专利名称：一种水包油型复方硝唑尼特纳米乳及其制备方法
技术领域：
本发明属于医药领域，涉及一种可以用于人或畜禽原虫(微小隐孢子虫、阿米巴原虫等)、蠕虫(大部分的线虫、绦虫和吸虫)、细菌(革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌)和病毒(轮状病毒等)等感染引起的疾病的治疗的一种水包油型复方硝唑尼特纳米乳及其制备方法。
背景技术：
硝唑尼特别称硝唑克酰胺；邻[N-(5-硝基噻唑-2-基)氨基甲酰]苯酚乙酸酯，是一种硝噻柳酸酰胺的衍生物。最初于20世纪70年代由Romark Laboratories公司成功研制开发，1996年在墨西哥首次作为抗寄生虫药物上市。英文商品名Daxon和Colufase,后陆续在澳大利亚、新西兰、美国等国上市，商品名CryptazTM,上市剂型为片剂(500mg)和干混悬剂(60ml，100mg/5ml)。美国于2002年11月22日批准硝唑尼特作为由隐孢子虫、蓝氏贾第鞭毛虫引起的12月-11岁儿童腹泻的治疗药物上市，剂型为混悬剂，商品名AlianaTM。 硝唑尼特以广谱、高效、低毒，尤其是在抗耐药性厌氧菌和幽默螺旋菌中的特点，弓I起人们的高度重视。临床研究表明硝唑尼特有很强的抗原虫、蠕虫、细菌和病毒的活性。原虫包括 微小隐孢子虫、蓝氏贾第鞭毛虫，阿米巴原虫和小孢子虫等；蠕虫包括大部分的线虫、绦虫和吸虫，如猪带绦虫、微小膜壳绦虫和肝片吸虫等。细菌包括革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌，特别是拟杆菌、梭状杆菌和幽门螺旋菌。资料显示，与阿苯达唑、甲苯达唑和甲硝唑相比，硝唑尼特的抗虫谱和抗菌谱更加广泛。其实际的作用机制虽尚未弄清，但被认为与抑制丙酮酸盐，铁氧化还原蛋白氧化还原酶的酶依赖性电子转移反应有关，后者对厌氧能量代谢至为重要。美国于2002年11月批准硝唑尼特作为由隐孢子虫、蓝氏贾第鞭毛虫引起的 J L童腹湾的治疗药物上市。作为当前较为理想的抗虫、抗菌和抗病毒新药，硝唑尼特具有多种优点①治疗谱广泛，既可以驱虫，又可杀菌，抗病毒。②对机体的耐受性高，利用推广使用。③临床效果证明，对于HIV感染者并伴随感染微小隐孢子虫等肠道孢子形成类原虫所致长期慢性腹泻的治疗有了可能，将可能发挥更为重要的治疗作用。④国内市场巨大，而目前市场却几乎处于真空状态，且我国的原虫性腹泻率发病较高，有较大的医疗价值和市场开发价值。目前临床上使用的硝唑尼特已知剂型为片剂和混悬剂，其他剂型几乎没有。片剂为传统制剂和常用制剂，制剂时需加入赋形剂并压缩制成，口服后药物溶出速度较慢，生物利用度低，且对于某些特殊病人会有不易吞服的缺陷；混悬剂中的药物微粒一般在0. 5 IOum之间，属于热力学不稳定的粗分散体系，生物利用度也不高，稳定性较差。因此，有必要开发更好的硝唑尼特新剂型以代替旧剂型的不足，满足临床的使用。
发明内容
本发明针对上述问题及现有技术中存在的缺陷与不足，提供一种使用安全，疗效显著，药物生物利用度高，稳定性好的用于人和畜禽由于各种原虫、线虫、绦虫、吸虫、细菌和病毒等感染所引起的疾病的治疗的一种水包油型复方硝唑尼特纳米乳。该纳米乳使用安全、毒副作用小。实现上述发明目的的技术方案是该水包油型复方硝唑尼特纳米乳，它是由下列质量百分比的原料组成
表面活性剂19. 0% 35. 0%
助表面活性剂0 7. 0%
肉桂醛0. 1% 8. 0%
硝唑尼特0.01% 0.21%
余量为蒸馏水
上述原料的质量百分比之和为100%。本发明还有一个目的是提供上述水包油型复方硝唑尼特纳米乳的制备方法，包括以下步骤
1)按配方准确称取表面活性剂、助表面活性剂、硝唑尼特、肉桂醛、蒸馏水，备用；
2)将硝唑尼特溶解于肉桂醛中充分搅拌均匀作为油相；
3)将表面活性剂和助表面活性剂混合后加入到油相中并充分搅拌均匀；
4)向步骤3)制备的溶液是中缓慢滴加蒸馏水，边加边搅拌，加水和搅拌过程中该混合物体系会出现由稀变粘稠，最后又由粘稠变稀的一系列变化，直至最终澄清透明即形成水包油型复方硝唑尼特纳米乳组合物。本发明在表面活性剂的选择上，选用无毒性和生物相容性好的非离子型表面活性剂。由于非离子表面活性剂在水中不解离，不受强电解质和溶液PH值的影响，毒性和溶血性较小，能与多数药物配伍，与其他表面活性剂相容性好，在溶液中比较稳定，因此，将非离子表面活性剂做为首选。又依据0/W型纳米乳的制备需要表面活性剂的HLB值(亲水亲油平衡值)介于8 18之间且考虑到制备工艺的简单性，即纳米乳的易形成性和制备出来的纳米乳的稳定性，本发明选用HLB介于10 15之间的液态非离子型表面活性剂。可选用的表面活性剂有聚氧乙烯醚蓖麻油(EL-40)、聚氧乙烯(40)氢化蓖麻油(RH-40)和吐温-80 中的一种或几种混合物。本发明中的助表面活性剂不是水包油型复方硝唑尼特纳米乳必要的成分，在助表面活性剂的比例为零的情况下，也可以形成水包油型复方硝唑尼特纳米乳。本发明以硝唑尼特与肉桂醛作为组合，是因为硝唑尼特具有较好的抗虫、抗菌和抗病毒活性，且对动物机体的耐受性良好，安全性高，目前无耐药性的报道，疗效确实；肉桂醛具有杀菌、消毒和防腐的功能，对机体无毒或低毒，对微生物的繁殖能起到较强的杀灭和抑制作用，特别是对大肠杆菌、金黄色葡萄菌、白色葡萄球菌、志贺氏痢疾杆菌、伤寒和副伤寒甲杆菌、肺炎球菌、产气杆菌、变形杆菌、肠炎沙门氏菌，霍乱弧菌等均有抑制作用。可用于治疗多种因细菌感染引起的疾病，还具有较强的抗溃疡、加强胃肠道的运动功效，口服后对硝唑尼特的治疗起到辅助和增强效果，且可以作为硝唑尼特的油相溶剂，有较高的溶解度。本发明经透射电子显微镜检测，液滴直径分布在I IOOnm之间，外观为黄色或淡黄色的透明液体，具有很好的稳定性
I、经时稳定性
4本纳米乳液在室温自然变化条件下储藏30天后，经检验外观持久澄清透明，未发现浑浊或沉淀等破乳情况，说明经时稳定性好。2、热贮稳定性
将本纳米乳液分装于几个玻璃瓶中，密封之后置于50°C恒温箱中贮存15d，每隔5d取样观察。结果表明，该纳米乳热贮后检验外观仍保持澄清透明的外观，未发现浑浊或分层等破乳情况，说明热贮稳定性良好。3、抗冷冻稳定性
将本纳米乳液在冰箱中_10 C保存一周后。恢复至室温。该纳米乳由固态融化为液态， 经稀释检验后外观仍澄清透明，放置一周后继续检验，未发现浑浊或沉淀等破乳情况，表明抗冷冻性良好。4、加速稳定性
将本纳米乳液置于试管，密封，在15000r/min的转速下离心20分钟，经稀释检验后外观仍澄清透明，未发现浑浊或沉淀等破乳情况。5、光稳定性实验
将本纳米乳液分装于玻璃瓶中，密封置于日光下，室温光照10d，于ld、3d、5d、10d分别取样。经稀释检验表明该纳米乳液保持澄清透明，无浑浊或分层等破乳情况，表明光稳定性良好。本发明的水包油型复方硝唑尼特纳米乳具有治疗人和畜禽原虫、线虫、绦虫、吸虫、细菌和病毒等感染引起的疾病的功效。用法口服或饮水。本发明的水包油型复方硝唑尼特纳米乳与现有技术相比，具有以下优点
1)热力学稳定性高。制备时操作比较简单，储存后不分相、不破乳，稳定性提好；
2)剂型为水包油型液体制剂，为目前市场上除了片剂、混悬剂之外的新剂型，前景广
阔；
3)生物利用度高。硝唑尼特纳米乳滴粒径在fIOOnm之间，具有较高的肠道吸收率， 且可以避开肝首过效应，提高了药物的生物利用度，减少了药物用量；
4)方法工艺简单，适合规模化生产。
具体实施例方式以下通过药物安全性试验和药效试验来进一步阐述本发明所述药物的有益效果。试验例I 硝唑尼特纳米乳口服药物安全性实验。选取体重为20g左右的昆明种健康小鼠50只，将其随机分为对照组、空白纳米乳组、复方硝唑尼特纳米乳低剂量组、中剂量组和高剂量组5组，每组10只。对照组小鼠每只灌胃生理盐水0. 5ml，空白纳米乳组灌胃同等剂量的药物溶剂，复方硝唑尼特纳米乳低剂量组、中剂量组和高剂量组分别灌胃0. 5ml浓度为0. 5g/L、l. 0g/L、2. Og/L，每日2次，连续灌胃3天，期间每日观察各组小鼠的精神、饮食和活动情况，末次灌胃5h后，将小鼠解剖，观察各个脏器病变情况，并作详细记录。实验结果各组小鼠精神、饮食和活动状况均正常，小鼠脏器也无异常病变，各组之间无显著差异。表明机体对本纳米乳耐受性良好。4/5页试验例2 复方硝唑尼特纳米乳治疗家兔魏氏梭菌病效果试验
选取临疹上确诊为魏氏梭菌疫情的兔场家兔10例，病兔表现精神沉郁，喜趴伏，食欲不振，饮欲正常或增强，部分家兔腹胀，听诊肠音不整且剧烈，粪便恶臭稀软，肛门处被毛污秽潮湿，对粪便中的病原菌进行实验室诊断，确诊为魏氏梭菌感染。将10例病兔随机分为 2组，每组5只，第一组为对照组，不做任何处理；第二组每只灌服本纳米乳液5ml (含硝唑尼特原药0.2%)，每日2次，连用3天。用药期间禁用其他同类药品。判断病愈标准
痊愈患兔精神良好，食欲恢复，活动正常，肠音规律整齐，粪便成球；
显效患兔精神一般，食欲好转，活动改善，肠音基本正常，粪便成球；
有效患兔精神、食欲、活动情况仍欠佳但有所好转，粪便偏软稍臭；
无效患兔死亡或症状较治疗前加重。总有效率为痊愈率+显效率+有效率
表I复方硝唑尼特纳米乳剂治疗家兔魏氏梭菌感染药效试验结果
权利要求
1.一种水包油型复方硝唑尼特纳米乳，其特征在于，由下列质量百分比的原料组成 表面活性剂19. 0% 35. 0%、助表面活性剂0 7. 0%、硝唑尼特0. 01% 0. 21%、肉桂醛0.1% 8. 0%、余量为蒸馏水，上述原料的质量百分比之和为100% ；所述的表面活性剂是聚氧乙烯(40)氢化蓖麻油、聚氧乙烯醚蓖麻油和吐温-80中的任一种或两种混合物；所述的助表面活性剂是无水乙醇。
2.根据权利要求I所述的一种水包油型复方硝唑尼特纳米乳，其特征在于，该纳米乳的粒径在I IOOnm之间。
3.根据权利要求I所述的一种水包油型复方硝唑尼特纳米乳的制备方法，其特征在于，它包括以下步骤1)按配方准确称取表面活性剂、助表面活性剂、硝唑尼特、肉桂醛、蒸馏水，备用；2)将硝唑尼特溶解于肉桂醛中充分搅拌均匀作为油相；3)将表面活性剂和助表面活性剂混合后加入到油相中并充分搅拌均匀；4)向步骤3)制备的溶液是中缓慢滴加蒸馏水，边加边搅拌，加水和搅拌过程中该混合物体系会出现由稀变粘稠，最后又由粘稠变稀的一系列变化，直至最终澄清透明即形成水包油型复方硝唑尼特纳米乳组合物。
全文摘要
本发明公开了一种水包油型复方硝唑尼特纳米乳组合物，该纳米乳粒径在1~100nm之间，由下列质量百分比的原料组成表面活性剂19.0%～35.0%、助表面活性剂0～7.0%、硝唑尼特0.01%～0.21%、肉桂醛0.1%～8.0%余量为蒸馏水，上述原料的质量百分比之和为100%。该纳米乳提高了硝唑尼特的溶解度和药物的生物利用度，增强了药物疗效，减少了药物用量，具有较强的抗原虫、蠕虫、细菌和病毒的活性，用于人或畜禽原虫、蠕虫、细菌和病毒等感染引起的疾病的治疗。本发明使用安全、疗效显著，制备方法简单，便于推广应用，在医药领域有广阔的市场前景。
文档编号A61K9/107GK102526039SQ201210055708
公开日2012年7月4日 申请日期2012年3月6日 优先权日2012年3月6日
发明者欧阳五庆, 沈巧艳, 郭建军 申请人:西北农林科技大学