用于调节免疫系统的免疫组合物及其用途，用于治疗和预防疾病的方法，诱导细胞再生的 ...的制作方法
【专利摘要】本发明涉及用于调节免疫反应的免疫原性组合物，其包含治疗有效量的两种或更多种具有病原体相关分子模式(PAMP)和/或危险相关分子模式(DAMP)的免疫活性抗原试剂和一种或多种生理上可接受的载体、赋形剂、稀释剂或溶剂。根据本发明的免疫原性组合物用于产生用于预防和/或治疗如下疾病的药物：感染性疾病、自身免疫疾病、过敏性疾病、炎症、关节炎、炎症性疾病、移植排斥、由血管障碍引起的疾病、由出血性或缺血性心血管事件引起的疾病、导致组织破坏的局部缺血、梗塞和出血、心脏、肾、呼吸或肝功能不全、癌症、恶性和良性肿瘤以及赘瘤。本发明还涉及用于诱导细胞、组织、器官和器官系统例如循环、神经和内分泌系统的再生的方法。最后，本发明涉及用于恢复动物，特别地人类的免疫反应的方法。
【专利说明】用于调节免疫系统的免疫组合物及其用途，用于治疗和预防疾病的方法，诱导细胞再生的方法以及用于更新免疫反应的方法
发明领域
[0001]本发明涉及用于调节免疫系统的免疫原性组合物，其包含治疗有效量的两种或更多种呈现病原体相关分子模式(pathogen-associated molecular patterns) (PAMPS)和 /或危险相关分子模式(danger associated molecular patterns) (DAMPS)的免疫活性抗原试剂，以及一种或多种生理上可接受的载体、赋形剂、稀释剂或溶剂。
[0002]优选地，本发明的组合物包含呈现病原体相关分子模式(PAMPS)和/或危险相关分子模式(DAMPS)的免疫活性抗原试剂，所述抗原试剂选自:㈧具有与细菌相关的分子模式的抗原试剂；(B)具有与病毒相关的分子模式的抗原试剂；(C)具有与真菌和酵母相关的分子模式的抗原试剂；(D)具有与原生动物相关的分子模式的抗原试剂；(E)具有与多细胞寄生虫相关的分子模式的抗原试剂，或(F)具有与朊病毒相关的分子模式的抗原试剂。
[0003]本发明的另一个方面是免疫原性组合物在制造用于预防和/或治疗如下疾病的药剂中的用途:感染性疾病、自身免疫疾病、过敏性疾病、炎症、关节炎、炎症性疾病、移植排斥、由血管障碍引起的疾病、由出血性或缺血性心血管事件引起的疾病、导致组织破坏的局部缺血、梗塞和出血、心脏、肾、呼吸或肝功能不全、癌症、肿瘤以及恶性和良性病变。
[0004]本发明的免疫原性组合物还被直接用于预防和/或治疗感染性疾病、自身免疫疾病、过敏性疾病、炎症、关节炎、炎症性疾病、移植排斥、由血管障碍引起的疾病、由损伤或出血缺血性引起的疾病、导致组织破坏的局部缺血、梗塞和出血、心脏、肾、呼吸或肝疾病、癌症、肿瘤以及恶性和良性病变。
[0005]本发明还涉及用于诱·导细胞再生、组织再生、器官再生以及器官系统例如循环系统、神经系统和内分泌系统的再生的方法。
[0006]最后，本发明涉及用于更新动物、特别地人的免疫反应的方法。
发明背景
[0007]抗生素和其它药物的发现
[0008]从20世纪下半叶抗生素的先驱性发现以来，已大规模地开发了抗大多数细胞内和细胞外细菌的新型抗生素、半合成抗生素和具有抗微生物活性的化学治疗剂。这些开发已改变了医学史，从而使得其对于绝大部分折磨人类的细菌感染性疾病达到了广谱的治愈。
[0009]因此，抗生素的发现是一个伟大的里程碑，分水岭，因为感染可因明确的因果关系而以明确的方式得以阐明和治愈，并且当确定时是可测量的。该发现在医学中极大地扩展了治愈的能力，对人健康和寿命具有巨大的积极影响。在疾病的演化和治疗中抗生素的发现从通过该实验模型获得的成功深远地影响了研究者的研究和思想(Reeves G, Todd 1.Lecture notes on immunology.第 2 版:Blackwell ScientificPublications, 1991 ；Neto VAj Nicodemo AC，Lopes HV.Antibioticos na pratica medica.第 6 版:Sarvier, 2007 ;Murray PR, Rosenthal KS, Pfaller MA.Microbiologia Medica.第 5 版:Mosby, 2006 ;Trabulsi LR, Alterthum F.Microbiologia.第 5 版:AtheneuEditora, 2008)。
[0010]继抗生素之后是抗真菌、抗寄生虫和抗病毒药物的开发和使用。还开发具有广泛应用的抗恶性肿瘤的抗肿瘤药、细胞抑制药和细胞毒药物、有激素和非激素性质的抗炎药、抗过敏药和免疫抑制药物(抗淋巴细胞，其中和免疫系统的抗白细胞)，如用于感染性疾病，用于任何来源的炎症性疾病，用于自身免疫疾病，用于遗传疾病，用于血管疾病，用于过敏性疾病，用于创伤，用于肿瘤性疾病，用于激素性疾病，用于退行性疾病等等。
[0011]因此，新药物为医学干预带来非凡的能力，提供了巨大益处，决定性和部分治愈，不治之症中的寿命延长，但具有因与它们缺乏针对治疗的疾病的病理生理学的特异性相关的副作用而造成的极高发病率。
[0012]先天性免疫
[0013]先天性免疫，除了防止微生物的进入和阻止它们的定殖以外，还具有另一个最近发现的生命机能(vital function):区分“自我”与“非自我”以及与起始或抑制抗侵入微生物的整体免疫反应或阻止、修复或抑制对身体的破坏或自我侵害的病况(例如，在创伤、自身免疫疾病和过敏性疾病等中)的警告和命令相关的模式识别能力。该双重能力先前被错误地专有地归功于适应性免疫。先天性免疫通过其自己的受体识别侵入病原微生物、自体或甚至同种异体赘生性细胞、同种异体或异种移植物为“非自我”，从而将它们鉴定为不属于生物体。从那时起，其触发了警告和联合先天性及适应性免疫反应以消除它 们或抑制对人或动物生物体有害的反应(Goldsby RA, KindtTJ, Osborne B.1munologia de kuby.第 6 版:ARTMED ;2008，第 704 页；Janeway
C,Travers P, Walport M, Slhlomchik MJ.1mmunobiology.第 5 版:Garland Pub.；2001.第 732 页；Voltarelli JC.1munologia clinica ha pratica medica:atheneu editora ；2009 ；Janeway CA, Jr., Medzhitov R.1nnate immune recognition.Annual review ofimmunology.2002 ；20:197-216.Epub2002/02/28 ；Matzinger P.The danger model:arenewed sense of self.Science.2002 ；296(5566):301-5.Epub2002/04/16 ；SteinmanRM,Banchereau J.Taking dendritic cells into medicine.Nature.2007 ；449(7161):419-26.Epub2007/09/28.；Beutler BA.TLRs and innate immunity.Blood.2009 ； 113(7):1399-407.Epub2008/09/02 ；Moresco EM, LaVine D,Beutler B.Toll-like receptors.Current biology:CB.2011 ；21(13):R488_93.Epub2011/07/12)。
[0014]侵袭性微生物、赘生性细胞或改变的或移植的细胞的“非自我”的(默认/标准/模式识别通过前哨细胞(sentinel cell)(以上皮细胞、粘膜细胞和基质细胞例如周细胞、树突细胞、巨噬细胞和成纤维细胞等为代表的)来进行。策略性地遍布全身的这些细胞具有PRR(模式识别受体)和DRR(危险识别受体)，所述受体是各自能够识别a)广泛的微生物的标准识别分子、特征，和b)所述惰性物质的某些化学和物理模式和对代谢应激例如自由基的释放和组织化学变化(因电离辐射或因化学物质等而引起的)的改变的受体。
[0015]PRR不能辨别一个特定的个体微生物，但能辨别微生物而非人体的存在。每一个PRR接受者可结合几种不同的病原体，识别为未在人或动物身体中发现的来自细菌、病毒、真菌或寄生虫的PAMP (病原体相关分子模式)糖类、脂质、肽和核酸。[0016]DRR辨别存在组织损伤，一种由无生命的或惰性试剂引起的危险状态。DRR鉴定与由毒性物质、辐射或创伤引起的组织损伤相关的DAMP(危险相关分子模式)，其引起被这些受体识别的代谢应激、自由基的释放和组织化学变化(Janeway C，TraversP, alport M, Slhlomchik MJ.1mmunobiology 第 5 版:Garland Pub.；2001.第 732 页；Matzinger P.The danger model:a renewed sense of self.Science.2002 ;296(5566):301-5.Epub2002/04/16 ；Beutler BA.TLRs and innate immunity.Blood.2009 ; 113(7):1399-407.Epub2008/09/02 ；Moresco EM, LaVine D, Beutler B.Toll-like receptors.Current biology:CB.2011 ；21(13):R488_93.Epub2011/07/12)。
[0017]因此，前哨细胞通过它们的PRR和它们的DRR在哪个属于(“自我”)和哪个为属于(非“自我”)的分类中，以及在通过侵入病原体的PAMP以及由赘生性细胞和毒性物质或修饰(因创伤引起的)引起的DAMP(从而导致对人和动物生物体的实际危险的状况)的识别触发炎症和免疫反应中起作用。
[0018]立即地，这些活化的前哨细胞发出警告信号，通过NF_kB(核因子-kB)信号翻译系统触发先天性免疫反应(从而导致促炎细胞因子的分泌)和产生Ia和β型干扰素的IRF信号翻译系统。这些细胞因子一起作用于细胞和血管，引起局部炎症性过程，最初包含侵入试剂、自体(肿瘤细胞)、异种(微生物、朊病毒、移植瓣(graft)和移植物)或同种异体(移植瓣和移植物)，或修复危险状况。该观点通过预先存在的调理急性期蛋白的抗体以及通过白细胞和巨噬细胞(所述细胞吞食和开始分别破坏细胞外和细胞内微生物，或消除任何类型的其它病原体)发生。
[0019]在痛风中，在矽肺、化学侵害中，在异物(foreign body)肉芽肿中，在创伤中，形成炎症性过程以消除激怒物(offending agent)(如果可能的化)，随后诱导组织治愈和再生。当激怒物未被消除并且炎症被永久化且引起不可治愈或不可控制的慢性炎症性疾病(稳定的或进行性的)时，这 危害了患者的生命或健康。
[0020]先天性免疫与适应性免疫的相互作用及整合
[0021]具有APC功能的先天性免疫前哨细胞(抗原呈递细胞)例如树突细胞和巨噬细胞在侵袭、攻击和炎症部位上同时吞噬和胞饮(除其它侵袭物以外)微生物或肿瘤细胞或移植的细胞并且加工它们的抗原。被病原体脉冲的这类APC细胞迁移至局部淋巴结并且活化它们。反应性淋巴结中的活化和成熟的APC细胞将抗原呈递至淋巴细胞，分泌细胞因子，从而诱导、协调、极化、扩增和维持对于侵入微生物或赘生性细胞或对于移植的细胞或其它激怒物是特异性的适应性免疫反应，从而允许它们被攻击和消除，获得感染或炎症的可行且必然的治愈以及修复和再生或伤口愈合。
[0022]因此，这些免疫机制以整合和协同的方式通过先天性和适应性反应抵御疾病，所述反应是通过前哨细胞、APC功能前哨细胞和先天性免疫效应物、与适应性免疫的细胞和分子效应物(其分别为淋巴细胞、细胞因子和抗体)结合的细胞和分子进行的。
[0023]因此，在针对任何类型的侵袭物的感染或免疫反应的背景中，两种免疫(先天性和适应性免疫)的相互作用帮助以整体和协同的方式抵御疾病。两种免疫的整合最初通过具有APC功能的先天性免疫细胞例如树突细胞和巨噬细胞的作用，但主要地通过树突细胞的活性进行的，因为它们是能够起始针对主要传染原或寄生虫的适应性免疫反应，从而有效地保护身体的细胞。[0024]如所指出的，巨噬细胞也用作APC细胞，但更专门化，并且作为效应物回路的部分参与微生物的吞噬作用和消除。B淋巴细胞，当成熟时，也是APC细胞，并且其最为人所知的作用是在产生抗T依赖性抗原的抗体和二次抗体应答的两种淋巴细胞的协同的框架内，将抗原呈递至T淋巴细胞的呈递。巨噬细胞，与其它髓系细胞一样，也在癌症和不能治愈的慢性感染中参与抑制免疫反应。在这些情况下，其性能不利于生物体的防御，因为其抑制免疫反应并且产生肿瘤易化(tumor facilitation)。恶性肿瘤病的特征在于引起初始沉默的难察觉的炎症，并且最终其通过TH17特征性炎症组织变得极具促炎性和症状性，这通常导致患者遭受长期痛苦。
[0025]当共刺激分子不在APC细胞表面表达时，由于特征在于不存在PAMP和DAMP对PRR的活化的警报信号的不存在，仅产生由TCR提供的第一信号。在TCR与抗原结合后，在第二信号不存在的情况下，T淋巴细胞变得耐受显示的特定抗原并且中止了免疫反应。
[0026]在另一方面，活化的T淋巴细胞的⑶40L分子，当其结合至APC细胞上的⑶40分子时，显著地增加了⑶80和⑶86分子的表达，从而增强了当前反应，这从而仅当适应性T反应已在保卫身体中时才发生。由细胞因子例如IL-1提供的第三信号仅由APC细胞在结合共刺激分子和发射第二信号后提供。由APC细胞分泌的IL-1作用于淋巴细胞，导致IL2的受体完全表达以及导致参与对起始克隆扩增的反应的处女或记忆淋巴细胞产生细胞因子。
[0027]因此，病原体对先天性免疫的活化是解除第二和第三信号的束缚和发生潜在有效的免疫(通过从事反应的T淋巴细胞的完全活化进行的)的关键。在第二和第三信号不存在的情况下，反应被中止并且产生对于所呈递的抗原是特异性的耐受性。
[0028]在嗜中性粒细胞、单核细胞和巨噬细胞通过PAMP与抗原呈递细胞(APC)上的PRR的联系起始对细菌和对其它传染原的抵御的同时，它们活化局部和新到达的树突细胞和巨噬细胞。这些细胞吞噬和胞饮细菌和细菌抗原，加工它们并且开始成熟过程。活化和成熟的树突细胞现迁移至局部淋巴结以呈递抗原和起始对侵袭物的免疫反应。
[0029]成熟抗原脉冲的APC细胞，尤其是`树突细胞在淋巴结中与T和B淋巴细胞协作，起始适应性反应。树突细胞是最具效力的呈递抗原的细胞，只有APC细胞能够活化处女CD4T淋巴细胞和起始新的免疫反应。
[0030]在淋巴结中进行一段约7天的时间后，变成T⑶4Th2的空白⑶4淋巴细胞与B淋巴细胞和抗原呈递树突细胞之间的协作，起始了特异性致敏的B淋巴细胞的分化。现被活化的这类B细胞，在与此类抗原接触后通过表面免疫球蛋白识别细菌抗原，增殖，成熟和分化成现分泌抗该细菌的特异性抗体的浆细胞。所有类型的感染(细菌、病毒、真菌和寄生虫)通常可在急性期中发展至呈现再生和愈合的完全治愈，或带有后遗症的治愈。它们还可发展成不可治愈的慢性病(可控制的或不可控制的)，能够治愈的慢性病(具有或不具有后遗症)或死亡。
[0031]免疫反应的极化
[0032]已知的和由树突细胞通过与不同细胞因子直接和间接接触诱导的以及由T CD4细胞产生的免疫特征谱具有4种类型:
[0033]a)细胞Thl特征谱，其产生通过细胞介导的细胞免疫；
[0034]b)体液Th2特征谱，其产生通过抗体介导的体液免疫；
[0035]c)组织或炎症性Thl7特征谱，其产生也由细胞和细胞因子介导的炎症性组织免疫，所述免疫诱导对于某些病原体的消除是特别重要的炎症，和
[0036]d)Treg/Trl特征谱，其通过抑制上述其它三种特征谱，确保身体平衡状态的恢复来抑制免疫反应和控制。
[0037]e)未完全建立的特征谱，如体液反应的Tfh (滤泡辅助者)，某些寄生虫的Th9特征谱，或可被发现的其它特征谱。
[0038]因此，各种特征谱确保生物体的防御以及侵袭和定殖自体(瘤形成)的致病异种(感染性)试剂的消除。最后的特征谱确保免疫反应的终止、平衡、再生、至常态的完全返回，并且其阻止自我损伤和过敏症，从而与其它特征谱一样，对于人物种和动物的健康和保持是至关重要的。
[0039]免疫反应的极化的现象定义为某些免疫学特征谱例如Thl或Th2在损害其它特征谱(变成次要的或无效的)的情况下获得的优势。该现象根据身体遭受的攻击的类型发生。即，根据感染的类型、病理学和感染阶段或病理学阶段，不同类型的免疫反应可以是优势的，其可以是细胞、体液、组织或免疫调节反应，然而其它类型的免疫反应被抑制，从而导致极化的现象。
[0040]根据定义，在极化中，特征谱是优势的，但其它非优势特征谱也是需要的，并且以将帮助消除疾病的互补方式表达。例如，结核病是Thl7细胞在肺中的出现，所述Thl7细胞允许Thl细胞定居，并且可导致在肺实质中治愈该感染(StoCkinger，B.和Veldhoen, M.Differentiation and function of Thl7T cells.Current Opinion inImmunology, 19(3)，第281-286页.2007)。在病毒感染中，Thl特征谱的CTL细胞破坏被病毒感染的细胞，消除病毒。然而，需要抗体来阻止病毒感染其它健康细胞，从而防止感染的传播。两个特征谱的协同装配是治愈某些病毒感染所必需的。由细胞外革兰阴性杆菌引起的某些肠道感染为了其治愈，在终末期，除了 Th2特征谱外，还需要能够产生消除该类型的细菌所必需的强烈炎症的补充Thl7特征谱的产生。
·[0041]综上所述，由于树突细胞是唯一的能够启动原发性适应性免疫反应的专职APC细胞并且在任何特征谱中在触发继发性特异性免疫反应中是最具效力的，因此它们控制着先天性免疫与获得性免疫的相互作用和整合，以产生能够治愈疾病的有效免疫反应。在炎症部位中，在淋巴结中，在脾中，在粘膜中，与处于不同功能状态的与不同侵袭物接触的其它APC和前哨细胞协作的树突细胞能够领导、协同、极化和放大例如对于侵入病原体的肽是特异性的适应性免疫反应(原发的和继发的)，在该情况下这最适合于清除正在进行的感染。
[0042]因此，树突细胞和其它APC细胞是起始免疫反应的关键细胞，因为它们评价自体和异种病原体的性质，即定殖细胞(colonizing cell)的类型,并且除了控制具有消除病原体所需的特征谱和强度的适应性反应以外，借助于前哨细胞，它们还可测量和评价异种或自体侵袭物的尺寸、其范围、其强度和攻击性。
[0043]在分化后，再分化可发生，其通过抗原或其呈递的微环境和/或类型诱导，其中可交换Thl或Th2特征谱的抗炎特征谱或免疫抑制特征谱或反之亦然。免疫系统在任一方向上的分化或再分化的该极端可塑性显示了当通过极化获得的方向对于治愈感染过程或瘤形成不是最好的方向时，用于在感染过程中操纵免疫系统的策略窗口。
[0044]作为举例说明性实例，我们具有在严重的感染或败血症中所发生的一切，此时由大量接触遍布身体的前哨细胞的微生物引起的大范围炎症，诱导了 Thl7的一个特征谱，这反过来使炎症更加增强，从而变得有害，导致组织破坏而非诱导治愈。在这些情况下，特征在于组织破坏和炎症扩大的Thl7特征谱主要负责损害治愈的临床并发症例如严重的ARDS (成人的急性呼吸窘迫综合征)、肺休克、肾功能衰竭的产生。[0045]为了抑制大范围炎症，Th或Th2特征谱的极化的再分化是设计或制备的免疫疗法，在严重感染或败血症过程中试图解决该引人注目和致命类型的情况的符合逻辑和策略的途径，所述感染或脓毒症具有极高的死亡率和发病率，并且对于其以现有模式例如单一模式施用抗生素和其它抗微生物剂将具有令人失望的抗感染结果。相同的实例用于严重的细胞内细菌、真菌、病毒和寄生虫感染，对于广泛的组织破坏和极其严重的炎症，通常具有不良的预后。
[0046]佐剂用于刺激免疫反应的用途
[0047]人和动物器官通常不产生抗可溶性蛋白质的抗体，从而使得必需使用所谓的非特异性或无关佐剂来获得期望的免疫反应。自免疫学初创以来用于免疫和疫苗应用中的这类佐剂是微生物的部分、矿物油和其它物质或从其制备的，所述佐剂活化先天性免疫，随后产生发展针对蛋白质或针对所述疫苗的期望的免疫反应的所必需的警报和控制(GOLDSBYRA, KINDT TJ, OSBORNE BA.1MUN0L0GIA DE KUBY.第 6 版:ARTMED ; 2008.第 704 页)；(Janeway C, Travers P, alport M, Slhlomchik MJ.1mmunobiology five.第 5 版:GarlandPub.；2001.第 732 页)；(VOLTARELLI JC.1MUN0L0GIA CLINICA NA PRATICA MEDICA:ATHENEU EDITORA ;2009) ； (Janeway CA, Jr., Medzhitov R.1nnate immune recognition.Annual review of immunology.2002 ;20:197-216.Epub2002/02/28.) ； (MatzingerP.The danger model:a renewed sense of self.Science.2002 ;296(5566):301-5.Epub2002/04/16.): (Steinman RM, Banchereau J.Taking dendritic cells into medicine.Nature.2007 ;449 (7161):19-26.Epub2007/09/28.) ；(Beutler BA.TLRs and innateimmunity.Blood.2009 ; 113 (7):1399-407.Epub2008/09/02.) ； (Moresco EM, LaVine
D,Beutler B.Toll-like receptors.Current biology:CB.2011 ；21 (13):R488-93.Epub2011/07/12)。
[0048]应当指出的是，将佐剂用于免疫(尽管是最古老的特征之一，但现今仍然常用，并且是接种和免疫学研究所必需的)仅被认为是有用的非特异性效应。不能设想，持续一个多世纪，其在先天性免疫中区分什么是“自我”和不是“自我”的作用以及其对人物种和动物的存活的独特和根本能力:产生警报信号和起始或不起始、或抑制整合的、保护性或治愈性的先天性和适应性免疫反应的命令(GOLDSBY RA, KINDT TJ, 0SB0RNEBA.1MUN0L0GIA DE KUBY.第 6 版:ARTMED ;2008.第 704 页)；(Janeway C, TraversP, Walport M, Slhlomchik MJ.1mmunobiology five.第 5 版:Gar I and Pub.；2001.第732 页)；(VOLTARELLI JC.1MUN0L0GIA CLINICA NA PRATICA MEDICA:ATHENEU EDITORA ；2009) ； (Janeway CA, Jr., Medzhitov R.1nnate immune recognition.Annual review ofimmunology.2002 ；20:197-216.Epub2002/02/28.) ； (Matzinger P.The danger model:arenewed sense of self.Science.2002 ;296 (5566):301-5.Epub2002/04/16.): (SteinmanRM, Banchereau J.Taking dendritic cells into medicine.Nature.2007 ;449 (7161):419-26.Epub2007/09/28.) ； (Beutler BA.TLRs and innate immunity.Blood.2009 ;113(7):1399-407.Epub2008/09/02.) ； (Moresco EM, LaVine D,Beutler B.Toll-likereceptors.Current biology:CB.2011 ；21 (13):R488_93.Epub2011/07/12)。
[0049]目前的抗感染和抗癌治疗
[0050]通过使用评估、按重要性排列和最优化影响有利于患者的生物平衡的移动的变量和调节他或她的免疫系统(从而在更短时间内减少其无效和允许大量医疗资源释放)的疗法，大量医用物质、工时、药剂和医院病床可得到更好的利用。现有技术仍然必须提供实时进行期望的免疫系统再极化的替代方法，或改变或逆转其对正在发生的疾病或病的反应的时间，如果可能改善生活质量，或延长寿命，或帮助抵御患者正在发生的疾病或病的过程的话。
[0051]抗用于临床实践的抗生素、抗真菌、抗病毒、抗寄生虫和抗肿瘤药的细菌、真菌、病毒、寄生虫和肿瘤抗性被视为治愈细菌性、真菌性、病毒性、寄生虫性和肿瘤性疾病的主要障碍，并且被认为是全球性严重健康问题。该问题通过适当地合理使用抗生素、抗微生物和抗癌药剂和随着新型更具效力的药物的出现而得以避免。然而，迟早地，抗性总是不可避免地产生，该问题的解决办法仍未被发现。由于抗生素、抗真菌、抗病毒、抗寄生虫和抗肿瘤药物被当作唯一证实有效的抗感染 、抗寄生虫和抗肿瘤治疗方式，因此未来治疗的前景因微生物和肿瘤抗性的现象而变得令人不安和暗淡。
[0052]抗生素、抗真菌、抗病毒、抗寄生虫和抗肿瘤药可用于感染性细菌、真菌性、病毒性、寄生虫性和肿瘤性病况的任何分期。然而，抗微生物和抗癌剂不能治愈大多数晚期、无处不在的严重的细菌、真菌、病毒、寄生虫和癌症病况，所述病况通常具有极高的死亡率和发病率。
[0053]此外，新型药物的发现涉及能够基于能够治愈感染性、寄生虫性和肿瘤性疾病的单一药物消除病原体和治愈感染、侵袭和瘤形成的药物。
[0054]目前肿瘤的治疗
[0055]细胞因子例如白细胞介素2以及I α和β型干扰素用于治疗免疫原性肿瘤例如黑色素瘤和肾上腺样瘤。细胞因子骨髓集落生长因子功能用于以良好的效果抵御由疾病或治疗引起的外周血中元素的贫血、白细胞减少症、细胞减少症。I型干扰素被广泛地用于抵御乙型和丙型病毒性肝炎，具有良好的效果，对于多发性硬化的治疗效果不太明显。异体和自体骨髓的移植用于治疗癌症。利用自体或异体的CTL CD8树突细胞、白细胞的被动免疫疗法(使用或不使用细胞因子)被用于治疗某些肿瘤，效果仍然不太明显或根本不明显，但限定于某些特殊的病状，如在免疫抑制移植患者中生长的病毒诱导的肿瘤。在这些情况下，利用对于EBV病毒是特异性的T CTL CD8e CD4细胞的被动免疫疗法通常是成功的并且治愈仅在免疫抑制患者中生长的特殊肿瘤。然而，值得注意的是这些技术以及其它类似但不太有效的技术未开发出试剂或成组的试剂，所述试剂能够有效地免疫调节免疫系统，以起始抗任何侵入病原体(感染)或存在于待治疗的身体中的自体定殖者(colonizer)(肿瘤)的反应，或可解决初级或次级遗传免疫系统的自主神经机能异常(dysautonomia state)状态，导致通过免疫系统产生的自我伤害状态，应当保护身体免受侵害。
[0056]实例包括使用包含可被PPR识别的分子模式的免疫调节剂的成功癌症治疗，作为罕见的已建立的技术之一的BCG疫苗的使用，所述技术已被接受和证明，使用免疫调节作为治疗的方法。Brake及同事描述了 BCG免疫疗法用于具有表浅膀胱瘤的患者的用途，所述患者处于TI 期(Brake M, Loertzer H, Horsch R, Keller H(2000)."Long-term results ofintravesical bacillus Calmette-Guerin therapy for stage Tl superficial bladdercancer".UR0L0GY55 (5):673-678)。免疫疗法通过在复发性浅表肿瘤的情况下施用第二轮BCG来在膀胱肿瘤的完全尿道切除后用于患者。结论是在膀胱肿瘤的尿道切除后利用BCG的免疫疗法代表了用于TI期膀胱癌的高效基础治疗，在所有患者中具有89%的无瘤存活率。
[0057]按照该路线，Burger及同事已示范了随机比较测定，其中具有肌肉层的非侵袭性膀胱癌的患者使用BCG或利用自体巨噬细胞(BEXIDEM ? )的细胞疗法(BurguerM, Thiounn N, Denzinger S，Kondas J, Benoit G,等人(2010) ,The application ofadjuvant autologous antravesical macrophage cell therapy VS.BCG in non-muscleinvasive bladder cancer:a multicenter, randomized trial.Journal of TranslationMedicine, 8:54.do1:10.1186/1479-5876-8-54)。相较于 BCG，不良事件的发生率在治疗BEXIDEM(分别地26%和14%)中显著更低。然而，利用BEXIDEM治疗的患者的肿瘤的复发率显著高于接受BCG作为辅助疗法的患者。
[0058]Donald等人描述了 BCG以免疫疗法的形式用于黑色素瘤患者的用途(DonaldL.Morton, M.D., Frederick R.Eilber, M.D., E.Carmack Holmes, M.D., John S.Hunt, M.D.,等人(1974).〃BCG Immunotherapy of Malignant Melanoma:Summary of a Seven-yearExperience^.Ann.Surg.,第635-641 页)。被选择用于进行研究的患者具有复发的黑色素瘤，已知的残留疾病或处于发生复发的高风险中。首先，在每一个皮内和皮下伤口中将0.l-ο.5cc的BCG直接注射至黑色素瘤的恶性结节中。处于II期的患者利用单独的BCG免疫疗法或利用BCG和同种异体黑色瘤细胞来治疗。在III期疾病中，单独施用BCG或将其作为与患者的肿瘤细胞混合的佐剂来进行施用。利用BCG的瘤内注射治疗的具有真皮内转移的患者是对治疗反应更好的患者，3个因素似乎与对BCG免疫疗法的反应相关:转移的位置、肿瘤出现的量以及患者的免疫活性(immunocompetence)。在具有巨大肿瘤或内脏转移灶的患者BCG的抗肿瘤活性较低。结果显示31%的具有真皮内转移灶的患者经发现在免疫疗法开始后达到6年的时期中无疾病复发。
[0059]由Grant等人描述的免疫疗法由与BCG组合的BEC2 (模拟存在于小细胞肺癌的大多数肿瘤细胞表面上的⑶3神经节苷脂的独特型抗体)的使用组成(Grant SC, KrisMG, Houghton AN, Chapman PB (1999)."Long Survival of Patients with Small CellLung Cancer after Adjuvant Treatment with the Ant1-1diotypic Antibody BEC2PlusBacillus Calmette-Gue".Clinicai Cancer Research,第 5 卷，1319-1323)。肺癌患者的施用剂量为2.5mg,为期超过10周。利用免疫疗法治疗的患者相较于相似组的患者在存活率和无疾病复发存活上具有显著的增加。
[0060]Popiela等人评价了 BCG免疫疗法和利用FAM (5_氟尿嘧啶、亚德利亚霉素(adriamycin)、丝裂霉素C)的化学疗法在III或IV期胃癌患者中的使用，所述患者先前经历了该癌症的治愈性胃切除术(Popiela T, Kulig J, Czupryna A, Scz印anik AM, ZembalaM(2004)."Efficiency of adjuvant immunochemotherapy following curativeresection in patientes with locally advanced gastric cancer".Gastric cancer, 7:240-245)。将患者随机分成3组:BCG+FAM、FAM和对照(仅进行手术)。以2_4个活力单位/剂量施用BCG免疫疗法的剂量。在免疫疗法组中，通常观察到47.1%的10年存活率。Powles及同事报导了其中利用BCG和死亡的同种异体肿瘤细胞治疗急性髓性白血病。BCG的剂量据估计为约 IO6个生物体(RL Powles, PJ Selby, DR Jones, JA Russel, HG Prentice,等人(1977)."Maintenance of remission in acute myelogenous leukemia by a mixtureof B.C.G.and irradiated leukemia cells".THE LANCET, 1107-1110)。在显不缓和一段时间的患者中观察到改善，从而得出结论:利用白血病肿瘤细胞和BCG的免疫疗法可以有效地延长缓和。同样地，Vuvan等人描述了 BCG免疫疗法在急性非淋巴细胞白血病患者中的使用(H.Vuvan, D.Fiere, M.Doillon, C.Martin, B.Coiffier,等人(1978).^BCG Therapyin Acute Non Lymphoid Leukaemias".Scand J Haematol21, 40-46)。进行了随机化研究，其中将患者分成利用单独的化学疗法和利用化学疗法和BCG治疗的2组，在化学疗法周期的间隔期间以6xl08个活细胞的剂量施用BCG。结果显示接受免疫疗法的患者相较于仅接受化学疗法的组具有更高的存活率。此外，观察到BCG似乎在年龄超过40岁的患者中更有效。
[0061]最后,Hsueh等人使用由称为Canvaxin的黑色素瘤细胞组成的治疗性疫苗(HsuehED, Essner R, Foshag LJ, Ollila Dff, Gammon G,等人(2002)."Prolonged Survival AfterComplete Resection of Disseminated Melanoma and Active Immunotherapy with aTherapeutic Cancer Vaccine' Journal of Clinicai Oncology,第 20 卷，n23,第4549-4554页)。全部患者利用PPD (纯化蛋白质衍生物)进行测试，随后接受利用疫苗的疗法。对于前两次治疗，将疫苗与BCG混合。在第一注射中，在PPD阴性患者中以2.7至10.SxlO6集落形成单位的剂量以及在PH)阳性患者中以该剂量的半剂量施用BCG。在手术后接受利用Canvaxin的主动免疫疗法的患者存在存活的延长。
[0062]使用BGC的上述研究，尽管它们使用从疾病或障碍的病原体分离的免疫刺激剂来在患者中引起期望的效应，不管是否与本发明中提及的其它医学方法和治疗组合，但是未利用使用多个抗原性组 分(与不同的病原体分子模式相关的)，特别是代表细胞内和细胞外细菌、病毒、寄生虫、真菌和酵母的组合。上述研究组和研究仅在简单的佐剂功能中使用BCG,而没有考虑目的在于活化记忆或空白细胞的本发明的基础，所述细胞在各个身体组织中可通过许多病原体相关分子模式(所述分子模式可使得能够产生最大可能数目的记忆和效应细胞)来灭活。由于不呈递不同的能够刺激先天性和特异性免疫的抗原性非特异性试剂的该组合(如所描述的)，因此根据提出的论点，许多免疫记忆细胞的群体将不再被活化,这将不导致免疫反应的语境重构(recontextualization)、更新和再编程，这与本文中所示的同样有效。
[0063]现有技术水平既未说明免疫方案以及免疫刺激剂的局部和远端应用的重要性，也未说明在身体不同部位进行的许多应用是如何成为以编程和有义的方式使PAMPS和DAMPS分子模式到达组织所必需的，所述组织以足以激发最佳反应和极化的量和质量保持APC细胞。
[0064]Tanaka等人(Tanaka N., Gouchi A.0hara T., Mannami Τ., Konaga Ε., FuchimotoS., Okamura S.,Sato K., Orita K(1994).^Intratumoral injection of a streptococcalpreparation, 0K-432, before sugery for gastric cancer.A randomized Trial.Cooperative Study Group of Preoperative Intratumoral Immunotherapy for('ajiccr".Cancer, 74(12):3097-3103)和 Yasue 等人(Yasue Μ., Murakami Μ., NakazatoH.,Suchi Τ., Ota K (1981).Controlled Study of Maintenance ChemoimmunotherapyVS Immunotherapy Alone Immediately Following Palliative Gastrectomy andInduction Chemoimmunotherapy for Advanced Gastric Cancer".CInCe ChemotherPrasmacoI, 7:5-10.) 报导了从称为OK-432的减毒酿胺链球菌(Streptococcuspyogenes)制备的免疫调节剂在胃癌患者中的用途。这样的试剂能够活化免疫系统并且引起胃癌的患病组织的局部退化。Tanaka描述了 IOKE的内窥镜注射的0K-432的术前使用，和在术后在淋巴结中的转移灶的情况下皮内注射中施用的IKE至5KE的剂量。Tanaka得出0K-432的瘤内注射可在处于III期胃癌的患者中具有有益的临床效应,因为其似乎改善了该亚组患者的存活。Yoshida 等人(Yoshida K., Sugiura T., Takifuji N., KawaharaM., Matsui K.，等人(2007)."Randomized phase II trial of three intrapleuraltherapy regimens for the management of malignant pleural effusion in previouslyuntreated non-small cell lung cancer； JC0G9515.Lunger Cancer, 58:362-368)评价了 OK-432 (0.2KE/kg,和最大剂量10KE/Kg)作为胸腔疗法(pleural therapy)在控制先前未治疗的非小细胞肺癌患者的恶性胸腔积液中的功效和毒性。除了 0K-432之外，也评估了作为胸腔内疗法(intrapleural therapy)的博来霉素和顺钼与依托泊苷。得出使用的最佳胸腔内疗法是0K-432的使用，因为其是具有最佳无病存活率和最低胸腹复发率的疗法。[0065]Aftergut 等人(Kent Aftergut, MD, Mary Curry, MD, JackCohen, DO (2005).〃 Candida Antigen in the Treatment of Basal Cell Carcinoma'Dermatol Surg, 31:16-18)研究了念珠菌属(Candida)抗原在治疗基底细胞癌中的病灶内使用(intralesional use)。研究显示56%的患者具有肿瘤细胞的完全消退。通过皮内注射以0.1mg的剂量施用抗原。再次地，本发明的特点是使用非常精细和更复杂的抗原性组分的组合，当单独使用或与其它疗法组合使用时具有获得更有利的结果的潜能。由Miles等人描述的研究(Miles Dff, Towlson KE, Graham R, Reddish M, Longenecker BM,等人(1996).randomised phase II study of sialyl-Tn and DETOX-B adjuvant with orwithout cyclophosphamide pretreatment of the active specific immunotherapy ofbreast cancer".British Journal of Cincei.，74:1292-1296)研究了当经历利用低剂量的环磷酰胺预治疗时，由唾液酸-Tn-KLH与DETOX-B的联合(在其组合物中包含草分枝杆菌(Mycobacterium phlei)细胞壁骨架)引起的乳腺癌患者的免疫反应的改善的发生。使用0.5ml的由STN-KLH和DETOX-B组成的乳剂。作为结果，观察到所有患者都产生了抗唾液酸-Tn的IgM和IgG,接受环磷酰胺预治疗的患者具有显著更大的IgM的增加。Korec等人提供了研究，在所述研究中，利用体外血衆输注(通过包含金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)固定化蛋白A的过滤器)治疗11个具有不同肿瘤类型的患者和3个具有与丝裂霉素C相关的血栓性血小板减少性紫癜(thrombotic thrombocytopenia purpura)的患者(Korec S，Smith FP, Schein PS,Phillips TM(1984).^Clinicai experiences withextracorporeal immunoperfusion of plasma from cancer patients' J Biol ResponseMod.3(3):330-5)。作为结果，存在通过免疫输注(immune-perfusion)产生的适度抗肿瘤效应。在10个适当治疗的患者中，存在可测量的肿瘤的减小(40%的原始肿瘤质量的减少)。
[0066]Engelhardt 等人(Engelhardt R, Mackensen A, Galanos C(1991)."Phase ITrial of Intravenously Administered Endotoxin(Salmonella abortus equi)inCancer Patients".CANCER.RESEARCH51, 2524-2530)描述了与从马流产沙门氏菌(Salmonella abortus equi)脂多糖(基本上不含蛋白质和核酸)制备的内毒素的静脉内施用相关的测定。选择24个33至67岁的患者，10个患者经诊断患有结直肠癌，5个患者患有非小细胞癌，2个患有癌症，2个患有胰腺癌，2个患有肉瘤，一个患有胆囊癌，I个在肛门中患有癌症以及I个在气管中患有癌症。胰腺癌患者未接受先前的治疗，然而其它患者已用放射疗法、化学疗法和/或手术治疗，这些治疗在研究治疗开始前4周完成。使用的内毒素初始剂量为0.15ng/kg,最大耐受剂量为4ng/kg。结果显示在结直肠癌患者中，2个具有部分反应，4个出现疾病稳定化，由于这些患者在具有最多参与者的组中，因此不一定表明该类型的肿瘤对脂多糖的敏感性超过在研究中研究的其它肿瘤。还证实了疾病在非小细胞肺癌、肾细胞癌和气管癌患者中稳定一段时间。Otto等人描述了由Engelhardt报导的研究的II期。在该分期，15个非小细胞肺癌患者和27个结直肠癌患者接受4次内毒素注射(4ng/kg剂量)和每2周一次的1600mg的口服施用的布洛芬。结果显示3个结直肠癌患者的改善，其中2个患者具有肿瘤的部分缓解，所述缓解分别稳定7至8个月，他们中的一个获得完全肿瘤缓冲。在肺癌患者中还观察到最小的抗肿瘤效应。
[0067]如我们可在由Aftergut (Kent Aftergut, MD, Mary Curry, MD, JackCohen, DO (2005)."Candida Antigen in the Treatment of Basal Celi Carcinoma'Dermatol Surgj 31:16-18),Miles(Miles Dj Towlson KE，Graham Rj ReddishM，Longenecker BM 等人.(1996).randomised phase II study of sialyl-Tnand DETOX-B adjuvant with or without cyclophosphamide pretreatment of theactive specific immunotherapy of breast cancer11, British Journal of Cancer,74:1292-1296)，Korec(Korec S，Smith FP，Schein PS，Phillips TM(1984)."Clinicaiexperiences with extracorporeal immunoperfusion of plasma from canccrpatients^.J Biol Response Mod.3 (3):330-5),Engelhardt(EngelhardtRj Mackensen A，Galanos C(1991)."Phase I Trial of Intravenously AdministeredEndotoxin(Salmonella abortus equi)in Cancer Patients' cAncerRESEARCH51，2524-2530)e Otto (Otto F, Schmid P, Mackensen A, ehr U, Seiz A,等人(1996).〃Phase II trial of intravenous endotoxin in patients with colorectal andnon-small cell lung cnncer".Eur J Cancer, 32A(10):1712-8)描述的现有技术的实例中观察到的，在每一个各自的研究中仅使用一种抗原性组分。
[0068]William B.Coley是在癌症患者中结合使用免疫疗法的研究的先驱者(EdwardF.McCarthy, MD.^The Toxins of Willian B.Coley and the treatment of bone andsoft-tissue sarcomas'The 1wa Orthopaedic Journal,第 26 卷，p:154-157)。在由Coley进行的研究中，描述了链球菌属与粘质沙雷氏菌(Serratia marcescens)(科利毒素(Coley Toxin)) 一起用于治疗软组织肉瘤的成功使用，还指出了这样的免疫疗法在治疗其它癌症例如黑色素瘤和癌中不太有效。由于这些研究是100多年前进行的并且已被现代医学(高度集中于获得用于疾病的单一药物)相对忽视，但其主要概念和可能性一直未被探究和阐明。Coley仅在其组合物中使用两种细菌组分，并且没有开发利用方法和所有可能的免疫系统的调节(如本文中描述的)^ayashi等人能够进一步推进免疫系统的重要性的理解，并且还组合两种抗原性组分，但这些概念仍然未在其整体上进行探究。在该研究中，Hayashi等人评价了淋巴结节在利用与卡介苗菌(Bacillus Calmette-Guerin) (BCG-CffS)结合的牛分枝杆菌(Mycobacterium bovis)的细胞壁骨架进行的卵巢癌患者的治疗中的作用((Hayashi A, Nishida Y, Yoshii S，Kim SY, Uda H, Hamasaki T(2009)."Immunotherapyof ovarian cancer with cell wall skeleton of Mycobacterium bovis BacillusCalmette-Guerin:Effect of lymphadenectomy^.Cancer Sei,第 100 卷，n ° 10，第1991-1995页)。在手术去除肿瘤后，患者接受2-200118皮内剂量的806-0胃5。因其诱导(IFN) -y和刺激郎格尔汉斯细胞(随后分化成树突细胞)的潜能(如先前测试中报导的)，疫苗被用于研究。未经历淋巴结切除术的术后患者的诊断比已经历其的患者好很多，这确认了淋巴结节在响应利用BCG-CWS的免疫疗法获得抗卵巢癌的免疫反应中的重要性。虽然使用两种不同的对于待治疗的疾病是非特异性的抗原性组分，但它们仅源自两种细菌，从而在其组合物中未显示其它病原体相关分子模式，例如在病毒、寄生虫、真菌和酵母中发现的那些病原体相关分子模式。
[0069]根据本领域中的现有知识，免疫系统对抵御疾病具有至关重要的作用，但几乎没有什么技术能够有效地刺激和免疫调节该系统以当疾病已建立时更好地抵御所述疾病。
[0070]此外，值得注意的是，感染和肿瘤的治愈，与现今宣讲的和接受的相反，总是由免疫系统控制。抗生素、抗微生物和抗癌药物主要用作重要的促进剂，通常是治愈感染所必需的。换句话说，抗生素本身不能实现治愈疾病，但帮助和促进由通过免疫系统进行的治愈过程。抗生素在该意义上用作有利于感染的生物体的生物学平衡的移位器(shifter)，以通过其特异性作用通过在体内抑制或杀死或破坏一部分细菌，从而允许免疫系统更快速和有效的作用。然而，不存在显示通过抗微生物的作用消除微生物的体内工作。
[0071]在该新的科学假设下，必需开发免疫调节剂、免疫原性组合物和能够选择允许实时诱导先天性免疫系统的试剂的治疗方法，所述试剂将通过将病原性抗原正确地呈递至APC细胞，使免疫系统重新语境化、重编程和更新成对于待治疗的疾病是有效的新型特异性适应性反应，所述新型特异性适应性反应通过免疫系统的记忆和处女细胞将有效地抵御感染性疾病和存在于给定的患者中的其它疾病。即，无需产生和施用对于已建立的疾病是特异性的抗原，通过使用免疫系统的各自机制，在其语境重构(recontextualization)、重新和再编程(任选地由免疫调节剂诱导的)后，免疫反应达到与通过先前被免疫系统记忆的相同病原体的反复侵入触发的免疫反应相当的速度和功效。
[0072]即，新型免疫调节剂、免疫原性组合物和治疗方法可移转所有恶性肿瘤、感染和侵袭的生物学和抗微生物化学疗法的平衡。该新型治疗法可组合免疫疗法与常规抗生素的同时使用，并且在任何类型的感染过程中和寄生虫感染中，增加治愈的机会，并且相较于仅考虑单独的抗微生物药和化学疗法的功能的疗法显著地减少来自这类疾病的发病率和死亡率。
[0073]发明目的
[0074]本发明的目的是提供用于调节免疫系统的免疫原性组合物，其包含治疗有效量的两种或更多种呈现病原体相关分子模式(PAMPS)和/或危险相关分子模式(DAMPS)的免疫活性抗原试剂，以及一种或多种生理上可接受的载体、赋形剂、稀释剂或溶剂。[0075]具体地，本发明的目的是提供用于调节免疫系统的免疫原性组合物，其包含具有免疫活性病原体相关分子模式(PAMPS)和/或危险相关分子模式(DAMPS)的抗原试剂，所述抗原试剂选自:(A)具有与细菌相关的分子模式的抗原试剂；(B)具有与病毒相关的分子模式的抗原试剂；(C)具有与真菌和酵母相关的分子模式的抗原试剂；(D)具有与原生动物相关的分子模式的抗原试剂；(E)具有与多细胞寄生虫相关的分子模式的抗原试剂，或(F)具有与朊病毒相关的分子模式的抗原试剂。
[0076]本发明的另一个目的是提供所述免疫组合物用于制造用于预防和/或治疗如下疾病的药剂的用途:感染性疾病、自身免疫疾病、过敏性疾病、炎症、关节炎、炎症性疾病、移植排斥、由血管障碍引起的疾病、由出血性或缺血性心血管事件引起的疾病、导致组织破坏的局部缺血、梗塞和出血、心脏、肾、呼吸或肝功能不全、癌症、赘瘤以及恶性和良性病变。
[0077]本发明的目的还在于提供用于预防或治疗动物(更具体地人)的感染性疾病、自身免疫疾病、过敏性疾病、炎症、关节炎、炎症性疾病、移植排斥、由血管障碍引起的疾病、由损伤或出血性缺血性引起的疾病、导致组织破坏的局部缺血、梗塞和出血、心脏、肾、呼吸或肝功能不全、癌症、赘瘤以及恶性和良性病变。 [0078]本发明的目的还在于提供诱导细胞修复、组织再生、器官再生和器官系统例如循环系统、神经系统和内分泌系统的再生的方法。
[0079]最后，本发明的目的是提供用于更新动物(尤其是人)的免疫系统的方法。
[0080]定义
[0081]在本专利申请的说明书中，数次使用缩写，根据它们在本申请中的用法下面概述它们的定义:
[0082].BCG是指减毒牛分枝杆菌、卡介苗菌；
[0083].DAMPS是指危险相关分子模式；
[0084].DECA是指本专利申请的实施例1中描述的组合物；
[0085].GM-CSF是指〃粒细胞巨噬细胞集落刺激因子〃；
[0086].IL12是指白细胞介素-12 ；
[0087].IL15是指白细胞介素-15 ；
[0088].IL2是指白细胞介素_2 ；
[0089].IL21是指白细胞介素-21 ；
[0090].IL4是指白细胞介素_4 ；
[0091].IL5是指白细胞介素_5 ；
[0092].IL7是指是指白细胞介素_7 ；
[0093].PAMPS是指病原体相关分子模式。
[0094].PFU:噬斑形成单位。
[0095].PPD是指结核分枝杆菌的纯化蛋白质衍生物；
[0096].ΡΗ)是指柯霍氏菌(Koch’s bacillus)的纯化的蛋白质提取培养物的级分(〃纯化蛋白质衍生物〃)。PH)是结核分枝杆菌的主要抗原；
[0097].TDCI50是用于定量病毒颗粒的单位，是组织培养中50%的细胞被感染的感染剂量;
[0098].柯霍氏结核菌素是指灭活的牛分枝杆菌裂解物；[0099]?单位Lf或〃絮状反应限量单位(Limes flocculation units) 〃是被世界卫生组织接受的用于定量类毒素疫苗中的抗原的国际单位；
[0100]附图简述
[0101]下列附图是本报导的部分，并且在此处用于举例说明本发明的某些方面。本发明的目的可通过参考与此处提供的优选实施方案的详细说明组合的这些附图的一个或多个得到更好的理解。
[0102].图1显示利用DECA、DECA+IL-2的治疗在体内对肿瘤生长的效应。在第O天，在C57B16雄性小鼠的背部皮下(s.c.)接种鼠黑色素瘤细胞(B16F10) (IxlO6, 100 μ L/动物)。(A)借助于数字测径器，每3天测量一次肿瘤体积(以mm3表示)。(B)在第7天计算获得的每一个肿瘤的体积的百分比增加。结果表示为均值土均值的标准误差(SEM)。*p〈0.05表示相较于对照组的统计上显著的差异(单因素方差分析(one-way AN0VA)，事后检验(post-hoc):邓奈特检验(Dunnett test))。n=9_10 只动物。
[0103]?图2显示利用DECA、DECA+IL-2的治疗对利用鼠黑色素瘤细胞接种的动物的存活率的效应。在第O天，在C57B16雄性小鼠的背部皮下(s.c.)接种B16F10细胞(IxlO6, 100 μ L/动物)。图表示死亡率曲线，百分比表示在肿瘤接种后30天仍然活着的动物。η=9-10 只动物。*ρ, 0.05 (ρ=0.0361),统计分析:时序检验(Logrank Test)-卡方(Chisquare)。
[0104].图3显示志原者“MBS”的病理解剖学检查。A.免疫疗法治疗前检查，黑色箭头表示肿瘤区域，白色箭头表示炎症浸润物的不存在。以黑色轮廓描绘的区域举例说明通过炎症浸润物的不存在检测肿瘤对免疫系统的抑制。B.治疗后免疫学检查，其中可看到肿瘤的完全消退，白色箭头表示致密的炎症浸润物，以黑色封闭的区域举例说明充满炎症浸润物的纤维化和修复改变的区 域。C.通过使用本发明产生的免疫系统的语境重构，通过与无数表皮内树突细胞(用箭头标示的)中的S-100的阳性反应得以证明，其中表皮炎症浸润延伸至无黑色素瘤细胞或残留黑色素瘤的深层真皮。
[0105].图4显示志原者“PPC”的病理解剖学检查。A.免疫疗法治疗前检查，其显示具有一些色素细胞的侵袭性转移性黑色素瘤的区域，稀有的轻微的炎症外周浸润通过箭头指示，确认了肿瘤对免疫系统的抑制。B.免疫疗法后检查，其举例说明肿瘤的消失和被强烈和致密的炎症浸润物取代。C.通过使用本发明的治疗产生的免疫系统的语境重构，通过与无数表皮内树突细胞(用箭头标示的)中的S-100的阳性反应得以证明，其中表皮炎症浸润物延伸至无残留黑色素瘤的深层真皮。
[0106].图5显示患者R-M的核磁共振检查(Al、A2和A3，于30/07/2008免疫治疗前)和CT扫描(B1、B2、B3，于在13/05/2009治疗后，Cl和C3，于30/08/2011治疗后，以及C2，于13/04/2010治疗后)。Al显示脂肪变厚的癌扩散(箭头)。A2.腹腔动脉干淋巴结节簇(Celiac trunk lymph node cluster)(箭头;最大测量3.7cm)。A3.月干胃韧带淋巴结节簇,测量为4cm(箭头)。BI癌扩散的消失，通过脂肪变厚的消失显示的(箭头)。B2.腹腔动脉干淋巴结节簇中最大结节的减小(3.7cm至1.4cm)(箭头)。B3.肝胃韧带淋巴结节簇的消失(箭头)。Cl.癌扩散的消失(箭头)。C2.腹腔淋巴结节簇中最大结节的减小(1.4cm至1.lcm)。C3.肝胃韧带淋巴结节簇的消失的确认(箭头)。这些数据显示免疫疗法与与姑息性放射和化学疗法相关的本发明的组合导致恶性腹膜癌扩散和胃癌的淋巴管播散(lymphatic dissemination)的完全缓解。
[0107].图6显示志愿者A-D的胸部和腹部的CT扫描检查。A.于09/10/2006进行的免疫疗法治疗前检查在用圆圈标示的区域中鉴定了肿瘤。B.于11/12/2006进行的免疫疗法后检查显示在分析的区域中不存在这些肿瘤。
[0108].图7显示患者O-S的前列腺特异性抗原(PSA)血清水平的测试。第一个点是指表示在非治愈后残留的赘生性细胞存在的标志的残留值，所述赘生性细胞，当进行免疫学治疗时，在4周内变得不可检测(标绘为O)。该数据强有力地表明免疫疗法治疗，如果其是在放射疗法开始时采用的单一药物疗法，则在肿瘤的完全缓解和局部肿瘤根除中是有效的，因为现有技术水平不能够区分肿瘤块的完全根除与最小残留疾病。
[0109]发明详述
[0110]免疫原性组合物的描述
[0111]本发明涉及用于调节免疫系统的免疫原性组合物，其包含治疗有效量的两种或更多种呈现病原体相关分子模式(PAMPS)和/或危险相关分子模式(DAMPS)的抗原性免疫活性试剂，以及一种或多种生理上可接受的载体、赋形剂、稀释剂或溶剂。
[0112]优选地，本发明的组合物包含呈现病原体相关分子模式(PAMPS)和/或危险相关分子模式(DAMPS)的免疫活性抗原试剂，所述抗原试剂选自:㈧具有与细菌相关的分子模式的抗原试剂；(B)具有与病毒相关的分子模式的抗原试剂；(C)具有与真菌和酵母相关的分子模式的抗原试剂；(D)具有与原生动物相关的分子模式的抗原试剂；(E)具有与多细胞寄生虫相关的分子模式的抗原试剂，或(F)具有与朊病毒相关的分子模式的抗原试剂。
[0113]更优选地，本发明的组合物包括选自上述㈧、⑶、(C)、⑶、(E)和(F)的至少3个分类的病原体相关分子模式(PAMPS)和/或危险相关分子模式(DAMPS)。
`[0114]更优选地，本发明的组合物包括选自上述㈧、⑶、(C)、⑶、(E)和(F)的至少4个分类的病原体相关分子模式(PAMPS)和/或危险相关分子模式(DAMPS)。
[0115]本发明的抗原试剂可选自表位、遗传物质、脂质、多糖和/或本发明的免疫活性蛋白质可通过从天然存在的材料的分离片段或来源于植物、动物或微生物提取物的级分纯化获得，或通过遗传重组产生，优选来源于病毒、真菌、寄生虫或细菌朊病毒株。
[0116]因此，具有与本发明的细菌相关的分子模式的本发明的抗原试剂选自但不限于具有与如下属的细菌相关的分子模式的抗原试剂:葡萄球菌属(Staphylococcus)、链球菌属(Streptococcus)、肠球菌属(Enterococcus)、棒状杆菌属(Corynebacterium)、芽孢杆菌属(Bacillus)、利斯特菌属(Listeria)、梭菌属(Clostridium)、分枝杆菌属(Mycobacterium)、放线菌属(Actinomyces)、诺卡尔菌属(Nocardia)、埃希氏菌属(Escherichia)、变形杆菌属(Proteus)、克雷伯菌属(Klebsiella)、沙雷氏菌属(Serratia)、肠杆菌属(Enterobacter)、沙门氏菌属(Salmonella)、志贺氏菌属(Shigella)、假单胞菌属(Pseudomonas)、伯克霍尔德菌属(Burkholderia)、寡养单胞菌属(Stenotrophomonas)、不动杆菌属(Acinetobacter)、弧菌属(Vibrio)、弯曲杆菌属(Campylobacter)、螺杆菌属(Helicobacter)、拟杆菌属(Bacteroides)、奈瑟球菌属(Neisseria)、莫拉菌属(Moraxella)、嗜血杆菌属(Haemophilus)、博德特菌属(Bordetella)、布鲁氏菌属(Brucella)、弗朗西斯氏菌属(Francisella)、巴斯德氏菌属(Pasteurella)、耶尔森菌属(Yersinia)、军团杆菌属(Legionella)、加德纳菌属(Gardnerella)、密螺旋体属(Treponema)、钩端螺旋体属(Leptospira)、疏螺旋体属(Borrelia)、支原体属(Mycoplasma)、立克次体(Rickettsial)和衣原体属(Chlamydia)。
[0117]具有与本发明的病毒相关的分子模式的抗原试剂可选自但不限于具有与如下病毒科相关的分子模式的抗原试剂:腺病毒科、沙粒病毒科、布尼亚病毒科、冠状病毒科、纤丝病毒科、黄病毒科、嗜肝DNA病毒科、丁肝病毒科、杯状病毒科、疱疫病毒科、正粘病毒科、乳多瘤病毒科、副粘液病毒科、细小病毒科、细小RNA病毒科、乳多空病毒科、呼肠病毒科、逆转录病毒科、弹状病毒科和披膜病毒科。
[0118]具有与本发明的真菌和酵母相关的分子模式的抗原试剂可选自但不限于具有与如下属的真菌和酵母相关的分子模式的抗原试剂:孢子丝菌属(Sporothrix)、曲霉菌属(Aspergillus)、芽生菌属(Blastomyces)、念珠菌属(Candida)、球抱菌属(Coccidioides)、隐球菌属(Cryptococcus)、组织胞衆菌属(Histoplasma)和肺囊虫属(Pneumocystis)。
[0119]具有与本发明的原生动物相关的分子模式的抗原试剂可选自但不限于具有与如下属的原生动物相关的分子模式的抗原试剂:隐孢子虫属、环孢子虫属、内阿米巴属、耐格里属、贾第虫属、利什曼原虫属、疟原虫属、弓形虫属、毛滴虫属、锥虫属、微孢子虫属和等孢子球虫属。
[0120]具有与本发明的多细胞寄生虫相关的分子模式的抗原试剂可选自但不限于具有与蠕虫吸虫、绦虫和线虫相关的分子模式的抗原试剂。
[0121]本发明的抗原试剂包括蛋白质、多糖、脂质分子和/或模拟蛋白质、多糖和/或脂质分子的复合合成分子。
[0122]更具体地，本发明·的试剂包括免疫活性抗原性蛋白质分子，其具有酶活性，例如激酶、磷酸酶、链激酶(streptoquinase)、链球菌DNA酶(estreptodornase)和脱氧核糖核酸酶(例如链道酶(dornases))。
[0123]本发明的用于调节免疫系统的免疫原性组合物包含0.001至500微克/ml的每一种免疫原性试剂。
[0124]可将此类免疫原性试剂封闭在胶囊、微粒、纳米颗粒、包衣片剂、脂质体中。
[0125]具体地，本发明的用于调节免疫系统的免疫原性组合物包含4至20种抗原试剂，所述抗原试剂选自试剂:链道酶、levedurin、念球菌素、PPD>朊病毒、链激酶(streptoquinase)、链球菌属类毒素、白喉类毒素、破伤风类毒素、柯霍氏结核菌素(Koch’s tuberculin)、灭活的人蛔虫裂解物、曲霉菌属的某些种、黄曲霉菌(Aspergillusflavus)) > 烟曲霉菌(Aspergillus fumigatus)、土曲霉(Aspergillus terreus) > 念珠菌属(Candida)的某些种、白色念珠菌(Candida albicans)、光滑念珠菌(Candidaglabrata)、近平滑念珠菌(Candida parapsilosis)、衣原体属(Chlamydia)的某些种、肺炎衣原体(Chlamydia pneumoniae)、鹤踏衣原体(Chlamydia psittaci)、沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis)、隐孢子虫属(Cryptosporidium)的某些种、皮肤癖菌、溶组织内阿米巴(Entamoeba hystolitica)、螺形住肠烧虫(Enterobius vermicularis)、幾肠球菌、絮状麦皮癖菌(Epidermophyton floccosum)、大肠埃希氏菌(Escherichia coli)、蓝氏贾第虫(Giardia Iamblia)、流感嗜血杆菌(Haemophilus influenzae)、犬小孢子菌(Microsporum-cannis)、分枝杆菌属(Mycobacterium)的某些种、牛分枝杆菌、麻风分枝杆菌(Mycobacterium leprae)、结核分枝杆菌、淋病奈瑟球菌(Neisseria gonorrhoeae)、人乳头状瘤病毒、脊髓灰质炎病毒、变形杆菌属(Proteus)的某些种、奇异变形杆菌(Proteusmirabilis)、彭氏变形杆菌(Proteus penerii)、普通变形杆菌(Proteus vulgaris)、沙门氏菌属(Salmonella)某些种、邦戈尔沙门氏菌(Salmonella bongori)、肠炎沙门氏菌(Salmonella enterica)、沙雷氏菌属(Serratia)的某些种、解凝沙雷氏菌(Serratialiquefaciens)、粘质沙雷氏菌(Serratia marcencens)、志贺氏菌属(Shigella)的某些种、福氏志贺氏菌(Shigella flexneri)、宋氏志贺氏菌(Shigella sonnei)、葡萄球菌属(Staphylococcus)的某些种)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、表皮葡萄球菌(Staphylococcus epidermidis)、幾类圆线虫(Strongyloides stercoralis)、链球菌属(Streptococcus)的某些种)、牛链球菌(Streptococcus bovis)、草绿色链球菌(Streptococcus viridans)、马肠链球菌(Streptococcus equinus)、月市炎链球菌、酿脓链球菌(Streptococcus pyogenes)、刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)、阴道毛滴虫(Trichomonas vaginalis)、发癣菌素、发癣菌属(Trichophyton)的某些种、红色毛癖菌(Trichophyton rubrum)、断发毛癖菌(Trichophyton tonsurans)、须疮癖菌(Trichophyton mentagrophytes)、黄热病毒、乙型肝炎病毒、风疫病毒、水痘带状疱疫病毒、天花病毒、腮腺炎病毒、麻疹病毒、疱疹病毒和痘苗病毒或呈现与这类抗原试剂相关的病原体相关分子模式(PAMPS)和/或危险相关分子模式(DAMPS)的合成类似物。
[0126]本发明的优选免疫原性组合物包含灭活的牛分枝杆菌裂解物、结核分枝杆菌(M.tuberculosis)的纯化蛋白质衍生物、灭活的金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)裂解物、灭活的表皮葡萄球菌(Staphylococcus epidermidis)裂解物、灭活的化脓裂解物、灭活的肺炎链球菌(Streptococcus pneumonia)裂解物c灭活的粪肠球菌裂解物、链激酶/链道酶、灭活的白色念珠菌(Candida albicans)裂解物、灭活的光滑念珠菌(Candida glabrata)裂解物、灭活的絮状麦皮癖菌(Epidermophyton floccosum)裂解物、灭活的犬小孢子菌裂解物、灭活的须疮癣菌指间变种(Trichophyton mentagrophytes)裂解物、灭活的肠致病性大肠埃希氏菌(enteropathogenic Escherichia coli)裂解物、灭活的邦戈尔沙门氏菌(Salmonella bongori)裂解物、灭活的肠道沙门氏菌(Salmonellaenterica)裂解物和灭活的马铃薯沙门氏菌裂解物。
[0127]本发明的优选免疫原性组合物包含0.001至lng/ml的灭活的牛分枝杆菌裂解物、0.001至lng/ml的结核分枝杆菌的纯化蛋白质衍生物、0.1至100 μ g/ml的灭活的金黄色葡萄球菌裂解物、0.1至100 μ g/ml的灭活的表皮葡萄球菌裂解物；0.1至100 μ g/ml的灭活的产脓链球菌(Steptococcus pyogenes)裂解物；0.1至100 μ g/ml的灭活的肺炎链球菌裂解物；0.1至100 μ g/ml的灭活的粪肠球菌裂解物、0.01至10 μ g/ml的链激酶、0.01至10 μ g/ml的链道酶；0.1至100 μ g/ml的灭活的白色念珠菌裂解物；0.1至100 μ g/ml的灭活的光滑念珠菌裂解物、0.1至100 μ g/ml的灭活的絮状麦皮癣菌裂解物；0.1至100 μ g/ml的灭活的犬小孢子菌裂解物、0.1至100 μ g/ml的灭活的须疮癣菌指间变种裂解物；0.1至100 μ g/ml的灭活的肠致病性大肠埃希氏菌裂解物；0.1至100 μ g/ml灭活的邦戈尔沙门氏菌裂解物、0.1至100 μ g/ml灭活的肠道沙门氏菌裂解物和0.1至100 μ g/ml的灭活的马铃薯沙门氏菌裂解物。
[0128]此外，为了取决于免疫疗法的目的，提高、降低或极化免疫反应，本发明的抗原性组合物可包含细胞因子和/或趋化因子例如GM-CSF、IL4、IL5、IL7、IL12、IL15、IL21、干扰素Y，最优选IL2。
[0129]本发明的组合物还可包含赋形剂，例如杀菌剂、抑菌剂、抗氧化剂、防腐剂、缓冲剂、稳定剂、pH调节剂、克分子渗透压浓度调节剂、止泡剂和表面活性剂以及残留抗原灭活或分级分离试剂、生长培养基成分和通常用于产生疫苗和免疫疗法的溶剂。
[0130]本发明的组合物可以是固体、液体或凝胶。如本文中所用，术语“药学上可接受的载体”的使用意指无毒性固体、惰性半固体液体赋形剂、稀释剂、任何类型的辅助制剂或仅无菌水溶液例如盐水。可用作药学上可接受的载体的材料的一些实例是糖类例如乳糖、葡萄糖和蔗糖、淀粉例如玉米淀粉和土豆溶液、纤维素及其衍生物例如羧甲基纤维素、乙基纤维素和醋酸纤维素、环糊精；油类例如花生油、棉籽油、葵花子油、芝麻油、橄榄油、玉米油和大豆油、二醇例如丙二醇、多元醇、例如甘油、山梨糖醇、甘露醇和聚乙烯酯(polyethyleneesters)例如月桂酸乙酯、油酸乙酯、琼脂、缓冲剂例如氢氧化铝和氢氧化镁、海藻酸、无热原水、等渗盐水(isotonic saline)、林格氏液(Ringer’s solution)、乙醇和磷酸盐的缓冲溶液以及用于药物制剂的其它无毒相容性物质。
[0131]用于本文中描述的免疫治疗组合物和疫苗的动物或人的多个施用途径是可获得的。具体选择的模式将取决于选择的抗原试剂、治疗功效所需的剂量和对其施用组合物的患者。本发明的方法通常可使用生物上可接受的任何施用模式(即产生有效水平的免疫反应而不引起临床上有害的反应的任何方法)来进行。此类施用模式包括真皮内、口服、直肠、舌下、局部、经鼻、经皮肤、或胃肠外施用。术语“胃肠外”包括皮下、静脉内、硬膜外、冲洗法(irrigation)、肌内、释放泵(release pump)或输注。具体地,在本发明中，口服、真皮内、胃肠外、皮下、静脉内、肌内以及经鼻粘膜和/或口服施用对于本文要求保护的组合物的施用是优选的。
[0132]为了进行胃肠外施用，还可将活性成分溶解于药物载体中，以溶剂、乳剂(包括微乳剂和纳米乳剂)或悬浮液的形式 施用。适当的载体的实例是水、盐水、葡萄糖溶液、果糖溶液或动物油、植物油或合成来源的油。其它媒介物还可包含其它成分，例如，防腐剂、悬浮剂、增溶剂、缓冲剂等。
[0133]本发明的免疫原性组合物的性质
[0134]本发明的免疫原性组合物对免疫反应具有预料之外的效应。如可在下文中的实施例中看到的，本发明的免疫原性组合物显示引起牵涉免疫反应的实时语镜重构、更新和再编程的预料之外的技术效应。
[0135]更具体地，本发明的免疫治疗性组合物能够通过以对其有利的方式改变抗侵袭物的力量的关系来激发免疫系统的业务活动能力的语境重构，赋予免疫系统竞争优势，这在疾病的演化中不会自发生发。该语境重构决定了已建立的或早期建立的，或错误地建立的以自主神经机能障碍的方式错误地攻击人或动物身体的免疫反应的随后更新和重编程，将其极化成初次或二次、活化或抑制的更有效的适当的免疫反应。
[0136]该效应通过免疫系统的某些组分例如前哨细胞、抗原呈递前哨细胞和记忆淋巴细胞的刺激、活化和协同作用产生。具体地，本发明的组合物适当地活化前哨细胞、树突细胞和其它APC细胞，从而产生抵御感 染、侵袭或肿瘤性疾病的CD4T细胞活化的程度和强度以及免疫特征谱的程度和强度。[0137]因此，本发明的免疫调节抗原性组合物，当以更大或显著的量触发特异性主动性适应性免疫反应时，期望在抵御赘生物、癌症和肿瘤中抵御细菌、病毒或寄生虫感染。
[0138]此外，利用本发明的免疫原性组合物治疗能够刺激免疫系统的再生能力，提供消除感染性疾病和其它疾病的随后效应:通过恢复因引起生物体的部分丢失的创伤和损伤而衰弱的器官功能来恢复细胞和组织。
[0139]因此，本发明的免疫原性组合物能够动员免疫系统，并且通过动员干细胞或激活基因集合导致增加的身体再生能力，这允许细胞和组织再生并且可以甚至重建器官及它们的功能，以及可重建器官系统例如血管系统、神经系统和内分泌系统等等。
[0140]如可在下文中所示的实施例中看到的，本发明的免疫原性组合物显示实时语境重构、更新和重编程免疫反应的预料之外的技术效应和从而当与本领域中的药物和方法比较时显著的治愈率。
[0141]在本发明的第一实施方案中，免疫调节剂的具体浓度用于制备能够诱导先天性免疫反应的免疫疗法药物组合物，所述组合物触发一系列免疫事件，包括从通过人工干预接种的试剂活化记忆淋巴细胞和通过存在于患者自己身体中的抗原产生伴随活化，从而导致针对特定的已建立的疾病(或仍然在建立期)的正在进行的免疫反应的语境重构、更新和重编程，从而有效地产生对于该疾病是特异性的适应性反应，从而允许抵御病原体。这样，包含本发明的试剂的组合物的施用，当至今建立的极化不足时，通过病原体或定殖者的作用，在疾病存在的情况下再极化免疫系统或改善免疫系统的极化。本发明的试剂的活性影响免疫反应的形状、时 间、准确度和极化，优选导致更有效地抵御疾病的特异性先天性和/或适应性反应，从而导致生物自身的更好反应。
[0142]本发明提供了通过使用描述的抗原性组合抵御这些类型的异种(感染和侵袭)和自体(肿瘤)攻击的方法。本发明还提供了如下可能性:将常规疗法添加至本发明的试剂，通过选择用于病原体和其它传染病原的抗微生物、抗癌或其它药物的真实治疗潜能，帮助消除病因学异种侵袭物和定殖性自体细胞。这可能按照与本文中所述的免疫反应的正常极化组合的有利于患者的生物平衡的移位原则来进行。
[0143]当免疫刺激遵循免疫反应的状况时，在疾病机制或侵袭结束时，本发明的抗原或免疫调节剂对免疫系统的持续活化通过活化干细胞，通过仍未完全清楚，但与在各种医疗情况下观察到的治愈或完全恢复(restitutio ad integrum)机制相关的机制导致组织、器官和系统的再生。
[0144]本发明的组合物允许招募最大量的个体的处女和记忆细胞，产生比现有技术中描述的抗体增加显著更大的效应。使用多种具有不同的充足的PAMPS和DAMPS的抗原试剂刺激不同类型的攻击(生物体所遭受的和生物体对其已具有免疫记忆的，通过将生物暴露于环境或接种程序)，允许更广泛地招募记忆和处女细胞，从而使得能够实时语境重构免疫反应，从而相较于现有技术以积极的，在几个情况下如此令人惊异的方式潜在和根本地改变免疫反应的类型以及影响个体的病害或疾病进展。此外，与现有技术不同，除了病毒、寄生虫、真菌和酵母的组分以外，本发明还在组合物中使用更大量的细菌组分(代表细胞内和细胞外细菌)。Hayashi等人未开发更加多样的组合物来获得潜在地更大的效应。抗原试剂的施用方法也是不同，因为本发明包括更多的具有APC细胞的身体和组织的区域，优选寻找在接近感染部位的位置上的暴露和对疾病部位的其它远端施用(如在身体的特定位置表现它们自己的障碍或疾病中那样)。本发明的组合物，当按照使用本发明的方法在一个或通常各个由淋巴样区域或一级和/或二级淋巴器官或甚至病灶内排出的身体部位施用时，被身体的所有前哨细胞的PRR(病原体相关模式识别受体)感知。
[0145]在第一组侵害条件或真实危险(其中免疫系统被细菌、真菌、病毒、朊病毒、寄生虫或其它微观-或宏观生物、单细胞或多细胞(异种侵害)或良性或恶性赘生物(自体侵害)即兴压倒、瘫痪或克服)中，以其先天性和适应性免疫的细胞和分子装置的活化和动员状态提供其制剂的修饰，整合的所述制剂能够逆转其中发现免疫系统和身体的竞争性不利方面的状态。
[0146]在第二组侵害条件(其中真实危险来自免疫系统本身)中，即当其在自身免疫或过敏性疾病中攻击人或动物身体时，将免疫系统语境重构为能够抑制该有害作用的制剂。本发明诱导免疫系统抑制其活化状态并且遣散维持自我侵害的记忆效应物回路。该效应通过动员先天性和适应性免疫的细胞和分子装置(所述细胞和分子装置负责抑制和调节免疫反应以及至称为动态平衡或常态的平衡的返回)来实现。
[0147]在第三组条件(其中免疫系统处理源自多个原因(异种或自体的或甚至创伤的)的组织、器官或系统攻击的后果)中，免疫系统的作用在修复由这些攻击引起的损伤中发生。在该情况下，免疫系统的制备或动员通过从免疫系统自身或从其它细胞系统(自体的、同种异体的或异种的)动员干细胞来进行。或者甚至通过活化存在于患者自己的细胞中的基因集合来进行。
[0148]因此，本发明以语境重构免疫系统、活化和更改用于组织修复和再生的机制的量、浓度和特定位置使用免疫调节剂，当在组织、器官或系统的瘢痕形成和再生中进行时，导致具有疤痕的“完全恢复”或重建。该修复通常在免疫反应过程结束时，在治愈创伤、感染、肿瘤疾病或自身免疫或过敏性 反应后被触发。
[0149]本发明的免疫原性组合物的用途
[0150]鉴于本发明的免疫原性组合物的性质，其构成了本发明的另一个方面，该方面将免疫原性组合物用于制造用于预防和/或治疗如下疾病的药剂:感染性疾病、自身免疫疾病、过敏性疾病、炎症、关节炎、炎症性疾病、移植排斥、由血管障碍引起的疾病、由出血性或缺血性心血管事件引起的疾病、导致组织破坏的局部缺血、梗塞和出血、心脏、肾、呼吸或肝疾病、癌症、赘瘤以及恶性和良性病变。
[0151]本发明的免疫原性组合物还被直接用于预防和/或治疗感染性疾病、自身免疫疾病、过敏性疾病、炎症、关节炎、炎症性疾病、移植排斥、由血管障碍引起的疾病、由出血性或缺血性心血管事件引起的疾病、导致组织破坏的局部缺血、梗塞和出血、心脏、肾、呼吸或肝疾病、癌症、赘瘤以及恶性和良性病变。
[0152]这些感染性疾病可以是病毒、细菌、真菌或寄生虫来源的。
[0153]通过本发明的免疫原性组合物预防和/或治疗的病毒来源的疾病可由(但不限于)下列病毒引起:
[0154]HIV、肝炎病毒、疱疫病毒、弹状病毒、风疫病毒、天花病毒、痘病毒、麻疫病毒和副粘液病毒。
[0155]通过本发明的免疫原性组合物预防和/或治疗的细菌来源的疾病可由(但不限于)下列细菌引起:肺炎球菌(Pneumococcus)、葡萄球菌属(Staphylococcus)、芽抱杆菌属(Bacillus)、链球菌属(Streptococcus)、脑膜炎球菌(Meningococcus)、淋病双球菌(Gonococcus)、埃希氏菌属(Escherichia)、克雷伯菌属(Klebsiella)、变形杆菌属(Proteus)、假单胞菌属(Pseudomonas)、沙门氏菌属(Salmonella)、志贺氏菌属(Shigella)、嗜血杆菌属(Haemophilus)、耶尔森氏菌属(Yersinia)、利斯特菌属(Listeria)、棒状杆菌属(Corynebacterium)、弧菌属(Vibrio)、梭菌属(Clostridia)、衣原体属(Chlamydia)、分枝杆菌属(Mycobacterium)、密螺旋体属(Treponema)和螺杆菌属(Helicobacter)。
[0156]通过本发明的免疫原性组合物预防和/或治疗的真菌疾病可由(但不限于)下列真菌引起:念珠菌属、曲霉菌属、新型隐球菌(Cryptococcus neoformans)和/或引起浅表和深部真菌病的真菌。由寄生虫引起的疾病由下列寄生虫引起:锥虫属、血吸虫属、利什曼原虫属、变形虫属和绦虫属。
[0157]本发明的免疫原性组合物还可用于预防和/或治疗系统性红斑狼疮(全身性红斑狼疮)和局部狼疮、类风湿关节炎、结节性多动脉炎、多肌炎和进行性dematomiosite、进行性系统性硬化症、弥散性硬皮病、肾小球肾炎、重症肌无力、干燥综合征、桥本氏病、格雷夫斯病、肾上腺炎、甲状旁腺功能减退症、恶性贫血、糖尿病、多发性硬化、脱髓鞘疾病、葡萄膜炎、天疱疮、类天疱疮肝硬化、溃疡性结肠炎、心肌炎、局限性肠炎、成人呼吸窘迫综合征和对药物反应的局部表现、异位性皮肤炎、婴儿湿疹、接触性皮炎、银屑病、扁平苔癣、过敏性肠病(allergic enteropathies)、支气管哮喘、移植排斥、链球菌感染后疾病例如心脏、肾和关节性风湿热和其它相关事件、癌症的多个和各种形式，例如癌、腺癌、黑色素瘤、肉瘤、恶性星形细胞瘤、肝细胞瘤、肾上腺样瘤、淋巴瘤和黑色素瘤等等。
[0158]本发明的免疫治疗性组合物还用于治疗以癌症的所有形式存在的癌症、通过良性和恶性肿瘤细胞产生的自体定殖，所述癌症称为癌、腺瘤、腺癌、肝细胞瘤、星形细胞瘤和中枢及周围神经系统的其它肿瘤、黑色素瘤、肉瘤、淋巴瘤和白血病以及所有良性肿瘤。
[0159]本发明的免疫原性组合物还可用于在免疫系统的自主神经机能异常(如已提及的)中产生的疾病例如如红斑狼疮；类风湿关节炎(rheumatoid arthritis);结节性多动脉炎(polyarteritis nodosa)、多发性皮肌炎(polymyositis)和皮肌炎以及进行性系统性硬化症(弥散性硬 皮病)；肾小球肾炎、重症肌无力、干燥综合征、桥本氏病(hypothyroidism)、格雷夫斯病(hyperthyroidism);肾上腺炎；甲状旁腺功能减退症、恶性贫血、糖尿病、多发性硬化和去除矿物质共相关(demineralizing co-related)或相关疾病；葡萄膜炎；天疱疮、类天疱疮肝硬化；溃疡性结肠炎；心肌炎；局限性肠炎、肝炎和肝硬化；成人呼吸窘迫综合征、药物反应的局部和全身性表现例如pharmacodermia、皮炎等等。
[0160]仍然在免疫系统的自主神经机能异常疾病的领域中，本发明还提供了在疾病中治疗动脉和静脉血管意外的免疫疗法治疗，所述疾病是例如心肌梗塞、肺、脑和消化系统中或中风或局部缺血在其中导致出血的身体的任何其它部位的血栓栓塞现象，所述现象在例如但不限于完整肌肉骨髓系统中，完整的中枢和周围神经系统中导致这些区段的坏死或萎缩，这导致血液供给的阻塞以及导致心脏病发作和脑损伤。因此，本发明的免疫疗法提供了可导致对于疾病的建立是重要的炎症进程的阻断的抗炎和免疫增强，所述疾病例如代谢综合征、肥胖、2型糖尿病、动脉粥样硬化、酒精性脂肪肝、非酒精性脂肪肝、高血压、肾功能衰竭、血栓形成后综合征、血栓性静脉炎后(post-thrombophlebitis)和来源于免疫系统的炎性作用的任何其它疾病。
[0161]在过敏性疾病、自身免疫疾病和炎性疾病的情况下，本发明的免疫疗法可用于(但不限于)与如下疾病相关的或由其引起的炎症:儿童的皮肤过敏反应、特应性湿疹；哮喘、支气管哮喘中的接触性皮炎、毛细支气管炎和过敏性支气管炎、变态反应性鼻炎、过敏性小肠炎；过敏性肠病；目前已知来源的炎性假瘤进程；银屑病(假炎症性肿瘤)；扁平苔藓、链球菌感染后疾病；心、肝、肺、肾、胰岛移植排斥等等；针对传染病原的超敏反应或破坏性免疫反应、链球菌感染后疾病例如心脏炎症、肾炎、心肌炎、心包炎和风湿热(rheumatic fever)以及不受限于这些表现的形式的由其它病原体导致的等同疾病。在自身免疫和过敏性病的情况下，浓度和剂量优选低得多，作用于免疫细胞(记忆或非记忆细胞)的不完全活化，所述疾病可包括但不限于上述疾病。
[0162]本发明的免疫原性组合物还用于诱导细胞再生、组织再生、器官再生和器官系统例如循环系统、神经系统和内分泌系统的再生。
[0163]因此本发明的一个实施方案是用于诱导动物的细胞修复、组织再生、器官再生和器官系统(例如循环系统、神经系统和内分泌系统)再生的方法，其包括给动物施用治疗有效量的一种或多种本发明的免疫原性组合物。
[0164]本发明的另一个实施方案是用于更新动物的免疫系统的方法，其包括下列步骤:
[0165]a)给动物全身性和/或局部施用治疗有效量的一种或多种权利要求1至21中任一项中定义的免疫原性组合物；
[0166]b)确保步骤"a"中使用的一种或多种免疫原性组合物与动物的树突细胞或其它APC细胞接触；
[0167]c)任选地在其中待治疗疾病的部位或区域施用修复试剂，例如维生素，以增强代谢，从而增强动物的免疫系统，和
[0168]任选地施用药剂或其它特定治疗。
[0169]在本发明的一个实施方案中，在身体的一个区域或不同部位施用本发明的组合物一次，以以最高的可能效率改变免疫系统的方向。本发明的免疫原性组合物的用于调节免疫系统的用途，包括暴露免疫系统的部分或全部以识别免疫系统中的抗原，例如来自身体的不同部位的树突细胞、巨噬细胞和淋巴结，将取决于由待抵御的疾病所作用的目标，并且优选通过注射或使用枪(gun)或递送系统或受控输注或利用体外抗原的脉冲细胞来进行。可以以如下几种形式仅在身体的一部位或在数十个部位施用试剂:皮下、肌肉、静脉内、口月艮、可吸入气雾剂、器官、内脏或特定组织中或不同体腔中的皮肤(皮肤贴片)，这分一至五十(50)期(session)在数目上可从一变化至一百(100)次施用。
[0170]还可将本发明的抗原性组合物与其它药物组合，所述其它药物可削弱疾病的病原体的繁殖、生长或任何形式的增强，从而引起有利于宿主、动物或人的生物免疫防御的平衡的移位。或仍然以伴随治疗的方式存在。
[0171]取决于与不适当或无效的免疫活性相关的待抵御的病害或疾病，还可将本发明的抗原性组合物与其它方法组合，所述方法例如但不限于抗生素、化学疗法、放射疗法、利用抗体和抗血清的疗法、使用激素或其它生理调节剂(细胞因子、趋化因子、神经激素、肽)、利用抗病毒剂的治疗、草药的使用、维生素补充法、利用其它辅因子或修复试剂(prosthetic agent)的补充给药学、细胞或组织的移植、治疗性或预防性接种的方法(使用或不使用细胞，不限于疫苗媒介物的类型)、基因疗法、外科手术或顺势疗法。
[0172]具体地，为了应免疫疗法的目的而升高、降低或极化免疫反应，可将本发明的抗原性组合物与利用细胞因子和/或趋化因子例如GM-CSF、IL4、IL5、IL7、IL12、IL15、IL21、干扰素Y，最优选IL-2的疗法结合使用。
[0173]免疫反应的语境重构、更新和重编程。
[0174]免疫系统的语境重构，如本专利申请的文本文件中所解释的，通过用与待治疗的病状无关的不同病原体的抗原刺激免疫系统来实现，对于所述抗原，人或动物优选已具有针对其的免疫记忆。
[0175]这些抗原可变化并且多个抗原，在数目上大于5，具有多个PAMP和DAMP，在前哨细胞和在APC细胞中，特别地在树突细胞中诱导剧烈的活化，从而允许在施用部位动员对于这些抗原是特异性的这些记忆⑶4淋巴细胞。
[0176]这些刺激物必须能够在局部淋巴结，远处的淋巴结中在施用的部位引起针对这些抗原的强烈的、强劲的和有效的二次特性免疫反应和免疫系统的全身性动员，以便其可平行地引起能够消除进行中的特定病状的有效反应。
[0177]通过本发明的组合物有意引发的先天性和适应性免疫反应应当包括受待治疗的病况影响的身体区域的整个范围或甚至超过其，如果可能能够以这样的数量和强度活化前哨和APC细胞的话，所述数量和强度是适当地对付由待治疗的病原性疾病引起的侵袭，并且活化和触发最佳特异性适应性反应，高效且正确地连续极化，以治愈待治疗的病况所需要的。
[0178]因此，通过本发明诱导的先天性和适应性反应将在地理上与待治疗的病况重叠，并且通过其强烈而广泛的活化，将修正被克服身体防御的病原体的作用有意限制的无效活化，通过阻止竞争，其依照其·最大遗传和生物学潜能恰当地动员和产生有效的适应性反应。该理想的活化还应当逆转由病原体建立的免疫抑制、耐受性和逃逸机制，因为已知并且证明了，完全覆盖待修正的反应的强劲激烈的无关免疫反应将通过免疫系统的活化的细胞和细胞因子高效地修正这些缺陷情形。
[0179]本发明的特定抗原的效应细胞和记忆(在抗原施用部位活化和产生的)将通过血流进入已激活的淋巴结，所述淋巴结排出受疾病影响的区域，将使得能够以强劲激烈的方式将所有存在的树突细胞汇集在那里。这样，它们将导致整个淋巴结的活化，从而通过增加的灌溉引起其生长，增加其尺寸，使其成为能够激发抗弱抗原的免疫反应的反应性淋巴结，所述弱抗原自身引起免疫反应。效应/记忆T淋巴细胞的该佐剂效应(公知的并且已在实验和临床上得到证明的)将对抗靶病原体的作用，所述靶病原体正阻断淋巴结产生抵御所述疾病所必需的免疫反应的所需的活化。
[0180]- 即，为了本发明的目的和通过本发明的作用，仅仅通过其强效的抗原性组合物就可发生:免疫反应的前哨细胞和树突细胞以及巨噬细胞对于无关抗原与对于病理学抗体来说是相同的，但通过该作用，将被强劲且适当地活化。被多种抗原强劲活化的树突细胞具有缓慢的代谢，并且理想地通过已知的“辅助者(helper) ”效应呈递病原体的所有优势和亚优势表位，从而动员所有可能的和可获得的能够特异性识别待治疗和/或与其反应的自体或异种病原体的抗原的T淋巴细胞。
[0181]炎症性过程的区域与淋巴区域完全相同。发炎的区域，通过被它们的抗原性组合物通过本发明动员的不相关的特定记忆细胞的抗炎作用，将阻断炎性体，并且施加抗炎作用，所述抗炎作用将修正负责疾病的病状并且由其病原体引起的病理性炎症。关于记忆效应，重要地要指出，记忆T细胞的该已知作用主要负责在已建立免疫后，与任何病理因子的二次接触是无症状的，不引起疾病。
[0182]-淋巴区域是完全相同的，只是现在被强烈活化和具有通过本发明引起的必需警报信号，以引发任何免疫反应，甚至针对弱抗原的免疫反应，与对于树突细胞(对于本发明来说是常见的)和对于待抵御的自体或异种病原体所发生的类似。淋巴因子和控制有效的二次反应的先天性细胞是相同的，特异性地抗待抵御的病原体的T淋巴细胞将“搭乘”该理想的微环境以保持有效的免疫反应。
[0183]被本发明活化的树突细胞可在病状部位和相关淋巴区域中捕获待抵御的病原体的抗原，并且可在能够修正地和理想地启用的淋巴系统中与病原体特异性T⑶4淋巴细胞接触。被活化和通过对于病原体是特异性的TCD4成熟的树突细胞的作用在有利于以宿主生物体的免疫系统的全部遗传和生物学潜能进行免疫反应的微环境中发生。
[0184]病态部位和淋巴结上的这类树突细胞可正确地评估侵袭的严重度、程度、强度和类型，从而活化、诱导、协作、极化、领导和维持新的有效适应性免疫反应，其效应物回路，与强烈的被正确活化的先天性免疫的细胞和效应分子协作，可以能够消除待抵御的病原体。因此答案被重编程和带回(如上文中指出的)，使生物学平衡逆转以有利于宿主，所述生物学平衡在此之前处于自体或异种致病因素的控制之下。
[0185]该作用可在生物学平衡移位器例如抗生素和抗癌药物的帮助存在或不存在的情况下发生，能够阻断、减弱或中和病原体的作用和潜能，从而允许免疫系统有机会治愈作为治疗的目标的病状。一旦被任何病原体触发，当病原体被消除或生物体死亡时免疫系统将只会停止反应，这样本发明将帮助避免后一选择，或其可`改善患者的病况，如果是不可治愈的慢性疾病的话。
[0186]因此，有意地和策略性地重叠在处于待抵御的试剂的作用下的整个区域上的本发明的组合物的作用，将通过活化前哨细胞和常见APC中的PAMP和DAMP和通过无关的特异性二次适应性免疫反应来语境重构免疫系统。该有意诱导的免疫反应将高效地活化整个淋巴区域和受病原体影响的器官区域。在语境重构化区域和在凸起(bulge)中，在更大的免疫反应的背景中，靶免疫反应的更强、更强烈和更广泛的二次抗炎性质，如所描述的，将在对于宿主来说更大机会的范围内被重编程和高效地更新，现有机会向对其有利的方向逆转生物学平衡。
[0187]方案对于待治疗的病况的病理生理学特征的充足性:
[0188]a)抗赘瘤免疫疗法的基础。
[0189]恶性赘瘤的特征性质是如本发明的研究中定义的微环境的主导地位，这与在现有技术水平中常规定义的不同，其为通过肿瘤细胞的作用利用生物体的细胞(这种作用籍由所述生物体的细胞以使它们以对其有利的方式发挥作用)产生的环境的主导地位。本文中定义的微环境是围绕单个或一组赘生性细胞的空间，所述赘生性细胞通过由其分泌的表面分子和/或其它分子以对其有利的方式完全控制该环境。
[0190]在该占据主导位置的空间中，结缔组织开始通过其结构元件和通过被决定供应肿瘤细胞以及它们的支持组织的新血管来营养和支持这类细胞。通过由肿瘤细胞在该环境中分泌的表面分子和物质以及酶，它们破坏它们所源自的组织，以及它们侵入的健康组织，所述健康组织被定殖和替代。表面和分泌分子完全阻断免疫反应，灭活和固定前哨细胞、APC细胞和淋巴细胞，诱导非特异性和特异性免疫抑制，灭活局部和远处的淋巴结。通过微环境的主导地位,肿瘤细胞通过表面分子和酶进入血液和淋巴管,在远离局部原发性肿瘤的地方定殖，引起远距离淋巴性和血行性转移。
[0191]因此，围绕单个细胞的微环境的完全主导地位使肿瘤细胞通过其无差别增殖，最初病理性地征服围绕其自身、其组织来源、相邻的区域、器官的空间，最终通过转移征服整个身体。类似地，免疫忽视、免疫抑制以及特异性和非特异性诱导的耐受性主要在原位发生，随后在局部、局部区域、器官发生，最终完全控制宿主身体的全身性免疫系统。
[0192]微环境的控制因而是由赘生性细胞的基因组潜能产生的策略性、至关重要和决定性效应，该效应导致一个肿瘤细胞在原位、局部、区域、器官和全身性空间占据主导，从而定殖宿主和导致死亡。
[0193]简而言之，免疫疗法必须一定打破已建立的肿瘤微环境和宏观环境的主导地位，覆盖被赘瘤控制的所有免疫区域。免疫疗法治疗还应当覆盖远离肿瘤的淋巴区域，利用能够与局部治疗(瘤内和损伤周围)一起完全逆转肿瘤控制地位的强惯性从外至内诱导受影响的区域的免疫系统的语境重构、更新和重编程。
[0194]应当每4或5天进行免疫预防，因为这是产生控制免疫反应的抑制细胞的生理周期。与此同时连续波地重复抗原性刺激将无限期地永久化免疫反应，使抗原刺激永存，因为其在其慢性期和免疫 功能障碍产生前伴随感染。不能产生抑制细胞和语境重构阻止了肿瘤细胞对抑制细胞的控制及其对抗环境的主导地位的保护作用。
[0195]赘生性细胞在微环境控制区中以及一组赘生性细胞在宏观环境中的作用在其中病况一直存在的整个时期中一天24小时地不间断进行。因此，应当连续地施用具有上述范围、频率和强度的免疫疗法，只要仍然存在肿瘤细胞。有趣地提及引起不连续刺激的常规免疫疗法，与用于利用惰性抗原(可溶性的或非可溶性的)或利用减毒试剂进行免疫的方案一样，不能用于由肿瘤诱导的病理生理学场合。
[0196]任何特异性免疫反应可通过以受体饱和水平添加细胞因子和/或趋化因子，优选外源IL-2来扩增和高效地增强，这将产生识别抗原，从而在其表面具有白细胞介素2受体的完全表达的免疫细胞的增殖。在其中仅使用弱抗原的抗肿瘤免疫疗法中，应当用IL2补充其以获得有效的强劲的免疫反应。
[0197]抗败血症、脓毒症和〃脓毒性休克〃的免疫疗法的建立
[0198]败血症被定义为极其严重的感染，其中一种或多种细菌或微生物从它们的进入点进入血液并且开始以巨大的数量循环，在远距离点获得建立定殖组织、器官，在最严重的情况下，可成功地到达大部身体表面。通常地，当微生物载负荷太大时，大量细菌和它们毒性和代谢产物以及不计其数的PAMPS和DAMPS与大部分身体表面的所有也是不计其数的PRR和RDP接触，同时产生广泛的强劲和剧烈的一般炎症过程，细胞因子从所有这些体征大量释放。
[0199]败血症的不利进展通过促炎细胞因子例如TNF、ILl、IL18、IL6等的大量释放，弓丨起具有血液动力学特征改变例如低血压、疾脉(rapid pulse)的炎症坍塌(inflammatorycollapse)导致脓毒症，所述炎症坍塌在脓毒性休克中达到极点，通常是不可逆的。败血症、脓毒症是具有高发病率和死亡的严重感染。在此类严重感染中，免疫系统反过因其因细菌诱导的虚弱和阻滞造成的受损的可手术性，开始作用以不惜任何代价消除细菌，通过炎症性Thl7组织特征谱，不相称地增加炎症，从而损害生物体。
[0200]在该炎症性组织特征谱中，受TCD4淋巴细胞控制的先天性免疫的效应物环引起组织损伤，有时重大破坏，这危害了器官和组织并且加重感染，导致例如呼吸衰竭、肺休克，并且在ARDS (成人呼吸窘迫综合征)中还导致肾功能衰竭和多器官衰竭。
[0201]因此，在败血症、脓毒症和脓毒性休克中，存在两个应当在策略上考虑并且应当作为免疫疗法的靶的变量，这样其才能成功。这两个变量是由不计其数的细菌在整个身体中的大量扩散以及其PRR和DPP的结合引起的炎症和因Thl和Th2特征谱的功能不可行性引起的Thl7特征谱的极化。这些变量是这些疾病的严重度、严重性、发病率和死亡率的基石。
[0202]通过考虑这两个变量，为了使免疫疗法在这些感染中有效，应当将其用于覆盖整个身体表面，包括最大数量的在地理上与病原体的作用重叠的淋巴区域。还应当将其用于受损区域和损伤周围区域，以便它们可通过其作用可恢复T回路的完整性一起引起广泛的语境重构，并且通过在施用部位中产生的效应/记忆T细胞产生宽广的，广泛的和强烈的抗炎效应。其应当通过上述语境重构和重编程平行地极化Thl7炎症组织特征谱朝向体液TH2和细胞THl特征谱的T⑶4反应，进一步减小全身炎症。
[0203]由IL2产生的环扩增应当非常低，正好足以特异性扩增炎症性特征谱对免疫特征谱的免疫反应的极化。
[0204]因此，通过使用本发明的组合物的免疫疗法，通过覆盖免疫细胞(通过无关特异性记忆T淋巴细胞的抗炎作用)，通过组织炎症特征谱TH17至选择的有效的THl和TH2免疫特征谱的再极化实现的语境重构和重编程，将改变免疫反应的方向。该免疫反应，在感染过程中实时更新，与生物学平衡移位器结合，在使用不同抗微生物剂的情况下，有机会在其中对微生物极其有利，对宿主有利的曲线的末端逆转微生物，并且现有机会解决。
·[0205]方案对病状和待治疗的患者中的免疫系统的“状态”的充足性。
[0206]在癌症和败血症的情况下，通过自己的病理生理学机制，违背了 T回路的完整性和功能性不足以极化癌症中的抑制性TREG特征谱和对于败血症(其免疫系统被疾病攻克而几乎完全不具手术性)中的炎症性组织Thl7特征谱的极化。在这些情况下，如在本文中引用的实例中一样，语境重构必须到达整个身体以逆转所有由症状诱导的免疫抑制、耐受性和免疫忽视，以及恢复免疫系统的所有可手术性和功能性能力，以具有重编程和更新的有效免疫反应。
[0207]治疗方案的原理
[0208]设计用于癌症和败血症的病例的本发明的治疗方案必须:
[0209]-用于身体或感染的最具战略性的淋巴区域。在本文中描述的情况下，超过10个淋巴区域已被选中。其必须用于肿瘤内以及感染的和损伤的区域内。
[0210]-免疫疗法制剂必须包含至少5种抗原以便其包含PAMP和DAMP，从而能够对免疫系统进行语境重构。
[0211]-施用区域必须重叠、覆盖和超过被肿瘤和感染占据的区域的整个延伸范围。
[0212]-抗原性刺激必须每4或5天重复一次以避免能够中止新的期望的免疫反应的抑制细胞产生或抑制获得的再极化。[0213]-治疗必须以这样的方式维持，直至最后的赘生性细胞消除，或直至感染结束，或直至伤口、器官或系统治愈。[0214]-实际上，必须将I至3ml的该免疫疗法用于10个或更多个淋巴区域。应当将本发明连带地用于伤口内或伤口外或被癌症或感染损害的肿瘤区域。
[0215]总之，免疫疗法被〃全身性地〃分配在数个(至少10个)淋巴区域、肿瘤旁和瘤内或伤口(具有能够破坏肿瘤和使肿瘤摆脱其微观和宏观环境的控制)中，或覆盖被感染和炎症显著影响的区域，以及恢复有利于生物体的免疫反应的微环境。通过在疾病持续期间不间断地使用低剂量的外源白细胞介素_2，每4至5天施用其一次。在如上文中指出的败血症、脓毒症和感染性休克的情况下，该剂量应当可能是最低的。
实施例
[0216]为了使得能够更好地理解本发明和明确地阐明获得的技术进步，对于本发明进行的各种测试的结果在下文中以实施例的方式显示。
[0217]在实施例1中，描述了本发明的几种优选免疫原性组合物。在实施例2至8中，显示了本发明的免疫原性组合物的性质、用途和使用其的治疗方法。在实施例2至8中，使用实施例1中描述的免疫原性组合物(组合物I)，在本文中称为DECA。
[0218]这些实施例被提供来仅用于举例说明的目的，并且不应当以任何方式认为是限定本发明的界限和范围。
[0219]实施例1:免疫源性组合物
[0220]为了根据本发明中描述的创新概念实现免疫反应的实时语境重构、更新和重编程，本领域技术人员可设计不同的和独特的组合物、产物的组合或制剂，所述组合、产物的组合物或制剂落在本发明的范围内。
[0221]如所描述的，对于此类满足技术要求(以在抵御许多病害和疾病中获得有利的或未公布的结果)的组合物，它们必须具有高度多样的来自病原体的抗原，以便在将PAMP和DAMP与它们的受体结合并且允许在前哨细胞(具有或不具有ATC功能)中实现先天性免疫的高度活化中获得最大协同效应，从而使得能够实时语境重构、更新和再编程免疫反应。
[0222]此类组合物应当优选使用这样的抗原试剂，对于所述抗原试剂，大多数人由于先前的接触而在它们的免疫系统中具有能够与语境重构平行地诱导广泛抗炎作用的记忆克隆。为此，应当优选选择这样的抗原试剂，所述抗原试剂:
[0223].对应于由个体从儿童到成年感染的最常见的感染(当动物或人类获得其"免疫组库(repertoire of immunity) 〃 时)。
[0224].用于免疫程序例如抗地方性和/或流行性疾病的儿童接种程序。
[0225]?来自具有潜在地致病微生物区系(尤其是胃肠道的)的生物体的抗原试剂，其中记忆淋巴细胞起着活动动态屏障的作用，确保个体的存活。
[0226].理想地，每一种抗原试剂应当以0.001至500微克/mL的浓度存在。
[0227]根据这些概念，已使用以它们已可获得的安全且被批准的形式存在的抗原试剂配制了几种制剂，以用于人接种程序或过敏反应测试以及免疫评估测试。
[0228]因此，我们列出下列几个组合物的实例，其落在本发明的范围内但无意对其限定，因为本发明及其概念允许设计包含非常大量的抗原试剂的组合的免疫原性组合物。[0229]组合物1:
[0230]
【权利要求】
1.一种用于调节免疫反应的免疫原性组合物，其包含治疗有效量的两种或更多种呈现病原体相关分子模式(PAMPS)和/或危险相关分子模式(DAMPS)的天然或合成抗原试剂和一种或多种生理上可接受的载体、赋形剂、稀释剂或溶剂，所述抗原试剂选自:(A)具有与细菌相关的分子模式的抗原试剂；(B)具有与病毒相关的分子模式的抗原试剂；(C)具有与真菌和酵母相关的分子模式的抗原试剂；(D)具有与原生动物相关的分子模式的抗原试剂；(E)具有与螺虫相关的分子模式的抗原试剂和/或(F)具有与朊病毒相关的分子模式的抗原试剂。
2.根据权利要求1所述的用于调节免疫系统的免疫原性组合物，其特征在于所述抗原试剂选自种类㈧、⑶、(C)、⑶、(E)和(F)的至少3种。
3.根据权利要求1所述的用于调节免疫系统的免疫原性组合物，其特征在于所述抗原试剂选自种类㈧、⑶、(C)、⑶、(E)和(F)的至少4种。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的用于调节免疫反应的免疫原性组合物，其特征在于具有与细菌相关的分子模式的抗原试剂选自具有与属于如下属的细菌相关的分子模式的抗原试剂:葡萄球菌属、链球菌属、肠球菌属、棒状杆菌属、芽孢杆菌属、利斯特菌属、梭菌属、分枝杆菌属、放线菌属、诺卡尔菌属、埃希氏菌属、变形杆菌属、克雷伯菌属、沙雷氏菌属、肠杆菌属、沙门氏菌属、志贺氏菌属、假单胞菌属、伯克霍尔德菌属、寡养单胞菌属、不动杆菌属、弧菌属、弯曲杆菌属、螺杆菌属、拟杆菌属、奈瑟球菌属、莫拉菌属、嗜血杆菌属、博德特菌属、布鲁氏菌属、弗朗西斯氏菌属、巴斯德氏菌属、耶尔森菌属、军团杆菌属、加德纳菌属、密螺旋体属、钩端螺旋体属、疏螺旋体属、支原体属、立克次体和衣原体属。
5.根据权利要求1至3中任一项所述的用于调节免疫系统的免疫原性组合物，其特征在于具有与病毒相关的分子模式的抗原试剂选自具有与属于如下科的病毒相关的分子模式的抗原试剂:腺病毒科、沙粒病毒科、布尼亚病毒科、冠状病毒科、纤丝病毒科、黄病毒科、嗜肝DNA病毒科、丁肝病毒科、杯状病毒科、疱疫病毒科、正粘病毒科、乳多瘤病毒科、副粘液病毒科、细小病毒科、细小RNA病毒科、乳多空病毒科、呼肠病毒科、逆转录病毒科、弹状病毒科和披膜病毒科。
6.根据权利要求1至3中`任一项所述的用于调节免疫系统的免疫原性组合物，其特征在于具有与真菌和酵母相关的分子模式的抗原试剂选自具有与属于如下属的真菌和酵母的真菌和酵母相关的分子模式的抗原试剂:孢子丝菌属、曲霉菌属、芽生菌属、念珠菌属、球孢子菌属、隐球菌属、组织胞浆菌属和肺囊虫属。
7.根据权利要求1至3中任一项所述的用于调节免疫系统的免疫原性组合物，其特征在于具有与原生动物相关的分子模式的抗原试剂选自具有与属于如下属的原生动物相关的分子模式的抗原试剂:隐孢子虫属、环孢子虫属、内阿米巴属、耐格里属、贾第虫属、利什曼原虫属、疟原虫属、弓形虫属、毛滴虫属、锥虫属、微孢子虫属和等孢子球虫属。
8.根据权利要求1至3中任一项所述的用于调节免疫系统的免疫原性组合物，其特征在于具有与蠕虫相关的分子模式的抗原试剂选自具有与蠕虫吸虫、绦虫和线虫相关的分子模式的抗原试剂。
9.根据权利要求1至8中任一项所述的用于调节免疫系统的免疫原性组合物，其特征在于所述抗原试剂包括蛋白质、多糖、脂质分子和/或模拟蛋白质、多糖和/或脂质分子的合成组合物。
10.根据权利要求9所述的用于调节免疫系统的免疫原性组合物，其特征在于所述免疫活性蛋白质分子显示酶促活性。
11.根据权利要求10所述的用于调节免疫系统的免疫原性组合物，其特征在于所述免疫活性蛋白质分子用作激酶、磷酸酶、链激酶和链球菌DNA酶。
12.根据权利要求1至11中任一项所述的用于调节免疫系统的免疫原性组合物，其特征在于其包含0.001至500微克/ml的各免疫原性试剂。
13.根据权利要求1至12中任一项所述的用于调节免疫系统的免疫原性组合物，其特征在于其包含4至20种选自来源于如下物质的抗原试剂的抗原试剂:链道酶、levedurin、念球菌素、柯霍氏菌纯化蛋白衍生物(PH))、朊病毒、链激酶、链球菌属类毒素、白喉类毒素、破伤风类毒素、柯霍氏原结核菌素、灭活的人蛔虫裂解物、曲霉菌属的某些种、黄曲霉菌、烟曲霉菌、土曲霉、念珠菌属的某些种、白色念珠菌、光滑念珠菌、近平滑念珠菌、衣原体属的某些种、肺炎衣原体、鹦鹉衣原体、沙眼衣原体、隐孢子虫属的某些种、皮肤癣菌、溶组织内阿米巴、蠕形住肠蛲虫、粪肠球菌、絮状麦皮癣菌、大肠埃希氏菌、蓝氏贾第虫、流感嗜血杆菌、犬小孢子菌、分枝杆菌属的某些种、牛分枝杆菌、麻风分枝杆菌、结核分枝杆菌、淋病奈瑟球菌、人乳头状瘤病毒、脊髓灰质炎病毒、变形杆菌属的某些种、奇异变形杆菌、彭氏变形杆菌、普通变形杆菌、沙门氏菌属的某些种、邦戈尔沙门氏菌、肠炎沙门氏菌、沙雷氏菌属的某些种、解凝沙雷氏菌、粘质沙雷氏菌、志贺氏菌属的某些种、福氏志贺氏菌、宋氏志贺氏菌、葡萄球菌属的某些种、金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、粪类圆线虫、链球菌属的某些种、牛链球菌、草绿色链球菌、马肠链球菌、肺炎链球菌、酿脓链球菌、刚地弓形虫、阴道毛滴虫、发癣菌素、发癣菌属的某些种、红色毛癣菌、断发毛癣菌、须疮癣菌、黄热病毒、乙型肝炎病毒、风疫病毒、水痘带状疱疫病毒、天花病毒、腿腺炎病毒、麻疫病毒、疱疫病毒和痘苗病毒或呈现与这类抗原试剂相关的病原体相关分子模式(PAMPS)和/或危险相关分子模式(DAMPS)的合成类似物。
14.根据权利要求1 3所述的用于调节免疫系统的免疫原性组合物，其特征在于包含灭活的牛分枝杆菌裂解物、结核分枝杆菌的纯化蛋白质衍生物、灭活的金黄色葡萄球菌裂解物、灭活的表皮葡萄球菌裂解物、灭活的化脓裂解物、灭活的肺炎链球菌裂解物、灭活的粪肠球菌裂解物、链激酶/链道酶、灭活的白色念珠菌裂解物、灭活的光滑念珠菌裂解物、灭活的絮状麦皮癣菌裂解物、灭活的犬小孢子菌裂解物、灭活的须疮癣菌指间变种裂解物、灭活的肠致病性大肠埃希氏菌裂解物、灭活的邦戈尔沙门氏菌裂解物、灭活的肠道沙门氏菌裂解物和灭活的马铃薯沙门氏菌裂解物。
15.根据权利要求14所述的用于调节免疫系统的免疫原性组合物，其包含0.001至lng/ml的灭活的牛分枝杆菌裂解物、0.001至lng/ml的结核分枝杆菌的纯化蛋白质衍生物、0.1至100μ g/ml的灭活的金黄色葡萄球菌裂解物、0.1至100μ g/ml的灭活的表皮葡萄球菌裂解物；0.1至100μ g/ml的灭活的产脓链球菌裂解物；0.1至100μ g/ml的灭活的肺炎链球菌裂解物；0.1至100μ g/ml的灭活的粪肠球菌裂解物、0.01至10 μ g/ml的链激酶、0.01至10μ g/ml的链道酶；0.1至100μ g/ml的灭活的白色念珠菌裂解物；0.1至100μ g/ml的灭活的光滑念珠菌裂解物、0.1至100μ g/ml的灭活的絮状麦皮癣菌裂解物；0.1至100μ g/ml的灭活的犬小孢子菌裂解物、0.1至100μ g/ml的灭活的须疮癣菌指间变种裂解物；0.1至100μ g/ml的灭活的肠致病性大肠埃希氏菌裂解物；0.1至100 μ g/ml灭活的邦戈尔沙门氏菌裂解物、0.1至100μ g/ml灭活的肠道沙门氏菌裂解物和0.1至·100 μ g/ml的灭活的马铃薯沙门氏菌裂解物。
16.根据权利要求1至15中任一项所述的用于调节免疫系统的免疫原性组合物，其特征在于其还包含细胞因子和/或趋化因子。
17.根据权利要求16所述的用于调节免疫系统的免疫原性组合物，其特征在于其包含GM-CSF、IL2、IL4、IL5、IL7、IL12、IL15、IL21 和 / 或干扰素 Y。
18.根据权利要求17所述的用于调节免疫系统的免疫原性组合物，其特征在于其包含IL2。
19.根据权利要求1至18中任一项所述的用于调节免疫系统的免疫原性组合物，其特征在于以胶囊、微粒、纳米颗粒、糖衣丸或脂质体的形式封装所述抗原试剂。
20.根据权利要求1至19中任一项所述的用于调节免疫系统的免疫原性组合物，其特征在于为固体、液体或凝胶的事实。
21.根据权利要求1至20中任一项所述的用于调节免疫系统的免疫原性组合物，其特征在于用于通过口服、真皮内、胃肠外、皮下、静脉内、肌内以及还通过鼻和/或口腔粘膜给人或动物施用。
22.根据权利要求1至21中任一项中定义的免疫原性组合物的用途，其特征在于其用于制造药剂。
23.根据权利要求22所述的用途，其特征在于制造用于预防和/或治疗如下疾病的药剂:感染性疾病、自身免疫疾病·、过敏性疾病、炎症、关节炎、炎症性疾病、移植排斥、由血管障碍引起的疾病、由出血性或缺血性心血管事件引起的疾病、导致组织破坏的局部缺血、梗塞和出血、心脏、肾、呼吸或肝功能不全、癌症、赘瘤以及恶性和良性肿瘤。
24.根据权利要求23所述的用途，其特征在于所述感染性疾病可以是病毒、细菌、真菌或寄生虫感染。
25.根据权利要求24所述的用途，其特征在于所述病毒疾病由下列病毒引起:HIV、肝炎病毒、疱疫病毒、弹状病毒、风疫病毒、天花病毒、痘病毒、麻疫病毒和副粘液病毒。
26.根据权利要求24所述的用途，其特征在于所述细菌疾病由下列细菌引起:肺炎球菌属、葡萄球菌属、芽孢杆菌属、链球菌属、脑膜炎球菌、淋病双球菌、埃希氏菌属、克雷伯菌属、变形杆菌属、假单胞菌属、沙门氏菌属、志贺氏菌属、嗜血杆菌属、耶尔森氏菌属、利斯特菌属、棒状杆菌属、弧菌属、梭菌属、衣原体属、分枝杆菌属、密螺旋体属和螺杆菌属。
27.根据权利要求24所述的用途，其特征在于所述真菌疾病由下列真菌引起:念珠菌属、曲霉菌属、新型隐球菌和/或引起浅表和深部真菌病的真菌。
28.根据权利要求24所述的用途，其特征在于由寄生虫引起的疾病由下列寄生虫引起:锥虫属、血吸虫属、利什曼原虫属、变形虫属和绦虫属。
29.根据权利要求23所述的用途，其特征在于用于预防和/或治疗如下疾病的事实:局部和系统性红斑狼疮、类风湿关节炎、结节性多动脉炎、多肌炎和进行性dematomiosite、进行性系统性硬化症、弥散性硬皮病、肾小球肾炎、重症肌无力、干燥综合征、桥本氏病、格雷夫斯病、肾上腺炎、甲状旁腺功能减退症、恶性贫血、糖尿病、多发性硬化、脱髓鞘疾病、葡萄膜炎、天疱疮、类天疱疮肝硬化、溃疡性结肠炎、心肌炎、局限性肠炎、成人呼吸窘迫综合征和对药物反应的局部表现、异位性皮肤炎、婴儿湿疹、接触性皮炎、银屑病、扁平苔癣、过敏性肠病、支气管哮喘、移植排斥、链球菌感染后疾病例如心脏、肾和关节性风湿热和其它相关事件、癌症的多个和各种形式，例如癌、腺癌、黑色素瘤、肉瘤、恶性星形细胞瘤、肝细胞瘤、肾上腺样瘤、淋巴瘤和黑色素瘤等等。
30.根据权利要求22所述的用途，其特征在于其将诱导细胞修复、组织再生、器官再生和器官系统例如循环系统、神经系统和内分泌系统的再生。
31.一种用于预防或治疗动物的感染性疾病、自身免疫疾病、过敏性疾病、炎症、关节炎、炎症性疾病、移植排斥、由血管障碍引起的疾病、由出血性或缺血性心血管事件引起的疾病、导致组织破坏的局部缺血、心肌梗塞和出血、癌症、肿瘤以及恶性和良性肿瘤的方法，其特征在于包括给所述动物施用有效量的一种或多种根据权利要求1至21中任一项中定义的免疫原性组合物。
32.根据权利要求31所述的方法，其特征在于所述感染性疾病可以是病毒、细菌、真菌或寄生虫感染。
33.根据权利要求32所述的方法，其特征在于病毒疾病的来源由下列病毒引起:HIV、肝炎病毒、疱疫病毒、弹状病毒、风疫病毒、天花病毒、痘病毒、麻疫病毒和副粘液病毒。
34.根据权利要求32所述的方法，其特征在于细菌疾病由下列细菌引起:肺炎球菌属、葡萄球菌属、芽孢杆菌属、链球菌属、脑膜炎球菌、淋病双球菌、埃希氏菌属、克雷伯菌属、变形杆菌属、假单胞菌属、沙门氏菌属、志贺氏菌属、嗜血杆菌属、耶尔森氏菌属、利斯特菌属、棒状杆菌属、弧菌属、梭菌属、衣原体属、分枝杆菌属、螺杆菌属和密螺旋体属。
35.根据权利要求32所述的方法，其特征在于所述真菌疾病由下列真菌引起:念珠菌属、曲霉菌属、新型隐球菌和/或引起浅表和深部真菌病的真菌。
36.根据权利要求32所述的方法，其特征在于由寄生虫引起的疾病由下列寄生虫引起:锥虫属、血吸虫属、利什曼原虫属、变形虫属和绦虫属。
37.根据权利要求31所述的`方法，其特征在于用于预防和/或治疗如下疾病的事实:局部和系统性红斑狼疮、类风湿关节炎、结节性多动脉炎、多肌炎和进行性dematomiosite、进行性系统性硬化症、弥散性硬皮病、肾小球肾炎、重症肌无力、干燥综合征、桥本氏病、格雷夫斯病、肾上腺炎、甲状旁腺功能减退症、恶性贫血、糖尿病、多发性硬化、脱髓鞘疾病、葡萄膜炎、天疱疮、类天疱疮肝硬化、溃疡性结肠炎、心肌炎、局限性肠炎、成人呼吸窘迫综合征和对药物反应的局部表现、异位性皮肤炎、婴儿湿疹、接触性皮炎、银屑病、扁平苔癣、过敏性肠病、支气管哮喘、移植排斥、链球菌感染后疾病例如心脏、肾和关节性风湿热和其它相关事件、癌症的多个和各种形式，例如癌、腺癌、黑色素瘤、肉瘤、恶性星形细胞瘤、肝细胞瘤、肾上腺样瘤、淋巴瘤和黑色素瘤等等。
38.一种用于诱导动物的细胞修复、组织再生、器官再生和器官系统例如循环系统、神经系统和内分泌系统的再生的方法，其特征在于包括给所述动物施用有效量的一种或多种根据权利要求1至21中任一项中定义的免疫原性组合物。
39.一种用于更新动物的免疫反应的方法，其特征在于包括下列步骤: a)给所述动物全身性和/或局部施用治疗有效量的一种或多种根据权利要求1至21中任一项中定义的免疫原性组合物； b)确保一种或多种在步骤“a”中应用的免疫原性组合物与所述动物的树突细胞或其它APC细胞接触；c)任选地给其中将对疾病进行治疗的部位或区域施用修复试剂例如维生素，以增强所述动物的代谢，从而增强其免疫系统，和 d)任选地施用其它药剂或特殊治疗。
40.根据权利要求31至39中任一项所述的方法，其特征在于任选地包括给所述动物施用一种或多种细胞因子和/或趋化因子的事实。
41.根据权利要求40所述的方法，其特征在于其包括任选地给所述动物施用GM-CSF、IL2、IL4、IL5、IL7、IL12、IL15、IL21 和 / 或干扰素 Y。
42.根据权利要求41所述的方法，其特征在于其包括任选地给所述动物施用IL2。
43.根据权利要求31至42中任一项所述的方法，其特征在于将其与抗生素疗法、化学疗法、放射疗法、利用抗体和抗血清的疗法、激素、细胞因子、趋化因子、神经激素、肽、抗病毒剂的使用、植物疗法、维生素补充法、其它辅因子或修复试剂补充法、细胞或组织的移植、治疗性或预防性接种的方法、基因疗法、外科手术或顺势疗法联合。
44.根据权利要求31至43中任一项所述的方法，其特征在于所述动物是哺乳动物。
45.根据权利要求4 4所述的方法，其特征在于所述哺乳动物是人。
【文档编号】A61K39/00GK103717233SQ201280024132
【公开日】2014年4月9日 申请日期:2012年3月19日 优先权日:2011年3月18日
【发明者】亚历山大·爱德华多·诺威尔 申请人:亚历山大·爱德华多·诺威尔