糊精以及其他赋形剂生产不同的药物制齐U。2-1B的溶解度较低或制剂是有毒性的(参见对比例)。令人惊奇地，用多于I%，尤其是用2. 5%或更高的取代的β-环糊精和/或柠檬酸缓冲液配制2-1B在合适的pH值下提供溶解度增加的溶液。本文中所描述的制剂适用于制备2-1B(CltlH17N3O2S)和2-1B衍生物的药剂溶液。2-1B衍生物包括2-亚氨基生物素羧基衍生物。2-亚氨基生物素羧基衍生物已被证明是iNOS的抑制剂，这表明iNOS抑制不需要2-1B的自由羧基(Sup SJ等人.Biochem andBiophy Res Comm 1994 204:962-968)。优选地，2-亚氨基生物素羧基衍生物为2-亚氨基生物素酰阱和/或2-亚氨基生物素N-羟基丁二酰亚胺酯。优选地，本文所描述的制剂包括 2-1B。环糊精在结构和性质上有变化。例如，疏水腔的尺寸(例如直径和深度)以及功能性(例如疏水性、电荷、反应性以及氢键的能力)在取代和未取代的α、β以及Υ-环糊精之间变化。术语“环糊精”是指含α环键的D-吡喃葡萄糖单元的化合物。α-环糊精是指具有六个环键的D-吡喃葡萄糖单元的环糊精，β -环糊精具有七个环键的D-吡喃葡萄糖单元，Y-环糊精具有八个环键的D-吡喃葡萄糖单元。这些环键的D-吡喃葡萄糖单元限定了疏水腔，且已知的环糊精在固体状态或水性溶液中与其他有机分子、盐以及卤素形成包含化合物(inclusion compound)。典型地,选择用于制剂的环糊精具有适用于该制剂的目标组分和其他组分的尺寸和功能性。遗憾的是，存在许多环糊精配位作用不能进行或未产生显著优点的药物(J. Szejtli, Cyclodextrins in Drug Formulations Part II,Pharmaceutical Technology,24-38，8 月，1991)。取代的环糊精可包括作为侧链的任何有机部分或杂环部分。优选的环糊精包括已被烷基化、羟基烷基化或反应形成磺烷基醚的取代的环糊精。优选的环糊精包括轻丙基-β _环糊精，例如⑶_2_轻丙基环糊精、2-0-[⑶-2，-轻丙基]-β-环糊精、2-0-[(R)-2'-羟丙基]-β-环糊精、6-0-[(S)-2'-羟丙基]-β-环糊精、2~0~ [ (R) -2 ' , 3 ' _轻丙基]环糊精、轻乙基-环糊精、竣甲基-环糊精、羧甲基-乙基-β -环糊精、二乙基-β -环糊精、二甲基-环糊精、葡糖基-环糊精、羟丁烯基-β -环糊精、麦芽糖基-β -环糊精、以及磺丁基-β -环糊精。对于目前的制剂和方法，认为取代的β -环糊精，例如，羟丙基-β -环糊精和磺丁基-β -环糊精具有补足上述制剂的其他组分的尺寸以及功能性。更优选地，环糊精是磺丁基环糊精("SBE-CD")。 在2-ΙΒ制剂中测试两种类型的取代的β -环糊精。二者均显著地增加2-ΙΒ的溶解度。(参见实施例)磺丁基-β -环糊精(SBE-CD)是通过丁基醚联接基或硫代丁基醚将上述疏水腔与磺酸钠盐分开的商业可得的聚阴离子环糊精衍生物(Captisol 是可从CyDex有限公司购得的七-取代的磺丁基_ β _环糊精的商品名称)。羟丙基一 β _环糊精(HP-O))从Roquette Pharma S. Α.购得的(如Kleptose )商业可得的β-环糊精衍生物。在美国专利5134127和5376645中进一步描述了环糊精，其全部内容通过引用并入本文。本文中公开的2-ΙΒ制剂可为2-ΙΒ和取代的β -环糊精的干燥物理混合物，或其加入水时复原形成水性制剂的干燥包含配合物形成。或者，水性制剂可冷冻干燥且然后加水复原。在一些实施方式中，本文公开的2-ΙΒ制剂是水性溶液的形式，且包括调节pH在约4至约7范围内的酸缓冲液。适于本文中应用的酸缓冲液的实例包括酸，诸如盐酸、硫酸、磷酸、氢溴酸等，以及诸如草酸、马来酸、富马酸、乳酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、苯甲酸、乙酸、甲磺酸、甲苯磺酸、苯磺酸、乙磺酸等的有机酸。也可采用上述酸的酸盐。优选地，制剂包括足够的柠檬酸和/或柠檬酸钠或其他柠檬酸盐以达到所需的pH。在一些实施方式中，制剂包括I和25mM之间的朽1檬酸。在一些实施方式中，制剂包括O.1和5mM之间的朽1檬酸钠。在一些实施方式中，制剂包括至少20mM的柠檬酸/柠檬酸盐。优选地，制剂包括约I至约40，约5至约30，优选约10至约20，更优选地约12. 5至约17. 5mM之间的柠檬酸、其去质子化的变体或它们的混合物。优选地，制剂包括约15mM的柠檬酸、其去质子化的变体或它们的混合物。本文公开的2-1B制剂制备如下将柠檬酸或其他酸缓冲液溶解于注射用水中。将取代的β -环糊精(优选SBE-CD)(如果使用)溶于上述酸缓冲液水溶液中。然后将2-1B溶于该溶液中。或者，将取代的β -环糊精(优选SBE-CD)(如果使用)溶于水溶液中，且然后将2-ΙΒ溶于该溶液中。pH调节至约3至约6的范围内。优选地，制剂制备并包装用作无菌和无致热原的制剂。例如，所得到的溶液可被无菌过滤(例如，通过O. 22微米过滤膜)并装入无菌小瓶。停止并密封小瓶且可进行最终灭菌。溶液也可提供至安瓿、注射器、IV袋或其他分配器(dispenser)。优选地,制剂以单个剂量单位提供。溶液可被高压灭菌而不影响2-1B的稳定性(表24)。包括等渗剂，例如糖、氯化钠等也是合乎需要的。通过使用延迟吸收试剂，例如单硬脂酸铝和明胶可引起注射药物剂型的长期吸收。优选地，用于儿科给药的2-1B制剂不包括禁忌的赋形剂(例如乳酸、多库酯钠、丙二醇等)。优选地，用于儿科给药的制剂不包括苄醇、没食子酸丙酯、聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯40或聚山梨醇酯60、苯甲酸钠、水杨乙萊(thimerosal)、花生油或硼酸。在本领域技术人员的知识范围内来选择合适的附加试剂。优选地，2-1B制剂是等渗的。在一些实施方式中，2-1B制剂进一步包括优选在O.1和O. 9%之间，更优选地在O. 2和O. 9%之间的NaCl。在一些实施方式中，2-1B制剂进一步包括优选在I和5%之间，更优选在2和5%之间的糖，例如葡萄糖、乳糖或甘露醇。优选地，尤其对于儿科制剂，上述糖是葡萄糖。制剂可包括与制剂等渗量的NaCl和糖的组合。本公开提供优选用于胃肠外给药的2-1B的溶液和剂型。本文中所用的胃肠外给药(Parentaladministration)是指给药的形式包括但并不限于,静脉内、肌肉内、动脉内、鞘内、囊内、眶内、心脏内、皮内、腹膜内、经气管、皮下、表皮下、关节内、囊下、蛛网膜下、脊柱内以及胸骨内的注射和滴注。优选地，制剂是静脉给药。制剂可提供在小瓶、安瓿、注射器、IV袋或其他分配器中。它们可直接给药至受治疗者或进一步稀释。提供的制剂的剂量浓缩物(dose-concentrate)可位于经过标准治疗间隔(例如稀释后直接或稀 释后长达24小时，如果必要的话)保持使用的制剂量的密封容器内。可制备用于静脉给药的溶液，例如，通过将剂量浓缩物制剂与稀释剂一起加入至容器(例如玻璃或塑料瓶、小瓶、安瓿)以得到用于给药的所需浓度。将水性溶剂加入至液体剂量浓缩物是通过移出用于稀释的剂量浓缩物的等分部分或整体内含物来便利地形成单位剂量的液体药物制剂。剂量浓缩物可加入至含有合适水性溶剂的静脉内注射(IV)容器中。有利地，上述溶剂是用于注射的标准溶剂(例如5%的葡萄糖、生理盐水、乳酸林格氏液、或注射用无菌水等)。典型的单位剂量IV袋是常规的带有入口和出口单元且具有标准(例如25mL、50mL、100mL和150mL)容量的玻璃或塑料容器。在其他实施方式中，将提供的剂型包装在容器中以防止在使用前光照射制剂是合乎需要的。在一些实施方式中，这种隔光容器可抑制一种或多种降解途径。例如，小瓶可为防止内容物暴露在光中的轻容器(light container)。此外和/或可替代地,小瓶可包装在防止制剂暴露在光中的任何类型的容器中(例如小瓶的二次包装)。同样，任何其他类型的容器可为隔光容器或包装在隔光容器中。制剂的可被给药至受治疗者，该受治疗者包括任何脊椎动物，优选哺乳动物，且更优选人类。受治疗者的实例包括人类、非人类的灵长类、啮齿类、豚鼠、兔、羊、猪、山羊、牛、马、狗、猫、鸟和鱼。
在一些实施方式中，2-1B制剂适用于给药至新生婴儿，且尤其适用给药至患有、预计患有或以其它方式判断在分娩期处于并发症的危险中，尤其是可导致缺血缺氧的围产期窒息的新生儿。围产期窒息可能会在出生前不久或出生后发生，且也可适于用本文中描述的2-1B制剂治疗。术语“新生婴儿”和“新生儿”包括通过自然分娩出生的婴儿以及通过例如剖腹产而出生的婴儿，还包括早产的婴儿和/或人工引产的婴儿。在一些实施方式中，当预计是窒息的新生儿时，2-1B制剂适用于给药至胎儿的母体。术语“母体”是指胎儿或新生婴儿的母体，包括自然、人工受精、引产(induced)和携带(carrier)母体。通常，在分娩后短时间内(例如“窗口”)用2-1B制剂治疗新生儿以进行治疗干预。通常，该窗口包括分娩后的第一天且尤其是分娩后的第一个O 24小时。然而，如果预计是窒息的婴儿，在预计阵痛前，尤其是在阵痛前约O 24小时内可对母体进行治疗。作为这种治疗的部分，2-1B制剂通常以一种或多种药物有效量给药至新生儿，且尤其以一种或多种在预防和/或治疗上述影响中有效的量。这些治疗可仅包括单次给药，但是通常优选包括在几小时或几天内的多次给药，例如作为给药方案或治疗方案的一部分或根据给药方案或治疗方案。因此，这种治疗方案可如下表示在第一个24小时期间每4小时静脉注射上述物质。通常，给药至新生儿的2-1B的量对应每天每千克体重为O. 01至30mg之间，优选每天在O.1和25mg/kg之间，更优选在1. 8和12mg/kg/天。这些量是指活性组分而不包括载体或例如糖类、酯类或蛋白质等辅助材料。这些量作为每天的单次剂量或作为多次剂量给药，或实际上连续一段特定时间内的连续给药，例如，通过连续滴注。优选地，2-1B是以3 6剂量/天给药。优选地,2-1B是以O. 01至lmg/kg之间的剂量给药至人类新生儿,优选在O. 05至O. 75mg/kg之间，更优选在O. 05至O. 5mg/kg之间。示例性的剂量是O. 075、O. 45以及优选的O. 15mg/kg。

窒息后的治疗可持续多达24、48或72小时，或直至判定新生儿不再处于上述影响的危险。然而，治疗尤其是预防治疗也可包括在分娩前或分娩中将2-1B制剂给药至母体。制剂可给药至母体，例如，口服、皮下注射或静脉注射。然后，取决于胎盘转移和代谢，肝脏中的首过效应以及化合物的分配体积，给药的量可相同或较高。因此，给药至母体的量可为例如每天每千克母体的体重在O. 01 25mg的活性组分之间变动。本公开的一个方面提供用于治疗分娩中的并发症包括与低体温的结合进行2-1B的给药。已证实低体温在一些脑损伤的模型中具有治疗效果。例如，许多出版物中存在示出低体温在新生儿窒息模型体外(Onitsuka, M.,等人· 1998. Mild hypothermiaprotects rat hippocampal CAl neurons from irreversiblemembrane dysfunctioninduced by experimental ischemia. Neuroscience Research 30:1-6)和体 内(Debillon，Τ·，等人，2003. Whole-body cooling after perinatal asphyxia a pilotstudy in term neonates. DevelopmentalMedicine and Child Neurology 45 :17-23)的有益效果。本文中所使用的术语“低体温”是指使具体受治疗者(在该情况下，新生儿受治疗者)承受低体温条件，例如通过被动或主动技术使体温降低。典型地，承受低体温条件使受治疗者的身体组织代谢降低，从而降低对氧气的需求。
在一些实施方式中，通过使哺乳动物的正常核心体温下降至少1、2、3、4、5、6、7、8、9或10°以降低哺乳动物的核心体温。在一些实施方式中，通过使哺乳动物的正常核心体温下降I 10、2 6或优选2 4°之间以降低哺乳动物的核心体温。在一优选的实施方式中，哺乳动物的温度维持在约31°至约37°摄氏度的温度。更优选地，哺乳动物的温度维持在约32°至约36°摄氏度的温度，更优选约32°至约35°摄氏度的温度，更进一步优选约33°至约35°摄氏度的温度。可通过本领域已知的任何方法实施使身体的核心温度降低来引入低体温。典型的低体温引入是指利用全身冷却或头冷却中的任意一种。低体温由冰/冷水或机械冷却装置例如表面冷却、Olympic CoolCap 系统以及使用置于大容器的导管冷却来引入。或者，低体温可由药剂例如辣椒素受体激动剂、辣椒碱或辣椒碱类激动剂(美国专利申请20090197966中所描述的，其内容通过引用并入本文)以及能够跨越血脑屏障的神经降压素类似物，例如NT69L和NT77 (在美国专利No. 7319090中所描述的，其内容通过引入并入本文)来引入。可同时、依次或分别施加低体温和2-1B。本文使用的“同时”是指与低体温同时进行2-1B给药，而所使用的术语“结合”是指如果不是同时进行2-1B的给药，则在2-1B以及低体温均显示出治疗效果后的时间段内“依次”，即它们均可在相同时间段内用来产生治疗作用。因此，“依次”给药可允许在低体温前或后的5分钟、10分钟或大约I小时进行2-1B给药，只要2-1B的循环半衰期为在新生儿受治疗者暴露在低体温条件下时以治疗有效量存在。相比“结合”或“依次”，本文所使用的“分别”意味着进行2-1B给药与使新生儿受治疗者暴露在低体温中之间的间隔是明显的，即当新生儿受治疗者暴露在低体温条件下时，在血液中可不再存在治疗有效量`的2-1B。在一个优选的实施方式中，2-1B以治疗有效量给药。在另一优选的实施方式中，2-1B以低于治疗有效量给药。换句话说，如果在无低体温条件下给药，2-1B以不足以产生所需治疗效果的量给药。甚至更优选地，2-1B和低体温结合具有协同效应，即，结合是相互促进的。在一些实施方式中，在缺氧缺血(HI)损伤后或出生后，低体温至少维持约6、12、18、24、36、48、72或96小时。在一个优选的实施方式中，在缺氧缺血(HI)损伤后或出生后，低体温维持约6至约24小时，优选至少72小时。优选地，根据本发明方法的治疗始于缺氧缺血(HI)损伤的约6小时内，且更优选在缺氧缺血损伤的约2小时内，更优选在缺氧缺血损伤的约I小时内。另一方面，2-1B先于缺氧损伤前给药。因此，在一个优选的实施方式中，2-1B通过出生前的母体对新生儿给药，例如，在阵痛前和阵痛期间对母体给药。对于哺乳动物在其危急中提供方法用于治疗新生儿窒息，所述方法包括(a)在阵痛前或阵痛期间，将治疗有效量的2-1B给药至哺乳动物的母体；以及(b)在出生后使该哺乳动物承受低体温。优选地，在出生前多达约48小时或24小时将2-1B给药至母体。在出生后，然后新生儿承受低体温条件。在一些实施方式中，一旦发现母体处于危险中或胎儿被发现处于窒息或延迟生长，就将2-1B给药至母体。通常“约”和“大约”应表示给定的测量性质或精度所测量的量的可接受误差度。典型地，示例性的误差度是在在给定值或给定范围值的20%内，优选在10%内，且更优选在5%内。本文中所使用的“预防”失调或病症的治疗是指在统计样本中，治疗样本相对于未治疗对照样本中化合物降低了失调或病症的发生，或相对于未治疗对照样本，延迟发作或降低了一种或多种失调或病症症状的严重性。术语“治疗”包括预防性和/或治疗性治疗。术语“预防性或治疗性”治疗是本领域公知的，且包括对将一种或多种主成分(subject composition)给药至主体。如果在不良病症(例如主体动物的疾病或其他不良状态)的临床表现前给药，则该治疗是预防性(即其保护主体抵抗不良病症的发展)，而如果在不良病症表现后给药，则该治疗是治疗性的(即期望减小、改善或稳定现存的不良病症或其副作用)。


图1为包括和未包括10% SBE-⑶在不同pH下的2_IB的溶解度。实施例2-1B具有酸性羧酸基团以及碱性氨基。利用PrologP计算软件，计算的这些基团的羧酸基团的PKa为4. 78，且氨基的pKa为11. 48。由于在2-1B中存在酸性基团和碱性基团，2-1B在中性pH范围内呈现出两性离子性质。因此，2-1B的水溶性强烈依赖于pH且远远低于在中性PH条件下的35g/l的计算值(参见表I)。由于2-1B的两性离子性质，其难以开发成合适的制剂。下列的对比例证实了开发适用于IV给药的2-1B制剂的众多尝试。对比例I ;溶剂的选择在以下溶剂中测定 2-1B的溶解度
O. 9%的氯化钠水溶液5%的葡萄糖水溶液N，N-二甲基乙酰胺N，N-二甲基甲酰胺二甲亚砜乙醇丙二醇聚乙二醇400玉米油称量约IOmg的2-1B放入IOml试管中。随后，逐步加入少量等分部分(100 μ 1-10
Oμ 1-200 μ 1-400 μ 1-800 μ 1-1600 μ 1-3200 μ I)的各种溶剂。在每次加入之后，强烈混合溶液且目测判断溶解度。所有溶剂的最终体积为6400 μ I (1. 6mg/ml)。在所有的实验中，在加入6400 μ I的溶剂后，仍然有大量的未溶解的2-ΙΒ，这表明2-ΙΒ在任何这些溶剂中不能充分溶解。在加入100 μ I的IN盐酸后，在所有溶剂中2-ΙΒ完全溶解。这进一步表明2-ΙΒ的两性离子性质以及pH对溶解度的强烈影响。在视觉上，丙二醇中溶解了最高部分的2-1B。因此，重复用丙二醇进行实验，但是在加入200 μ I丙二醇后加入ΙΟΟμΙ的IN盐酸(即IOmg 2-ΙΒ+200 μ I丙二醇+100 μ IlN盐酸)。这就得到了完全溶解且稳定的33mg/ml的2-1B的溶液。水加入至该制剂后立即产生2-1B沉淀，这表明该方法不是用于静脉制剂的可行方案。由于所有的测试溶剂需要加入酸用于2-1B的完全增溶，这就确定持续用5%的葡萄糖水溶液，这是因为在IV引入期间其他溶剂明显具有非常低的生物相容性或具有高风险的盐析效应(O. 9%氯化钠水溶液)。当在5%葡萄糖中制备酸化的2-1B制剂时，对于在I 5mg/ml范围的标称2-1B浓度，酸化后的pH约为2。用O.1 %的氢氧化钠部分中和可到达3 3. 5的pH(取决于标称浓度)，然而最终发生2-1B的沉淀，首先是非常细的“发丝”状针的形式，然后其生长为较大的聚集体。在PH接近7时，基于目测观察，所有的2-1B从溶液沉淀出。对比例2 ;表面活性剂研究下列表面活性剂的增溶特性十六烷基三甲基溴化铵(阳离子表面活性剂，1% )聚氧乙烯(40)硬脂酸酯(非离子表面活性剂，1%，0· 1%和0.01% )聚山梨酯80 (非离子 表面活性剂，I % )十二烷基磺酸钠(阴离子表面活性剂，1%，0· 1%,0.01% )在5%的葡萄糖中制备表面活性剂的储备溶液。所使用的测试步骤是逐步加入各种表面活性剂溶液至少量的2-1B (IOmg)中，如对比例I所述。在未加入酸的情况下，1. 6mg/ml的标称浓度的2-1B在任何表面活性剂溶液中未溶解。在加入酸之后，其全部溶解，但是随后用O.1N氢氧化钠(部分)中和，2-1B再次沉淀，正如未加入表面活性剂的实验中所观察的一样。这得出结论，表面活性剂未增加2-1B的溶解度(在低pH也未增加2-1B的溶解度)，且因此对于制剂不适于加入。表I示出了在多种制剂中2-1B溶解度的几个实例。将过量的2-1B加入至溶剂/表面活性剂溶液中，在室温下混合，然后过滤以去除未溶解的2-1B。然后用RP-HPLC分析这些溶液以确定2-1B的溶解量。表1:2-1B的概述
权利要求
1.一种2-亚氨基生物素的水溶性的制剂，所述制剂具有在约3和约7之间的pH，且包括约lmg/ml或更高的2-亚氨基生物素，以及约2. 5至约40%之间的取代的β -环糊精。
2.根据权利要求1所述的制剂，所述制剂具有在约4和约7之间的pH，且包括约2mg/ml或更高的2-亚氨基生物素，以及约2. 5至约20%的取代的β -环糊精。
3.根据权利要求1或2所述的制剂，所述制剂具有在约4和约6.5之间的pH，且包括约O. 5至3. 5mg/ml或更高的2-亚氨基生物素，以及约5至约40之间,优选约5至约10%之间的取代的环糊精。
4.根据权利要求1或2所述的制剂，所述制剂具有约4的pH，且包括约3.5mg/ml或更高的2-亚氨基生物素，以及约2. 5至约40%之间，优选约2. 5至约10%之间的SBE-⑶。
5.根据权利要求1或2所述的制剂，所述制剂具有在约4和约5之间的pH，且包括约O.5至约5mg/ml之间,优选约4至约5mg/ml之间的2-亚氨基生物素，以及约2. 5至约5%之间的SBE-CD。
6.根据权利要求1至5中任一项所述制剂，所述制剂进一步包括柠檬酸、所述柠檬酸的去质子化的变体或它们的混合物。
7.—种2-亚氨基生物素的水溶性的制剂，所述制剂具有在约3和约7之间的pH，且包括约lmg/ml或更高的2-亚氨基生物素，以及优选至少20mM的柠檬酸、所述柠檬酸的去质子化的变体或它们的混合物。
8.根据权利要求1至7中任一项所述的制剂在治疗新生儿的围产期窒息中的应用。
9.根据权利要求7所述的制剂，其中，所述制剂给药至新生儿。
10.根据权利要求8或9所述的制剂，其中，所述制剂在阵痛前和/或阵痛期间给药至新生儿的母体。
11.根据权利要求8至10中任一项所述的制剂，其中，所述治疗与使新生儿承受低体温彡口口
12.根据权利要求1至7中任一项所述的制剂在治疗分娩期间并发症影响中的应用。
13.—种2-亚氨基生物素在治疗分娩期间并发症影响中的应用，优选用于治疗围产期窒息中的应用，其中所述治疗与使新生儿承受低体温结合。
14.根据权利要求1至7中任一项所述的制剂在治疗响应2-亚氨基生物素治疗的疾病或失调中的应用。
15.—种2-亚氨基生物素的水溶性的制剂，所述制剂具有在约3和约6之间的pH，且包括约O. 5mg/ml至5mg/ml之间的2-亚氨基生物素以及柠檬酸、所述柠檬酸的去质子化的变体或它们的混合物，优选地，所述柠檬酸、所述柠檬酸的去质子化的变体或它们的混合物以约IOmM至约20mM的浓度存在。
全文摘要
本公开涉及改进2-亚氨基生物素的水溶性。在具体方面，本发明涉及适用于对哺乳动物进行2-亚氨基生物素给药的制剂，所述哺乳动物患有受益于所述给药的失调或病症。
文档编号A61K9/00GK103037904SQ201180034057
公开日2013年4月10日 申请日期2011年5月26日 优先权日2010年5月26日
发明者保罗·威廉·特瑞夏·约瑟夫·勒夫肯斯 申请人:纽柔菲克西亚有限公司