专利名称：一种从木瓜中提取齐墩果酸和熊果酸的方法
技术领域：
本发明涉及天然药物化学领域，具体涉及一种从木瓜中提取齐墩果酸和熊果酸的方法。
背景技术：
木瓜(Fructus Chaenomelis)为《中国药典》2010年版(一部)收载品种，是蔷薇科植物贴梗海棠Chaenomeles speciosa(Sweet)Nakai的干燥近成熟果实。味酸、温，归肝、脾经。具有平肝舒筋，和胃化湿的功效。主治湿痹拘挛，腰膝关节酸重疼痛，暑湿吐泻，转筋挛痛，脚气水肿等症。主产于安徽宣城、重庆綦江以及湖北资丘，分别习称为宣木瓜、川木瓜与资丘木瓜，其中历代本草以宣木瓜为地道药材，2011年被评为“国家地理标志”产品。随着中药药理学研究的深入，发现木瓜具有多种生理活性，已报道的主要药理活性成分包括三萜类、有机酸类、黄酮类以及鞣质等。主要的三萜类成分为五环三萜类化合物，包括齐墩果酸(oleanolicacid)、熊果酸(ursolic acid)、3_0-乙酰基熊果酸(3-0-acetylursolicacid)、3_0-乙酸坡模醇酸(3_0_acetyl pomolic acid)和样木酸(betulinic acid)等。木瓜中的其它成分，有机酸种类较多，主要有苹果酸(malicacid)、绿原酸(chlorogenic acid)、咖啡酸(coffeic acid)、朽1 樣酸(citric acid)、莽草酸(shikimate)、奎宁酸(quinic acid)、曲酸(kojic acid)、玻拍酸(succinicacid)、乙酸(acetic acid)、正葵酸(n-caproic acid)、掠榈酸(palmitic acid)、亚麻酸(顺-9，12-十八碳二烯酸，linolenic acid)、硬脂酸(stearic acid)、绿原酸甲酯(chlorogenic acid methyl ester)、绿原酸乙酉旨(chlorogenic acid ethylester)、绿原酸丁酯(chlorogenic acid-n-butyl)等等。黄酮类成分主要为槲皮素等。鞋质类成分主要为原儿茶酸(protocatechuic acid)、没食子酸(gallic acid)等。齐墩果酸和熊果酸是同分异构体，又称土当归酸，广泛存在于特定科属的叶和果实中，具有清热、抗炎、强心、降血糖、降血脂、抑制变态反应、利胆和退黄等活性，为保肝良药，可用于预防和治疗肝病、风湿、霍乱、痢疾、肠炎、脚气等疾病。近年来随着化妆品、保健品产业的发展，齐墩果酸和熊果酸又应用于美容护肤化妆品、保健品行业中。鉴于此两种化合物独特的临床效果、重要的经济价值及广泛的应用前景，建立一种从天然植物中采取经济、快速、适合于工业化生产的提取齐墩果酸和熊果酸的方法显得尤为重要。
发明内容
为开发一种可适用于工业化的齐墩果酸和熊果酸生产方法，本发明的目的是提供一种从木瓜中提取齐墩果酸和熊果酸的方法。本发明提供的从木瓜中提取齐墩果酸和熊果酸的方法，包括以下步骤( I)将新鲜木瓜晒干并粉碎得干木瓜粉；(2)取干木瓜粉加入水煮沸 提取，过滤分离出提取液，重复所述提取过程2 3次，合并提取液；
(3)将步骤(2)所得提取液调整至其体积(mL)干木瓜粉质量(g)=l O. 5 1，过滤取上清液；(4)将步骤(3)所得的上清液吸附于大孔吸附树脂柱，先用5 10倍柱体积的水进行洗脱，然后再用2 6倍柱体积体积浓度为20 80%的乙醇水溶液进行洗脱，收集洗脱后的乙醇水溶液，浓缩并干燥。上述提取方法中,所述步骤(I)为将新鲜木瓜先置入沸水中2 5min,然后取出晒干并粉碎得干木瓜粉。新鲜木瓜置于沸水中煮烫，可以提高木瓜酸度，提高水溶性总有机酸的量，从而提高齐墩果酸与熊果酸的含量。上述提取方法中，所述步骤(2)的提取过程中，加水的重量为所述干木瓜粉重量的5 10倍，提取时间为O. 5 3小时。上述提取方法中，所述步骤(3)中的过滤为离心过滤，转速为5000 lOOOOrpm。上述提取方法中，步骤(4)中，所述上清液以每小时I 4倍柱体积的流速加入到大孔吸附树脂柱中以进行吸附。上述提取方法中，步骤(4)中，用水进行洗脱时的流速为每小时I 5倍柱体积。上述提取方法中，步骤(4)中，用乙醇水溶液进行洗脱时的流速为每小时I 4倍柱体积。上述提取方法中，步骤(4)所述的大孔吸附树脂柱中填充聚苯乙烯型大孔树脂，其重量为所述干木瓜粉重量的5 15%。上述提取方法中，所述步骤(4)中采用喷雾干燥法进行干燥。最优选地，本发明提供的提取方法包括以下步骤(I)将新鲜木瓜先置入沸水中2 3min，然后取出晒干并粉碎得干木瓜粉；(2)取干木瓜粉加入8倍重量的水煮沸提取1. 5小时，过滤分离出提取液，重复所述提取过程2次，合并提取液；(3)将步骤(2)所得提取液调整至其体积干木瓜粉质量=1 O. 8，以8000rpm的转速进行离心过滤，过滤后取上清液；(4)将步骤(3)所得的上清液以每小时2倍柱体积的流速吸附于大孔吸附树脂柱，先用5 10倍柱体积的水以每小时1. 5倍柱体积的流速进行洗脱，然后再用2 6倍柱体积的体积浓度为75%的乙醇水溶液以每小时1. 5倍柱体积的流速进行洗脱，收集洗脱后的乙醇水溶液，浓缩并干燥。本发明提供的提取方法可得到有效成分含量较高的提取物，其中的齐墩果酸含量不少于28%，熊果酸的含量不少于22. 0%，总含量超过50%，可直接用于药物制剂的制备。本发明提供的提取方法无需大型设备，仅用大孔吸附树脂柱进行洗脱即可，提取时间短，生产效率高。而且该提取方法工艺步骤简单，条件温和，试剂安全无毒，不会产生大量的有害物质造成污染，环境友好。综上所述，本发明的提取方法具有非常广阔的工业应用价值，适宜于大规模生产。
具体实施例方式以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。实施例所述试剂、操作等如无特殊说明都属于本领域常见市售试剂或本领域常用操作。实施例1采收新鲜木瓜，入沸水中烫2_3min，捞出，纵剖，先将切面向上晒数日，再翻过来晒，日晒夜露直至晒干，并将晒干后的木瓜打成细粉。取干木瓜细粉IOOOgjP 8倍(体积重量比)水，在常压和100°C下加热提取1. 5小时，趁热过滤，将滤渣再加8倍(体积重量比)水，在常压和100°C下加热提取1. 5小时，合并两次提取的水提液。将水提液浓缩至每毫升含原药材(干木瓜细粉)约O. 8g，然后在15°C左右的温度下，以SOOOrpm的转速进行超速离心，离心后取上清液。将所得上清液以每小时2倍柱体积的流速上大孔吸附树脂柱，柱中填充DlOl大孔吸附树脂，用量为100g，待吸附饱和后，先用8倍柱体积的水(体积比，下同)以每小时1. 5倍柱体积的流速进行洗脱，然后用4倍柱体积75% (体积浓度，下同)的乙醇水溶液(体积比，下同)以每小时1. 5倍柱体积的流速进行洗脱，收集乙醇水溶液的洗脱液，浓缩，喷雾干燥得固体提取物24. 8g，收率为2. 5%。齐墩果酸与熊 果酸含量测定采用高效液相色谱法(中国药典2010版一部附录VI D)进行测定。色谱柱Shim-packCLC-ODS (M)柱(250mmX 4. 6mm, 5 μ m)；流动相甲醇-水-冰乙酸-三乙胺=265 35 O.1 O. 05 ；流速0.6ml · mirf1 ；检测波长2IOnm；柱温20°C;进样量20μ I。理论板数按齐墩果酸峰计不低于2000。取上述固体提取物约10mg，精确称定，置具塞锥形瓶中，精确加甲醇25ml，密塞，称定重量，浸泡2h，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，过滤，取滤液作为供试品溶液。精确称取齐墩果酸与熊果酸对照品各约10mg，分别置IOOml容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为齐墩果酸和熊果酸混合对照品溶液。取上述两种溶液各20 μ 1，注入液相色谱仪，按外标法以峰面积计算。经测定，提取物中齐墩果酸含量为38. 1%、熊果酸含量为24. 6%。实施例2采收新鲜木瓜，入沸水中烫2_3min，捞出，纵剖，先将切面向上晒数日，再翻过来晒，日晒夜露直至晒干，并将晒干后的木瓜打成细粉。取干木瓜细粉IOOOgJP 5倍(体积重量比)水，在常压和100°C的温度下加热提取
2.O小时，趁热过滤，将滤渣再加10倍(体积重量比)水，在常压和100°C的温度下加热提取1.O小时，合并两次提取的水提液。将所得水提液浓缩至每毫升含原药材约O. 6g，然后在12°C左右的温度下，以5000rpm的转速进行超速离心,离心后取上清。将所得上清液以每小时I倍柱体积的流速上大孔吸附树脂柱，柱中填充DlOl大孔吸附树脂，用量为120g，待吸附饱和后，先用8倍柱体积的水以每小时I倍柱体积的流速进行洗脱，然后用4倍柱体积60% (体积浓度)的乙醇水溶液以每小时I倍柱体积的流速进行洗脱，收集乙醇水溶液的洗脱液，浓缩，喷雾干燥即得固体提取物21. 6g，收率为2. 2%。经含量测定(测定方法同实施例1 )，齐墩果酸含量为32. 4%，熊果酸含量为20. 9%。实施例3采收新鲜木瓜，入沸水中烫2_3min，捞出，纵剖，先将切面向上晒数日，再翻过来晒，日晒夜露直至晒干，并将晒干后的木瓜打成细粉。取干木瓜细粉IOOOgJP 10倍(体积重量比)水，在常压和100°C的温度下加热提取O. 8小时，趁热过滤，将滤渣再加6倍(体积重量比)水，在常压和100°C的温度下加热提取1. 5小时，合并两次提取的水提液。将所得水提液浓缩至每毫升含原药材O. 5g，然后在20°C左右的温度下，以IOOOOrpm的转速进行超速离心，离心后取上清液。将所得上清液以每小时4倍柱体积的流速上大孔吸附树脂柱，柱中填充DlOl大孔吸附树脂，用量为90g，待吸附饱和后，先用8倍柱体积的水以每小时4倍柱体积的流速进行洗脱，然后用5倍柱体积80% (体积浓度)的乙醇水溶液以每小时2倍柱体积的流速进行洗脱，收集乙醇水溶液的洗脱液，浓缩，喷雾干燥即得固体提取物23.1g,收率为2. 4%。经含量测定(测定方法同实施例1 )，齐墩果酸含量为34. 9%，熊果酸含量为22. 5%。虽然，上文中 已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。
权利要求
1.一种从木瓜中提取齐墩果酸和熊果酸的方法，其特征在于，包括以下步骤 (1)将新鲜木瓜晒干并粉碎得干木瓜粉； (2)取干木瓜粉加入水煮沸提取，过滤分离出提取液，重复所述提取过程2 3次，合并提取液； (3)将步骤(2)所得提取液调整至其体积干木瓜粉质量=1 0.5 1，过滤取上清液； (4)将步骤(3)所得的上清液吸附于大孔吸附树脂柱，先用5 10倍柱体积的水进行洗脱，然后再用2 6倍柱体积体积浓度为20 80%的乙醇水溶液进行洗脱，收集洗脱后的乙醇水溶液，浓缩并干燥。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(I)为将新鲜木瓜先置入沸水中2 5min，然后取出晒干并粉碎得干木瓜粉。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)的提取过程中，加水的重量为所述干木瓜粉重量的5 10倍，提取时间为O. 5 3小时。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(3)中的过滤为离心过滤，转速为 5000 lOOOOrpm。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(4)中，所述上清液以每小时I 4倍柱体积的流速加入到大孔吸附树脂柱中以进行吸附。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，步骤(4)中，用水进行洗脱时的流速为每小时I 5倍柱体积。
7.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，步骤(4)中，用乙醇水溶液进行洗脱时的流速为每小时I 4倍柱体积。
8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(4)所述的大孔吸附树脂柱中填充聚苯乙烯型大孔树脂，其重量为所述干木瓜粉重量的5 15%。
9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(4)中采用喷雾干燥法进行干燥。
10.根据权利要求1-9任一项所述的方法，其特征在于，包括以下步骤 (1)将新鲜木瓜先置入沸水中2 3min，然后取出晒干并粉碎得干木瓜粉； (2)取干木瓜粉加入8倍重量的水煮沸提取1.5小时，过滤分离出提取液，重复所述提取过程2次，合并提取液； (3)将步骤(2)所得提取液调整至其体积干木瓜粉质量=1 O. 8，以SOOOrpm的转速进行离心过滤，过滤后取上清液； (4)将步骤(3)所得的上清液以每小时2倍柱体积的流速吸附于大孔吸附树脂柱，先用5 10倍柱体积的水以每小时1. 5倍柱体积的流速进行洗脱，然后再用2 6倍柱体积的体积浓度为75%的乙醇溶液以每小时1. 5倍柱体积的流速进行洗脱，收集洗脱后的乙醇水溶液，浓缩并干燥。
全文摘要
本发明涉及一种从木瓜中提取齐墩果酸和熊果酸的方法，包括将新鲜木瓜晒干并粉碎；加水煮沸提取得到提取液；调整所述提取液浓度，并过滤取上清液；将上清液用大孔吸附树脂柱进行分离。本发明提供的提取方法可得到有效成分含量较高的提取物，该提取方法无需大型设备，提取时间短，生产效率高，工艺步骤简单，条件温和，试剂安全无毒，环境友好。本发明的提取方法具有非常广阔的工业应用价值，适宜于大规模生产。
文档编号A61P17/00GK103054972SQ201210558480
公开日2013年4月24日 申请日期2012年12月20日 优先权日2012年12月20日
发明者郑嫣然, 吕美红, 王艳, 鞠岚岚 申请人:蚌埠丰原涂山制药有限公司