专利名称：治疗心脑血管疾病的组合物及其制备与检验方法
技术领域：
本发明涉及一种用于治疗心血管疾病和脑血管疾病的组合物及其制备与检验方法，具体的说涉及包含牡荆素和甘露醇的混合组合物，该组合物在抗心肌缺血、降低心肌耗氧量、改善血流动力学以及抗脑缺血等方面，效果显著。
背景技术：
根据最近的世界卫生报告，冠心病发病及死亡率近年呈快速增长的趋势，据统计全球因病死亡中每3个中就有I个死于心血管疾病，预计到2020年心血管死亡率将增加50%，悉尼大学的流行病学专家MacMahon教授指出，2020年心肌梗死与脑卒中将从目前死因的第5与第6位上升至第I和第4位。在我国，12个城市的统计,本病人口死亡率为29. 6/10万，其中以北京、天津两市最高。20世纪80年代中期，北京、上海、广州三市本病人口死亡率分别为21. 7/10万、15. 7/10万、4. 1/10万，20世纪90年代中期分别增至62. 0/10万、37. 4/10万、19. 8/10万，其趋势北方高于南方。动脉硬化、血栓、冠心病、心绞痛是高发性、高病死率、高残障性疾病，给一个人、家庭和社会造成沉重负担，是全球卫生保健和卫生资源的巨大负担。据WHO预计，心脑血管疾病每年至少造成全球1200万人死亡，已成为人类健康的头号敌人。在2005年全球10大畅销药物中，心脑血管类药物占到了 4个。2004年，全球心脑血管药物销售额为608亿美元，预计2008年将上升至912亿美元，而2010年这一数字将有可能窜升为1044亿美元。据有关部门统计，我国心脑血管病药物市场的规模约有160亿 180亿元人民币，其中西药与中药制剂各占半壁江山。在过去10年内，抗心脑血管病中药(尤以中药注射剂为主)早已成为国内医院的常用临床治疗剂。预计2020年随着人口老龄化到来，我国和其他发展中国家将会迎来冠心病流行高峰，此类药物将继续显示强劲的增长势头。`临床实践证明，中药注射剂治疗心脑血管疾病具有化学药产品不可替代的独特功效，也有中药其他剂型难以具备的优势，市场前景广阔，有望成为未来中药生产企业研发的热点和市场竞争最为激烈的领域，也是中药产业发展和现代化可能的重要方向。不得不承认的是，尽管国内每年都有一些新的治疗冠心病中药应用于临床，但除极少数药物外，大多数中药始终未能踏进国际市场的大门，其原因除药理学研究、有效药物成分、药代过程并不十分明确外，更主要是因为没有充分采用国际统一的疗效标准，很难证明中药在治疗冠心病方面的疗效和安全性优势。无论是最佳剂量还是给药途径，或是药效物质基础、体内过程，目前的研究还不能给出最具说服力的解释。目前临床使用频率较高的中成药品种包括丹参注射液、川芎嗪注射液、生脉注射液、灯盏花素注射液、黄芪注射液、参脉注射液、参附注射液、葛根素注射液等。山楂叶制剂无论在国内还是在国外，在心血管疾病治疗上都有着广范应用。据了解，在欧洲，山楂果、叶和花的混合提取物用于稳定性心绞痛患者取得了肯定疗效，山楂叶制剂对早期老年慢性心力衰竭的治疗也取得显著疗效。在国内，山楂叶现已收载于《中国药典》2005年及2010年一部，山楂叶提取物及制剂益心酮片也已均收载于《中国药典》2005年及2010年一部。益心酮片作为药品上市最早收载中华人民共和国卫生部药品标准中药成方制剂第六册151页。功能主治活血化瘀，宣通血脉。用于瘀血阻脉所致的胸痹，症见胸闷憋气、心前取刺痛、心悸健忘、眩晕耳鸣；冠心病心绞痛、高脂血症、脑动脉供血不足见上述症候着。现代研究表明山楂叶提取物具有降血压、降低外周血管阻力、扩张冠状动脉、增加冠脉流量、降低心肌耗氧量、强心、增加心输出量、抗心肌缺血，抗血小板聚集、改善血液流变性，消除氧自由基、降胆固醇和甘油三脂、增强耐缺氧能力和利尿等药理作用。临床应用于冠心病心绞痛及各种原因引起的早搏有明显疗效，有效地缓解心绞痛及心悸、胸闷等症状，改善心电图，降低血脂，提高HDL，改善微循环和血流变，增加脑血流量，抗脂质过氧化，且安全，未见毒副作用。牡荆素为黄酮类化合物C苷，口服制剂，其生物利用度低，不利于本品临床疗效发挥，故我们将牡荆素制与甘露醇成冻干粉针组合物。即利于临床疗效最大发挥，又利于运输、忙藏，方便临床用药。社会人口老龄化即将到来，冠心病、心绞痛、脑中风患者日益增多，且有年轻化的趋势，对此类药物需求日益增大，已上市临床运用药物随着患者使用增多，各种不良反应也随着增加。临床费用居高不下，市场急需疗效确切不良反应少，毒副作用低，价格相对便宜的药物。牡荆素、甘露醇组合物，质量稳定可控，疗效确切体内作用清楚，不良反应少，毒副作用低，物美价廉是普通百姓都能用得起的药。本品开发上市将能更好的满足广大患者需要，解决患者身心痛苦，具有良好的社会效益和经济效益。
发明内容
本发明的目的是提供了一种新的临床用于治疗心脑血管疾病的药物，该药物效果确切，作用速度快，毒副作用低。本发明还提供了牡荆素和甘露醇的混合组合物的制备方法、检验方法。本发明目的是通过以下技术方案实现
治疗心脑血管疾病的组合物，其活性成分为治疗有效量的牡荆素和甘露醇的混合组合物。治疗心脑血管疾病的组合物是通过在干重的基础上，按照1:6 10重量比的牡荆素和甘露醇来制备的，具体步骤如下a、称取处方量甘露醇、牡荆素原料混合，加注射用水，搅拌均匀，再加0. lmol/L的氢氧化钠溶液，搅拌溶解，再用lmol/L的盐酸溶液调至PH在8. 5±0. 5左右，加0. 04-0. 05%的针用活性炭，搅拌10-15分钟，微孔钛过滤器减压粗滤，脱炭，检查含量、pH合格后，再经0. 2-0. 25 um微孔滤膜终端过滤后，分装于西林瓶中，低温冷冻干燥；b、预冻把分装好的药品放入冻干箱内隔板上预冻开始至+25°C _40°C ；C、升华干燥将冷凝器温度下降至_45°C以下，启动真空泵，待真空度达到一定数值后，缓缓打开蝶阀，当干燥箱内的真空度达13. 33Pa即0.1mmHg以下关闭冷冻机，通过隔板下的加热系统缓缓加热，使冻结产品的温度逐渐升高至22-25°C ；d、再干燥在25-30°C下干燥，干燥失重符合规定，在无菌条件下加盖胶塞，轧盖，包装，检验，入库。
治疗心脑血管疾病的组合物的检验方法，包括以下过程(I)取本品适量，加乙醇制成每Iml含主药20呢溶液，作为供试品溶液，另取牡荆素对照品同法制成对照品溶液，按照2010年版中国药典一部附录薄层色谱法试验，吸取供试品溶液、对照品溶液各5W，分别点于同一聚酰胺膜上，以36%醋酸为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1%三氯化铝溶液，热风吹干，置紫外灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；(2)取本品适量，加乙醇制成每Iml含主药10吒的溶液，按照2010年版中国药典一部附录紫外-可见分光光度法测定，在270nm波长处有最大吸收；(3)有关物质取本品内容物，混合均匀，精密称取约相当于牡荆素25mg的样品，置50ml量瓶中，加60%乙醇IOml使溶解后用流动相稀释制成每Iml中含500 y g的溶液，作为供试品溶液；精密量取适量，加流动相稀释制成每I ml中含10 ii g的溶液，作为对照溶液；另精密称取荭草素对照品适量，用流动相使溶解并定量稀释制成每Iml中含g的溶液作为杂质对照品溶液，按照(5)含量测定项下的色谱条件，精密量取对照品溶液20 Ul注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分色谱峰的峰高约为满量程的20% ;再精密量取供试品溶液20 u I注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分色谱峰保留时间4倍，供试品溶液色谱图中如显杂质峰，含杂质荭草素按外标法以峰面积计算，不得过0. 6%，在供试品溶液中任何小于对照溶液主峰面积0. 01倍的峰可忽略不计的情况下，所有各杂质量的总和不得过2. 0% ；(4)甘露醇取本品适量,约相当于甘露醇0. 2g，精密称定，置250ml量瓶中，加水使溶解并稀释至刻度，摇匀；精密量取10ml，置碘瓶中，精密加高碘酸钠溶液[取硫酸溶液(1 — 20) 90ml与高碘酸钠溶液(2. 3 — 1000) IlOml混合制成]50ml，置水浴上加热15分钟，放冷，加碘化钾试液10ml，密塞，放置5分钟，用0. 05mol/L硫代硫酸钠滴定液滴定，至近终点时，加淀粉指示液1ml，继续滴定至蓝色消失，并将滴定的结果用空白试验校正。每Iml硫代硫酸钠滴定液相当于0 . 9109mg的C6H14O6，含甘露醇应为标示量的90. 0 110. 0% ；(5)牡荆素含量测定按照2010年版中国药典一部附录高效液相色谱法测定；色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-水-冰醋酸为18 82 1为流动相；检测波长为270nm。理论板数按牡荆素峰计算应不低于2500,牡荆素峰与杂质峰的分离度均应符合要求；测定法取本品内容物，混合均匀，精密称取约相当于牡荆素25mg的样品，置50ml量瓶中，加60%乙醇使溶解并稀释至刻度，摇匀；再精密吸取Iml置IOml容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。精密量取20沿注入液相色谱仪，记录色谱图；另取牡荆素对照品适量，精密称定，同法测定，按外标法以峰面积计算，含牡荆素(C21H2tlOltl)应为标示量的90. 0 110. 0%。本发明治疗心脑血管疾病的牡荆素和甘露醇的混合组合物在抗心肌缺血、降低心肌耗氧量、改善血流动力学以及抗脑缺血等方面，疗效确切显著，作用速度快，质量稳定可控，无不良反应，毒副作用低，成本较低，能更好的满足广大患者需要，解决患者身心痛苦，具有良好的社会效益和经济效益。
具体实施方式
以下通过具体实施例来进一步详细说明本发明。实施例1 :注射用牡荆素甘露醇的制备a、称取牡荆素30g、甘露醇180g原料均匀混合，加600ml注射用水，搅拌均匀，再加0. lmol/L的氢氧化钠溶液1500ml，搅拌溶解，再用lmol/L的盐酸溶液调至PH在8. 5左右，加注射用水至3000ml，加0. 05%的针用活性炭，搅拌10分钟，微孔钛过滤器减压粗滤，脱炭，检查含量、pH合格后，再经0. 22 y m微孔滤膜终端过滤后，分装于IOml西林瓶中，每瓶装3ml,低温冷冻干燥。b、预冻把分装好的药品放入冻干箱内隔板上预冻开始至+25°C -40°C，2小时;-40°C，3小时。C、升华干燥将冷凝器温度下降至_45°C以下，启动真空泵，待真空度达到一定数值后，缓缓打开蝶阀，当干燥箱内的真空度达13. 33Pa (0.1mmHg)以下关闭冷冻机，通过隔板下的加热系统缓缓加热，使冻结产品的温度逐渐升高至-20°C，再由-20°C逐渐升高至25°C。整个升华干燥过程约26小时。d、再干燥在25°C下干燥约5小时，干燥失重符合规定，在无菌条件下加盖胶塞，轧盖，包装，检验，入库。实施例2 :注射用牡荆素甘露醇的检验(I)取本品14. Omg,加乙醇制成每Iml含牡荆素20呢溶液,作为供试品溶液；另取牡荆素对照品同法制成对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录VI B)试验，吸取供试品溶液、对照品溶液各5W，分别点于同一聚酰胺膜上，以36%醋酸为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1%三氯化铝溶液，热风吹干，置紫外灯(365nm)下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
(2)取本品7. Omg，加乙醇制成每Iml含主药10吒的溶液，照紫外-可见分光光度法(中国药典2010年版一部附录V A)测定，在270nm波长处有最大吸收；( 3 )有关物质取装量差异项下的内容物，混合均匀，精密称取适量(约相当于牡荆素25mg)，置50ml量瓶中，加60%乙醇IOml使溶解后用流动相稀释制成每Iml中含500 y g的溶液，作为供试品溶液；精密量取适量，加流动相稀释制成每I ml中含IOii g的溶液，作为对照溶液。另精密称取荭草素对照品适量，用流动相使溶解并定量稀释制成每Iml中含g的溶液作为杂质对照品溶液。照含量测定项下的色谱条件，精密量取对照品溶液20ul注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分色谱峰的峰高约为满量程的20% ;再精密量取供试品溶液20 u I注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分色谱峰保留时间4倍，供试品溶液色谱图中如显杂质峰，含杂质荭草素按外标法以峰面积计算，不得过0. 6%，所有各杂质量的总和不得过2. 0%。(供试品溶液中任何小于对照溶液主峰面积0. 01倍的峰可忽略不计)；(4)甘露醇取本品233. 3mg，约相当于甘露醇0. 2g，精密称定，置250ml量瓶中，加水使溶解并稀释至刻度，摇匀；精密量取10ml，置碘瓶中，精密加高碘酸钠溶液[取硫酸溶液(I — 20)90ml与高碘酸钠溶液(2. 3 — 1000)110ml混合制成]50ml，置水浴上加热15分钟，放冷，加碘化钾试液10ml，密塞，放置5分钟，用硫代硫酸钠滴定液(0. 05mol/L)滴定，至近终点时，加淀粉指示液lml，继续滴定至蓝色消失，并将滴定的结果用空白试验校正。每Iml硫代硫酸钠滴定液(0. 05mol/L)相当于0. 9109mg的C6H14O6，含甘露醇应为标示量的100. 1%。(5)牡荆素含量测定按照高效液相色谱法(中国药典2010年版一部附录VI D)测定；色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-水-冰醋酸(18 82 :1)为流动相；检测波长为270nm。理论板数按牡荆素峰计算应不低于2500,牡荆素峰与杂质峰的分离度均应符合要求；测定法取装量差异项下的内容物，混合均匀，精密称取适量(约相当于牡荆素25mg)，置50ml量瓶中，加60%乙醇使溶解并稀释至刻度，摇匀；再精密吸取Iml置IOml容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。精密量取20W注入液相色谱仪，记录色谱图；另取牡荆素对照品适量，精密称定，同法测定，按外标法以峰面积计算，含牡荆素(C21H20O10)应为标示量的 90. 0 110. 0%。实施例3 :注射用牡荆 素甘露醇的临床使用静脉滴注,一次I瓶,一日I次；用150ml生理盐水溶解后使用。具体用法是取无菌注射针管吸取3 5ml注射用水，注入装有牡荆素、甘露醇组合物的西林瓶中，摇匀使溶解，再用无菌针管吸取注入150ml生理盐水中，摇匀后，用静脉滴注的方法，滴入患者静脉血管内。实施例4 :注射用牡荆素甘露醇的临床使用静脉滴注,一次2瓶,一日I次；用150ml生理盐水溶解后使用。具体用法是取无菌注射针管吸取3 5ml注射用水，注入装有牡荆素、甘露醇组合物的西林瓶中，摇匀使溶解，再用无菌针管吸取注入150ml生理盐水中，摇匀后，用静脉滴注的方法，滴入患者静脉血管内。实施例5 :注射用牡荆素甘露醇的临床使用静脉滴注,一次2瓶,一日I次；用250ml生理盐水溶解后使用。具体用法是取无菌注射针管吸取3 5ml注射用水，注入装有牡荆素、甘露醇组合物的西林瓶中，摇匀使溶解，再用无菌针管吸取注入250ml生理盐水中，摇匀后，用静脉滴注的方法，滴入患者静脉血管内。本发明药物组合物具有活血化瘀，宣通血脉。用于瘀血阻脉所致的胸闷胸痛、肢体麻木、中风偏瘫；脑中风、冠心病、心绞痛见上述症候者。本发明药效、药理、毒理等试验详见下述试验例1:动物心血管药效研究1、动物心血管药效学研究结果(I)试验材料牡荆素、甘露醇混合组合物由合肥七星医药科技有限公司提供，批号101109(冻干粉针，为淡黄色疏松块状物，规格30mg/每瓶)，临用前用生理盐水(NS)溶解至所需浓度；昆明种小白鼠(体重18 — 24g)及Wistar大鼠(体重200 320g)，由安徽医科大学实验动物中心提供，动物合格证号皖医实动准第01号，实验室饲养温度22±2°C ;家兔(体重2.0 2.5 kg)和杂种狗(体重7. 5 12.0 kg):安徽医科大学实验动物中心提供。(2)试验方法
小鼠气管夹闭心肌缺氧模型昆明种小鼠50只，体重18 24g。随机分为5组NS对照组、牡荆素、甘露醇混合组合物(12，6，3 mg .kg—1) 3个剂量组以及葛根素(60mg -kg-1)阳性药对照组，每组10只，早^各半。小鼠尾静脉注射给予(iv)受试药物后背位固定于蛙板上，做颈部正中切口，分离气管，并连接ECG。给药后20min夹闭气管，同时开始记时，以ECG II导联持续出现一平直线(即心电消失)作为小鼠死亡的标志。记录小鼠夹闭气管后II导联心电持续的时间(min)。大鼠急性心肌缺血模型大鼠60只随机分为6组假手术(Sham)组；NS模型对照组；牡荆素、甘露醇混合组合物(6，3，1. 5 mg个剂量组以及葛根素(30 mg .1 1)阳性药对照组，每组10只，早6各半。大鼠以10%水合氯醛(0.3ml .lOOg —O腹腔注射(ip)麻醉，仰卧位固定，颈部正中切口，分离右侧颈总动脉(CCA)，行气管插管，接人工呼吸机(呼吸时比为1. 5 I，60次^min-S潮气量70次^min-0，于胸骨左缘3 5肋打开胸腔，暴露心脏，在肺动脉圆锥左缘与左心耳下缘2_处经浅层心肌穿一 3/8丝线。结扎冠状动脉左前降支，造成心肌缺血。其中，Sham组及模型组舌下静脉注射(iv) NS，且Sham组只穿线不结扎，其它各受试药组大鼠于冠脉结扎前20min iv相应的受试药物。实验过程中，定期监测II导联ECG，30min后经右侧CCA插管取血，3000rpm离心lOmin，取上清液待测LDH和CK活力；实验结束后立即摘取心脏，留取左心室称重，并将其横切成6 8片，置入0.2% NBT染液中，37°C染色20min后，分离梗死心肌并称重，以计算梗死心肌占左心室肌湿重的百分比。Iso诱发大鼠急性心肌缺血模型50只大鼠(体重220 240g)随机分为模型组(iv NS + sc Iso)、牡荆素、甘露醇混合组合物(6，3，1. 5 mg-kg—1) 3个剂量组(iv牡荆素、甘露醇混合组合物+ sc Iso)及葛根素30 mg*kg^1i(iv葛根素+ sc Iso)，共5组，每组10只，早^各半。其中，Iso (注射剂量为5 mg kg-1)于各组受试药物iv给药后20min时于背部皮下注射给予，以诱发出现急性心肌缺血，并产生缺血ECG波形(II导联，ST段抬高或压低)。各组于注射Iso前及注射后30’，I’，2’，5’，10’，20’分别记录一次ECG (II导联)，以ST段偏移基线的高度的总和2 ST的mv数以及ST段偏移的平均值作为心肌缺血损伤程度的指标。20min后处死大鼠，迅速摘取完整心肌组织，剪取心尖部固定部位心肌组织称湿重；80°C烘烤15小时后，再称`其干重。计算心肌含水量(MWC)。MWC =(湿重-干重)/湿重X 100%。犬急性实验性心肌梗塞实验健康成年杂种犬36只，体重7. 5 12. Okgo随机分成6组Sham组、NS模型组、牡荆素、甘露醇混合组合物(4，2，Img kg—1) 3个剂量组及葛根素15mg k^1组，每组6只，早古兼用，早未孕。将犬以3%戊巴比妥钠静脉麻醉后，右侧位固定于手术台上，行气管插管并连接人工呼吸机维持呼吸。左侧第四肋间开胸，暴露心脏，分离冠状动脉左前降支中下1/3处，穿线以备结扎。按梗死区、梗死周围及正常组织部位固定30个心外膜电图电极，于冠脉结扎后即刻，5，15，30，45，60，90，120min等时刻描记心电图，以ST段升高总电压数表示心肌缺血程度(I ST)，以ST段升高大于2mv的导联数，计算心肌缺血范围(N-ST)。结扎前20min用药组经股静脉注入所试药物(给药容积为lml/kg)。结扎2h时取血待测CK，LDH活性，并迅速于左心室注入碳素墨水后处死，取出心脏，生理盐水洗净瘀血，剪下左心室，滤纸吸干后称重。分离缺血区(白色)与非缺血区(黑色)，称取缺血心肌重量。再将缺血心肌切成等厚的几片，置于0.2 %NBT中，37°C染色20min，剪下梗死心肌(不染色或灰黄色)称重。以缺血心肌重/左室重X100%代表缺血范围；以梗死心肌重/缺血心肌重X100%代表梗塞范围。并计算心梗指数，心梗指数=梗死区重量/左室重X100%。杂种犬血流动力学实验选用健康杂种犬30只，体重7. 5 12. 0kg。随机分成5组NS对照组、牡荆素、甘露醇混合组合物(4，2，Img kg-1) 3个剂量组及葛根素15mg kg—1组，每组6只，早6兼用，雌性未孕。以3%戊巴比妥钠静脉麻醉，取仰卧位固定。颈部正中切口，暴露并切开气管，接气管插管；分离右侧颈静脉以备冠状静脉窦插管进行血氧含量测定用；分离左下肢股动脉，接BL-420E生物机能实验系统描记血压；分离右下肢股动脉以备采血进行动脉血氧含量测定；分离左下肢股静脉，缓慢恒速输入生理盐水(约lml/min)以补充丢失的体液；四肢皮下固定针式电极，描记标准肢体II导联ECG，以计算心率；然后动物取前肢右卧位，胸前区去毛，于左四、五肋间，沿第四肋下缘切开皮肤，钝性分离肌肉，暴露胸膜后，接人工呼吸机，充分止血后切开胸膜，提起心包膜切开并作心包床，小心分离冠状动脉左旋支和主动脉根部后留预置线，根据冠状动脉和主动脉的粗细，选择并连接合适的多普勒超声血流仪MP100探头(2mm，12mm);左心室插管(管内充满肝素生理盐水)经左心室心尖部插入左心室内，接BL-420E生物机能实验系统测量左室内压、左室舒张末期压；从右颈静脉插管至冠状静脉窦(心导管内注入肝素生理盐水抗凝)；上述操作结束后，静脉注射肝素进行全身肝素化(5mg/kg)。待动物稳定30分钟后，观察并记录血压、ECG、冠状动脉流量和主动脉流量，并从股动脉和冠状静脉窦取血进行血氧含量测定，作为给药前的正常值。然后根据不同组别和剂量静脉注射给药(给药容积为lml/kg)，于给药后5，15，30，45，60，90和120 min时分别测定冠状动脉和主动脉血流量、血压以及ECG等，并于给药后30min，60min分别采血测冠状静脉窦和股动脉血氧含量。实验结束后，取出心脏称重。根据结果，将血压、心率、左室内压、冠状动脉血流量、主动脉血流量及血氧含量进行统计学处理，并根据公式计算出心搏出量、心脏指数、心搏指数、左室作功、每分钟100克心肌血流量、冠脉阻力、总外周阻力、心肌耗氧量、心肌氧利用率及心肌耗氧指数等。二级指标计算公式如下(I)体表面积=(体重 kg) 2/3X0. 11
(2)心搏出量=心输出量(ml/min) +心率(beat/min)(3)心脏指数=心输出量(ml/min) +体表面积(m2)(4)心搏指数=心脏指数(L/min/m2) + 心率(beat/min) XlO3(5)左室作功=心脏指数X1. 052 X (血压_5) X 13. 6+ IO3(6)每分钟每IOOg心肌血流量=冠脉血流量(ml/min) +1/3心脏重量X 100(7)冠脉阻力=血压(mmHg) +每分钟每IOOg心肌血流量(8)总外周阻力=血压(mmHg) X79.92+心输出量(L/min)(9)心肌耗氧量=(动脉血氧量-冠状窦静脉血氧量)X冠脉血流量(ml/min)X 10_2(10)心肌氧利用率=(动脉血氧量-冠状窦静脉血氧量)+动脉血氧量XlOO(11)心肌耗氧指数=心率(beat/min) X 血压(mmHg) XlCT2(12)血流量=流速(cm/sec) X3. 14X 半径(cm)2X60 (sec)(3)试验结果牡荆素、甘露醇混合组合物对气管夹闭小鼠心电持续时间的影响结果如表I所示，气管夹闭后，NS对照组小鼠在9. 26±1. 14min时相继死亡，而牡荆素、甘露醇混合组合物12，6，3 mg-kg^1 3个剂量组小鼠心电消失的时间均显著长于NS对照组，最多可延长约32. 94%，差异具有高显著性(P〈0. 01)，效果优于阳性药。提示牡荆素、甘露醇混合组合物可显著提高小鼠心脏耐缺氧的能力。表I牡荆素、甘露醇混合组合物对气管夹闭小鼠心电持续时间的影响(；±S，n=10)
权利要求
1.一种治疗心脑血管疾病的组合物，其特征在于，其活性成分为治疗有效量的牡荆素和甘露醇的混合组合物。
2.根据权利要求1所述的治疗心脑血管疾病的组合物，其特征在于，所述的牡荆素和甘露醇的重量比为1:6 10。
3.—种如权利要求1所述的治疗心脑血管疾病的组合物的制备方法，其特征在于，所述的药物组合物是通过在干重的基础上，按照1:6 10重量比的牡荆素和甘露醇来制备的，具体步骤如下 a、称取处方量甘露醇、牡荆素原料混合，加注射用水，搅拌均匀，再加0.lmol/L的氢氧化钠溶液，搅拌溶解，再用lmol/L的盐酸溶液调至PH在8. 5 ±0. 5左右，加0. 04-0. 05%的针用活性炭，搅拌10-15分钟，微孔钛过滤器减压粗滤，脱炭，检查含量、pH合格后，再经0. 2-0. 25 um微孔滤膜终端过滤后，分装于西林瓶中，低温冷冻干燥； b、预冻把分装好的药品放入冻干箱内隔板上预冻开始至+25°C -40°C； C、升华干燥将冷凝器温度下降至-45°C以下，启动真空泵，待真空度达到一定数值后，缓缓打开蝶阀，当干燥箱内的真空度达13. 33Pa即0.1mmHg以下关闭冷冻机，通过隔板下的加热系统缓缓加热，使冻结产品的温度逐渐升高至22-25°C ； d、再干燥在25-30°C下干燥，干燥失重符合规定，在无菌条件下加盖胶塞，轧盖，包装，检验，入库。
4.一种如权利要求1所述的治疗心脑血管疾病的组合物的检验方法，其特征在于包括以下过程 (1)取本品适量,加乙醇制成每Iml含主药20呢溶液，作为供试品溶液，另取牡荆素对照品同法制成对照品溶液，按照2010年版中国药典一部附录薄层色谱法试验，吸取供试品溶液、对照品溶液各5W，分别点于同一聚酰胺膜上，以36%醋酸为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1%三氯化铝溶液，热风吹干，置紫外灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点； (2)取本品适量，加乙醇制成每Iml含主药10呢的溶液，按照2010年版中国药典一部附录紫外-可见分光光度法测定，在270nm波长处有最大吸收； (3)有关物质取本品内容物，混合均匀，精密称取约相当于牡荆素25mg的样品，置50ml量瓶中，加60%乙醇IOml使溶解后用流动相稀释制成每Iml中含500 u g的溶液，作为供试品溶液；精密量取适量，加流动相稀释制成每I ml中含IOii g的溶液，作为对照溶液；另精密称取荭草素对照品适量，用流动相使溶解并定量稀释制成每Iml中含3 ii g的溶液作为杂质对照品溶液，按照(5)含量测定项下的色谱条件，精密量取对照品溶液20 Ul注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分色谱峰的峰高约为满量程的20% ;再精密量取供试品溶液20 u I注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分色谱峰保留时间4倍，供试品溶液色谱图中如显杂质峰，含杂质荭草素按外标法以峰面积计算，不得过0. 6%，在供试品溶液中任何小于对照溶液主峰面积0. 01倍的峰可忽略不计的情况下，所有各杂质量的总和不得过2. 0% ； (4)甘露醇取本品适量，约相当于甘露醇0.2g，精密称定，置250ml量瓶中，加水使溶解并稀释至刻度，摇匀；精密量取10ml，置碘瓶中，精密加高碘酸钠溶液[取硫酸溶液(I — 20) 90ml与高碘酸钠溶液(2. 3 — 1000) IlOml混合制成]50ml，置水浴上加热15分钟，放冷，加碘化钾试液10ml，密塞，放置5分钟，用0. 05mol/L硫代硫酸钠滴定液滴定，至近终点时，加淀粉指示液1ml，继续滴定至蓝色消失，并将滴定的结果用空白试验校正；每Iml硫代硫酸钠滴定液相当于0. 9109mg的C6H14O6，含甘露醇应为标示量的90. 0 110. 0% ； (5)牡荆素含量测定按照2010年版中国药典一部附录高效液相色谱法测定； 色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-水-冰醋酸为18 82 1为流动相；检测波长为270nm ;理论板数按牡荆素峰计算应不低于2500,牡荆素峰与杂质峰的分离度均应符合要求； 测定法取本品内容物，混合均匀，精密称取约相当于牡荆素25mg的样品，置50ml量瓶中，加60%乙醇使溶解并稀释至刻度，摇匀；再精密吸取Iml置IOml容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液；精密量取20W注入液相色谱仪，记录色谱图；另取牡荆素对照品适量，精密称定，同法测定，按外标法以峰面积计算，含牡荆素(C21H2tlOltl)应为标示量的 90. 0 110. 0%。
全文摘要
本发明公开了一种用于治疗心血管疾病和脑血管疾病的组合物及其制备与检验方法，该组合物是通过在干重的基础上，按照1:6～10重量比的牡荆素和甘露醇来制备的。本发明治疗心脑血管疾病的牡荆素和甘露醇的混合组合物在抗心肌缺血、降低心肌耗氧量、改善血流动力学以及抗脑缺血等方面，疗效确切显著，作用速度快，质量稳定可控，无不良反应，毒副作用低，成本较低，能更好的满足广大患者需要，解决患者身心痛苦，具有良好的社会效益和经济效益。
文档编号A61P9/10GK103054849SQ20121055920
公开日2013年4月24日 申请日期2012年12月21日 优先权日2012年12月21日
发明者邵旭, 何万龙, 牛海军, 李晓亮 申请人:合肥七星医药科技有限公司